子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdrl、肺耐药蛋白mRNA及其蛋白的表达变化和意义

目的 寻找预测子宫颈癌新辅助化疗效果的分子生物学指标.方法 采用real time RTPCR和免疫组织化学法检测40例子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdrl、肺耐药蛋白(LRP)mRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平.结果 新辅助化疗前后子宫颈癌组织中mdrl的表达量分别为(45.800 ±0.636、62.381±0.743,t=-66.582,P＜0.01);新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP mRNA的表达量分别为(50.048±0.770、66.912±0.752,t=-78.604,P＜0.01);新辅助化疗前后子宫颈癌组织中P-gP的阳性表达分别为40.0%(16/40)、70.0%(28/40),χ2=7.273,P=0.007;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP的阳性表达分别为62.5%(25/40)、92.5%(37/40),χ2=10.323,P=0.001,新辅助化疗后mdrl、LRPmRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平较化疗前明显升高,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).P-gP、LRP表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分级无关(P＞0.05);P-gP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为6(37.5%)、17(70.8%),2组比较差异有统计学意义(χ2=4.365,P＜0.05).LRP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为12(48.O%)、13(86.7%),2组比较差异有统计学意义(χ2=5.980,P＜0.05);P-gP与LRP成正相关(χ2=4.177,r=0.323,P＜0.05).结论 P-gP、LRP表达状态有可能作为预测化疗效果的参考指标.     

ARHI和环氧化酶-2蛋白在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨ARHI蛋白和环氧化酶-2（COX-2）蛋白在子宫颈腺癌发生中的作用及其相互关系。方法采用免疫组织化学法检测40例子宫颈腺癌及30例慢性子宫颈炎组织中。ARHI蛋白及COX-2蛋白的表达情况。结果ARHI在40例子宫颈腺癌组织阳性率为50．0％（20／40）,低于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率90．0％（27／30）,差异有统计学意义（X^2=12．43,P〈0．05）;COX-2在40例子宫颈腺癌组织阳性率82．5％（33／40）,高于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率0（0／30）,差异有统计学意义（x^2=46．16,P〈0．05）;ARHI蛋白阳性表达率与子宫颈腺癌临床分期（x^2=3．96,P〈0．05）及组织分化程度高低有关（x^2=7．04,P〈0．05）。COX-2蛋白与子宫颈腺癌组织分化程度有关（x^2=7．04,P〈0．05）,与临床分期无关（P〉0．05）;ARHI蛋白和COX-2蛋白与淋巴结有无转移均无关（P均〉0．05）;ARHI蛋白和COX．2蛋白表达有关联（r=0．31,P〈0．05）。结论子宫颈腺癌的发生与ARHI基因失活和COX-2蛋白表达异常有关,两者可能协同作用参与子宫颈腺癌的发生。     

缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白1在胃癌中的表达及其意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1alpha,HIF-1α）和葡萄糖转运蛋白1（glucosetransporterl,GLUTl）的基因产物在胃癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学EnvisionTM二步法检测172例胃癌和30例癌旁正常胃组织（距癌灶5cm以上）中HIF-1α和GLUT1蛋白的表达。结果HIF-1α在172例胃癌和30例癌旁组织中的阳性表达率分别为55．8％（96／172）和0,差异有统计学意义（x^2=11．16,P〈0．01）。胃癌组织中,HIF-1α表达与胃癌的临床分期呈正相关（x^2=25．53,P〈0．01）、与组织学分级呈正相关（x^2=24．99,P〈0．01）、与淋巴结转移呈正相关（x^2=1．20,P〈O．01）、与肿瘤坏死呈正相关（x^2=30．35,P〈0．01）。GLUT1蛋白在172例胃癌和30例癌旁组织中的阳性表达率分别为61．6％（106／172）和0,差异有统计学意义（X。=13．76,P〈0．01）。胃癌组织中,GLUT1表达与胃癌的临床分期呈正相关（x。=25．43,P〈0．01）、与组织学分级呈正相关（x^2=13．13,P〈0．05）、与淋巴结转移呈正相关（x^2=11．31,P〈0．05）、与肿瘤坏死呈正相关（x2．-23．29,P〈0．01）。HIF—Id和GLUTI蛋白的表达与患者年龄和术后5年生存率均无相关性。经Spearman相关分析,显示FIIF-1α与GLUT1表达程度呈正相关（r=0．636,P〈0．01）。结论HIF-1α、Glutl的阳性表达可以作为胃癌侵袭转移潜能的生物学指标,且这些指标的表达对于临床早期干预治疗具有重要的指导意义。     

K—Ras与B—Raf在前列腺癌组织表达及其与预后的关系

目的研究K—Ras和BRaf蛋白表达与前列腺癌发生及预后的关系。方法应用免疫组织化学方法（SP法）检测74例前列腺癌和39例前列腺增生组织KRas和B-Raf蛋白表达。74例前列腺癌中高中分化23例,低分化51例;未浸润转移（A＋B）期40例,浸润转移（C＋D）期34例。结果K—Ras在前列腺癌组织的表达（79．73％,49／74）明显高于前列腺增生（23．08％,9／39）,x^2=19．025,P〈0．01。在高中分化与低分化组的表达分别为（65．22％,15／23）与（66．67％,34／51）,x^2=0．15,P〉0．05,在（A＋B）期与（C＋D）期表达分别为（60．00％,24／40）与（73．53％,25／34）,x^2=1．504,P〉0．05;B-RaI在前列腺癌表达（64．86％,48／74）明显高于前列腺增生组织（10．26％,4／39）,x^2=30．659,P（0．05。在高中分化与低分化表达分别为（43．48％,10／23）与（74．51％,38／51）,x^2=6．698,P〈0．05,在（A＋B）期与（C＋D）期表达分别为（42．50％,17／40）与（91．18％,31／34）,x^2=19．107,P〈0．05。K—Ras与B-Raf蛋白表达呈正相关,x^2=0．272,P〈O．05。结论K—Ras与B-Raf蛋tt过表达与前列腺癌的发生有关,B-Raf蛋白高表达预示着前列腺癌的预后较差。     

卵巢上皮癌组织TLR4和P—gP表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体4（TLR4）、P糖蛋白（P-gp）在卵巢上皮癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法，检测50例卵巢上皮癌（化疗敏感组25例，化疗耐药组25例）组织和10例正常卵巢组织中TLR4、P—gP的表达。结果卵巢上皮癌组织中TLR4和P—gP的阳性表达率分别为62％和46％，明显高于正常卵巢组织的20％和10％（χ^2=5．939、4．500，P〈0．05）。卵巢上皮癌化疗耐药组TLR4和P—gP阳性表达率明显高于化疗敏感组（χ^2=6．876、6．522，P（0．05）。卵巢上皮癌组织TLR4的表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性（χ^2=6．848、6．376、5．433，P〈0．05），P—gP表达与病理分级、淋巴结转移具有相关性（χ^2=9．071、6．402，P〈0．05）；TLR4、P—gP蛋白表达具有正相关性（r=0．392，P〈0．05）。结论TLR4和P-gP的高表达及其相关性与卯巢上皮癌的化疗耐药及预后关系密切。     

肺癌中MDR基因产物LRP、P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义

目的：探讨多药耐药（MDR）基因产物LRP、P-gP、GST-π、TopoⅡ在肺癌中的表达及临床相关性。方法：应用单克隆抗体、免疫组化技术S-P法，对70例肺癌标本进行上述4种MDR指标检测。结果：在肺癌组织中LRP、P—gP、GST-π、TopoⅡ表达的阳性率分别为75．7％、70．0％、82．9％、84．3％，其与性别、年龄、部位、临床分期无关（P〉0．05）；在未分化、小细胞型肺癌中LRP、P—gP、GST-π表达的阳性率明显降低（P〈0.05），而TopoⅡ表达的阳性率则升高（P〈0．05，低分化型肺癌除外）。结论：LRP、P-gP、GST-π、TopoⅡ在未化疗过的肺癌组织中均有不同程度的高表达，且与肺癌的某些生物学行为有关，联合检测有助于化疗药物的选择及预后的判断。     

乳腺癌雌孕激素受体表达预测新辅助化疗敏感性的研究

目的探讨乳腺癌雌孕激素受体表达预测新辅助化疗有效性的可能性。方法应用免疫组织化学方法检测144例乳腺癌患者治疗前雌激素受体但R）表达、孕激素受体（PR）表达,评估对新辅助化疗的敏感性。结果144例新辅助化疗乳腺癌患者中,ER阴性者新辅助化疗有效率为83．91％,ER阳性者为57．89％,差异有统计学意义（x2=12．00,P〈0．05）;PR阴性者有效率为80．85％,PR阳性者为60．00％,差异有统计学意义（x2=7．30,P〈0．05）;ER、PR双阴性组与ER、PR单阳或双阳性组有效率差异也有统计学意义（X2=9．53,P〈0．05）。结论ER或PR阴性患者对化疗更敏感,ER、PR可作为乳腺癌新辅助化疗有效性的预测指标。     

子宫内膜样腺癌组织PELP1／MNAR表达及其与雌激素受体相关性

目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（PELP1／MNAR）和雌激素受体（ER）在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化PV二步染色法,对40例正常子宫内膜组织、60例子宫内膜增生过长组织和60例子宫内膜样腺癌组织中PELP1／MNAR、ER进行测定。结果子宫内膜样腺癌及不典型增生组织腺上皮细胞核中PELP1／MNAR阳性表达率高于正常子宫内膜及单纯性、复杂性增生组织（x^2=6．25～16．90,P〈0．05）;子宫内膜样腺癌绝经后组织间质中PELP1／MNAR阳性表达率低于未绝经组织（x^2=7．17,P〈0．05）;子宫内膜样腺癌及增生期内膜腺上皮细胞核中ER阳性表达率高于分泌期及增生过长组织（x^2=5．208～12．907,P％0．05）。子宫内膜样腺癌组织中ER与PELP1／MNAR的阳性表达率呈正相关（x^2=0．315,P〈0．01）。结论PELPl／MNAR在子宫内膜各个时期的表达异常可能与子宫内膜样腺癌的发生发展有关。     

乙酰肝素酶在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌组织中乙酰肝素酶（HPSE）的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SABC法检测45例胰腺癌组织、20例癌旁组织、20例正常胰腺组织中HPSE的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。结果胰腺癌组织中HPSE的阳性表达率明显高于癌旁及正常胰腺组织（x^2=22．35、29．79,P〈0．05）。淋巴结转移组HPSE蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移组（x^2=4．60,P〈0．05）。Ⅲ＋Ⅳ期组HPSE蛋白阳性表达率高于Ⅰ＋Ⅱ期组（x^2=6．91,P〈0．05）。结论在胰腺癌组织中HPSE高表达,且与肿瘤的浸润、转移有关。HPSE可以作为判断胰腺癌浸润、转移的参考指标之一。     

急性髓细胞白血病Bcl-2蛋白表达及其临床意义

目的：检测急性髓细胞白血病（AML）Bcl-2蛋白，并评价其与AML患者临床特征及多药耐药基因MDRl表达产物P170的关系。方法：免疫细胞化学ABC法检测白血病细胞中Bcl-2蛋白及P170表达。结果：AML中存在Bcl-2高水平表达，但复发的AML与初发AMLBcl-2表达无显著差异（P〉0．05）。初发AML中，Bcl-2阳性组患者完全缓解（CR）率显著低于Bcl-2阴性组（P〈O．01）。Bcl-2的阳性与阴性组中P170表达无显著差异（P〉0．05）。Bcl-2和P170间无相关表达（r1=0．171，P〉0．05），但Bcl-2／P170双阳性组化疗CR率显著低于双阴性组（P〈O．01）或P170／Bcl-2单阳性组（P〈O．05）。结论：初发AML中Bcl-2蛋白高水平表达与化疗耐药有关；Bcl-2与P170联合表达患者化疗反应更差。     

hTERT在人胰腺癌组织中的表达及其与COX-2、P-gp、Bcl-2蛋白表达和临床病理特征的关系

目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）、环氧合酶-2（COX-2）、P-糖蛋白（P-gp）和Bcl-2蛋白在胰腺癌组织中的表达及其相互关系,以及hTERT与胰腺癌的病理特征的关系。方法选择胰腺癌38例,慢性胰腺炎25例,正常胰腺组织20例。以SABC法检测hTERT、COX-2、P-gp和Bcl-2的表达。按手术记录描述肿瘤的病理特征。结果在38例胰腺癌组织中hTERT、P-gp、COX-2、Bcl-2阳性表达率分别为81.58%、52.63%、76.32%、57.90%,评分分别为（6.04±1.08）分、（4.50±1.75）分、（5.96±1.60）分、（5.61±1.08）分,而正常胰腺组织和慢性胰腺炎组织的hTERT与Bcl-2阳性表达率和评分均为0,在慢性胰腺炎P-gp、COX-2阳性率分别为20.00%、24.00%,评分分别为（1.21±0.86）分、（3.59±1.42）分,在正常胰腺组织阳性率分别为15.00%、0,评分分别为（0.90±0.58）分、0分。胰腺癌组与其他组各项阳性表达率和评分比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。在胰腺癌组织中,hTERT表达与P-gp（rp=0.365,P〈0.05）、COX-2（rp=0.534,P〈0.001）、Bcl-2（rp=0.557,P〈0.001）表达和临床分期（rp=0.333,P〈0.05）呈显著正相关。结论hTERT、P-gp、COX-2和Bcl-2蛋白在胰腺癌组织中均有较高表达,hTERT表达与P-gp、COX-2、Bcl-2表达和胰腺癌的临床分期均有显著的正相关性。     

抑癌基因WWOX与相关基因p73、Bax在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）的表达与结直肠癌生物学行为及p73、Bax表达的相关性。方法应用免疫组化Envision二步法检测58例结直肠癌中WWOX、p73及Bax的表达,并以20例结直肠黏膜炎症为对照。结果①WWOX、Bax在结直肠癌组织中的阳性率分别为25.86%、58.62%,显著低于结直肠黏膜炎症的65%、85%（P〈0.01,P〈0.05）;二者在结直肠癌中的表达与患者的预后相关（P〈0.01,P〈0.05）,且WWOX的表达在癌组织与浸润深度相关（P〈0.05）;②p73在癌组织中的阳性率显著高于炎症组（63.79%vs 30%,P〈0.01）,在结直肠癌中的表达与淋巴结转移及浸润深度有关（P〈0.05）;③WWOX与p73的表达无关（χ2=0.072,P〉0.05）,而与Bax的表达有关（χ2=6.561,P〈0.05）。结论 WWOX、p73及Bax参与调控结直肠癌的发生、发展,且WWOX与Bax协同作用,在结直肠癌的预后中扮演了重要角色。     

三种耐药相关基因及其蛋白在乳腺癌组织中的表达和意义

目的 探讨乳腺癌组织和癌旁正常组织中MDR1、BCRP、LRP的mRNA及其相应蛋白P-gp、BCRP、LRP的阳性表达情况及临床意义.方法 采用RT-PCR检测42份乳腺癌组织及其相应癌旁正常组织中MDR1、BCRP、LRP mRNA的相对表达量,同时采用IHC检测126份乳腺癌组织及42份相应癌旁正常组织中P-gp、BCRP、LRP蛋白的阳性率,并观察3种耐药相关基因及其蛋白与乳腺癌患者临床病理因素、腋窝淋巴结转移及5年复发转移与未复发转移之间的关系.结果 RT-PCR检测MDR1、BCRP、LRP mRNA在乳腺癌组织中的相对表达量分别为0.81±0.17、0.78 ±0.14、0.79±0.13,癌旁正常组织中的相对表达量分别为0.33±0.11、0.45±0.09、0.36±0.10;3种耐药基因在2组中的相对表达量的差异均有统计学意义(t值分别为4.613、4.850、8.089,P均<0.01).IHC检测P-gp、BCRP、LRP蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为41%(52/126)、39%(49/126)和66%(83/126),癌旁正常组织中的阳性率分别为14%(6/42)、17%(7/42)和19%(8/42),3种耐药蛋白在2组中的表达差异有统计学意义(x2值分别为10.147、7.020、27.820,P均<0.01).MDR1 mRNA和P-gp与乳腺癌患者不同临床分期及腋窝淋巴结有无转移有关(r=0.369、0.39 8,P均<0.05),BCRPmRNA及其蛋白与乳腺癌患者腋窝淋巴结有无转移有关(r=0.355,P<0.05);5年内发生复发转移的39例患者与5年内未发生复发转移的32例患者P-gp、BCRP及LRP阳性率比较,P-gp阳性率在2组中的差异有统计学意义(x2=11.771,P<0.01),BCRP及LRP阳性率在2组中的差异无统计学意义(x2=2.261、0.078,P均>0.05).3种耐药基因及其蛋白在乳腺癌组织中阳性表达的一致率分别为90.48%、92.85%和85.71%(Kappa值分别为0.806、0.751和0.697,P均<0.01).结论 乳腺癌中存在着广泛的原发性多药耐药现象,3种耐药基因MDR1、BCRP、LRP的mRNA及其P-gp、BCRP、LRP蛋白均参与了乳腺癌多药耐药的形成;检测3种耐药基因和蛋白的表达可为乳腺癌患者有目的 地选择化疗方案提供一定的理论依据及策略;特别是对于P-gp阳性表达者不宜使用CAF(环磷酰胺+阿霉素+5-氟尿嘧啶)方案化疗.     

缺氧诱导因子1α和P糖蛋白在乳腺癌中的表达及意义

目的检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和P糖蛋白(P-gp)在乳腺癌组织中的表达并分析其临床病理学意义及两者之间的相关性。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)检测59例乳腺癌组织和15例癌旁正常乳腺组织中HIF-1α和P-gp的表达。结果 HIF-1α和P-gp在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为61.0%(36/59)、40.7%(24/59),均明显高于正常乳腺组织(P0.05)。HIF-1α和P-gp在有淋巴结转移组中的阳性表达率均明显高于其在无淋巴结转移组中的阳性表达率(76.5%vs 40.0%和52.9%vs 24.0%),差异具有统计学意义(P0.05)。随着乳腺癌肿块的增大、组织学分级的增加,HIF-1α的阳性表达率均增高(分别为30.8%、65.7%、81.8%和22.2%、58.6%、81.0%),并均具有线性趋势(P0.05),而P-gp阳性表达率的差异均无统计学意义(P0.05)。在不同年龄、病理类型及月经状态组中HIF-1α和P-gp阳性表达率的差异均无统计学意义(P0.05)。HIF-1α与P-gp表达呈正相关表达(r=0.380,P0.05)。结论 HIF-1α和P-gp的高表达提示乳腺癌具有更高的侵袭性,可联合检测作为判断乳腺癌恶性程度及临床化疗疗效的指标。     

mdrlshRNA逆转膀胱癌耐药细胞株BIU-87／ADM对ADM的耐药性

目的构建抑制mdrl基因表达的短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,研究shRNA逆转膀胱肿瘤细胞多药耐药的可行性。方法针对mdrl基因已知mRNA序列不同位点,选择2个靶序列,构建靶向mdrlshRNA真核表达载体,通过脂质体介导转染膀胱肿瘤耐药细胞株BIU-87／ADM,利用RT-PCR和免疫细胞化学检测mdrlmRNA及P糖蛋白（P-gP）表达水平的变化,MTT法检测BIU-87／ADM细胞对ADM的敏感性。结果构建的2种重组质粒pshRNA-A、pshRNA-B均明显抑制BIU-87／ADM细胞株mdrl基因表达（P〈0．05）,免疫细胞化学检测显示P-gP表达明显下调（P〈O．05）,MMT法检测显示膀胱癌耐药株BIU-87／ADM对化疗药物ADM的敏感性明显增强,对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为52．02％和54．87％（P％0．05）。结论shRNA可有效抑制BIU-87／ADM细胞mdrlmRNA的转录和P-gP蛋白的表达,恢复BIU-87／ADM细胞对ADM的敏感性,给逆转膀胱肿瘤的多药耐药提供了一种新的方法。     

小细胞肺癌组织PXR与P—gP表达及其意义

目的探讨孕烷x受体（PXR）、P糖蛋白（Pgp）在小细胞肺癌（SCLc）组织的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法分别检测40例SCLC组织中PXR、PgP的表达情况。结果PXR、P—gP在小细胞肺癌组织表达率分别为35．0％、17．5％。PXR、P—gP的表达与病人年龄、性别及肿瘤分期无关（P〉0．05）,而与吸烟史有关（X2=8．47、5．09,P〈0．05）。SCLC组织中PXR与P—gP蛋白的表达水平呈正相关（X2=9．60,P〈0．05）。结论PXR、P—gP在SCLC组织中有不同的表达水平,PXR与P—gP的表达水平呈正相关,PXR可能是诱导P—gP表达的一个重要因子,检测癌组织PXR的表达可能更有助于早期判断机体对化疗药物的敏感性。