趋化因子及受体在肝移植术后急性排异早期诊断中的作用

目的探讨肝移植手术前后趋化因子(Mig、IP10、ITAC)及其受体(CXCR3)的动态变化在术后急性排斥(AR)早期诊断中的作用.方法 30例肝移植患者,于移植前1天及术后不同时间点分别检测血清Mig、IP10、ITAC水平及外周血淋巴细胞CXCR3的表达;分析发生AR者用激素冲击治疗后上述指标的变化及其与排斥活动指数(RAI)的关系.结果肝移植术后发生AR者(AR组)和未发生AR者(NAR组)Mig、IP10、ITAC水平和CXCR3表达均显著上升(P<0.01);NAR组在常规免疫抑制治疗后5 ～ 7 d,上述监测指标下降至术前水平,而AR组患者则持续增高,至激素冲击治疗逆转AR后下降.Mig、IP10、ITAC水平及CXCR3表达与RAI 计分呈正相关.结论血清中趋化因子Mig、IP10、ITAC和外周血淋巴细胞CXCR3的表达与排斥反应密切相关,可作为诊断AR和观察抗排异疗效的参考指标.     

趋化因子及受体在肝移植术后急性排异早期诊断中的作用

目的探讨肝移植手术前后趋化因子(M ig、IP10、ITAC)及其受体(CXCR3)的动态变化在术后急性排斥(AR)早期诊断中的作用。方法30例肝移植患者,于移植前1天及术后不同时间点分别检测血清M ig、IP10、ITAC水平及外周血淋巴细胞CXCR3的表达;分析发生AR者用激素冲击治疗后上述指标的变化及其与排斥活动指数(RAI)的关系。结果肝移植术后发生AR者(AR组)和未发生AR者(NAR组)M ig、IP10、ITAC水平和CXCR3表达均显著上升(P<0.01);NAR组在常规免疫抑制治疗后5~7 d,上述监测指标下降至术前水平,而AR组患者则持续增高,至激素冲击治疗逆转AR后下降。M ig、IP10、ITAC水平及CXCR3表达与RAI计分呈正相关。结论血清中趋化因子M ig、IP10、ITAC和外周血淋巴细胞CXCR3的表达与排斥反应密切相关,可作为诊断AR和观察抗排异疗效的参考指标。     

趋化因子IP10及其受体CXCR3早期诊断肝移植术后急性排异

目的探讨趋化因子IP10及其受体CXCR3动态变化与肝移植排斥的关系及其在早期诊断中的意义。方法以2005年4月-2005年9月在长征医院行肝移植术的30例患者为研究对象,检测患者术前及术后不同时间血清中IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达;确诊为急性排斥的患者,于当天以及经激素冲击治疗后不同时间分别检测治疗前后患者血清中IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达变化。结果肝移植术前1d(acute rejection,AR)组和(non-acute rejection,NAR)组患者血清IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达与肝癌肝硬化组相比无明显差异(P>0.05),但与正常对照组相比有显著差异(P<0.01)。肝移植后,AR组、NAR组手术后IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达均有上升,术后3 d血清中趋化因子水平与术前1d的表达水平相比较,有显著差别(P<0.05)。NAR组在常规的免疫抑制治疗后5~7 d内下降至术前水平,但AR患者术后不但各个检测时间血清IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达明显高于NAR组,且在NAR组的表达降低至术前水平6 d后仍然持续高表达,在手术后11 d、12 d以及术后14 d分别确诊排斥的发生;而当AR组经冲击治疗逆转后,趋化因子IP10表达也相应下降并保持较低水平。结论血清中趋化因子IP10和外周血淋巴细胞CXCR3的表达与排斥反应密切相关,可作为诊断急性排斥反应的发生,以及观察抗排异疗效的参考指标。     

胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3与移植肝急性排斥反应的相关性

目的:观察胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3(sCXCR3)的动态变化,探讨其与移植肝急性排斥反应(AR)的关系。方法:以2007年10月～2008年3月在本院行肝移植术的28例患者为研究对象,按急性排斥反应发生与否分为AR组(n=8)和NAR组(n=20);另选本院消化科因胆石症行鼻胆管引流(ENBD)的患者10例作为对照。采用双抗体夹心ELISA方法检测患者移植术后第1、3、5、7天和激素冲击治疗第1、3、7天胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达变化,分析其与肝穿刺活检Banff排斥活动指数(RAI)的相关性,评价其对AR的诊断价值。结果:肝移植患者术后胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平逐渐升高,术后第5天达到高峰,且从第5天开始,AR组患者的表达水平显著高于NAR组和ENBD组(P<0.05);经激素冲击治疗后,IP-10及sCXCR3的表达水平明显下降(P<0.05)。AR确诊当日,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平与RAI具有良好相关性(P<0.05)。术后第5天,截断值为964.45 pg/ml时,IP-10诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为100%;术后第7天,截断值为819.35 pg/ml时,sCXCR3诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为80%。结论:肝移植术后早期,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的动态变化与移植肝急性排斥反应密切相关,有望成为AR早期诊断及抗排斥治疗效果的无创监测指标。     

大黄素对大鼠肝移植排斥反应作用的时机选择

目的 探讨大黄素对大鼠肝移植术后排斥反应作用的最佳时机.方法 以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,建立大鼠原位肝移植模型.按照给予大黄素的时间不同,将模型动物随机分为4组,每组12只.A组作为对照组,B、C、D 3组分别于术前8 d至手术当天、术前4 d至术后4 d、术后1-8 d以ip给予大黄素50.0 rag/(kg·d).观察各组大鼠存活时间和移植肝组织病理变化,并确定排斥活动指数(RAI).结果 D组术后受者存活时间为(25.3±3.2)d,比其他3组明显延长(P<0.05);D组移植肝的RAI为6.12±0.55,比其他3组明显减轻(P<0.05).结论 于肝移植术后1～8 d给予大黄素对大鼠移植肝的排斥反应有明显抑制作用,能显著延长移植大鼠的存活时间.     

慢性乙型肝炎患者CXC趋化因子Mig的表达

目的探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者CXC趋化因子Mig的表达水平及其与HBV-DNA、丙氨酸转氨酶(ALT)的相关性。方法以实时PCR法动态检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)内MigmRNA的表达水平,以趋化因子与GAPDH比值为其最终含量。以ELISA法定量检测患者外周血中Mig蛋白含量。结果慢性乙肝患者PBMC内MigmRNA表达水平为0.6883±0.0693,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.001)。Mig血清浓度为(609.6±73.8)pg/ml,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05)。患者PBMC内MigmRNA与其外周血中Mig含量显著相关(r=0.7157,P<0.001),外周血中Mig含量与血清ALT水平显著相关(r=0.7220,P<0.001),外周血中Mig含量与血清中HBV-DNA含量显著相关(r=0.7266,P<0.001)。结论慢性乙肝患者MigmRNA及血清Mig含量表达均增高,Mig介导了肝脏炎症细胞浸润,参与了乙肝慢性化病程。     

丙型肝炎病毒慢性感染与IL-8、IP-10、Mig表达相关性研究

目的探讨HCV慢性感染与CXC趋化因子mRNA表达水平的相互关系.方法以Real-time PCR法动态检测慢性丙肝患者IFN-α联合利巴韦林治疗前、治疗3、6个月后IL-8、IP-10、Mig mRNA的表达水平.以趋化因子与GAPDH比值为趋化因子的最终相对表达量.结果慢性丙肝患者HCV-RNA平均水平2.09×106 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.243 7±0.071 2)、(0.682 8±0.073 8)、(0.668 3±0.075 4),与正常对照相比,差异有显著性(P<0.01).IFN-α治疗3个月后HCV-RNA平均水平6.70×103 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.089 1±0.094 6)、(0.551 2±0.090 2)、(0.560 2±0.096 0),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.001).IFN-α治疗6个月后HCV-RNA平均水平3.86×102 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.012 2±0.058 6)、(0.439 5±0.091 3)、(0.420 5±0.084 4),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01).HCV 1b和HCV 2a型患者各趋化因子表达水平相似,差异无显著性(P>0.05).结论慢性丙肝患者PBMC内IL-8、IP-10、Mig mRNA表达升高,其表达水平与体内HCV-RNA复制水平有关,但与HCV基因型无关.IFN-α能显著抑制HCV复制,间接下调IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平.IFN-α这种综合作用效果,对降低患者体内炎性反应,控制病情发展十分有利.     

肾移植患者外周血穿孔素、颗粒酶B表达与急性排斥的关系

目的 :探讨肾移植患者外周血淋巴细胞 (peripheralbloodlymphocyte ,PBL)穿孔素、颗粒酶B的表达与急性排斥反应 (acuterejection ,AR)的关系 .方法 :用流式细胞分析仪(flowcytometry ,FCM )动态监测慢性透析 (chronichemodialy sis,HD) (n =2 6 )、AR (n =1 2 )、肾功能延迟恢复 (delayedgrartfunction ,DGF) (n =1 0 )、肾功能正常 (stablerenalallo graftrecipient,SRAR) (n =1 8)组患者的PBL穿孔素、颗粒酶B表达差异和AR的关系 .结果 :①肾移植术后患者PBL穿孔素、颗粒酶B的表达强度依次为AR组、SRAR组和DGF组 .且AR组较其余 3组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;②其升高时间比临床上出现AR的症状早 3d左右 .随着AR的逆转 ,其表达也逐渐降低至原有基础水平附近 .结论 :PBL穿孔素、颗粒酶B表达是一种有价值的、无创性的AR的标志物 ,不仅有助于AR的早期诊断 ,并可用来评价抗排斥治疗是否有效的手段之一 .     

肝移植术后应用重组生长激素对急性排斥反应的影响

目的　探讨临床肝移植术后早期应用rhGH对排斥反应的影响。方法　对 30例肝移植患者随机抽取其中 15例作为观察组 ,15例作为对照组 ,观察组于术后第 1天开始连续 7d每天 1次皮下注射重组人生长激素10u ,其他治疗与对照组相同。术后 1,4 ,8,14d测定免疫学指标及临床观察。结果　观察组血清GH及IGF - 1水平较对照组显著升高 (n=15 ,P <0 0 5 ) ,同时两组血清IgG ,IgM ,IgA ,IL - 2水平CD4 /CD8值及急性排斥发生率差异均无显著性 (n=15 ,P >0 0 5 )。结论　观察组与对照组的细胞免疫与体液免疫指标及急性排斥发生率差异无显著性。     

环孢素A对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨环孢素A治疗急性排斥反应的作用机制.方法采用Ono方法建立SD大鼠心脏移植排斥反应动物模型,将实验分为两组:对照组n=10,未进行任何治疗;环孢霉素A(CsA)组:n=20,术后1～7 d腹腔内注射CsA 10mg/(kg*d).采用ELISA法测定术后IL-2的含量,采用Tunel法检测心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数.结果两组移植物存活时间为7.25 d±0.71 d和19.4 d±2.07 d,实验组比对照组延长12 d(P<0.01).实验组术后IL-2含量明显减少,与对照组相比较差异有显著性(P<0.05).两组中心肌细胞凋亡指数分别为2.84±1.48和0.54±0.19(P<0.0001).结论 CsA通过抑制IL-2的分泌和心肌细胞凋亡,发挥抗排斥作用.     

完全逆转的急性排斥对移植肾长期生存率的影响

目的　回顾性分析 946例肾移植患者急性排斥发生的时间、次数、治疗效果对移植肾长期存活的影响。方法　通过lifetable分别计算和比较无排斥组、一次排斥组、二次以上排斥组、早期排斥 (肾移植术后 90d内 )组、后期排斥 (术后 90d以后 )以及完全逆转组、部分逆转组患者肾生存率 ,并通过Cox回归分析相关危险因素。结果　急性排斥患者 ( 172例 )移植肾生存率要明显低于无急性排斥患者 ( 774例 ) ,5年和 10年生存率分别为 70 9%、2 9 8%和 93 3 %、83 3 % (P <0 0 0 0 1)。发生 2次以上急性排斥患者的肾长期生存率比无排斥和 1次排斥组要低得多 (P <0 0 0 0 1和P =0 0 0 3)。完全逆转组和部分逆转组患者的 5年、8年肾生存率分别为 93 9%、89 2和 6 3 1%、41 4% (P <0 0 0 0 1) ,前者和无排斥组患者肾生存率无明显差异 (P =0 96 )。排斥发生时间并不是影响移植肾生存的因素。结论　发生急性排斥反应的患者有较差的移植肾长期生存率 ,发生 1次且抗排斥治疗能完全逆转的患者其移植肾长期生存率与无排斥患者的肾生存率无明显差异。     

Impact of acute rejection episodes on long-term renal allograft survival

Objective To assess the impact of the number, and time of acute rejection (AR) and outcome of anti-rejection therapy on the long-term survival of renal allografts and the relative risk factors. Methods The Kaplan-Meier analysis and log-rank test were used to calculate the survival rates of patients and grafts in no acute rejection group (NAR, 895 patients), 1 rejection episode group (1AR, 183), 2 and more than 2 rejection episodes group (2AR, 17), acute rejection group ［AR (1AR+2AR), 200］, early acute rejection group (within 90 days after transplantation, EAR, 125), late acute rejection group (91 days later, LAR, 58), completely AR reversed group (CAR, 105), and incompletely AR reversed group (IAR, 68). The relative risk factors were analyzed by the Cox proportional hazards regression. Results The 5- and 10-year survival rates of renal allografts were 75.4% and 17.1% in AR and 93.2% and 86.5% in the NAR group (P&lt;0.0001). The long-term graft survival was much lower in the 2AR group than in the NAR or 1AR groups (P&lt;0.0001 and P=0.002, respectively). It was similar in either the NAR or CAR groups (P=0.31), but it was significantly lower (P&lt;0.0001) in the IAR group. Multivariate Cox regression analysis revealed that the outcome of anti-rejection therapy is an important risk factor affecting the long-term survival of allografts. Conclusions AR is significantly associated with poor long-term survival of renal allografts. But the long-term graft survival of patients with one acute rejection but completely reversed is not significantly different from that of patients without acute rejection.     

The Role of sICAM-1 Detection in the Diagnosis of Acute Rejection Following Liver Transplantation

In order to evaluate the applied value of soluble intracellular adhesion molecule-1 （sICAM-l） in acute rejection （AR） following liver transplantation, the expression of sICAM-1 protein was sequentially detected by using ELISA in serum and bile of 43 patients receiving liver transplantation. In AR group, the expression levels of sICAM-1 protein were increased 3 days before and immediately on the establishment of AR diagnosis, and there was significant difference in the expression of bile between AR group and control group （P〈0.01）. After reversion of AR with hormone intensive therapy, there was significant difference in the sICAM-1 protein expression of serum and bile between AR group and control group. It was concluded that the sequential detection of sICAM-1 protein level in serum and bile was a reliable and noninvasive method for the early diagnosis of AR after liver transplantation and was valuable to observe the curative effects of anti-AR therapy.     

倾向值匹配法评价解剖性肝切除和非解剖性肝切除对肝细胞癌预后的影响

目的 采用倾向值匹配法比较解剖性肝切除和非解剖性肝切除两种方法对肝细胞癌预后的影响.方法 回顾性分析2010年1月至2015年12月南昌大学第一附属医院收治的124例接受肝癌切除的肝细胞癌患者的临床资料,其中解剖性肝切除组64例,非解剖性肝切除组60例.利用倾向值匹配的方法均衡组间协变量后,比较两组患者的总体生存率,并用Cox比例风险模型分析影响肝癌预后的危险因素.结果 经倾向值匹配后,解剖性肝切除组(n=29)与非解剖性肝切除组(n=45)患者的中位总体生存时间分别52(44.83～59.17)个月和38(31.45～44.55)个月,组间差异有统计学意义(P=0.005).Cox回归模型多因素分析显示解剖性肝切除有助于提高肝细胞癌患者的总体生存率(相对危险度为o.54,95％置信区间0.30～0.96,P=0.04).结论 解剖性肝切除较非解剖性肝切除更能提高肝细胞癌患者的总体生存率.     

PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用

目的 建立real-time RT-qPCR(实时荧光定量RT-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mRNA的水平.方法 两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组( LEW→BN)模型,术后7d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR Green I real-time RT-qPCR检测法.利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量.结果 异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P＜0.05).RAI评分排斥组高于耐受组(均P ＜0.05).PD-L1扩增效率为98.8％,相关系数为0.996;溶解曲线为特异单峰;变异系数小于2.0％;移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组[(0.95±0.10)×10-2]高于排斥组[(0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026).结论 成功建立了大鼠源PD-L1的real-time RT-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础.     

肾移植术后早期天然免疫分子Toll样受体4动态变化的规律

目的探讨天然免疫分子Toll样受体4（TLR4）在肾移植术后早期的动态变化规律及其在肾脏移植免疫中的作用。方法对18例肾移植术后早期病例进行了研究,采用三色标记流式细胞术检测肾移植术后第1、4、7天CD14阳性单核细胞中TLR4及其下游分子CD80的表达水平,同时观察患者术后恢复情况,根据术后2周内有无排斥反应将18例病例分为排斥组（3例）和无排斥组（15例）。对TLR4和CD80在排斥组和无排斥组的表达情况进行分析。结果（1）无排斥组肾移植术后第1、4、7天TLR4的表达水平呈下降趋势,分别为（21．38±16．02）％、（13．38±7．90）％和（4．28±3．74）％,术后第7天表达低于术后第1天和第4天表达,差异有统计学意义（均P〈0．05）;排斥组TLR4表达水平分别为（3．59±1．18）％、（21．5±20．54）％、（17．05±12．92）％,有不同程度升高（P〉0．05）。（2）排斥组（3例）术后第4天TLR4水平与术后第1天的环比（d4／d1）高于无排斥组（15例）,差异有统计学意义（P〈0．05）;排斥组（2例）术后第7天TLR4水平与术后第4天的环比（d7／d4）高于无排斥组（15例）,差异有统计学意义（P〈0．05）。排斥组1例术后第5天因移植肾急性排斥反应行移植肾切除术,术后第7天与第4天TLR4表达水平环比下降。（3）无排斥组肾移植术后第1、4、7天CD80的表达呈下降趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。排斥组CD80的表达则有不同程度的升高,但差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论肾移植术后早期TLR4的表达变化规律与患者免疫反应能力相一致;肾移植术后早期排斥组TLR4表达水平环比明显高于无排斥组。     

肝移植术后近期毛细胆管淤胆性高胆红素血症的激素治疗

目的探讨激素对肝移植术后近期毛细胆管瘀胆性高胆红素血症的治疗作用。方法选择肝移植术后2周～1月出现血清总胆红素超过171μmol/L的13例病例,经检查排除肝脏血供、胆道并发症、急性排斥反应等因素,病理确认为肝内毛细胆管淤胆后,予静滴氢化可的松琥珀酸钠,于治疗前1日、治疗后1日、治疗后1周分别检查肝功能,比较治疗前后胆红素的变化,并于治疗前及治疗后1周分别行肝穿病理检查对照治疗前后的变化。结果经激素治疗后总胆红素水平明显下降,治疗后1周病理提示肝内毛细胆管淤胆消失。结论激素治疗肝移植术后近期毛细胆管淤胆性高胆红素血症是有效的方法。