β-羟基异戊酰紫草素二甲醚衍生物对白血病细胞株THP-1的作用

 目的　选用人类单核细胞白血病细胞株THP-1,体外加入紫草素二甲醚衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基异戊酰紫草素（SK36）,研究其在THP-1细胞株增殖和凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法　CCK法检测SK36对THP-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞早期凋亡标记Annexin V／ PI及细胞凋亡通路Caspase活性;激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡和坏死。结果　流式细胞术检测结果显示,1.02 μg／ml SK36作用24、48 h后的细胞凋亡率分别为（40.61±2.13）% 和 （67.40±9.15）%,明显高于对照组的（16.97±0.61）%,差异有统计学意义（t＝18.444,t＝9.528,P＜0.01）;SK36诱导THP-1细胞凋亡且经历了Caspase-3的激活（F＝323.61,P＜0.01）。结论　紫草素二甲醚衍生物SK36能有效地诱导THP-1细胞凋亡,其作用机制主要是激活Caspase-3。     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

不同预激方案诱导白血病细胞株凋亡的机制研究

目的:旨在了解不同预激方案作用于急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞株HL-60和急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMOL)细胞株U937的体外效应及其机制。方法:设置对照组(未给予药物处理),阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)、阿克拉霉素(aclarubicin,Acla)和米托蒽醌(mitoxantrone,Mito)单药组,Ara-C联合Acla组以及Mito联合Ara-C的双药联合组,粒细胞集落刺激因子(granulocyte-colony stimulating factor,G-SCF)预激联合Ara-C和Acla(CAG方案)以及G-CSF预激联合Mito和Ara-C(MAG方案)的三药联合组。药物处理各组细胞24和48h后,观察细胞学形态;采用CCK-8法检测各组2种白血病细胞的生长抑制率;FCM检测各组的细胞凋亡率和细胞分化抗原CD11b的表达率;应用FCM检测与细胞凋亡相关的线粒体膜电位(JC-1法)及caspase-3活性的变化。结果:CAG和MAG方案作用48h后,HL-60和U937细胞形态学变化表现为凋亡小体明显增多;各组药物作用48h后,HL-60和U937细胞的生长均受到抑制,三药联合组的细胞存活率明显下降,并呈时间依赖效应。除Ara-C单药组外,其余各组U937细胞的凋亡率均高于HL-60细胞;各组之间细胞分化抗原CD11b的表达率差异无统计学意义。药物作用后,HL-60和U937细胞线粒体膜电位降低,且三药联合组明显高于单药组和对照组(P<0.05);三药联合组和单药组的caspase-3荧光强度较对照组显著增强(P<0.05)。结论:CAG和MAG方案主要通过诱导白血病细胞凋亡而发挥治疗效应,其作用机制可能与降低线粒体膜电位继而激活caspase-3从而诱导白血病细胞凋亡有关。     

减毒水泡性口炎病毒诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究减毒水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法:将减毒VSV以1.0 MOI的接种密度感染HeLa细胞,在6、12、18、24和30 h后收集细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色观察HeLa细胞凋亡形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa细胞早期凋亡率,流式细胞术分析HeLa细胞sub-G1凋亡峰,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,caspase试剂盒检测HeLa细胞caspase-3、caspase-8及caspase-9的活性。结果:减毒VSV感染HeLa细胞12和24 h后,HeLa细胞增殖活力分别为(78.4±1.9)%和(63.1±5.6)%(P<0.01);早期凋亡细胞率分别为(16.88±2.48)%和(31.9±4.24)%(P<0.01),sub-G1凋亡峰分别为(14.85±1.48)%和(21.05±2.28)%(P<0.01)。随着减毒VSV感染时间的增加,HeLa细胞线粒体跨膜电位逐渐降低(P<0.05),caspase-9和caspase-3的活性显著升高(均P<0.05)。结论:减毒VSV能够抑制HeLa细胞的增殖,并通过caspase-9和caspase-3依赖的途径诱导HeLa细胞凋亡。     

Fas／FasL信号通路在千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡中的作用与机制研究

目的：在明确千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡的基础上,从Fas/FasL信号通路的角度探讨其诱导凋亡的分子机制。方法 HL-60细胞培养体系中分别以千金子甾醇终浓度2．5、10、40μg/ml作用24 h后CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光学及荧光显微镜下观察细胞形态学变化,Annexin Ⅴ/PI 流式细胞术检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应法检测Fas/FasL、caspase-8和caspase-3 mRNA转录水平,比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性。结果千金子甾醇可明显抑制HL-60细胞的增殖,增殖抑制率分别为（34．9±3．7）％、（54．6±5．2）％、（61．3±4．3）％,细胞呈典型凋亡形态学改变,细胞早期凋亡率分别为（23．4±3．1）％、（35．7±4．3）％、（53．2±3．9）％。Fas、FasL、caspase-8和caspase-3 mRNA转录水平明显上调（P＜0．01）,caspase-8和caspase-3活性显著增高（P＜0．01）。结论千金子甾醇可以诱导HL-60细胞发生剂量依赖性细胞凋亡,其机制与上调Fas/FasL凋亡信号通路有关。     

三七皂苷R1通过线粒体相关通路促进白血病细胞株HL-60凋亡

目的:观察三七皂苷(notoginsenoside) R1对白血病细胞株HL-60凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测三七皂苷R1(10、20、40及80 μmol/L)处理HL-60细胞12、24、36及48 h后HL-60细胞的凋亡情况,Western blotting检测HL-60细胞内Bcl-2、Bax及细胞色素C(cytochrome-C,Cyt C)蛋白的表达水平,JC-1染色法观察HL-60线粒体膜电位的变化.结果:MTT和流式细胞术检测显示三七皂苷R1浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,且细胞存活率随处理时间的增加而降低;与空白对照组相比,加入三七皂苷R1后细胞中Bcl-2蛋白表达显著减少[(0.45 ±0.03) vs (1.00 ±0.00),P＜0.05]、Bax蛋白表达显著增加[(1.72 ±0.08) vs (1.00±0.00),P＜0.05];Bcl-2/Bax比值减小[(0.21±0.01) vs (1.00±0.00),P＜0.05];线粒体膜电位降低[(0.56±0.09) vs (1.00±0.00),P＜0.05];胞质(cyto)中Cyt-C蛋白表达水平显著下降[(0.42±0.03) vs (1.00±0.00),P＜0.05].结论:三七皂苷R1可显著诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能是通过线粒体通路促进细胞的凋亡;本实验可为三七皂苷R1用于临床治疗白血病提供实验依据.     

维生素E琥珀酸酯诱导K562/ADM细胞凋亡过程中线粒体结构和功能的改变

目的：观察维生素E琥珀酸酯（vitamin E succinate，VES）诱导K562／ADM耐药细胞凋亡过程中线粒体形态及功能的改变。方法：采用annexin V／PI双标记法和透射电镜检测K562／ADM细胞凋亡；电镜观察凋亡细胞线粒体形态结构变化；流式细胞仪（FCM）检测线粒体跨膜电位（△ψm）和caspase-3活性变化；激光共聚焦显微镜分析细胞色素C（cytochrome c，Cyt c）的释放。结果：20μmol／L和40μmol／L VES处理K562／ADM细胞12～24h，annexin V／PI染色检测发现早期凋亡细胞明显增加，并呈现典型的凋亡形态改变。线粒体内外膜融合、缩小、碎片化，嵴减少且紊乱；线粒体△ψm降低，细胞质内Cytc释放增多；caspase-3活性显著增强。结论：VES可能通过改变线粒体的形态结构和稳定性，导致线粒体膜电位降低，Cytc释放，caspase-3激活而诱发K562／ADM耐药细胞凋亡。     

茶多酚诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究茶多酚对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:通过MTT法、瑞氏染色法和FCM法分别检测不同浓度的茶多酚对RPMI 8226细胞增殖和凋亡的影响;FCM法检测对细胞线粒体膜电位的影响;蛋白质印迹法检测△caspase-3片段和凋亡相关蛋白bc1-2的表达;ELISA法检测对RPMI 8226细胞分泌细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的影响.结果:与对照组相比,茶多酚浓度129.6和259.1 μmol/L处理RPMI 8226细胞1～3 d后均能明显抑制细胞的增殖,且呈时间-剂量相关性;统计显示,24 h时的半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为165.7μmol/L.茶多酚(129.6μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞出现典型的凋亡形态学改变;茶多酚(129.6和259.1 μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞凋亡率分别为(24.6±2.3)％和(43.5±3.9)％,与对照组比较差异均有统计学意义;细胞的线粒体膜电位降低,活性△caspase-3片段产生,bc1-2蛋白表达水平下降,IL-6分泌水平降低.结论:茶多酚能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与产生活性△caspase-3片段,抑制bc1-2蛋白表达,降低细胞分泌IL-6水平相关.     

鲎血细胞多肽诱导HL-60 细胞凋亡时线粒体膜电位的变化

目的：探讨鲎血细胞多肽诱导HL-60细胞凋亡与线粒体膜电位变化的关系。方法：鲎血细胞多肽0、12.5,25、50、100μg/ml,分别处理HL-60细胞2、4、6、8、10、12、14小时，罗丹名123染色，流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。结果：不加鲎血细胞多肽组处理0-14小时，线粒体膜电位稳定，鲎血细胞多肽12.5-100μg/ml各组均出现线粒体膜电位下降；线粒体膜电位的下降与鲎血细胞多肽浓度及作用时间相关。结论：鲎血细胞多肽诱导HL-60细胞凋亡与线粒体膜电位下降有关。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

胰腺实性假乳头状瘤7例临床病理特征并文献复习

目的探讨胰腺实性假乳头状瘤（SPTP）的临床病理特征以及免疫组化特点。方法对7例SPTP进行临床、组织病理、免疫表型的观察并复习相关文献。结果 7例SPTP,男女之比为2∶5,平均年龄34岁,仅3例有临床症状。6例发生于胰腺,有1例发生在胰腺外。肿瘤均呈囊实性;组织学上肿瘤细胞形态较一致,呈巢状排列,并形成假乳头状结构,部分瘤细胞呈透明细胞样细胞改变;间质黏液样变性、异物巨细胞反应及胆固醇样结晶。免疫组化结果显示：瘤细胞Vimentin、AAT呈强阳性,EMA均呈阴性;部分病例NSE、Syn、CgA、CD56、CD10、、AE1/AE3、PR局部阳性。4例术后随访30～114个月,患者均未发现复发及转移。结论 SPTP少见,多见于年轻女性,以实性、假乳头结构为主要组织学特征,并伴有其它多种组织学结构及多向分化的免疫组化表型。免疫组织化学检测结果对SPTP诊断具有重要价值,AAT、Vimentin阳性是诊断SPTP的可靠依据。