LY-294002对大鼠骨关节炎模型关节软骨中VEGF表达的影响

目的研究LY-294002对大鼠骨关节炎模型关节软骨中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组(OA组)和LY-294002治疗组,每组10只。利用膝关节注射4%的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数(MAI),Western blot方法检测关节软骨中VEGF蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测VEGF m RNA的表达变化。结果对照组关节无任何异常变化,OA模型组随着造模的时间延长,关节出现了重度红肿现象,与OA模型组比较,给药组的关节炎症反应呈现消退现象。术后8周检测关节软骨中VEGF蛋白及m RNA表达的变化,结果显示VEGF蛋白及m RNA在对照组大鼠关节软骨仅有微量表达,而在OA组大鼠关节软骨表达则显著升高(P0.01);与OA组相比,LY-294002治疗组大鼠关节软骨中VEGF蛋白及m RNA表达均显著降低(P0.01)。结论下调VEGF的表达很可是LY-294002参与骨关节炎的发病机制之一。     

环氧合酶-2抑制剂对骨关节炎大鼠关节软骨中白介素-1β表达的影响

目的研究环氧合酶-2抑制剂对骨关节炎大鼠关节软骨中自介素-1β（IL-1β）表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组（OA组）和环氧合酶-2抑制剂（吲哚美辛）处理组,每组10只。利用膝关节注射4％的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数（MAI）,免疫组化方法与Westernblot方法检测关节软骨中IL-1β蛋白的表达变化。结果OA模型组关节出现重度红肿现象,对照组关节无异常,环氧合酶-2抑制剂组炎症反应比0A模型组减轻。环氧合酶-2抑制剂组平均关节炎指数比0A模型组显著降低（p〈0．01）。IL-1β蛋白在对照组大鼠关节软骨仅有微量表达,而在OA组表达则显著升高（P〈0．01）,环氧合酶-2抑制剂组比0A组显著降低（P〈0．01）。结论吲哚美辛对骨关节炎的治疗作用与其下调IL-1β蛋白表达相关。     

塞来昔布对大鼠骨关节炎模型关节软骨中TNF-α表达的影响

目的研究塞来昔布对大鼠骨关节炎模型关节软骨中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、骨性关节炎组（OA组）和塞来昔布治疗组,每组10只。利用膝关节注射4％的木瓜蛋白酶溶液的方法制作骨关节炎模型。：采用关节炎评分法评定各组大鼠平均关节炎指数（MAI）,Westernblot方法检测关节软骨中TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测TNF．仅mRNA的表达变化。结果对照组关节无任何异常变化,OA模型组随着造模的时间延长,关节出现了’重度红肿现象,与OA模型组比较,给药组的关节炎症反应呈现消退现象。术后8周检测关节软骨中TNF-α蛋白及mRNA表达的变化,结果发现TNF．仪蛋白及mRNA在对照组大鼠关节软骨仅有微量表达,而在OA组大鼠关节软骨表达则显著升高（P〈0．01）;与OA组相比,塞来昔布治疗组大鼠关节软骨中TNF-α蛋白及mRNA表达均显著降低（P〈0．01）。结论塞来昔布很可通过下调TNF-α的表达参与骨关节炎的发病机制。     

关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的观察膝关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型关节软骨中基质金属蛋白酶-9表达的影响。方法健康家兔30只,随机分为对照组(空气组)、骨性关节炎组(OA组)和医用臭氧组(25μg/ml),使用Hulth法复制出膝骨性关节炎(OA)模型。分别在造模成功时和处死前测定兔膝关节活动度,末次注射后3 d处死实验兔,免疫组化方法与Western blot方法检测关节软骨中MMP-9蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中MMP-9 mRNA水平的变化。结果造模成功后,OA组和医用臭氧组兔膝关节活动度均显著降低,但是采用医用臭氧治疗后,医用臭氧组兔膝关节活动度显著升高。OA组兔关节软骨中MMP-9蛋白与mRNA的表达水平比对照组显著升高,但臭氧组兔膝关节MMP-9蛋白与mRNA的表达显著降低。结论降低关节软骨中基质金属蛋白酶-9的表达可能是医用臭氧有效治疗膝关节炎的作用机制之一。     

关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的观察膝关节腔内注射医用臭氧对兔膝骨性关节炎模型关节软骨中基质金属蛋白酶-13表达的影响。方法健康家兔30只,随机分为对照组(空气组)、骨性关节炎组(OA组)和医用臭氧组(25μg/ml),使用Hulth法复制出膝骨性关节炎(OA)模型。分别在造模成功时和处死前测定兔膝关节活动度,末次注射后3 d处死实验兔,免疫组化方法与Western blot方法检测关节软骨中MMP-13蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测关节软骨中MMP-13 mRNA水平的变化。结果造模成功后,OA组和医用臭氧组兔膝关节活动度均显著降低,医用臭氧组兔膝关节活动度显著升高。OA组兔关节软骨中MMP-13蛋白与mRNA的表达水平显著升高,但是采用医用臭氧治疗后,臭氧组兔膝关节MMP-13蛋白与mRNA的表达水平显著降低。结论降低关节软骨中基质金属蛋白酶-13的表达可能是医用臭氧有效治疗膝关节炎的作用机制之一。     

大鼠骨关节炎模型的建立及软骨组织中MMP-13和ADAMTS-5的表达

目的评价大鼠膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除制作骨关节炎(OA)模型方法的可行性,探讨MMP-13和ADAMTS-5蛋白在大鼠骨关节炎模型软骨中的表达情况。方法 SD大鼠40只按随机数字法分为模型组(n=30)和假手术组(n=10),模型组采用膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除制作膝OA模型,假手术组打开膝关节囊后缝合。模型组于术后4、6、8周处死大鼠,假手术组于术后8周处死大鼠。取大鼠关节软骨组织,分别采用Western blot技术及免疫组化方法测定软骨组织中MMP-13和ADAMTS-5蛋白表达情况。结果模型组术后4周即可见软骨退变,术后6周和8周时退变进一步加重,假手术组无明显软骨退变,各组相比大鼠关节软骨评分差异有统计学意义(P0.05)。Western blot检测结果显示,MMP-13及ADAMTS-5蛋白表达在假手术组水平均较低。MMP-13造模4周开始升高,持续升高到第6周,第8周较之前降低。造模4周、造模6周和造模8周各组蛋白表达比较差异有统计学意义(P0.05)。ADAMTS-5造模6周开始升高,造模8周维持之前表达水平。造模4周分别与造模6周和造模8周相比,蛋白表达差异有统计学意义(P0.05)。造模6周大鼠关节软骨组织中蛋白表达和造模8周相比,差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化检测蛋白表达趋势与Western blot检测结果一致。结论采用膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除的方法可建立动物OA模型;MMP-13和ADAMTS-5在OA发病过程中的不同时期表达水平有明显变化,需要进一步的研究来探讨其相关信号通路。     

血管内皮生长因子与肿瘤坏死因子-α在佐剂关节炎大鼠滑膜中表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜组织中的表达及其与关节病理积分的关系。方法:建立AA大鼠模型,常规HE染色,计算关节病理积分,并用免疫组织化学染色检测VEGF和TNF-α蛋白表达。结果:AA组大鼠滑膜VEGF和TNF-α蛋白表达在3周、8周及20周时均明显高于健康对照组(均P<0.01),且二者均与关节病理积分呈显著正相关(均P<0.01),二者之间亦呈显著正相关(均P<0.01)。结论:VEGF和TNF-α在关节炎的形成及发展过程中起重要作用,二者互相作用并影响滑膜新生血管的形成。     

以关节不稳建立的大鼠骨关节炎模型

背景：骨性关节炎是一种复杂的多病因退变性关节疾病。早期进行骨性关节炎的防治尤其重要。但获取足量的适合研究的早期骨性关节炎的人类骨标本十分困难。 目的：观察关节不稳方法建立骨关节炎模型大鼠的关节软骨组织学变化。 方法：10周龄雄性SD大鼠随机分为2组：实验组切除右膝内侧半月板及内侧副韧带,对照组仅切开关节囊。于术后1,2,4,6,8周取右膝关节标本,行病理组织学检查分析大鼠骨关节炎病程的变化情况。 结果与结论：①术后2,4,6,8周,实验组关节软骨退变程度呈现轻度糜烂、溃疡磨损、严重磨损、骨赘形成等病理变化。②术后1,2,4,6,8周,实验组关节软骨评分均明显高于对照组(P < 0.05)。结果显示该实验采用内侧副韧带切断+内侧半月板切除方法成功建立了大鼠膝关节骨关节炎模型,且造模后4周内的病理、形态学改变类似于人类早期膝关节骨关节炎表现,是研究早期骨关节炎的理想模型。     

HIF-1α、VEGF及CD34在大鼠骨关节炎模型软骨中的表达及意义

目的检测低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及CD34在膝骨关节炎(OA)软骨中的表达。方法 60只Wister大鼠,鼠龄3个月,体质量约200~250 g。随机分为实验组45只和对照组15只。实验组行单膝前交叉韧带切断术,对照组不做处理,作为空白组对照;术后9周处死动物,采用免疫组织化学苏木精-伊红(HE)染色对实验组和对照组HIF-1α、VEGF、CD34表达进行检测。结果 HIF-lα、VEGF、CD34在实验组中阳性表达率分别为66.67%(30/45)、73.33%(33/45)、71.11%(32/45),均明显高于对照组;两组数据之间的差异有统计学意义(P0.05)。实验组HIF-1α、VEGF、CD34阳性细胞计数显著高于对照组(P0.05);HIF-1α与VEGF、CD34表达存在正相关(r=0.249、0.289,P0.05)。结论 OA软骨中HIF-1α、VEGF及CD34高表达,HIF-1α与VEGF、CD34表达存在正相关,且HIF-1α、VEGF与CD34在OA软骨退行性变进展中共同发挥着重要作用。     

右归丸对膝骨关节炎模型鼠软骨组织显微结构及热休克蛋白90α蛋白表达的影响

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠软骨组织显微结构和热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,Hsp90α)蛋白表达的影响,进一步揭示右归丸防治KOA的机制。方法:将大鼠随机分为假手术对照组、KOA模型组、硫酸氨基葡萄糖组和右归丸(高、中、低剂量)组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,分别予相应药物灌胃8周。HE染色法观察软骨组织的形态学变化,并进行Makin评分;应用免疫组化法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、纤连蛋白(fibronectin,Fn)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL-Ⅱ)的表达;RT-qPCR法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和MMP-13的mRNA表达水平,应用Western blot法检测各组大鼠软骨组织Hsp90α和COL-Ⅱ的表达。结果:与假手术组比较,KOA模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织Hsp90α的蛋白表达显著升高,IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达明显升高,COL-Ⅱ和Fn的蛋白表达明显降低(P<0.01),关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与KOA模型组相比,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分和Hsp90α的蛋白表达均明显降低,Fn的蛋白表达明显升高,右归丸中、高剂量组COL-Ⅱ的蛋白表达明显升高,右归丸各干预组IL-1β、MMP-3和MMP-13的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸通过下调Hsp90α的蛋白表达并上调Fn的蛋白表达来减缓炎症因子的分泌和细胞外基质的降解,从而有效保护KOA模型大鼠关节软骨,延缓关节软骨退变。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察佐剂性关节炎大鼠血清血管内皮生长因子水平,滑膜血管新生和血管内皮生长因子及其受体的表达及姜黄素对其干预作用,探讨姜黄素治疗类风湿关节炎可能的机制。方法取sD大鼠,制成佐剂性关节炎模型,设正常组、模型组、姜黄素组、甲氨喋呤组。造模后第9天起分别予腹腔注射姜黄素50mg·kg^-1·d^-1,连续14d;甲氨蝶呤0．5mg·kg^-1·3d^-1,连续5次。计算第9天、第23天各组大鼠的AI积分。于第23天处死大鼠,ELISA法检测血清血管内皮生长因子;取膝关节滑膜,行免疫组化染色,观察滑膜微血管密度,半定量计算血管内皮生长因子及其受体的表达。结果①在第9天,各组造模后大鼠表现不同程度的关节炎症,其AI积分与正常组差异均有显著性（P〈0．01）。治疗后,第23天姜黄素组和甲氨蝶呤组大鼠AI积分与模型组相比有显著性差异（P〈0．01）;②模型组大鼠血清血管内皮生长因子明显升高（P〈0．01）,治疗后甲氨蝶呤组和姜黄素组的血清血管内皮生长因子与模型组相比差异均有显著性（P〈0．01）;③模型组大鼠滑膜微血管密度和血管内皮生长因子及其受体表达较正常组增加明显（P〈0．01）,治疗后甲氨蝶呤组和姜黄素组的微血管密度,血管内皮生长因子及其受体的表达与模型组相比差异均有显著性（P〈0．01）,且甲氨蝶呤组、姜黄素组组间比较差异无显著性（P〉0．05）。结论姜黄素能有效降低佐剂性关节炎大鼠血清血管内皮生长因子水平,抑制滑膜血管新生和血管内皮生长因子及其受体的表达,这可能是姜黄素治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

复方银杏叶对糖尿病大鼠附睾VEGF表达的影响

目的探讨复方银杏叶（CGL）对糖尿病大鼠附睾VEGF的影响。方法 40只Wistar雄性大鼠随机抽取10只作为正常对照组（NC）,其余大鼠用链脲佐菌素（Streptozotocin STZ）加高脂高糖饮食制备2型糖尿病模型,造模动物筛选后,随机分为糖尿病组（DM组）和CGL治疗组,每组10只。治疗组给予CGL 10周后,取双侧附睾组织,提取蛋白,检测组织中血管内皮生长因子（VEGF）含量。结果 2型糖尿病模型制备成功,糖尿病组与对照组比较,VEGF含量降低,差别有显著性意义（P〈0.01）,而治疗组与糖尿病组比较,VEGF升高,差别有显著性意义（P〈0.01）。结论复方银杏叶能够提高糖尿病大鼠附睾VEGF的表达,对糖尿病伴随生殖功能障碍有一定的改善作用。     

风湿康治疗大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的探讨风湿康治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法膝关节腔注射4%的木瓜蛋白酶建立大鼠OA模型,1周后48只大鼠随机平均分成正常组、模型组、双醋瑞英组及1.35g/kg、2.7g/kg、5.4g/kg的风湿康治疗组共6组,正常组与模型组给与等体积的生理盐水。4周后处死动物,检测各组大鼠血清中IL-1β和TGF-β1的含量,切取大鼠膝关节,行大体和组织学观察,采用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在关节软骨中的表达。结果风湿康治疗组均能降低血清中IL-1β的水平（P〈0.001）,风湿康中剂量和高剂量组能显著升高血清中TGF-β1的水平（P〈0.001）。风湿康低剂量组对关节软骨的保护作用并不明显（P〉0.05）,风湿康中剂量和高剂量组均可显著抑制MMP-13在膝关节软骨中的表达（P〈0.05）,风湿康高剂量组与双醋瑞英组具有相似的疗效（P〉0.05）。结论风湿康可能是通过降低血清中IL-1β、升高TGF-β1的水平、减少MMP-13在膝关节软骨中的表达,从而发挥其对骨关节炎的治疗作用。     

色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子在糖尿病大鼠肾脏的不平衡表达

目的检测色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病大鼠肾脏的表达，探讨其在糖尿病肾病（DN）发生发展中的作用。方法40只雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（NC）、糖尿病模型组（DM）。4、8周末，检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数、尿白蛋白排泄率，免疫组织化学法检测肾脏PEDF、VEGF的表达。结果4、8周末，DM组大鼠肾脏PEDF的表达较NC组明显减少（P〈0．01）；VEGF的表达较NC组明显增多（P〈0．01）；肾脏PEDF的表达与VEGF明显负相关（r=-0．823，P〈0．01）。结论PEDF和VEGF在肾脏的不平衡表达可能参与了DN的发病。     

针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响

目的:观察针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响。方法:SD大鼠20只,连续6w腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1)和亚硝酸钠(45mg·kg-1)建立AD模型后随机分成模型组、针刺组(n=10),同时设立非模型组(n=10)。造模后第21d,针刺组大鼠予以针刺百会和肾俞穴治疗,而模型组大鼠不予以治疗。针刺治疗结束后大鼠立即处死,采用免疫组化法检测非模型组、模型组、针刺组大鼠海马Caspase-3表达。结果:免疫组化结果显示模型组大鼠海马Caspase-3表达明显增加,与对照组比较有显著差异(P0.01);而针刺组Caspase-3的表达明显减少,与模型组比较(P0.01)。结论:针刺可抑制大鼠海马Caspase-3表达。     

Ⅱ型胶原注射液对大鼠骨性关节炎的治疗研究

目的评价Ⅱ型胶原注射液对大鼠骨性关节炎的治疗作用。方法采用酸溶法提取高纯度的Ⅱ型胶原注射液（创尔关节腔注射液,纯度98．5％以上）。雄性SD大鼠64只,无特定病原体动物即SPF级．体质量110～150g（合格证号0083113）。采用改良的Hulth法制作大鼠膝关节骨性关节炎模型,按体质量随机分组为正常对照组、模型对照组、天节腔注射液组、透明质酸钠组．每组16只。于术后l、3、5、7、9、11周关节腔注射液组、透明质酸钠组关节腔分别注射Ⅱ型胶原注射液、透明质酸钠凝胶,正常对照组和模型对照组注射等量的0．9％氯化纳溶液进行治疗。于治疗时间第7周和第13周．各取动物眼眶静脉丛采血．测定血清C反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）含量．取右侧膝关节进行病理组织观察并通过wilhelmin关节软骨损伤分级及关节软骨组织学Mankin’s评分评价Ⅱ型胶原注射液对大鼠骨性关节炎的疗效,结果各组大鼠血清中CRP的含量差异均无统计学意义（P〉0．05）。关节腔注射液组和透明质酸钠组中大鼠血清中的RF含量降低,炎症反应得到改善;与正常对照组[第7、13周分别为（89．56±6．10）IU／L、（83．86±15．32）[U／L]相比．模型对照组术后第13周的血清中RF含量无统计学意义（P〉0．05）,关节腔注射液组血清中RF含量也无统计学意义（P〉0．05）．而透明质酸钠组血清中RF含量[第7、13周分别为（85．95±7．68）IU／L、（81．64±11．45）IU／L]显著下降（P〈0．05）;与模型对照组相比。关节腔注射液组和透明质酸钠组第13周的Wilhelmin分级具有一定的改善．Mankin’s评分均较同时期模型对照组有减少的趋势。结论Ⅱ型胶原注射液能够缓解大鼠骨性关节炎的病理过程．     

附睾血管内皮生长因子基因慢病毒干扰载体的构建

目的：以血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA 为靶点,设计、构建VEGF 的RNA干扰慢病毒载体,并 对其在大鼠附睾的沉默效果进行验证。 方法：构建3 种附睾VEGF-shRNA 慢病毒表达载体VEGF-shRNA-1、 VEGF-shRNA-2、VEGF-shRNA-3, 提取3 种阳性克隆质粒测序, 转染HEK293-T 细胞后产生慢病毒质粒。大鼠随 机分为空白对照组、NC-shRNA 阴性感染组、VEGF-shRNA-1 感染组、VEGF-shRNA-2 感染组、VEGF-shRNA-3 感染组,将病毒液分别注射到各组大鼠双侧附睾;实时荧光定量 PCR及蛋白免疫印迹检测各组大鼠附睾VEGF 的mRNA 及蛋白沉默效果。结果： 测序结果证明3 种慢病毒载体被包装成功。感染大鼠附睾后,VEGF 感染组 mRNA 及蛋白表达量均较阴性感染组和空白对照组明显降低,其中以VEGF-shRNA-3 感染组干扰效果更为有效。 结论：成功设计了VEGF 基因的RNA干扰靶点和制备了VEGF 基因的慢病毒载体,VEGF-shRNA-3 能有效抑制 附睾VEGF 的表达。