镇肝熄风汤载药脑脊液对PC12细胞损伤的保护作用

目的 :探讨镇肝熄风汤载药脑脊液对甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4- phenylpyridinium, MPP⁺)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。 方法 :不同浓度的镇肝熄风汤载药脑脊液预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP⁺诱导PC12细胞损伤模型。用MTT法检测PC12细胞活力,实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。 结果 :MPP⁺处理72~96 h,与空白对照组比较,模型组细胞活力明显降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著下调, Bax mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05)。与模型组比较,不同浓度的镇肝熄风汤载药脑脊液细胞活力明显升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著上调, Bax mRNA和蛋白表达显著下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论 :镇肝熄风汤载药脑脊液对MPP⁺诱导的PC12细胞具有保护作用,可能是通过上调Bcl-2和下调Bax的 mRNA和蛋白表达而发挥抑制PC12细胞凋亡的作用。     

灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测凋亡率,DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平;Rhodamine123染色法检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测胞浆Cyt-C的表达;ELISA法检测caspase-3和caspase-9酶活性。结果 250μmol/L MPP+处理PC12细胞,细胞存活率显著降低,并明显诱导细胞产生凋亡。而经灯盏花素(12.5、25、50μg/L)预处理,有效抑制MPP+诱导的细胞调亡,明显增加PC12细胞存活率,同时使细胞活性氧的增加和线粒体膜电位的降低;并明显抑制胞浆Cyt-C的释放和caspase-3和caspase-9的高表达。结论灯盏花素预处理能明显提高MPP+诱导的PC12细胞损伤的细胞存活率,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞损伤保护作用的抗氧化机制分析

目的:观察镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其是否通过抗氧化活性发挥神经保护作用。方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,每组10只。镇肝熄风汤按照8,16,32 g·kg~(-1)灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备含药和空白血清。常规培养PC12细胞,分为空白组、模型组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,空白组和模型组给予空白血清,其他3组给予10%含药血清,孵育1 h,再加100μmol·L~(-1)6-OHDA共孵育24 h后收集细胞。采用MTS法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,分光光度法检测脂质过氧化物(lipid peroxidation,LPO)水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测醌氧化还原酶-1(NADPH quinine oxidoreductase 1,NQO-1)mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,而细胞凋亡和LPO水平明显增加(P0.05)。与模型组比较,10%的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加,而细胞凋亡和LPO水平明显减少(P0.05)。与模型组比较,10%的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组NQO-1 mRNA表达明显上调(P0.05),而空白组与模型组NQO-1mRNA表达无显著性差异。结论:镇肝熄风汤含药血清具有保护6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用,其机制可能与上调PC12细胞NQO-1 mRNA表达进了提高了细胞抗氧化能力有关。     

开心散抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的机制

目的:研究开心散(Kaixin San,KXS)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色观察及流式细胞技术,考察KXS对凋亡的保护作用;采用比色法测定caspase活性、Western blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,RT-PCR技术分析Bcl-2和Bax mRNA的表达,考察KXS抗凋亡的机制。结果:KXS可以有效地改善H2O2诱导的PC12细胞的凋亡,抑制caspase-3、caspase-9的活性,降低胞浆中细胞色素C的水平,增加Bcl-2mRNA的表达,减少BaxmRNA的表达,从而导致Bcl-2/Bax比值的增加。结论:KXS可能通过线粒体途径抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。     

镇肝熄风汤含药血清激活Nrf2/ARE信号通路对6-OHDA 诱导PC12 细胞氧化应激的保护作用

目的：研究镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）致PC12细胞氧化应激的保护作用及其相关机制。方法：应用镇肝熄风汤低剂量（8 g?kg-1）、中剂量（16 g?kg-1）和高剂量组（32 g?kg-1）大鼠的含药血清或空白血清预处理PC12细胞1 h后,加100 μM 6-OHDA共孵育24 h后收集细胞。二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）荧光探针染色法结合荧光酶标仪检测活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平,采用实时定量PCR检测核转录因子E2相关因子2（Nuclear Factor-erythroid 2 Related Factor 2,Nfe2l2））基因Nfe2l2、血红素加氧酶-1（Heme Oxygenase-1,HO-1）、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基（Glutamate-CysteineLigase Catalyticsubunit,GCLc）和调节亚基（GCLm）mRNA表达。采用荧光素酶报告基因系统检测抗氧化反应元件（Antioxidant Response Element,ARE）活性。结果：镇肝熄风汤含药血清抑制了6-OHDA诱导的氧化应激,上调了6-OHDA处理细胞中Nfe2l2、HO-1和GCLc mRNA表达,但是对GCLm mRNA表达没有显著影响。结论：镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与上调Nfe2l2 mRNA表达,使ARE激活进一步诱导其下游II相解毒酶基因和抗氧化酶基因HO-1和GCLc mRNA表达有关。     

姜黄素对Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体内细胞色素C表达的影响

目的:探讨姜黄素对β淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡及线粒体内细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)表达的影响,探讨其抗PC12细胞凋亡的线粒体机制。方法:以Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,分别以0(空白组),1.25,2.5,5,10,20,40μmol·L-1不同浓度的姜黄素进行处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对细胞存活率的影响。实验随机分为空白组,模型组,姜黄素低、高(10,20μmol·L-1)浓度组,采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡情况;JC-1染色分析检测线粒体膜电位(Δψm)的变化;免疫荧光分析检测Cyt C的分布;蛋白质印迹法(Western blot)检测线粒体内Cyt C蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组PC12细胞存活率显著降低,凋亡率升高(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞存活率,降低凋亡率(P0.01)。与空白组比较,模型组PC12细胞Δψm降低,Cyt C由线粒体释放至胞浆增多,线粒体内Cyt C的表达下调(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞Δψm,抑制Cyt C由线粒体释放至胞浆并上调线粒体内Cyt C的表达(P0.05,P0.01)。结论:姜黄素可抑制线粒体凋亡途径,从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。     

清心开窍方含药脑脊液对过氧化氢所致PC12细胞损伤的保护机制研究

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对过氧化氢(H202)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9g/kg),每日2次,连续3.5d,分别于第7次给药后0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h采集制备清心开窍方不同时间点含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度200μmol/L的过氧化氢共培养,造成神经细胞损伤模型.RT-PCR方法检测Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论:清心开窍方对H2O2损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨金花茶种子诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的机制.方法 用不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物(CCEB)干预人前列腺癌PC3细胞,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测其对细胞凋亡及Bax、Bcl-2等表达的影响.结果 CCEB作用于人前列腺癌PC3细胞后,引起PC3细胞DNA片段化率增大,线粒体膜电位下降,细胞内caspase-3活性增高,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少,胞浆中细胞色素c含量增加.结论 CCEB诱导PC3细胞凋亡与caspase依赖性线粒体途径相关.     

MPP~+诱导PC12细胞氧化应激损伤的实验研究

目的:考察MPP+诱导PC12细胞氧化应激损伤作用,并探讨其机制。方法:以不同浓度、不同作用时间的MPP+作用于PC12细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,紫外可见分光光度计测LDH、NO、NOS、MDA含量和SOD活性。结果:MPP+终浓度达到300μmol/L时,作用48h后可明显降低PC12细胞存活率(P0.001),提高细胞凋亡率(P0.01),增强LDH、NO、NOS、MDA的含量和降低SOD活性,有统计学意义(P0.05)。结论:MPP+能诱导PC12细胞氧化应激损伤,其作用机制可能是通过增加PC12细胞NO和NOS含量,引起胞内SOD的活性降低,从而引起脂质过氧化物增加来损伤多巴胺能神经细胞的。     

枸杞提取物对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性的保护作用

目的:观察枸杞提取物对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性的保护作用并探讨其作用机制。方法:以不同浓度枸杞提取物预处理MPP+诱导的线虫和PC12细胞多巴胺能神经损伤模型,计算线虫的存活率和选择性表达绿色荧光的多巴胺能退行性变神经元的数量,以MTT法和核形态检测PC12细胞的损伤,检测PC12细胞的胞内的氧自由基、线粒体膜电位、总GSH水平。结果:枸杞提取物明显提高了MPP+处理过的线虫的存活率和保护了多巴胺能神经元,对MPP+诱导的PC12细胞的具有明显的保护作用,作用呈量效关系。枸杞提取物通过减少MPP+诱导PC12细胞胞内ROS的过量积聚,减少线粒体损伤,恢复GSH水平而发挥其保护作用。结论:枸杞提取物主要通过抗氧化及恢复GSH水平而发挥其对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性保护作用。     

金丝桃苷对叠氮钠诱导PC12细胞凋亡的保护作用(英文)

目的:研究金丝桃苷对叠氮钠诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:将PC12细胞与不同浓度金丝桃苷共同孵育4h后,加入20mmol·L-1的叠氮钠继续孵育3～24h,观察金丝桃苷的保护作用。采用MTT、Hoechst33342分别检测细胞存活率和细胞形态变化。以Ac-DEVD-AMC为底物检测caspase-3活性,CM-H2DCFDA法用于测定ROS水平。Western blotting用于分析Bcl-2和Bax表达水平。结果:金丝桃苷在0.01,0.1及1μmol·L-1浓度时,可显著提高叠氮钠作用后PC12细胞的存活率,抑制细胞凋亡,减少细胞内活性氧自由基生成和caspase-3活性,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,降低促凋亡因子Bax表达。同时结果显示caspase-3抑制剂呈时间依赖性地减少细胞内活性氧自由基含量。结论:金丝桃苷对叠氮钠诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用,活性氧自由基生成与凋亡进程中caspase-3活性密切相关。     

清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠所致PC12细胞损伤的保护机制研究

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对连二亚硫酸钠(sodium dithionite,Na2S2O4)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g· kg-1),每12h ig1次,共7次,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度8 mmol·L-1的Na2S2O4共培养,造成神经细胞损伤模型.以尼莫地平(1×107 mol·L-1)为阳性对照组,MTr法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响,RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P ＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Na2S2O4损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

刺五加有效组分对帕金森病模型细胞中相关微小RNA表达的干预作用

目的研究刺五加有效组分对帕金森病模型PC12细胞(MPP+所诱导的)损伤是否具有保护作用,并且观察其对微小RNA表达的影响。方法采用MPP+作用于PC12细胞的方法来构建帕金森病(PD)的细胞模型,以刺五加有效组分对模型进行药物干预;采用MTT法检测细胞存活率;运用RT-PCR法检测mi RNA-205、mi RNA-433以及mi RNA-153 mRNA的表达水平。结果与空白组比较,模型组PC12细胞的OD值存活率减少(P <0.05);与模型组比较,给药组细胞OD值存活率增加(P <0.05),mi RNA-205、mi RNA-433以及mi RNA-153 mRNA的表达水平上升,差异有统计学意义(P <0.05)。结论刺五加有效组分对PC12细胞(由MPP+诱导的)的损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过影响相关微小RNA:mi RNA-205、mi RNA-433以及mi RNA-153 mRNA的表达,从而影响帕金森病的出现与发展。     

葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体 途径凋亡的保护作用

目的:探讨葛根素对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护机制.方法:台盼蓝染色检测细胞存活率;PI单染流式细胞术分析细胞凋亡率、细胞周期分布;ELISA和Western blotting法检测胞浆Cyt C的变化;ELISA方法检测Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9酶活性;DNA ladder分析药物对细胞凋亡的干预作用.结果:在12.5～50 μmol·L-1,葛根素对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,并呈一定的量效关系;PI单染流式细胞术检测结果显示MPP+诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,并阻滞细胞于G2/M期,预先加入不同剂量的葛根素可以逆转MPP+对SH-SY5Y细胞损伤作用.Western blotting和ELISA分析结果均显示葛根素能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Cyt C的释放.不同剂量的葛根素也能够抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞的Caspase-3和Caspase-9的活性,但对Caspase-8的活性影响不明显;DNA ladder分析也显示葛根素可以抑制MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡.结论:葛根素可以提高MPP+诱导的SH-SY5Y损伤的细胞存活率,抑制细胞凋亡的发生,其机制可能与调节线粒体Caspase通路和干预细胞周期有关.     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

清心开窍方含药脑脊液对Aβ25-35所致PC12细胞损伤的保护作用

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g·kg-1),每日2次,连续3.5d,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度10 μmol·L-1的β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)共培养,造成神经细胞损伤模型.RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Aβ25-35损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

刺五加有效部位对MPP~+诱导PC12细胞损伤的保护作用(英文)

目的:探讨刺五加有效部对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:以不同浓度、不同作用时间的MPP+作用于PC12细胞,MTT法检测细胞存活率,考察其量效关系和时效关系。用不同浓度的刺五加有效部位处理后,与MPP+共同孵育,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测凋亡率,紫外-可见分光光度计测LDH,NO,NOS,MDA含量,考察刺五加有效部位的保护作用。结果:刺五加有效部位终浓度达到200,400mg·mL-1时,可明显提高PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡率,降低LDH,NO,NOS,MDA的含量,有统计学意义(P0.05)。结论:刺五加有效部位对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过减少LDH漏出,降低NO,NOS,MDA的含量,从而抑制细胞凋亡,提高细胞存活率而实现的。     

清心开窍方含药脑脊液对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护机制

目的: 从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对谷氨酸(glutamate,Glu)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据. 方法: SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g·kg^-1),每天分2次灌服,连续3.5 d,以制备清心开窍方含药脑脊液.PC细胞分为正常组、模型组、尼莫地平组、10%正常脑脊液组、10%含药脑脊液组、20%正常脑脊液组、20%含药脑脊液组,除正常组外,其余各组采用PC12细胞和终浓度20 mmol·L^-1的Glu共培养,造成神经细胞损伤模型.除模型组和正常组外,其余各组分别采用尼莫地平、正常脑脊液、10%和20%含药脑脊液进行干预,以RT-PCR方法检测各组Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测PC12细胞活性. 结果: 清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P＜0.01),20%含药脑脊液组疗效优于10%含药脑脊液组(P＜0.01). 结论: 清心开窍方对Glu 损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

白英乙醇提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白英乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,白英提取物各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物通过上调caspase-3和下调survivin基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

菟丝子提取物对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:建立1-甲基-4-苯基吡啶(1-m ethyl-4-phenylpyrid in ium ion,MPP )诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytom a,PC12)凋亡模型,探讨菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:用四唑盐(MTT)方法检测细胞活力,用Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化,用流式细胞技术检测细胞凋亡比例。结果:浓度为0.15 mM MPP 作用于PC12细胞48 h诱导其产生典型的凋亡特征,50 mg/L菟丝子提取物具有抗凋亡作用。结论:菟丝子提取物对MPP 诱导的PC12细胞凋亡有明显的保护作用。