低频超声终止妊娠的实验研究

目的探讨低频超声止孕可能性。方法低频聚焦超声(353 kHZ)6种声强直接照射妊娠第10 d兔胚胎,10 d后观察胚胎死亡率,并用免疫组化法检测胎盘组织细胞p53的变化。结果声强30 W/cm2、35 W/cm2及≥40 W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.00%、72.88%和100%;照射后胎盘组织细胞p53表达增加,96 h升至最高点,192 h接近对照组水平。结论低频超声抗孕具有可行性,可诱导胎盘组织细胞p53表达增加,但具有可恢复性。     

高强度聚焦超声终止小鼠妊娠的实验研究

目的:探讨高强度聚焦超声(H IFU)终止妊娠的可能性。方法:利用H IFU治疗机(780 kHZ)6种声强各60s体内直接照射妊娠第7天小鼠胚胎,妊娠15 d时观察各组胚胎死亡率和胎盘、子宫的形态学变化。结果:对照组胚胎总死亡率为12.65%(32/253);照射组中声强3 W/cm2、6 W/cm2及≥9 W/cm2组的胚胎死亡率分别为25.00%(12/48)、72.88%(43/59)和100%(64/64、43/43、40/40、35/35)。超声照射后8 d的改变:光镜下主要为胎盘出血、变性、坏死;电镜下胎盘组织细胞坏死呈致密团块状,子宫改变轻微。变化随剂量的增加而明显。结论:胎盘较子宫对H IFU更敏感,更易受损,H IFU抗早孕具有潜在的可行性,值得进一步研究。     

凋亡基因表达与FGR胎盘细胞凋亡的相关性研究

目的:探讨凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况及与胎儿宫内生长受限(FGR)病因的相关性。方法:应用免疫组化法检测凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况。结果:①Bc l-2、Bax的表达强度在FGR组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),P53的阳性率及表达强度在FGR组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);②Bc l-2、Bax、P53的阳性率及表达强度在FGR组中的FGR不伴有PIH组及FGR伴有PIH组两组间差异无统计学意义。结论:①正常孕妇和FGR患者胎盘组织中均有细胞凋亡,但FGR患者胎盘细胞凋亡较多,这可能是引起FGR发生的重要病理过程;②FGR胎盘细胞凋亡可能是非P53依赖性的,由Bax、Bc l-2介导的细胞凋亡。     

人工流产与反复自然流产蜕膜组织中凋亡调控基因的表达

目的:探讨人工流产与自然流产蜕膜组织中凋亡调控基因的表达。方法:人工流产和反复自然流产蜕膜组织各30份,应用免疫组织化学方法测定Bc l-2、Bax、P 53、Fas、FasL 5种调控基因在蜕膜组织中的蛋白表达。结果:Bc l-2的表达在人工流产组与自然流产组无明显差异(P>0.05);Bax在自然流产组中的表达较人工流产组明显增强(P<0.05);FasL的表达在自然流产组明显低于人工流产组(P<0.05);Fas表达自然流产组与人工流产组无明显差异(P>0.05);P 53蛋白在自然流产组的表达强于人工流产组(P<0.05)。结论:自然流产的发生有3条凋亡调控途径:一为Fas/FasL途径:由于滋养细胞表面FasL表达的减少,不能引起母体内特异性的活化T细胞的凋亡,导致母体对胚胎的排斥反应,引起自然流产;另一为Bc l-2/Bax途径:虽然Bc l-2的表达在人工流产与自然流产蜕膜中无明显差异,但由于Bax在早孕自然流产蜕膜组织中的表达明显增强,导致Bc l-2/Bax的表达量失衡而引起流产;再一为P 53途径:野生型的P 53增多诱发细胞凋亡而导致流产发生。     

重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

诊断超声对人早孕绒毛细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨诊断超声对人早孕绒毛细胞凋亡的影响及机制。方法:应用ALOKA5500彩色多普勒超声诊断仪,对拟进行人工流产的32例早孕(45～60天)妇女的孕囊进行不同时间的持续照射,孕妇随机分为4组:对照组(0min组)、10min组、20min组和30min组,照射后24h取材。DNA Lader检测人早孕绒毛细胞凋亡;Western blot检测胚胎组织Bcl-2、Bax、Cytochrome-C、Caspase-3蛋白表达及绒毛细胞线粒体和细胞浆内的Bax蛋白表达。结果:对照组和超声照射10min组绒毛组织未见到DNA核小体断裂,照射20min组DNA核小体断裂开始出现,照射30min组DNA核小体断裂最明显。超声照射10min组绒毛组织Bcl-2、Bax、Cytochrome-C、Caspase-3蛋白表达与对照组无差别;各实验组人早孕绒毛细胞内总Bax蛋白表达无明显改变;但超声照射20min组,细胞浆中的Bax表达减少,照射30min组明显减少,而线粒体中的Bax在照射20min组表达增加,30min组明显增加;Bcl-2蛋白在照射20min组表达下降,照射30min组明显下降,而Cytochrome-C和Caspase-3蛋白在照射20min组表达升高,照射30min组明显升高。结论:诊断超声持续照射早孕孕囊组织10min可引起绒毛滋养层细胞凋亡增加,且随照射时间延长而继续增加,超声诱导凋亡是通过线粒体途径。     

促性腺激素释放激素激动剂治疗后子宫肌瘤细胞凋亡调控基因Bcl-2表达的变化

目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotrop in-releasing hormone agonist,GnRHa)对子宫肌瘤及相邻肌层组织细胞凋亡调控基因蛋白Bc l-2的影响。方法:采用免疫组化法测定30例子宫肌瘤患者应用GnRHa(达菲林,3.75 mg/28 d)治疗2~4个月,末次注射4~6周后子宫肌瘤及相邻肌层组织细胞凋亡调控基因蛋白Bc l-2的表达水平,并以30例同期手术的子宫肌瘤患者作对照。结果:GnRHa治疗组子宫及肌瘤体积均明显缩小,子宫体积收缩率为(42.77±12.11)%,子宫肌瘤体积收缩率为(37.65±15.20)%。肌瘤细胞内Bc l-2表达水平明显低于对照组(P<0.01),肌层组织细胞内Bc l-2表达水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:子宫肌瘤细胞内Bc l-2表达水平降低可能是GnRHa缩小子宫肌瘤的重要机制之一。     

超声对活鼠胚胎心肌细胞凋亡影响的研究

目的 观察诊断级超声波对活鼠胚胎心肌细胞Bcl-2及Bax表达及其凋亡的影响。方法 采用孕14d的Wistar大鼠36只,分为6组,分别为2.5MHz照射10 min、7MHz照射10 min、10 min对照组、2.5MHz照射40 min、7MHz照射40 min、40 min对照组(7MHz探头,Isppa=227W/cm²,Ispta=385mW/cm²;2.5MHz探头,Isppa=94.5W/cm²,Ispta=15.6mW/cm2)。采用免疫组化检测胎鼠心肌Bax及Bcl-2的表达,用TUNEL法及电镜检测胎鼠心肌细胞的凋亡情况。结果 统计显示同一样本不同胚胎间差异无显著性(P>0.05)。7MHz照射40 min组胎鼠心肌组织Bcl-2(+),Bax蛋白阳性(+),2.5MHz照射40min组胎鼠心肌组织Bcl-2阳性(+),Bax阳性(-),7MHz照射10min组胎鼠心肌组织Bcl-2(+),Bax蛋白阴性(-),2.5MHz照射10 min组胎鼠心肌组织Bcl-2阳性(+),Bax阳性(-),两组对照组两者均为(-);TUNEL试验及电镜显示7MHz照射40 min组较其他组凋亡差异有显著性(P<0.05),其余各组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。结论 较高强度诊断级超声波较长时间辐照可导致胎鼠心肌细胞凋亡,Bcl-2及Bax在该过程中起调节作用,小剂量的超声波可以促进Bcl-2表达来抑制细胞凋亡。     

急性髓性白血病骨髓细胞NF-κB活性及其与WT1和Bcl-2表达的关系

目的探讨核因子κappa B(NF-κB)的活性在急性白血病发病及疗效中的意义及其与W ilm s肿瘤基因(WT1)、B细胞淋巴瘤基因(Bc l-2)表达的关系。方法用EMSA方法检测43例急性髓性白血病病人(分初治、难治及完全缓解组)和30例对照骨髓细胞中NF-κB的活性,用RT-PCR方法检测了各组病人骨髓细胞中WT1、Bc l-2基因的mRNA表达水平。结果急性白血病难治组NF-κB活化明显高于初治组,初治组又明显高于完全缓解组,差异有统计学意义;对照组未检测到NF-κB活化;NF-κB活性与WT1、Bc l-2的表达水平两两之间均呈正相关(r=0.909,P<0.01;r=0.494,P=0.037)。结论NF-κB的活性及WT1、Bc l-2的表达水平与急性白血病的发病及疗效有关。难治性白血病疗效差可能与NF-κB的活性及WT1、Bc l-2的表达水平增高有关。     

Bax和Bcl-2在恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘组织中的表达研究

目的:Bax和Bcl-2是重要的凋亡调节因子,本研究主要探讨细胞凋亡与流产的关系。方 法:应用RT-PCR和原位杂交的方法检测恒河猴正常妊娠和药物流产胎盘、子宫中Bax和Bcl-2的 表达。结果:BaxmRNA在流产胎盘中的表达量明显高于正常妊娠胎盘,在胎盘绒毛滋养层细胞和基 底层蜕膜细胞均有明显表达。Bcl-2mRNA在流产胎盘中的表达量明显低于正常妊娠胎盘,表达模 式与Bax类似。结论:药物可能通过上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致恒河猴胎盘组织和子宫基 底层凋亡细胞的数量增加,影响胎盘的正常结构和功能,从而增加了流产的危险性。     

妊娠期糖尿病胎盘部位脂联素及其受体的表达

目的:探讨胎盘部位脂联素及其受体基因mRNA表达在妊娠期糖尿病病理状态下的变化趋势及与新生儿体重、新生儿Ponderal指数(PI)之间的关系。方法:对26例妊娠期糖尿病产妇、30例正常产妇采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测胎盘脂联素及其受体基因mRNA的表达,并对其表达水平进行半定量分析。结果:①脂联素及其受体1/2基因mRNA表达于胎盘组织;②妊娠期糖尿病组胎盘脂联素基因mRNA表达水平(0.75±0.19)显著低于正常对照组(1.17±0.17),差异有统计学意义(P<0.05);妊娠期糖尿病组胎盘AdipoR1基因mRNA的表达水平(2.08±0.67)与正常对照组(1.98±0.68)比较,差异无统计学意义(P>0.05);妊娠期糖尿病组胎盘AdipoR2基因mRNA的表达水平(1.58±0.36)显著高于正常对照组(1.19±0.25),差异有统计学意义(P<0.05);③胎盘脂联素基因mRNA表达水平与新生儿出生体重、PI呈显著负相关关系;胎盘AdipoR2基因mRNA表达水平与新生儿出生体重、PI无相关性。结论:①胎盘组织中存在脂联素及其受体基因的表达;②胎盘来源的脂联素及其受体可能参与了胎儿生长发育的调节。     

妊娠期糖尿病胎盘脂联素及其受体基因mRNA的表达

目的:探讨妊娠期糖尿病胎盘脂联素及其受体基因mRNA表达变化情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测20例妊娠期糖尿病产妇、25例正常产妇胎盘脂联素及其受体基因mRNA的表达,并进行半定量分析。结果:①脂联素及其受体1/2基因mRNA在胎盘组织均有表达;②妊娠期糖尿病组胎盘脂联素基因mRNA表达水平(0.78±0.19)显著低于正常对照组(1.16±0.18),t=-6.76,P<0.001;妊娠期糖尿病组胎盘脂联素受体1基因mRNA的表达水平(2.04±0.72)与正常对照组(2.03±0.69)比较差异无统计学意义,t=0.06,P>0.05;妊娠期糖尿病组胎盘脂联素受体2基因mR-NA的表达水平(1.64±0.40)显著高于正常对照组(1.20±0.26),t=4.38,P<0.001。结论:胎盘部位有脂联素及其受体的表达,妊娠期糖尿病病理状态可影响脂联素及其受体2基因水平在胎盘的表达,但对受体1的表达无明显影响。     

染料木黄酮对ox-LDL诱导人静脉平滑肌细胞MCP-1表达的影响

目的: 研究染料木黄酮(Gen)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达的影响。方法: 以hUVSMC为对象,采用逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验观察不同浓度Gen(1.0×10-5、3.0×10-5、9.0×10-5 mol/L)对ox-LDL诱导的MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:三种浓度的Gen均能明显降低ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA 和蛋白的表达,且高剂量与生理浓度的17b-雌二醇有相近的作用。结论:染料木黄酮能下调ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA和蛋白的表达,这可能是染料木黄酮抗动脉粥样硬化的重要机制之一。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应

目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24h后Giemsa,H.E染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。动脉内皮细胞和星形胶质细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bc1-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤动脉内皮细胞和星形胶质细胞,促进凋亡及影响血脑屏障。     

电磁辐射对大鼠心肌细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的 对比性研究3种波段电磁辐射对大鼠心肌细胞Bcl-2和Bax的表达变化,探讨其损伤心肌细胞凋亡的可能机制。方法 180只Wistar大鼠电脑随机分为对照组(C)、S波段微波辐照组(S)、X波段微波辐照组(X)、电磁脉冲辐照组(E),分别于辐照后6h、1d、3d、7d、14 d、28 d活杀,切取大鼠心脏标本行组织学、免疫组织化学检测Bcl-2和Bax的表达,应用图像分析技术,定量研究3种波段辐照后大鼠心脏组织Bcl-2和Bax的表达变化规律。结果 3种波段辐照后6h~7d大鼠心脏组织损伤呈加重趋势,心肌纤维排列紊乱,糖原颗粒减少,核染色质浓缩,蒲肯野纤维溶解,间质水肿,心肌间有浆液渗出;与对照组相比,心肌细胞凋亡增加,Bax和Bcl-2表达均增加(P<0.05),但Bax促凋亡表达强于Bcl-2的表达强度。14~28d后心脏呈修复恢复期,14~28d后各组Bcl-2和Bax蛋白表达比6h~7d有所减弱,Bcl-2表达强于Bax表达强度,但仍较对照组表达强。6~12个月心脏组织与对照组基本相似。结论 电磁辐射对心脏损伤过程中,心肌细胞凋亡起着重要的作用,并与凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达改变有关,且高功率微波作用较电磁脉冲明显,而X的作用又较S明显。     

GDM大鼠胎盘脂联素基因表达水平与胎鼠出生体重的关系

目的:探讨妊娠期糖尿病大鼠胎盘脂联素与胎鼠出生体重的关系。方法:育龄雌性SD大鼠受孕后随机分为正常妊娠组、妊娠期糖尿病组、共轭亚油酸治疗组。腹腔内注射45mg/kg链尿佐菌素,建立妊娠期糖尿病大鼠模型。注射药物3天后用共轭亚油酸3.0g/(kg·d)灌胃至孕19天,建立共轭亚油酸治疗组大鼠模型。孕19天后解剖大鼠,计数胚胎存活数并测量胎鼠体重。采用葡萄糖氧化酶法测定血糖;采用放射免疫法测定血清胰岛素;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清脂联素和胎盘组织脂联素浓度;采用RT-PCR技术检测脂肪组织脂联素和过氧化物增殖物激活受体γmRNA的表达和胎盘组织脂联素mRNA的表达,并进行半定量分析。结果:①共轭亚油酸可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平,增加脂肪组织中过氧化物增殖物激活受体-γmRNA、脂联素mRNA的表达和胎盘组织中脂联素mRNA的表达水平,相应地,妊娠期糖尿病大鼠血清中和胎盘组织中脂联素的浓度也升高。②3组大鼠的胚胎存活数无统计学差异。③胎盘脂联素mRNA表达水平与胎鼠出生体重呈显著负相关关系。结论:①共轭亚油酸可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖水平,并改善血糖升高后刺激胰岛素大量分泌的状态,改善胰岛素抵抗。②共轭亚油酸可通过激活过氧化物增殖物激活受体γ来提高妊娠期糖尿病大鼠脂联素水平。③胎盘组织有脂联素基因的表达,妊娠期糖尿病病理状态可影响脂联素基因在胎盘的表达水平,共轭亚油酸可上调脂联素mRNA的表达水平,并且胎盘组织中脂联素浓度升高。④妊娠期糖尿病病理状态对胚胎存活数影响不大,但胎鼠出生体重增加。⑤胎盘来源的脂联素可能参与了胎儿生长发育的调节。     

锌对热应激大鼠垂体POMC mRNA表达的影响

目的：通过锌对热应激大鼠垂体阿黑皮素原（ＰＯＭＣ）ｍＲＮＡ表达的影响研究，探讨锌对热应激大鼠的保护机理。方法：２０只ＳＤ雄性大鼠随机等分４组，即高锌高温暴露组（Ａ组）、中锌高温暴露组（Ｂ组）、低锌高温暴露组（Ｃ组）和正常锌室温对照组（Ｄ组）。在ＡＩＮ－９３Ｍ饲料配方基础上，以碳酸锌为锌源，配制成高锌、中锌、低锌和正常锌饲料，每公斤饲料锌含量测定值分别为９２．２ｍｇ、４５．６１ｍｇ、２１．７０ｍｇ和４５．６１ｍｇ。４组大鼠在室温下饲以相应饲料１４天后，将Ａ、Ｂ、Ｃ组大鼠置于高温室（Ｔｄｂ４０℃，Ｔｗｂ３０．８℃）中连续暴露３小时。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析法（探针为地高锌标记的ＰＯＭＣｃＲＮＡ），观察垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平。结果：（１）高温应激可使大鼠垂体ＰＯＭＣｍＲＮＡ表达水平增高；（２）高锌摄入可使热应激大鼠垂体ＰＯＭ－ＣｍＲＮＡ表达水平升高，而低锌摄入则相反。结论：锌对热应激大鼠垂体ＰＯＭＣ基因有调控作用，作用环节可能在转录水平上