青娥丸不同萃取部位对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的 探讨青娥丸不同萃取部位对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响.方法 取新生大鼠颅骨,用改良组织块法消化分离成骨细胞,MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸.酶(AKP)的活性.分离培养大鼠破骨细胞,加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性.结果 复方青娥丸RJ-1,R J-3,J-4,乙醇RJ-5四个萃取部位,OD -2,OD -3,0D -4,全方水煮OD -5四个不同提取物均能促进成骨细胞增殖;RJ-1,J-2两个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性.复方青娥丸石油醚等6个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均降低破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性.与对照组比差异有显著性.结论 复方青娥丸多种部位能促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性.从而维持骨代谢平衡.     

健骨胶囊含药血清对体外培养破骨细胞活性和骨吸收作用的影响

目的：观察健骨胶囊含药血清对体外培养新生大鼠破骨细胞活性与骨吸收的干预作用。方法：3天给药法制备健骨胶囊含药血清;机械分离培养法将新生大鼠四肢长骨干体外分离和培养破骨细胞,应用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,阳性破骨细胞计数、骨片吸收陷窝形态分析,评价健骨胶囊对破骨细胞的活性与骨吸收的作用。结果：健骨胶囊能减少体外破骨细胞的TRAP阳性细胞数及骨片吸收陷窝面积。结论：健骨胶囊含药血清对破骨细胞的活性与骨吸收具有抑制作用,为健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症提供血清药理学依据。     

补骨脂单体成分对体外培养成骨细胞和破骨细胞分化的影响

[目的]研究补骨脂单体成分异补骨脂素、异补骨脂查尔酮对体外培养破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)及成熟破骨细胞形成数目、体外培养成骨细胞增殖与分化的影响。[方法]体外采用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞前体细胞,考察异补骨脂素、异补骨脂素查尔酮对破骨细胞前体细胞在分化过程中其标志性酶TRACP的活性和成熟破骨细胞产生数目的影响。对硝基苯磷酸盐法(PNPP法)测定破骨细胞TRACP活性,TRACP细胞染色法鉴定并检测成数破骨细胞数目。酶消化法体外培养新生小鼠成骨细胞,(CCK-8)(cell counting kit-8)法检测两成分对成骨细胞增殖的影响,磷酸苯二钠法测定两成分对成骨细胞标志性酶碱性磷酸酶(ALP)的影响。[结果]体外成功培养小鼠破骨细胞和成骨细胞,两细胞强表达各自的标志性酶TRACP和ALP。异补骨脂查尔酮在0.05μmol/L浓度下对成熟破骨细胞的形成有显著抑制作用。异补骨脂素在0.1μmol/L浓度下对成骨细胞增殖有显著促进作用。[结论]补骨脂单体成分异补骨脂素对成骨细胞有促进作用、异补骨脂查尔酮对破骨细胞有抑制作用,提示补骨脂可能作为抗骨质疏松或骨吸收的药物。     

柚皮苷对破骨细胞分化的影响

目的: 探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响. 方法: 通过100 μg·L^-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB 受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响. 结果: 采用100 μg·L^-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达. 结论: 柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.     

“附子-白术”药对对破骨细胞及成骨细胞增殖、分化及活力的影响

目的:观察"附子-白术"药对对破骨细胞和成骨细胞增殖、分化与功能的影响。方法:采用体外诱导新生SD大鼠骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色来鉴定破骨细胞,用TRAP+细胞计数、TRAP活力测定检测"附子-白术"药对对破骨细胞增殖、分化及活力的影响。取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,分别用低、高浓度的附子-白术药对进行药物干预,MTT法检测成骨细胞的增殖,ELISA法检测成骨细胞ALP活性。结果:附子-白术药对低、高剂量(1mg/L和10mg/L)能显著性地抑制TRAP染色阳性细胞的数量及TRAP活力,"附子-白术"药对低、中浓度组成骨细胞的增殖及ALP的活力均明显高于对照组。结论:"附子-白术"药对具有抑制骨髓细胞向破骨细胞分化,并抑制破骨细胞的增殖和活性的作用及骨吸收功能的作用,同时也能促进成骨细胞的增殖和分化。     

中药地黄防治骨质疏松症的研究进展

高致残和致死率的骨质疏松性骨折是严重影响个体生活质量的棘手难题。目前,临床上仍缺少靶点明确和药效显著的防治骨质疏松药品。中药地黄及组方临床抗骨质疏松效果显著,已有越来越多的研究报道了地黄及其活性成分此方面的作用和机制,取得一定的研究成果。该文检索PubMed、Web of science、中国知网和万方数据库等近十年文献,搜集并整理地黄抗骨质疏松方面的最新研究进展,对于中药饮片生、制地黄、地黄中活性成分如梓醇、桃叶珊瑚苷、毛蕊花糖苷和地黄多糖等以及地黄组方等归纳其研究动态、作用指标和机制,挖掘潜在的活性成分、作用靶点和信号通路,包括对于骨髓间充质干细胞的影响、促进成骨细胞增殖和促进成骨分化(增加碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原蛋白、骨保护素和骨钙素等以及促进钙沉积)和增大骨密度以及抑制破骨细胞数量和分化、促进破骨细胞凋亡、减少抗酒石酸酸性磷酸酶和减少骨吸收陷窝面积等,为更好地发挥和研究地黄抗骨质疏松作用及机制提供参考和开拓新思路。     

葛根素在共育体系中对破骨细胞活性的影响

目的：观察葛根素在共育体系中对破骨细胞（OC）活性的影响。方法：选取1日龄SD大鼠分离培养成骨细胞（OB）,取5日龄SD大鼠分离培养破骨细胞,建立成骨-破骨细胞共育体系;在共育体系中,分别加入0．05ug/ml、0．5ug/ml、5ug/ml、50ug/ml的葛根素,与空白组对照;用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）和光镜观察骨吸收陷窝数。结果：0．5ug/ml～50ug/ml的葛根素组在48h、72h、96h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性均明显降低于对照组。结论：葛根素在共育体系中能够抑制OC活性。     

大血藤对破骨细胞活性及成骨细胞增殖分化作用的研究

该研究采用1α, 25-(OH)₂VitD₃诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色来鉴定破骨细胞,用TRAP⁺细胞计数、TRAP活力测定和骨吸收陷窝的数量及面积来检测大血藤对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。培养MC3T3-E1Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)细胞,用MTT法、碱性磷酸酶活力测定检测大血藤对其增殖和分化的影响。结果表明大血藤醇提物和水煎物低、中、高剂量组(2,20,200 mg·L^-1)对破骨细胞分化及骨吸收功能具有抑制作用,并具有剂量依赖性。大血藤醇提物和水煎物低、中剂量组具有促进MC3T3-E1Subclone 14细胞增殖分化的作用,说明大血藤对骨质疏松有一定的防治作用,这种作用可能是通过抑制破骨细胞活性和促进成骨细胞增殖分化来实现的。     

淫羊藿苷可促进人成骨细胞增殖与分化

北京大学第三医院研究人员发现,浓度为20μg/mL淫羊藿苷能够增加MTT的吸光度值,刺激人成骨细胞增殖,并且能显著提高人成骨细胞的碱性磷酸酶活性。碱性磷酸酶是参与骨代谢的重要蛋白质,被认为是细胞外基质成熟的早期标志,碱性磷酸酶的活性可以代表成骨细胞的早期分化水平。因此,     

“肾主骨”理论与破骨细胞骨吸收

从骨的现代定义及“肾主骨”理论的内涵出发,结合实验研究分析肾主骨与抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性、骨吸收陷窝对破骨细胞骨吸收机制的影响作用,为中药防治破骨细胞骨吸收类疾病及其作用机制研究提供思路.     

复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响

目的：探讨复元活血汤含药血清对大鼠成骨细胞功能的影响及其作用机制。方法：取2月龄SD雄性大鼠12只,随机分为2组,每组6只,分别给予20 g.kg-1复元活血汤生药灌胃（含药血清组）和同等量的生理盐水灌胃（空白血清组）,每天2次,14 d后腹主动脉采血。取新生SD大鼠2只,采用二次酶消化法消化幼鼠颅盖骨获取成骨细胞,采用血清药理学方法,分别采用含胎牛血清的培养液（胎牛血清组）、含复元活血汤生药灌胃大鼠血清的培养液（含药血清组）和含生理盐水灌胃大鼠血清的培养液（空白血清组）培养成骨细胞。分期测定体外培养的大鼠成骨细胞的增殖功能、分化功能、矿化功能及碱性磷酸酶含量。结果：①成骨细胞增殖功能。时间效应F=381.260,P=0.000;组别效应F=1 071.170,P=0.000;时间与组别交互效应F=22.500,P=0.000。②成骨细胞分化功能。时间效应F=159.950,P=0.000;组别效应F=62.120,P=0.000;时间与组别交互效应F=2.400,P=0.029。③成骨细胞矿化功能。时间效应F=115.500,P=0.000;组别效应F=4.370,P=0.082;时间与组别交互效应F=56.300,P=0.000。④成骨细胞碱性磷酸酶含量。时间效应F=2 175.670,P=0.000;组别效应F=1 201.370,P=0.000;时间与组别交互效应F=428.870,P=0.000。结论：复元活血汤能明显地促成骨细胞的增殖和分化功能,其作用可能与成骨细胞合成和分泌碱性磷酸酶有关。     

右归饮对体外培养破骨细胞分化与功能的影响

目的：探讨右归饮对体外培养破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响。方法：分离培养大鼠破骨细胞,分别以空白对照血清、地塞米松＋对照血清、地塞米松＋右归饮血清的培养液来培养破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;采用吖啶橙荧光染色法计数破骨细胞的凋亡率;用RT-PCR测定ATPase a3基因相对表达变化分析破骨细胞骨吸收活性。结果：与空白对照血清组和对照血清＋地塞米松组相比,地塞米松＋右归饮血清组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少（分别为P〈0.01,P〈0.05）,破骨细胞的凋亡率明显增加（P〈0.01）,ATPase a3基因表达明显减少（P〈0.01）。结论：右归饮可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗激素性股骨头坏死的作用。     

鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的:研究鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,CCK-8法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测成骨细胞ALP活性比;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨细胞Ⅰ型胶原(Col1α1)、骨钙素(Bglap)及Runx-2的表达水平。结果:鹿瓜多肽注射液干预成骨细胞3d,发现鹿瓜多肽注射液组成骨细胞活性较对照组明显增强(P<0.05);在鹿瓜多肽注射液干预细胞后第8天时,鹿瓜多肽注射液组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加(P<0.05);鹿瓜多肽注射液组成骨细胞骨钙素及Runx-2表达均较对照组明显增强。结论:鹿瓜多肽注射液能显著促进成骨细胞发育成熟。     

淫羊藿女贞子配伍对GIOP大鼠骨代谢生化指标的影响研究

目的：探讨淫羊藿、女贞子对糖皮质激素致骨质疏松（Glucocorticoid-induced Osteoporosis,GIOP）模型大鼠骨代谢生化指标的影响。方法：Sprague Dawley（SD）大鼠60只,雌雄各半,随机分为正常对照组、模型对照组、女贞子组、淫羊藿组、淫羊藿女贞子组、钙尔奇组。每周两次肌肉注射地塞米松（1 mg/kg）建立骨质疏松模型。造模同时各给药组灌服相应药物,8周后检测血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（alkalineph-osphatase,AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acidphosphatase,StrACP）、骨钙素（Bone Gla-protein,BGP）及骨Ca、P含量。结果：模型对照组较正常对照组血清AKP、StrACP活性以及血P含量均显著升高,血清BGP、血及骨Ca含量均显著下降;与模型对照组比较,各给药组均可显著下调血清AKP、StrACP水平,提高血清BGP含量;且可不同程度地纠正血及骨Ca、P代谢紊乱。结论：淫羊藿、女贞子配伍可明显改善骨代谢生化指标,有效纠正激素诱导骨质疏松模型大鼠骨代谢异常,从而发挥抗骨质疏松作用。     

地乌三萜皂苷W1对破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

目的探讨地乌三萜皂苷类成分W1对体外破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。方法3个不同浓度（0．0625,0．125,0．25μg／ml）的W1与核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor kB ligand,RANKL）诱导的小鼠单核／巨噬细胞RAW264．7共孵育7天,抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色观察TRAP阳性多核细胞的形成,甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察骨吸收陷窝的形成,图像分析计算骨吸收陷窝面积百分比;同3个浓度的W1与RANKL诱导的RAW264．7细胞共孵育24小时后收集细胞上清液,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量;甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测W1对RAW264．7细胞毒性影响。结果RANKL组诱导RAW264．7细胞形成多量TRAP阳性多核细胞,形成明显的骨吸收陷窝,并诱导TNF-α在RAW264．7细胞上清中异常高表达;与RANKL组相比,3个浓度的W1均能显著减少TRAP阳性细胞数（P〈0．01）,显著减少骨吸收陷窝面积（P〈0．01,P〈0．001,P〈0．001）,明显降低TNF-α的表达量（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．01）,且未观察到对RAW264．7的细胞毒性。结论W1对由RANKL诱导的体外破骨细胞分化和骨吸收功能有一定的负调节作用。     

清络通痹颗粒含药血清对破骨细胞骨吸收的影响

目的:确定清络通痹颗粒(QLT)含药血清的制备方法并观察其对体外培养破骨细胞的活性和骨吸收的影响。方法:选用高效液相色谱外标一点法测定,QLT含药血清中青藤碱的含量以确定含药血清的制备条件;乳鼠破骨细胞1×108/mL加入96孔板,将QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的大鼠含药血清1∶10稀释,分别加入各孔培养48 h,观察其对破骨细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性及破骨细胞形成的骨吸收陷窝的影响。结果:QLT 7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的增殖能力和吸收陷窝面积(P<0.05,P<0.01),QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的TRAP活性(P<0.05,P<0.01)。结论:QLT含药血清可抑制破骨细胞增殖、TRAP活性和骨吸收能力,对破骨细胞引起的骨质破坏产生抑制作用。     

犬脂肪基质干细胞体外复合珊瑚支架材料的生长特性和成骨活性

目的：研究犬脂肪基质干细胞（adipose derived stromal cells,ADSCs）作为种子细胞复合珊瑚体外培养的生长特性和成骨活性。方法：分离犬ADSCs,成骨诱导后复合珊瑚继续培养,以未诱导ADSCs复合物为对照,进行生长曲线、DIO染色后的激光共聚焦荧光显微镜、碱性磷酸酶（AKP）和骨钙蛋白（OCN）生物化学定量检测。结果：生长曲线示7天后ADSCs在材料上生长进入平台期,共聚焦显微镜示诱导ADSCs复合珊瑚7天后生长良好;AKP检测显示成骨诱导ADSCs-材料组在各个检测点均显著高于未诱导ADSCs-材料组（P〈0.05）;OCN从第7天开始表达,成骨诱导ADSCs-材料组显著高于未诱导ADSCs-材料组（P〈0.05）。结论：天然珊瑚是ADSCs生长和成骨转化的良好生物支架材料。     

益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响

目的:探讨益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响。方法:将45只大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、益气活血壮骨方组(C组)、乐力胶囊组(D组)和骨松宝组(E组),每组9只。假手术组仅开腹缝合,其余4组做卵巢切除术。术后4周,A、B组大鼠以生理盐水灌胃(10 mL.kg-1),C组大鼠以益气活血壮骨方灌胃(9.6 g.kg-1),D组大鼠以乐力胶囊灌胃(0.15 g.kg-1),E组大鼠以骨松宝灌胃(8 g.kg-1),每天1次,连续给药12周。12周后处死大鼠,腹主动脉取血测定大鼠骨密度、骨矿含量、白细胞介素6、骨钙素及碱性磷酸酶。结果:益气活血壮骨方组骨密度及骨矿含量高于模型组,白细胞介素6、碱性磷酸酶和骨钙素含量低于模型组;益气活血壮骨方组白细胞介素6含量低于乐力胶囊组和骨松宝组;模型组骨密度、骨矿含量、白细胞介素6、骨钙素及碱性磷酸酶与其它组比较有统计学差异;假手术组与乐力胶囊组骨密度及骨矿含量、白细胞介素6和碱性磷酸酶比较有统计学差异。结论:益气活血壮骨方可抑制去势大鼠骨吸收,促进骨形成,从而阻止骨量丢失。益气活血壮骨方抑制破骨细胞分化增殖和骨吸收的作用强于乐力胶囊和骨松宝。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

牛膝中三萜皂苷抑制破骨细胞分化作用的研究

目的：通过牛膝中三萜皂苷类成分对破骨细胞分化的影响,探讨牛膝防治骨质疏松症的作用机理。方法：建立破骨细胞分化体外实验模型,在甲状旁腺素（PTH）的诱导下,骨髓细胞分化形成TRAP阳性破骨样细胞。在细胞培养过程中,分别加入2、20、200μM的各组三萜皂苷样品进行干预,考察每组样品对破骨细胞形成的影响。结果：考察的7个三萜皂苷类成分均能不同程度地抑制破骨细胞分化,其中竹节参苷IVa和木鳖子皂苷Ib抑制作用最强,且其抑制作用具有可逆性。结论：牛膝中三萜皂苷类成分可有效抑制破骨细胞形成,提示其可能作为骨吸收抑制剂用于防治骨质疏松症。