免疫球蛋白G快速提纯方法的研究

前言免疫球蛋白G是主要抗体之一。不论在基础免疫学还是临床免疫学的研究中,提纯抗体——免疫球蛋白G是重要的基础工作之一。提纯方法有很多,如盐析法、柱层析法、电泳法等等。前者操作手续多,     

免疫层析法和被动凝集法检测肺炎支原体抗体的临床应用比较

目的对比评价肺炎支原体抗体免疫层析法和被动凝集法的临床应用。方法选择2015年1~6月来我院就诊疑似肺炎支原体感染的患者2884例,对其进行被动凝集法和免疫层析法两种方法的检测,评价分析结果。结果被动凝集法的总阳性35.0%(1009/2884),免疫层析法的总阳性率为29.3%(845/2884),总阳性率被动凝集法较免疫层析法高5.7%。结论被动凝集法敏感性高于免疫层析法。免疫层析法具有操作简便、快速等特点,但对有些免疫低下抗体产生不足时或接受免疫抑制治疗的患者,血清学抗体检测容易漏诊,造成假阴性结果。被动凝集法检测的抗体水平是各种亚型抗体的总和,不仅检测抗体滴度,还能判断是现症感染或是既往感染,为支原体肺炎的早期诊断、治疗提供重要的依据。     

荧光免疫层析法检测2019-nCoV特异性抗体用于新冠病毒感染筛查价值探讨

目的探讨荧光免疫层析法检测2019-nCoV特异性抗体IgM和IgG用于一般人群新冠病毒感染筛查价值。方法选取2019年2月至2020年10月某医院共2322例诊疗患者,采用免疫荧光层析法对血清中2019-nCoV特异性抗体IgM和特异性抗体IgG分别进行检测。记录光免疫层析法2019-nCoV抗体检测结果,包括阳性率、疑似阳性率。观察2019-nCov特异性抗体IgG检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄分布情况。结果在2322例2019-nCoV特异性抗体检测中,荧光免疫层析法检测总阳性病例28例,即阳性检测率为1.21%;特异性抗体IgG检测阳性率为0.78%;特异性抗体IgM中,阳性率为1.18%。2019-nCov特异性抗体IgG检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄>45岁的比例为61.54%(1429/2322);2019-nCov特异性抗体IgM检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄>45岁的比例为72.00%(1672/2322)。结论荧光免疫层析法检测2019-nCoV血清抗体用于一般人群筛查假阳性率低,可作为核酸检测的补充手段,用于疑似人群初筛,节省医疗资源。     

免疫层析法在肺结核诊断中的应用价值

目的探讨免疫层析法检测结核抗体在肺结核诊断中的应用价值。方法采用免疫层析法检测208例肺结核病人血清中的结核抗体,89例非结核患者和30例健康人血清中的结核抗体,并且与酶联免疫吸附法(ELISA)进行对照。结果免疫层析法和ELISA法的特异性分别为96.63%,85.71%;灵敏度分别为89.42%,74.52%。结论免疫层析法操作简单,快速,且特异性及敏感性均高于ELISA法,可作为结核病诊断和鉴别诊断的方法之一。     

组织因子单克隆抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化组织因子(TF)单克隆抗体及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤8A3和9E10细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化组织因子抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及蛋白浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,TF抗体和对照抗体的最终浓度分别为0.7726mg/ml和0.8592mg/ml。结论应用层析法和凝胶过滤和Protein A亲和分离层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

ELISA法与金标层析法检测HIV抗体的适用性探讨

目的将金标层析法与ELISA法检测HIV—Ab的结果进行分析比对，以探讨两种方法检测HIV抗体在日常工作中的适用性。方法对1208例血液样本用金标层析法与ELISA法检测其HIV抗体。结果两种方法检测HIV抗体的结果差异无显著性，ELISA法的特异性高于金标层析法。结论两种方法均可适用于医学检测，金标层析法适合于急诊、流动采血点、基层单位的推广使用，而ELISA法适合于大中型医院HIV抗体筛查和艾滋病流行病学监测等。     

Slit2-Robo1信号阻断抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化Slit2-Robo1信号阻断抗体(R5抗体)及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤3B2.3和CRL-1608细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化R5抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,R5抗体及对照抗体的质量浓度分别为0.986 mg/mL和3.57 mg/mL。结论应用层析法和Protein A亲和层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

乳胶层析法与ELISA法检测乙型肝炎病毒标志物的比较

目的探讨乳胶层析法与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎五项病毒标志物的阳性符合率、阴性符合部与总符合率。方法分别用乳胶层析法和酶联免疫吸附法检测 95例血清中乙肝病毒五项标志物,比较两种方法检测结果。结果 95例标本中,乳胶层析法检测结果表面抗体(HBsAb)出现 4例假阴性、e抗体(HBeAb)出现 2例假阴性、核心抗体 (HBcAb)出现4例假阴性,表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)检测结果两法完全相符,各项指标检测P>0. 05,两法结果无显著性差异。结论乳胶层析法快速简便,适合大范围筛查乙型肝炎病毒感染。     

对比3种不同免疫检验方法检测HIV抗体结果的可靠性

目的 对比酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测人体免疫缺陷病毒(HIV)抗体的可靠性.方法 选取2018年9月至2020年9月于本院检测确诊为HIV的143例患者,采集血液样本,分别行酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测,对比HIV抗体的检测结果.结果 酶联免疫吸附试验检测HIV抗体灵敏度为92.78％,特异度为93.48％,准确率为93.01％;胶体金免疫层析法检测HIV抗体灵敏度为91.75％,特异度为84.78％,准确率为89.51％;化学发光法检测HIV抗体灵敏度为98.97％,特异度为95.65％,准确率为97.90％;化学发光法检测HIV抗体的灵敏度高于酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附试验、化学发光法检测HIV抗体的特异度、准确率均高于胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05).结论 化学发光法检测HIV抗体效能更高,疾病筛查时可有效避免漏检发生,值得临床推广运用.     

人类免疫缺陷病毒抗体的两种常用检测方法对比

目的 HIV抗体检测中酶联免疫吸附试验和免疫层析法灵敏度的对比.方法 用酶联免疫吸附试验和免疫层析法各两种试剂对已知HIV阴性血清、阳性血清及弱阳性血清进行检测对比.结果 酶联免疫吸附试验比免疫层析法灵敏度高.结论 筛查HIV抗体最好选用ELISA,防止漏检.     

妊娠特异性β1糖蛋白的分离纯化及特异抗血清的制备

本文采用硫酸铵盐析、DE-52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶过滤及抗SP_1免疫亲和柱层析等方法从胎盘后血分离妊娠特异性β_1民糖蛋白(SP_1)所得SP_1纯化约207倍.纯化的SP_1与德国Behringwerke AG的SP_1抗血清在双向免疫扩散时有沉淀反应;免疫电泳时纯化SP_1移动的位置与β蛋白相当.聚丙烯酰胺凝胶电泳时纯化的SP_1呈现一条主带其分子量为90,000左右.免疫家免所得的抗血清经血浆蛋白吸收后得特异SP_1抗血清在双向免疫扩散时与正常男子或非孕妇女血清均无沉淀反应;与孕血反应形成的沉淀线与德国Behring werke AG的SP_1抗血清所形成的沉淀线相连;交义免疫电泳时呈现一个峰.此抗血清已成功地用于建立酶联免疫法测定SP_1含量     

孕妇血清中早孕因子的分离与纯化

目的：建立一条从妊娠早期妇女血清中分离纯化早孕因子的技术路线，获得高纯度的早孕因子。方法：采用依次经过DEAE 52阴离子交换层析、SP Sepharose F．F阳离子交换层析、ConA Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl-6B亲和层析分离纯化的方案，最终得到具有早孕因子活性的Heparin-Ⅱ成分，早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示有一条电泳区带，相对分子量为10．91kDa。结论：这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的，得到的相对分子量为10．91kDa的蛋白质为电泳纯的早孕因子。     

角膜内皮抗原及抗角膜内皮抗原抗体的提纯

目的 提纯角膜内皮抗原（corneal endothelial antigen,CEN-Ag)及抗角膜内皮抗原抗体（anti-corneal endothelial antibody,aCEN-Ab)。方法 用猪角膜内皮做抗原，上皮做对照，经离子交换层析及2B4.14.1单克隆抗体亲和层析制得纯化的CEN-Ag和角膜上皮抗原（corneal epithelial antigen,CEP-Ag)，用提纯的CEN-Ag和CEP-Ag分别免疫家兔，取血清经亲和层析得到aCEN-Ab和抗角膜上皮抗原抗体（anti-corneal epithelial antibody,aCEP-Ab)。结果 经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。抗原CEN-Ag和CEP-Ag的Mr分别为43000和53000，相应的免疫球蛋白是IgG2和IgG3。     

亲和层析纯化兔肝谷胱甘肽过氧化物酶

兔肝GSH-px纯化包括:硫酸铵沉淀、亲和层析和DEAE-Sephadex A-25层析。在最后一步中GSH-px被纯化均一。纯化倍数340,比活102,回收率33.7%,SDS-PAGE表明为单一区带。亚基分子量为19842u。     

GST-PPARγC1原核表达载体的构建、表达及抗GST-PPARγC1多克隆抗体的制备

目的 在大肠杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(PPARγC1)与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白，并制备抗PPARγC1的多克隆抗体。方法 从肝癌细胞系HepG2提取总RNA，用RT-PCR扩增出PPARγC1 cDNA的编码序列，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，重组载体在酶切鉴定后，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-PPARγC1蛋白，SDS-PAGE分析表达产物，通过亲和层吸法纯化表达的GST-PPARγC1融合蛋白，并以此为抗原制备多克隆抗体。Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果 经测序、酶切鉴定证明，PPARγC1基因已正确插入到pGEX-4T-1中，经IPTG诱导后，表达出相对分子量为44000的融合蛋白。Western blotting鉴定所制备的多克隆抗体可以与PPARγC1特异性结合。结论 PPARγC1片段在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体，为检测PPARγC1及其在其他组织中的表达提供了一种检测途径。     

Identification and partial purification of an Entamoeba histolytica membrane protein that binds fibronectin.

A 37 kDa protein has been described as a putative receptor for fibronectin (Fn) on E. histolytica trophozoites (1). We have now identified a membrane protein that binds biotinylated fibronectin (BFn) with an apparent molecular weight of 140 kDa. Using BFn we were able to follow this protein during partial purification through DEAE-cellulose and Fn-Sepharose chromatography. Antisera prepared against a peptide corresponding to the deduced amino acid sequence for the putative receptor binding site for human Fn (2) recognized a protein with the same molecular weight. The purified protein was also recognized by this sera. We propose that this protein may function as a Fn receptor and will explore the possibility for it being an integrin.     

快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70例的研究

目的：应用快速蛋白液相色谱（FRLC）系统建立分离和纯化615系小鼠肝癌细胞Hcaf细胞膜上热休克蛋白（HSP70）的分离方法。方法：用经43℃热处理8h的Hcaf细胞制备裂解液,用ConA-Sepharose4B和MonoQ柱进行连续分离,所得蛋白经电泳及Western-blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果：纯化蛋白经鉴定分子量70000的HSP70。结论：用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。     

人早幼粒白血病细胞衍生的淋巴细胞凝集物质的部分纯化及特性

人早幼粒白血病细胞(HL60)衍生的淋巴细胞凝集物质已经用DEAE Sephadex A25离子交换层析和Sephadex G 200凝胶过滤层析进行了纯化。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该物质是一种分子量为70KDa的蛋白质。~3H—TdR掺入实验表明,该物质能够抑制PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增殖反应。结果提示,这种与集落刺激样因子有别的凝集物质可能是一种抑制免疫反应的物质。     

GST-PPARγC1原核表达载体的构建、表达及抗GST-PPARγC1多克隆抗体的制备

目的 在大肠杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(PPARγC1)与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗PPAR γC1的多克隆抗体.方法 从肝癌细胞系Hep G2提取总RNA,用RT-PCR扩增出PPAR γ C1 cDNA的编码序列,克隆人表达载体pGEX-T-1中,重组载体在酶切鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-PPARγC1蛋白,SDS-PAGE分析表达产物.通过亲和层吸法纯化表达的GST-肿ARγC1融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体.Westernblotting检测重组抗原的免疫活性.结果 经测序、酶切鉴定证明,PPARγC1基因已正确插入到pGEX-T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为000的融合蛋白.Western blotting鉴定所制备的多克隆抗体可以与PPARγC1特异性结合.结论 PPARγC1片段在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体,为检测PPARγC1及其在其他组织中的表达提供了一种检测途径.     

功能化SEBS的制备与结构

采用熔融反应接枝的方法将(3-异氰酸酯基-4-甲基)苯氨基甲酸-2-丙烯酯(TAI)引入到聚苯乙烯-b-聚(乙烯-co-丁烯)-b-聚苯乙烯三嵌段共聚物(SEBS)上,以实现SEBS的功能化。以傅里叶红外光谱（FT-IR）、核磁共振波谱（NMR）、凝胶渗透色谱（GPC）、动态力学分析（DMA）等手段对接枝物进行了表征。研究了引发剂、单体用量对接枝率及熔体流动速率的影响。结果表明：单体TAI的自聚倾向低,已成功接枝到SEBS上,接枝后的SEBS分子量高且分子量分布宽,接枝后聚(乙烯-co-丁烯)段的玻璃化转变温度提高。