献血者巨细胞病毒感染筛查的初步研究

目的：探讨检测人巨细胞病毒(HCMV)的低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原对健康献血巨细胞病毒感染情况的筛查。方法：对2003年2～7月收集的103份EDTA抗凝外周血标本，用免疫组化方法进行pp65抗原血症检测，同时以ELISA法检测其中的86份血清中的IgM和IgG抗体。结果：103份标本中共有10份pp65抗原阳性，阳性率为9．71％；ELISA法检测86份标本CMV—IgM抗体全部阴性，CMV—IgG抗体56例阳性，阳性率为62％(56／86)，10份pp65抗原阳性的标本中，CMV—IgG阳性9例。结论：pp65抗原是检测CMV感染的一种敏感、特异的方法，而检测CMV—IgM、CMV—IgG不能预测CMV的活动性感染，因此对需要输注全血、成分血的免疫力低下或各种移植病人，应进行CMVpp65抗原的检测。     

婴儿肝炎综合征肝脏巨细胞病毒低基质磷酸化蛋白的检测意义

目的：观察人巨细胞病毒（HCMV）低基质磷酸化蛋白（pp65）在婴儿肝炎综合征肝脏组织中的表达,为诊断婴儿巨细胞病毒性肝炎提供科学依据.方法：选择30例婴儿肝炎综合征患儿,在B超介导下进行肝组织活检,免疫组化法检测肝组织中HCMV pp65抗原,观察婴儿巨细胞病毒性肝炎特异性病理改变,同时用ELISA方法检测血清HCMV IgM水平,计算并比较两指标的阳性率.结果：30例婴儿肝炎综合征患儿肝组织HCMVpp65抗原阳性18例,血清IgM阳性6例,阳性率分别为60％、20％.两者阳性率比较差异有显著性（P＜0.01）.结论：通过免疫组织化学检测婴儿肝组织中HCMV pp65抗原表达,可用于诊断婴儿巨细胞病毒性肝炎.     

几种CMV相关物检测对诊断肾移植患者CMV感染的评价

目的 比较血中pp65抗原、DNA和IgM抗体检测对肾移植患者巨细胞病毒（CMV）活动性感染的诊断价值,为临床上对CMV感染的诊断和治疗提供参考.方法 收集83位肾移植患者的血标本（共302份）,分离血浆和多型核白细胞,血浆用于CMV-DNA（定性PCR）和IgM抗体（ELISA）检测,白细胞用于pp65抗原血症检测（荧光免疫法）.结果 CMV-DNA阳性率为36.1%,CMV IgM抗体阳性率20.2%,CMV pp65抗原阳性率为38.5%.pp65抗原阳性细胞数与病人的临床症状密切相关.结论 pp65抗原阳性细胞数能反应CMV的数量,可监测早期活动性CMV感染及疗效观察,检测方法特异,灵敏,操作简单,适合临床实验室应用.     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其在肾移植受者CMV病诊断中的临床应用

目的 建立一种简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法 运用催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,并与抗HCMV-IgM检测法作比较.结果 检测100例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性47例,IgM抗体检测阳性41例,pp65抗原阳性细胞数为(71±45)个,2×105个WBC,而有症状的CMV病29例,抗原阳性细胞指数为(83±46)个,2×105个WBC.对照组50名健康人,pp65抗原检测全为阴性.pp65的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别是100%、74.6%、61.7%和100%.结论 该法敏感、简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

HCMV pp65抗原血症和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值

目的 探讨外周血白细胞人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原血症检测和UL83基因检测对肾移植术后HCMV感染的诊断价值和临床意义.方法 对77例肾移植受者术后定期随访患者外周血进行HCMV感染检测,分别进行外周血白细胞HCMV pp65抗原血症实验和PCR技术检测HCMV UL83基因,比较两种方法的诊断准确性.结果 ...     

性病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性lgM的酶联捕获技术,并分析性病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM（μ链特异性）抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测688例性病患者及450名健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行比较。结果性病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为274例（39.8%,酶标抗体法）和262例（38.1%,酶标抗原法）,与正常对照组（0.89%）存在显著性差异（P〈0.05）。酶标抗体法与酶抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时无显著性差异（P〉0.05）,阳性符合率95.6%,且不受类风湿因子（RF）的影响。结论酶联捕获HCMVpp65特异性lgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

肝、肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的 探讨巢式PCR（Nest PCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒（HCMV）DNA，并与传统ELISA法作方法学对照。方法 巢式PCR针对HCMV AD169株IEA基因设计内外两对引物，对59例肝、肾移植术后受体（肝移植27例、肾移植32例）血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果 血液Nest PCR阳性率肝移植62.9%，肾移植46.8%；ELISA法阳性率：IgG35.5%,IgM27.1%,IgG IgM18.6%，IgM阳性标本（16例）DNA检测皆为阳性，6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。结论 巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCVM感染的方法，灵敏度及特异性高于传统ELISA，能弥补ELISA的假阴性，更适用于临床检测器官移植术后HCMV感染。     

糖尿病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性IgM的酶联捕获技术,来分析糖尿病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM(μ链特异性)抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测727例糖尿病患者及230例健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行了比较。结果糖尿病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为81例(11.14%,酶标抗体法)和78例(10.73%,酶标抗原法),与健康组(0.87%)相比存在统计学差异(P<0.05)。酶标抗体法与酶标抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时不存在显著性差异(P>0.05),且不受RF因子的影响。HCMV pp65-IgM与HCMV pp65蛋白表达呈现良好的相关性。结论酶联捕获HCMV pp65特异性IgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

HCMV感染孕妇外周血胎儿细胞的分离及HCMV—DNA检测

目的运用不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞以进行人巨细胞病毒-DNA（HCMV—DNA）的检测。方法取20名人巨细胞病毒抗原血症（pp65）阳性的孕妇外周EDTA抗凝血,经不连续密度梯度离心初步富集、免疫磁珠法分选及胎儿细胞特异性抗体-HbF标记、识别的胎儿有核红细胞经全基因组扩增后,对产物进行HCMV—DNA的检测。结果20名PP65阳性孕妇外周血中分选到胎儿有核红细胞的有16例,将此16例胎儿有核红细胞进行HCMV—DNA的检测,检出阳性2例,10份未妊娠妇女外周血细胞涂片中均未发现胎儿有核红细胞;10份正常妊娠妇女外周血细胞涂片中发现胎儿有核红细胞数9例,其量不等。结论不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法结合特异性抗体-HbF标记、识别能有效地分选出母血中胎儿有核红细胞,应用于进一步的无创性产前诊断,将有着良好的应用前景。     

实时定量聚合酶链反应在肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用研究

目的:建立血浆、外周血白细胞HCMV DNA实时定量聚合酶链反应检测方法,评价其监测肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用价值。方法:用重组质粒PQHY-1制作标准曲线;分别用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法,对28例肾移植术后病人采血标本动态检测,并将结果进行比较。结果:实时定量PCR最低可检测出20拷贝/孔的HCMV DNA,且可重复性强(批内及批间误差均<5％),在102～107拷贝/孔的浓度范围时与Q值有很好的线性关系(r=-0.978)。与PP65抗原血症检测结果比较,血浆及外周血白细胞定时定量检测的灵敏度分别为88.5％,94.2％;特异度分别为97.8％,95.4％。HCMV活动性感染时血浆和外周血白细胞HCMV DNA平均含量分别为102.4拷ml和103.2拷贝/106PBL。血浆和外周血白细胞中HCMV DNA阳性检出时间较PP65抗原血症阳性检出时间平均要早1.6和3.8天。结论:实时定量聚合酶链反应检测方法是一种灵敏度高,特异度好的定量检测方法,可用于监测早期HCMV活动性感染。     

CMV-PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染的临床价值

目的 探讨巨细胞病毒PP65抗原（CMV-PP65）检测在预防肾移植术后巨细胞病毒（CMV）感染的临床价值.方法 采用间接免疫荧光法和酶联免疫捕获法检测52例肾移植受者术后CMV-PP65抗原和CMV-IgM抗体.结果 52例肾移植受者中CMV-PP65抗原检测阳性25例,CMV-IgM抗体检测阳性17例,随访3~6个月,共15例发生CMV病,CMV-PP65抗原检测均阳性,CMV-PP65抗原检测的敏感度及阴性预测值均高于CMV-IgM抗体检测;25例患者CMV-PP65抗原检测术后首次出现阳性的平均时间为4.2±3.3周,17例患者CMV-IgM抗体检测术后首次出现阳性的平均时间为8.7±5.8周,两者比较有显著差异性（P〈0.05）.结论 CMV-PP65抗原检测可早期排除和预防肾移植术后CMV感染,值得临床推广应用.     

人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达

目的克隆表达人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）特异性强的抗原决定簇基因，制备特异性抗原。方法从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA，用PCR扩增HCMVpp150（ppUL32）、gp52（UL44）、pp65（ppUL83）、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列，将其克隆至pMD-18T载体并测序，然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达，采用免疫印迹法（Western blotting）检测表达产物的抗原性。结果经序列测定各基因片段序列正确，并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达，表达的融合蛋白经Western blotting和ELISA分析，具有良好的抗原性，能够与HCMV IgM阳性血清发生特异性反应。结论通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原。为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原。     

PP65抗原检测在预防肾移植术后巨细胞病毒感染中的价值

目的探讨巨细胞病毒PP65抗原（CMV—PP65）检测在肾移植术后患者巨细胞病毒病防治中的价值。方法肾移植术后患者37例，常规随诊接受巨细胞病毒PP65抗原检查。结果37例患者中11例（29．7％，11／37）CMV—PP65抗原阳性，均给予更昔洛韦抗病毒治疗，11例患者中3例（8．1％，3／37）发展成巨细胞病毒病，均发生于停用或未采用更昔洛韦时；另外26例患者（70．3％，26／37）PP65抗原始终阴性，随访3个月无巨细胞病毒病。结论巨细胞病毒PP65抗原检测对于肾移植术后巨细胞病毒病的诊断、治疗尤其是预防起到重要作用。     

人巨细胞病毒pp65抗原检测在肾移植后HCMV感染状况的研究

目的人巨细胞病毒pp65蛋白（HCMVpp65）抗原血症检测已被认为是预测活动性感染非常好的指标。但临床医生对移植患者此项检查的最佳时机掌握并不十分准确。本文拟探讨HCMVpp65抗原移植患者阳性率、移植术后HCMVpp65抗原检测的最佳时期。方法①回顾性分析100例次HCMVpp65抗原检测，计算阳性率。②对10例HCMVpp65阳性患者，计算初次阳性出现时期例数分布情况。结果①移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％；②HCMVpp65抗原术后检测出现阳性时期集中在术后第一至三个月，此后极少。结论①肾移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％。②术后第一至三个月患者易感HCMV，为HCMVpp65抗原高密度检测最佳时期，第四个月至1年可低密度监测。     

人巨细胞病毒激活感染与颈动脉粥样硬化斑块不稳定性的临床研究

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）激活感染与颈动脉粥样硬化的关系。方法采用免疫荧光法检测外周血自细HCMV—PP65抗原作为HCMV激活感染的指标,对212例颈动脉粥样硬化患者分别进行HCMV—PP65抗原、血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）水平检测和颈动脉超声检查。结果HCMV—PP65抗原阳性组、阴性组血清MMP-9含量分别为（242．25±81．03）、（159．57±79．20）pg／mL,差异有统计学意义（P〈O．01）;两组TNF—α含量分别为（3．04±0．37）、（1．37±0．17）ng／mL,差异有统计学意义（P〈O．01）;HCMV—PP65抗原阳性组44例（69．84％）存在不稳定性斑块,HCMV—PP65抗原阴性组72例（48．32％）存在不稳定性斑块,差异有统计学意义（x^2=8．82,P〈0．01）。结论人巨细胞病毒激活感染可引起MMP-9、TNF—α水平增高,可能与颈动脉粥样硬化斑块不稳定性有关。     

流式细胞术检测PP65抗原血症在巨细胞病毒性肝炎诊断中的意义

目的:探讨流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)肝炎的诊断价值.方法:采用流式细胞仪对41例CMV肝炎患儿进行血PP65抗原检测,同时用PCR方法测定尿CMV-DNA并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较3种方法的检测结果,对部分患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值.结果:41例CMV肝炎中36例检出PP65抗原阳性,阳性率达87.8%,CMV-DNA及IgM的阳性率分别为92.6%及36.6%.全身性感染伴高水平抗原血症,单纯肝炎抗原水平相对较低(P＜0.01).PP65在肝炎恢复期转为阴性或低水平,病情恶化时明显增高.结论:PP65抗原血症检测是诊断活动性CMV感染的有效手段,量化结果有助于监测病情.     

血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用

目的探讨血PP65抗原、尿CMV-DNA和血IgM抗体检测对婴儿巨细胞病毒(CMV)活动性感染的诊断价值.方法通过免疫荧光技术对142例CMV病毒性感染患儿进行血PP65抗原检测,同时用实时荧光定量PCR方法测定尿CMV-DNA,并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较三种方法的检测结果;对25例PP65阳性患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值.结果142例CMV感染患儿中,PP65抗原阳性率89.4%(127/142),阳性细胞范围7-145/2×105个多形核白细胞.PP65与尿CMV-DNA两种方法检测的结果差异无统计学意义(χ2=0.125,P>0.05),但PP65与血CMV-IgM检测结果差异有统计学意义(χ2=53.16,P<0.01).PP65抗原和尿PCR的阳性符合率98.4%(127/129),阴性符合率86.7%(13/15),与IgM抗体阳性符合率是51.2%(65/127),阴性符合率19.5%(15/77).PP65相对于PCR的敏感性为98.4%(127/129),特异性为97.6%(124/127);PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性,高水平PP65感染患儿多发全身性感染,低水平PP65抗原血症多为单脏器感染(χ2=49.03,P<0.005).在感染恢复期,PP65转为阴性或明显下降.结论 PP65抗原检测是诊断活动性CMV感染的快速、敏感、特异的有效方法,量化结果有助于监测病情,评价感染状态.     

肾移植受者外周血循环中pp65阳性内皮细胞的新模式

目的：为了观察感染人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus HCMV）的1例女性肾移植外周血中膨大内皮细胞（Cytomegalic endothelial cells,CEC)的一种新模式。方法：本研究运用了HCMV pp65抗原分析法，实时PCR技术、流式细胞分析法等系列技术。结果：发现这一围绕并粘附了许多白细胞的蛋白样物质内，含有几个pp65阳性的CEC。这种蛋白质样物质的成分和功能目前还不清楚。该患者外周血中出现CEC表明其血管有损伤，而且该患者的CD4^ 及CD8^ 淋巴细胞的百分比都超出正常范围。其血浆、外周血白细胞及尿液中的HCMV-DNA都阳性，但该患者并没有明显的HCMV病症状。结论：HCMV感染和CEC形成之间的关系需进一步研究。     

人巨细胞病毒pp65在脑胶质瘤中的表达

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）pp65在脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度的相关性.方法 手术获取64例脑胶质瘤标本（低级别胶质瘤27例,高级别胶质瘤37例）,免疫组织化学方法检测肿瘤组织中HCMV pp65蛋白表达,ELISA法检测高级别胶质瘤患者和正常人各20例外周血中HCMV-IgG抗体水平.结果 pp65在高级别胶质瘤中的阳性表达率明显高于低级别胶质瘤（97.3%和22%）,强阳性表达率以胶质母细胞瘤最高;高级别胶质瘤患者血清HCMV-IgG水平明显高于正常人群.结论 HCMV pp65在不同级别的脑胶质瘤中均有表达,且表达水平与肿瘤恶性程度相关.     

炎性脱髓鞘型神经系统疾病人巨细胞病毒抗原血症检测的临床意义

目的探讨人巨细胞病毒pp65（HCMVpp65）抗原血症与炎性脱髓鞘型神经系统疾病的关系。方法采用HCMV单克隆抗体免疫荧光法检测60例炎性脱髓鞘型神经系统疾病及30例脑梗死及脑供血不足患者外周血的HCMVpp65抗原阳性细胞水平，同时对抗病毒药物疗效进行分析。结果炎性脱髓鞘型神经系统疾病组HCMVpp65阳性18例，阳性率为30%，包括急性脱髓鞘脑病9例、吉兰-巴雷综合征5例、脑脊髓炎2例、视神经脊髓炎1例、多发性硬化1例。对照组HCMVpp65阳性3例，阳性率10%，两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。对HCMVpp65阳性患者应用抗病毒药物（膦甲酸钠）治疗，有效率88.9%，其中1例急性脱髓鞘脑病患者及1例多发性硬化患者治疗后复查HCMVpp65转为阴性。结论HCMV与炎性脱髓鞘型神经系统疾病的发生密切相关。HCMVpp65抗原血症检测动态观察对临床治疗有指导意义。膦甲酸钠对HCMV所致炎性脱髓鞘型神经系统疾病有良好疗效。