UW液、Celsior液和HTK液低温保存生物人工肝用L-02细胞的效果比较

目的 比较UW液、Celsior液和HTK液4℃常规低温保存生物人工肝用L-02细胞的效果。方法 制备好的L-02细胞悬液分以下3组：UW液保存组（UW液组）;Celsior液保存组（CS液组）;HTK液保存组（HTK液组）。各组细胞于4℃低温保存72h后,分别测定细胞存活率及死亡率（流式细胞术）,ALT及LDH释放,尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果 UW液较Celsior液和HTK液显著提高了4℃常规低温保存保存72h的L-02细胞的存活率[(60.05 ± 4.23)% vs (50.12 ± 3.99)%、(44.20 ±4.67)%],均P<0.05;降低了细胞死亡率[(39.95±4.23)%vs (49.88 ±3.99)%、(55.80%±4.67)%], 均P<0.05;抑制了ALT、LDH释放(均P <0.05);更好地维持了L-02细胞尿素合成功能[ (1.03 ± 0.23)mmol/L vs (0.80± 0.14)mmol/L、(0.48± 0.05)mmol/L]和白蛋白分泌功能[(8.36 ±1.38 )mg/L vs (6.41±1.25)mg/L、(5.19±0.41)mg/L), 均P<0.05。结论 同Celsior液和HTK液相比,使用UW液4℃常规低温保存L-02肝细胞可以明显的提高复温后细胞存活率,降低低温损伤引起的ALT、LDH释放,有效的保护肝细胞尿素合成功能和白蛋白分泌功能,但保存时间不应超过72h。     

零下非结冰UW液保存人工肝用C3A细胞

目的探索零下非结冰（-0.8℃）保存C3A肝细胞的效果以及同细胞凋亡的关系。方法UW液（University of Wisconsin Solution）保存的C3A细胞分为以下2组：-0.8℃组,4℃组。低温保存24h、48h及72h后分别测定细胞存活率及凋亡率、AST释放、尿素合成功能及白蛋白分泌功能。结果零下非结冰（-0.8℃）72hC3A细胞存活率（86.49±2.80）%高于4℃（77.83±3.40）%,P〈0.001;细胞凋亡率（1.26±0.84）%低于4℃（9.16±1.99%,P〈0.001;AST释放（5.30±0.42）U/L低于4℃（8.18±1.05）U/L;细胞尿素合成功能（0.68±0.06）mmol/L优于4℃（0.40±0.07）mmol/L,P〈0.001;白蛋白分泌功能（2.06±0.22）mg/ml优于4℃（1.68±0.18）mg/ml（P=0.002）。结论0.8℃的UW液可明显提高低温保存C3A细胞存活率,有效地保护细胞尿素合成和白蛋白分泌功能。     

肝移植3种器官保存液的比较研究

目的 比较UW液、Celsior液和HTK液时移植供肝灌注保存的效果.方法 回顾性分析2002年1月～2004年3月施行的成人首次肝脏移植且术前诊断为良性肝病者263例,根据所采用的灌注保存液分为lAW液组(161例)、Celsior组(45例)和HTK组(57例),3组患者年龄、性别及原发病分布,术前肝功能指标及分级,肝移植术式及供肝冷,热缺血时间差异均无显著性,比较3组患者术后早期移植肝功能指标、血管及胆道并发症发生率和移植物存活率.结果 3组患者肝移植术后早期血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和γ-谷氨酰转肽酶差异均无显著性;UW液组术后第7天血清总胆红素(117.4±96.3)μmol/L高于Celsior组[(85.1±77.9)μmol/L,P=0.047]和HTK组[(86.5±82.6)μmol/L,P=0.033];HTK组术后即刻凝血酶原时间(21.9±5.8)s低于UW液组[(24.8±6.2)s,P=0.004]和Celsior组[(26.4±7.0)s,P=0.0011;HTK组凝血酶原时问峰值(24.0±5.2)s低于Celsior组[(27.5±6.1)s,P=0.002].UW液组发生移植肝原发无功能2例(1.2%),但组间差异无显著性(P=0.528).3组患者术后血管并发症、胆道并发症及排斥反应发生率和再次移植率差异均无显著性.移植物1年及3年存活率分别为:UW液组80.7%和73.9%,Celsior组91.1%和82.2%,HTK组94.7%和80.7%,存活时间差异无显著性(P=0.099).结论 UW液、Celsior液和HTK液对移植供肝灌注保存的效果差异无显著性.     

零下非结冰UW液成功保存生物人工肝用L-02肝细胞

目的 比较零下非结冰(-0.8℃)与常规低温(4℃)分别用于人工肝用永生化L-02细胞保存的效果,探索零下非结冰保存肝细胞与细胞凋亡的关系.方法 制备好的UW液保存的L-02细胞悬液分为以下2组:-0.8℃组(零下非结冰组),4℃组(对照组).低温保存24、48 h及72 h后,分别测定细胞存活率、凋亡率、坏死率(流式细胞术)及ALT释放、尿素合成功能、白蛋白分泌功能.结果 -0.8℃(零下非结冰)较4℃明显提高了长时间低温保存L-02细胞的存活率[72 h:(70.17±2.82)%vs(60.05 4±3.17)%,P<0.01],降低了细胞凋亡率[72 h:(5.73±1.68)%vs(9.20±2.35)%,P=0.02],抑制了ALT释放[72h:(6.21±O.65)U/L vs(8.68±1.18)U/L,P<0.01],更好地维持了L-02细胞的尿素合成功能[72 h:(1.01±0.14)mmol/L vs(0.66±0.09)mmot/L,P<0.01]及白蛋白分泌功能[72 h:(9.04±0.53)μg/ml vs(7.70±0.52)μg/ml,P<0.01].2组间细胞坏死率差异无统计学意义[72 h:(18.45±1.88)%vs(21.82±3.86)%,P>0.05].结论 零下非结冰可明显维持L-02细胞存活率,降低低温损伤引起的细胞凋亡,有效保护肝细胞尿素合成和白蛋白分泌功能.     

肝脏缺血再灌注损伤大鼠嘌呤核苷磷酸酶活性的研究

目的:探讨大鼠肝脏低温保存及常温缺血再灌注过程中,不同保存液中嘌呤核苷磷酸酶(PNP)活性的变化.方法:将大鼠肝脏在3种不同保存液中低温保存不同时限后,用37℃Krebs-Henseleit液连续循环灌注90min,分别于不同灌注时间检测灌洗液中PNP活性的变化.结果:经过8 h的低温保存,再灌注90min后,HTK保存的肝脏中PNP明显高于UW和Celsior;经过16 h的低温保存后,再灌注60min前,HTK保存的肝脏中PNP明显高于UW和Celsior;60min后HTK和Celsior保存的肝脏中PNP明显高于UW;经过24 h的低温保存后,再灌注15min后,HTK保存的肝脏中PNP明显高于Celsior,而Celsior又明显高于UW.结论:随着低温保存和再灌注时间的延长,大鼠肝脏中PNP逐渐增高且UW液的保存效果明显优于HTK和Celsior     

嘌呤核苷磷酸化酶活性和外源性透明质酸吸收率对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)活性和外源性透明质酸(HA)吸收率对大鼠肝脏低温保存及常温缺血再灌注损伤的作用。方法:将大鼠肝脏在UW﹑Celsior和HTK3种不同保存液中低温保存16、24h后,用37°CKrebs-Henseleit液连续循环灌注90min,分别于不同灌注时间检测灌洗液中PNP活性和外源性HA吸收率的变化。结果:低温保存16h和24h,UW和Celsior组再灌注60min与15min比较,PNP活性明显增高(P<0.05),而HTK组再灌注30min则显著增高;低温保存16h,UW和Celsior组再灌注60min与15min比较外源性HA吸收率明显下降(P<0.05),而HTK组再灌注30min出现外源性HA吸收率明显下降;低温保存24hUW组再灌注60min外源性HA吸收率明显下降,而Celsior和HTK组30min即出现外源性HA吸收率明显下降。结论:PNP和HA吸收率可作为评价肝脏缺血再灌注损伤的指标。     

上海多器官保存液保存离体大鼠肝脏的实验研究

目的:观察上海多器官保存液(Shanghai-mutil-organ solution,SMO液)对离体大鼠肝脏的保存效果,探讨应用SMO液保存离体供肝的可行性.方法:SD大鼠随机分为SMO液、UW液和HTK液保存组,建立离体肝脏单纯低温保存模型,保存液保存8、16、24、36 h分析肝脏组织能量代谢情况,观察肝组织形态学改变和肝脏细胞凋亡情况.结果:保存16、24、36 h,SMO液组肝组织三磷酸腺苷(ATP)、磷酸腺苷总量(TAN)及Atkinson能荷(AEC)均明显高于同时点HTK液组 (P＜0.05),与同时点UW液组无显著差异;形态学检查见SMO液组组织损伤较同时点HTK液组轻,除细胞肿胀较同时间点UW液组明显外,其余表现基本一致.保存24、36 h,SMO液组凋亡指数明显低于HTK液组(P＜0.05),而与UW液组无明显差异.结论:SMO液对大鼠离体肝脏的保存效果总体上与UW液相当,优于HTK液,仅在防止细胞水肿方面较UW液稍差.     

低温氧合血+Celsior液微流量持续灌注对大鼠右心的保护效果

目的 探讨低温氧合血+Celsior液微流量持续灌注对大鼠右心的保护效果.方法 Wistar大鼠切取全心,随机分为3组,实验组的心脏以4℃氧合血+Celsior液微流量(1 mL/h)持续灌注低温保存4 h;对照组以4℃Celsior液微流量持续灌注低温保存4 h;单纯冷保存组以4℃Celsior液单纯浸泡保存4 h.保存后的鼠心用Langen-dorff装置灌注,切除右心耳,将一球囊放入右心室.测定右心室血流动力学指标;高效液相色谱仪测定ATP含量;光镜和电镜观察心肌组织的形态学改变.结果 灌注30 min时,实验组的右心室收缩压(RVSP)为(26.64±3.3)mmHg,右室舒张压(RVDP)为(19.07±3.23)mmHg,右心室压力微分(±dp/dt)为(752±77)mmH/s;对照组的RVSP为(23.98±4.02)mmHg,RVDP为(11.31±2.46)mmHg,±dp/dt为(548±103)mmHg/s;单纯冷保存组的RVSP为(22.38±3.65)mmHg,RVDP为(9.43±2.44)mmHg,±dp/dt为(457±151)mmHg/s,实验组的血流动力学指标优于对照组和单纯冷保存组(P<0.05).实验组心肌细胞的ATP含量为(1.225±0.316)μmol/L,对照组为(0.852±0.303)μmol/L,单纯冷冻保存组为(0.587±0.232)μmol/L,实验组ATP含量明显高于对照组和单纯冷保存组(P<0.05).实验组的组织学损害轻于对照组和单纯冷保存组.结论 低温氧合血+Celsior液微流量持续灌注对大鼠右心有保护效果.     

家兔睾丸移植模型研究

目的 比较不同睾丸血管吻合方式及睾丸保存方式对移植后睾丸存活率及生精功能的影响。方法 分别将睾丸血管与睾丸血管、腹壁下血管、隐血管吻合，建立器官移植模型；分别用UW液和HTK液保存睾丸，建立器官低温保存移植模型。术后监测睾丸存活率、精子生成及雄激素分泌水平。结果端端吻合睾丸动静脉、输精管的睾丸阴囊原位移植方法最为简单易行，存活率高，术后生精功能良好；在0℃～4℃条件下，UW液和HTK液分别可保存兔睾丸72h和60h。结论 睾丸原位移植最为方便可靠，存活率高，术后生精功能良好；在0℃～4℃条件下，UW液和HTK液保存兔睾丸不宜超过72h和60h。     

富氢UW液减轻大鼠肾脏低温保存期缺血损伤

目的:研究富氢University of Wisconsin器官保存液(HRUW)对大鼠离体肾脏低温保存期缺血损伤的影响。方法:24只大鼠随机分为3组:正常对照组(C组)、UW液保存组(UW组)和HRUW液保存组(HRUW组),每组8只。按大鼠肾移植供肾摘取方法取下大鼠左肾。C组:肾脏不进行保存;UW组:将肾脏于4℃UW液中保存48 h;HRUW组:将肾脏于4℃HRUW液中保存48 h。分别于保存后观察各组大鼠肾脏组织形态学变化,进行肾小管损伤评分;检测肾脏组织中丙二醛(MDA)的含量及锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、Caspase-3的活性。结果:HRUW组大鼠肾脏组织病理改变较UW组明显减轻,肾小管损伤评分明显降低(P<0.05)。与UW组相比,HRUW组大鼠肾脏组织内MDA含量明显降低(P<0.01),Mn-SOD活性升高(P<0.01),Caspase-3活性明显降低(P<0.01)。结论:富氢UW液减轻大鼠肾脏低温保存期缺血损伤,其机制可能与氢气(H2)抑制低温保存肾脏氧化应激反应有关。     

HTK液和UW液对大鼠原代心肌细胞冷保存的保护作用

目的 研究HTK液和UW液对体外培养的大鼠原代心肌细胞冷保存中的保护作用。方法 体外培养大鼠原代心肌细胞，分别用生理盐水，UW液和HTK(液在0℃-4℃保存心肌细胞6h、8h、10h、12h。检测保存液的AST和LDH-L，台盼蓝染色法计算心肌细胞的生存率。结果 UW液组和HTK液组的AST和LDH-L均比生理盐水组极显著低下，心肌细胞的生存率则极显著的高于生理盐水组。而在12h时，HTK液组的AST和LDH-L显著低于UW液组，心肌细胞的生存率在8h和10h也明显高于UW液组。结论 HTK液和UW液均对体外培养的大鼠原代心肌细胞的冷保存有明显的保护作用。而HTK液相对于UW液更能延长对心肌细胞的冷保存时间。     

SMO保存液对犬肾低温保存期间Na~+-K~+ ATPase的影响

目的:研究SMO保存液对犬肾低温保存期间Na+-K+ATPase的影响。方法:建立犬离体肾脏单纯低温保存模型,对照组用0~4℃HTK保存液和UW保存液对供肾进行灌注和保存,试验组用0~4℃自制SMO保存液对供肾进行灌注和保存,分别于24、48、72h后取皮质标本,进行组织病理学观察及检测Na+-K+ATPase的活性。结果:SMO液组所见组织病理学改变,48h和72h比HTK液组轻,在各时间点与UW液组基本相似。Na+-K+ATPase活性,保存各时点,SMO液组与UW液组无明显差异;保存24h和48h,SMO液组与HTK液组无明显差异;保存72h,SMO液组Na+-K+ATPase活性明显高于HTK液组,存在明显差异。结论:SMO保存液在减轻细胞形态学改变和减缓Na+-K+ATPase活性下降方面显著优于HTK保存液,与UW保存液相当。     

旋转生物反应器内微载体共培养CL-1 肝细胞与人肝星形细胞

目的评估CL-1肝细胞跟人肝星形细胞（HSC）的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性。方法
实验分为两组：CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组。通过倒置显微镜观察、细胞
计数、MTT染色及扫描电子显微镜比较两组肝细胞的形态、细胞活力差异,并通过、培养上清中ALT、白蛋白浓度等功能指标测
定,比较两组肝细胞活力和功能差异。结果共培养组较单培养组细胞生长迅速,细胞从24 h贴壁后开始增长,到第5天进入高
峰。共培养组1~7 d的肝细胞密度明显高于单培养组的细胞密度（P<0.05）。两组肝细胞ALT、白蛋白从第1天开始不断分泌增
加,第5天达到峰值,第6、7天有所下降。ALT功能比较,共培养组明显低于单培养组（P<0.05）。白蛋白功能比较,共培养组明
显高于单培养组（P<0.05）。倒置显微镜、扫描电镜及MTT均提示共培养组肝细胞形态、活力优于单培养组。结论人肝细胞、HSC
微载体微重力共培养研究有利于维持及增强旋转生物反应器的肝细胞活力及功能,对人工肝的培养模式发展具有重要意义。
     

卡立泊来德对鼠移植供心的保护效果

目的 通过离体心脏灌流模型(Langendorff),评价卡立泊来德(Cariporide)对离体鼠移植供心的保护效果.方法 48只雄性Wistar大鼠随机分为四组.对照组两组:HTK(Histidine-Tryptophan-Ketoglurate Solution)8h、12h组,实验组(Cariporide 组)两组:HTK+Cariporide 20μmol/L,8h、12h组.切取鼠供心后即悬挂在Langendorff上灌注,测定血流动力学基础值.分别用两种器官保存液灌注离体鼠心后置于各自的冷心肌保护液(4℃)中保存8h、12h,恢复灌注后再次测定血流动力学指标和冠状动脉流量,留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、心肌细胞ATP含量,观察心肌细胞超微结构变化.结果 在冷缺血8h后,与对照组相比,实验组的平均左室发展压(LVDP)及心肌ATP含量均增高,磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)漏出量减少,但差异无统计学意义.在冷缺血12h后,与HTK组相比,卡立泊来德组LVDP均显著升高[(98.37±16.34)mmHg、(43.21±14.33)mmHg,(P＜0.01)](1 mmHg=0.133kPa);CK-MB漏出量明显减少[(4.373±1.489)IU/L、(34.23±3.328)IU/L,(P＜0.01)];心肌ATP含量明显增多[(34.32±1.87)μg/g、(17.92±1.47)μg/g,(P＜0.01)].结论 Cariporide对离体鼠供心具有较好的保护效果,并可延长供心的低温保存时间.     

感染性休克患者血乳酸测定的临床意义

目的:探讨血乳酸水平与感染性休克患者预后的关系。方法:58例感染性休克患者分为存活组和死亡组,动态监测血乳酸值及进行APACHEⅡ评分,比较上述指标的差异性。结果:①对照组、感染性休克患者存活组、死亡组治疗前动脉血乳酸水平分别为(0.63±0.33)mmol/L,(2.88±0.35)mmol/L,(7.54±0.66)mmol/L,感染性休克患者存活组血乳酸水平较对照组明显增高(P<0.05);死亡组血乳酸水平较存活组明显升高(P<0.05)。②感染性休克患者存活组血乳酸在48 h内达到正常,而死亡组患者的血乳酸明显高于存活组(P<0.05),随着血乳酸浓度的下降感染性休克患者的严重程度降低,生存率显著提高。③死亡组患者APACHEⅡ评分分值明显高于存活组(P<0.05),APACHEⅡ评分与血乳酸浓度显著正相关(r=0.674)。结论:血乳酸测定对于判断感染性休克患者病情预后具有重要价值。     

乌拉坦浓度依赖性增强康斯特保护液大鼠离体心脏保存效果的实验研究

目的 观察不同浓度乌拉坦增强康斯特保护液(HTK)液对大鼠离体心脏保存效果,筛选最佳的乌拉坦浓度.方法 36只SD大鼠心脏随机分为6组,分别用含有不同浓度乌拉坦的HTK液(mmol/L:0、10、20、40、80和160)灌注停搏并于4℃静止保存8 h.采用langendorff离体心脏灌注系统和多导生理仪测定停搏前及...     

高通量血液透析治疗慢性肾衰竭尿毒症患者65例临床疗效分析

目的：探讨高通量血液透析治疗慢性肾衰竭尿毒症患者的临床疗效。方法方便选取该院2014年6月一2016年6月收治的慢性肾衰竭尿毒症患者129例,依据完全随机分组法进行分组,实验组65例给予高通量血液透析治疗,对照组64例给予血液透析加血液滤过治疗,观察两组的肌酐、尿素氮、血红蛋白及白蛋白水平,比较两组的临床疗效。结果实验组治疗后肌酐(574.35±238.86)μmol/L、尿素氮(10.05±2.67)mmol/L低于对照组肌酐(690.03±251.75)μmol/L、尿素氮(15.16±3.45)mmol/L,血红蛋白(95.11±12.53)g/L、白蛋白(30.92±2.64)g/L高于对照组血红蛋白(79.57±14.36)g/L、白蛋白(26.88±4.76)g/L,其总有效率(96.92%）高于对照组(73.44%）,两组差异有统计学意义(P＜0.05）。结论高通量血液透析治疗慢性肾衰竭尿毒症的疗效较高,效果明显。