双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。     

酶标葡萄球菌A蛋白组化法用于肾综合征出血热诊断的研究

本文报告应用HRP-SPA组化法检测用4株不同来源的HFRS病毒抗原免疫的家兔血清和10例HFRS病人双份血清的抗体滴度，结果与IFA法基本一致，证明了HRP-SPA组化法的特异性。用HRP-SPA组化法和IFA法检测了不同疫区30例病人的恢复期血清，来源于黑线姬鼠和褐家鼠的Vero-E6细胞HFRS病毒抗原和7只HFRS抗原阳性黑线姬鼠肺洗液中的抗体，两法结果相同，证明了HRP-SPA组化法与IFA法一样，具有较高的灵敏性。此外，HRP-抗人IgG组化法用于HFRS的诊断也是可行的。     

用蚀斑减少技术测定汉坦病毒中和抗体

除乳鼠动物模型外,汉坦病毒感染细胞既不产生细胞病变,也不引起动物发病,因此常用免疫荧光抗体技术(IFA)测定病毒抗原来确定其感染性。由于IFA法只能定性,且流行性肾病(NE)患者血清与汉坦病毒有交叉反应,因而作者采用琼脂糖复盖     

南定病毒标准血清制备及间接ELISA检测方法的建立

目的 制备南定病毒(NDiV)标准血清,建立ELISA检测方法,为在人群中监测南定病毒感染状况提供方法。 方法 用南定病毒感染3周龄SPF级BALB/c小鼠,分别在0、7、14 d以腹腔注射的方式免疫SPF级6~8周龄BALB/c小鼠,免疫血清用IFA法进行鉴定;南定病毒感染C6/36细胞,制备ELISA抗原,确定酶结合物、抗原和标准阳性血清的最佳工作浓度,建立南定病毒ELISA检测方法,进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验。 结果 制备南定病毒免疫血清,以IFA测定血清效价为1:320,与呼吸道合胞病毒、腺病毒均无交叉反应;建立了ELISA检测方法,确立了各种试剂的最佳工作浓度,其中酶结合物最佳工作浓度为1:10 000,抗原为2.3 μg/ml,阳性参考血清为1:200;ELISA检测灵敏度为1:3 200。板内特异抗原、正常抗原平均变异系数为4.56%和5.17%,板间为3.38%和6.64%。稳定性实验相对偏差均小于20%。 结论 本研究制备的南定病毒免疫血清可作为血清学检测方法中的标准质控血清;建立的ELISA方法重复性、稳定性好,敏感性和特异性强,可用于南定病毒血清抗体检测。     

汉坦病毒核蛋白及其单抗标记物在建立ELISA试剂中的应用

[目的]利用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂。[方法]制备、纯化重组核蛋白抗原和抗核蛋白单抗并进行辣根过氧化物酶标记，在抗人μ链包被板中结合四甲基联苯胺-过氧化氢（TMB／H2O2）酶底物系统，从血清中检测肾综合征出廊热早期特异性IgM抗体，并与免疫荧光抗体法（IFA）进行比较。[结论]检测42份可疑HFRS病人血清，ELISA法和IFA法均阳性的20份，均阴性的19份；ELISA法阴性、IFA法阳性的1份，ELISA法阳性、IFA法阴性的2份，2种方法的差异无统计学意义（配对x^2=0．08，P〉0．05）。[结论]用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂可用于HFRS的早期IgM抗体检测。     

艾滋病感染窗口期实验诊断技术和方法

从艾滋病病毒感染到抗体产生之前或没有检测到抗体出现的这个时期称为窗口期,窗口期的存在给艾滋病检测带来了一定的困难,迄今为止,窗口期的检测还是依靠实验室检测,本文就实验室检测的最新方法第四代ELISA检测试剂、p24抗原测定、病毒载量测定以及流式细胞技术等检测技术在窗口期诊断中的应用作简要综述。进一步缩短窗口期的时间,对于口岸艾滋病的预防与控制具有重要的意义。     

婚检人群乙、丙型肝炎、梅毒及艾滋病毒检测

目的 了解北京市婚检人群乙型和丙型肝炎、梅毒及艾滋病病毒感染情况。方法 乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体和艾滋病毒抗体采用酶免法检测；梅毒采用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)检测：乙型和丙型肝炎病毒载量采用PCR荧光定量方法检测，病毒基因型采用直接PCR基因分型法测定。结果 800例婚检人群乙型和丙型肝炎感染率分别为12．0％，6．0％，梅毒和艾滋病病毒未检出。96例乙肝表面抗原阳性婚检人群中。乙型肝炎病毒载量小于10^5拷贝／ml占88．5％，大于10^5拷贝／ml仅占11．5％。5例丙型肝炎病毒RNA阳性中，病毒载量均小于10^4拷贝／ml，该婚检人群HBV感染中，B型占18．6％，B和C混合型占42．4％．C型占23．7％。3例丙型肝炎病毒感染均为HCV1b型。结论 该婚检人群中，乙型和丙型肝炎病毒感染率相对较高，但病毒载量相对较低。未发现梅毒和艾滋病毒感染。     

五种SARS冠状病毒-IgG抗体检测试剂的比较

目的 比较五种SARS冠状病毒—IgG抗体诊断试剂，检测SRS冠状病毒特异性抗体的敏感性和特异性。方法 分别用间接免疫荧光(IFA)和四种ELISA诊断试剂(其中SLISA—1为全病毒抗原建立的间接法，ELISA—2为表达抗原片断建立的双抗原夹心法，ELISA—3/4为表达抗原建立的间接法)检测IgG抗体。100份血清标本分别采自发病7d以上的临床确诊SARS病例34例和疑似病例42例、发病6d以内临床确诊病例1例和疑似病例23例。结果 用IFA及四种ELISA诊断试剂检测34份发病7d以上临床确诊SARS病例的血清样本，其IgG检出率与临床诊断的符合率分别为：IFA44．12％，SLISA—1、4为41．17％、ELISA—2、3为23．52％；对42例疑似病例的检出率，IFA、ELISA—3为11．9％，ELISA—-1、2、4为9、52％；发病1～6d内的确诊和疑似病例血清中未能检出特异性的IgG抗体。结论 五种诊断试剂都可以帮助临床做出符合诊断和鉴别诊断，可以作为SARS血清学诊断方法，但其检出率与临床诊断的符合率均较低。     

IFA法和ELISA法对感染后血清汉坦病毒血清型的研究

本文用IFA法、间接ELISA法和复合捕捉阻断ELISA法(CTB ELISA)对11 例接触实验鼠后感染汉坦病毒者和16例接触野生啮齿类动物感染者进行了血清分型,并对这3种方法进行了比较。参考血清有鼠特异性Ⅰ、Ⅱ型血清和兔特异性Ⅲ、Ⅳ型血清。 IFA法检测表明,11例接触实验鼠后感染的病人血清与汉坦病毒Ⅰ型、Ⅱ型均呈高度反应性,Ⅰ、Ⅱ型抗体滴度相同,而16例接触啮齿类动物感染者的血清,则与Hallnas(Ⅲ型)病毒呈高度反应性,Ⅲ型抗体普遍高于其它型抗体。但在间接ELISA法中,其中2份血清与Ⅰ、Ⅱ型病毒的反应性高于Ⅲ型。为了进一步证实人抗血清与不同     

抗体制备ELISA试剂诊断肾综合征出血热

目的研究汉坦病毒重组抗原及其单克隆抗体制备双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）试剂早期诊断肾综合征出血热（HFRS）.方法将汉坦病毒76118株S1.3kb基因克隆于pET28a质粒,诱导大肠埃希菌表达出48kd的汉坦病毒核蛋白抗原.以此抗原免疫Balb/c小白鼠,取其B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,小鼠腹腔接种,制备单克隆抗体.用重组抗原及其单克隆抗体,制备ELISA诊断试剂,并与美国产汉坦病毒重组抗原ELISA诊断试剂和间接免疫荧光法（IFA）比较.结果自产重组抗原及其单克隆抗体制备的双抗夹心ELISA试剂与美国产抗原ELISA试剂在87例HFRS和56例非HFRS诊断中完全吻合.结论自产ELISA试剂可用于早期诊断HFRS,且意义重大.     

间接免疫荧光法在健康人群新布尼亚病毒抗体检测中的应用

目的探讨间接免疫荧光法（IFA）对急性发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（SVTSV）感染的诊断价值,并了解宁波市象山县SFTSV流行区健康人群的抗体水平。方法非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）分离的本地SYTSV株制作抗原片,以IFA法和EUSA法对象山县265份健康人群血清进行SFTSV抗体测定,并用病毒微量中和试验（MNT）验证两种方法的检测效果。结果265份象山县健康人群血清中,IgG抗体经IFA法检测共36份阳性,阳性率为13．58％（36／265）;经ELISA法检测,共23份阳性,阳性率为8．68％（23／265）;两者差异有统计学意义（X^2=9．624,P〈0．05）。与MNT法检出结果对比,IFA法诊断的符合率为89．19（33／37）,而ELISA法的符合率为70．27％（26／37）;两者比较差异有统计学意义（X^2=4．097,P〈0．05）。所有SFTSV—IgG阳性样本中SFTSV—IgM同时阳性共23份,占62．16％（23／37）。结论IFA法可同时检测SFTSV—IgG和-IgM抗体,可作为未在病毒血症期内就症病例的补充诊断方法,也适合对人群抗体水平的调查。宁波市象山县健康人群中检出较高水平的SFTSV-IgG抗体,表明存在SFTSV的流行以及隐性感染;SFTSV—IgM阳性提示这些感染为新近感染。     

间接免疫荧光试验在生殖器疱疹诊断中的应用

目的评价间接免疫荧光试验(IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值。方法采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较。结果 IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P0.01)。两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,差异无统计学意义(χ2=1.96,P0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P0.05;47.2%,χ2=14.17,P0.01)。结论 IFA具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值。     

HAV吕8株生长特性及残余活毒检测方法的研究

[目的]对甲型肝炎病毒吕8株(HAV吕8)培养生长特性进行研究,确定其灭活后残余活毒检测方法的可靠性。[方法]通过一步生长曲线确定HAV吕8株的生长增殖高峰;将活病毒样品作2倍系列稀释后接种于细胞,研究不同接种量的最早检出时间;以统计学方法计算细胞培养方法检测HAV的灵敏性及可靠性;以病毒在细胞上的感染性为指标,经3次传代检测其有无感染性,以确证灭活疫苗残余活毒检测方法的可靠性。[结果]HAV吕8株细胞培养增殖高峰约为d20￣24;细胞培养方法检测甲肝病毒的灵敏性可达1.79CCID50、可靠检出甲肝病毒的最低量为10.23CCID50;凡达到ELISA的检出灵敏度的HAV接种样品,当培养增殖到d12时,均能被检出;当HAV含量达到512Eu/0.1ml时,不论是活病毒还是已灭活病毒,其吸附在细胞上的残余病毒量均能达到ELISA的检测灵敏度。[结论]将甲肝灭活疫苗样品接种细胞进行残余活毒检测,经3次传代,每次培养20d以上,该检测方法有较高的灵敏度,其检测结果是可靠的。     

福建株白纹伊蚊经口感染登革2型病毒研究

目的 探讨福建株白纹伊蚊对登革2型病毒的易感性。方法 用C6/36细胞培养登革2型病毒,白纹伊蚊人工经口感染病毒混合液,14 d后分别用间接免疫荧光和RT PCR检测蚊体内的登革2型病毒。结果 用间接免疫荧光检测感染登革2型病毒的白纹伊蚊,福建株白纹伊蚊感染率为44.6%（25/56）,头部感染率为32.1%（18/56）;用RT-PCR方法扩增出511 bp片段,感染率为53.9%（14/26）。结论 福建株白纹伊蚊对登革2型病毒易感。     

Serosurvey and laboratory diagnosis of imported sandfly fever virus, serotype Toscana, infection in Germany.

Of eight acute infections in German tourists caused by sandfly fever virus, serotype Toscana (TOS), and diagnosed clinically and serologically, seven were acquired during visits to Tuscany, Italy, and one to Coimbra, Portugal. An indirect immunofluorescence assay (IFA) using infected cells, and a newly developed enzyme-immunoassay (EIA) using crude virus antigen prepared from infected Vero-E6 cells was used to detect anti-TOS IgM and IgG. In a seroepidemiological survey of 859 health care workers and medical students, anti-TOS IgG was detected in 1.0% by IFA, and in 0.7% by EIA. In 2034 German patients hospitalized for various diseases, 1.6% were positive for anti-TOS IgG by IFA, and 0.8% by EIA. Anti-TOS IgG was detected in 43 samples of commercial immunoglobulins at titres of 10-1000 by EIA. Although the seroprevalence of antibodies to TOS is low in Germany, TOS infection should be considered in patients returning from endemic areas who complain of fever, and headaches, and have symptoms of meningitis.     

大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用

目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗）,并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgGl亚型,2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。     

HFRS病毒血凝素在Vero-E_6细胞培养和新生乳鼠脑组织中产生的动态观察

对肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染后的Vero-E_6细胞和新生乳鼠脑组织中病毒血凝素(HAN)产生的动态观察结果,发现:(1)病毒感染后第3d可在细胞内外检出病毒HAN,并分别在第9d和第7d达到高峰;(2)感染细胞内病毒HAN滴度明显高于其培养上清,而细胞内外感染性病毒颗粒和病毒抗原的含量差别则不明显;(3)在感染乳鼠脑组织中第2d即可检出病毒抗原和活病毒,第5d检出病毒HAN。病毒HAN的产生与其毒力呈正相关。     

慢性乙型肝炎患者血清XCL1与免疫损伤的相关性分析

目的 探讨慢性乙型肝炎患者血清XCL1含量与肝损程度及HBV DNA含量的相关性,探讨XCL1表达变化的可能原因.方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清XCL1浓度;流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群;时间分辨荧光分析仪检测乙型肝炎抗原/抗体半定量指标;全自动荧光定量PCR仪检测HBV-DNA载量;全自动生化仪检测肝功能.结果 （1）正常对照组、慢性乙肝（轻度）组、慢性乙肝（中度）组、慢性乙肝（重度）组血清XCL1浓度分别为（8.24±1.94）pg/ml、（10.99±1.94）pg/ml、（12.83±2.59）pg/ml、（13.72±3.13）pg/ml,慢性乙肝（轻、中、重度）组血清XCL1浓度显著高于对照组（P＜0.05）;慢性乙肝（重度）组血清XCL1浓度明显高于慢性乙肝（轻度）组（P＜0.05）;慢性乙肝（中度）组与慢性乙肝（轻、重）度组血清XCL1浓度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;XCL1浓度与ALT、AST、TBIL、DBIL水平呈正相关（r=0.463、0.472、0.413、0.440,P＜0.01）.（2）乙肝病毒低载量组血清XCL1浓度为（11.43±2.01）pg/ml,与高载量组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,乙肝病毒低载量组及高载量组血清CD4＋T细胞百分比分别为（41.26±11.33）%、（33.01±5.96）%,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 XCL1水平与肝脏炎症程度密切相关,可反映HBV感染后机体的免疫状态.