宫颈癌DNA倍体,人乳头瘤病毒16／18,ras p21和p53蛋白表达综合研究

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）核酸分子斑点杂交法、流式细胞技术和细胞免疫荧光法，检测宫颈癌ＤＮＡ倍体、ＨＰＶ、ｒａｓ ｐ２１和ｐ５３蛋白表达，并对其进行综合研究。结果显示，宫颈癌组ＤＮＡ指数平均值明显高于正常组，且与肿瘤细胞分化有关；癌变组ＤＮＡ异倍体率与肿瘤分化程度关系密切；在１７例ＨＰＶ１６／１８型阳性病例中，均有ｒａｓ ｐ２１和或ｐ５３蛋白阳性表达。说明宫颈癌变是多因素综合作用的结果，ＨＰＶ１６     

野生型p53cDNA真核表达载体的构建

ｐ５３基因是癌症研究和肿瘤基因治疗中最引人注目的抑癌基因之一，据报道，大约一半左右癌症的起因是由于ｐ５３基因突变。在所有的抑癌基因中，ｐ５３基因是突变率极高的一种，它的失活会阻止细胞进入凋亡，从而使之处于持续分裂状态而增加突变及恶性转化的概率［１］。因此，研究野生型ｐ５３基因在肿瘤的基因治疗中有普遍性意义。１材料和方法１．１材料ｐＧＥＭ－Ｔ载体（Ｐｒｏｍｅｇｅ公司）；真核表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（本室保存）；野生型ｐ５３ｃＤＮＡ由南京军事医学研究所朱敏生教授惠赠；限制性内切酶、ＴａｑＤＮＡ聚合酶…     

小儿肾母细胞瘤的发生与p53抑癌基因突变关系的研究

对１４例小儿肾母细胞瘤的ｐ５３抑癌基因突变、ＤＮＡ含量、病理分型及临床分期进行了比较研究。结果表明：（１）小儿肾母细胞瘤的发生与ｐ５３抑癌基因突变有密切关系；（２）突变与肾母细胞瘤的分化程度有关；（３）突变见于临床各期；（４）ｐ５３基因突变多见于肾母细胞瘤的二倍体肿瘤。     

人脑原发性肿瘤中p53基因PCR—SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤，１例为脑膜瘤，且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

p^53cDNA突变和突变型p^53蛋白表达与大肠癌预后的关系

目的 探讨ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变和突变型ｐ＾５３基因蛋白表达与大肠腺癌预后的关系。方法 ＲＴ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌组织ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变，ＰＡｂ２４０单抗免疫组化检测腺癌组织突变型ｐ＾５３基因蛋白表达，比较两者与大肠腺癌预后的关系。结果 １００例大肠腺癌中，ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变５１例（５１％），突变型ｐ５３基因蛋白高表达７６例（７６％），两者同步阳性４９例：ｐ＾５３基因ｃＤＮＡ突变与突     

人脑原发性肿瘤中p53基因的PCR-SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤（３７．５％），１例为脑膜瘤（７．７％），且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

喉部肿瘤HPV感染与p53基因变异的研究

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ交杂技术检测了５６例喉癌和３５例喉乳头状瘤组织中ＨＰＶ１６／１８的ＤＮＡ及ｐ５３基因点突变。结果显示２４例喉部肿瘤组织ｐ５３基因点突变，３５例喉癌及２４例喉癌及２４例喉乳太瘤组织中检出了ＨＰＶ、ＤＮＡ。在１３例喉癌组织和３例喉乳头状瘤组织 同时检出Ｐ５３点突变和ＨＰＶ０ＤＮＡ。提示ＨＰＶ感染和Ｐ５３变异与喉部肿瘤发生有关，其内在联系有待深入研究。     

胃癌细胞DNA倍体和突变型p53基因产物表达与转移扩散的关系

采用流式细胞测量术，对５７例人胃癌存档石蜡标标本的原发灶和转移灶癌细胞的ＤＮＡ含量与倍体类型进行了检测，同时利用ＭｃＡｂ－ｐ５３对突变型ｐ５３基因产物进行了免疫组化检测。     

人肝癌细胞肿瘤抑制基因转染对阿霉素敏感性的影响

目的为了解肿瘤抑制基因ｐ５３和Ｒｂ基因与肝癌对药物敏感性之间的关系，本实验用逆转录病毒介导将野生型ｐ５３或Ｒｂ基因导入人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１并观察其药物敏感性的改变。方法将野生型ｐ５３ｃＤＮＡ或ＲｂｃＤＮＡ克隆在逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，转染人肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１，筛选阳性克隆，同时以空载体ｐＬＸＳＮ和反义ｐ５３基因作为对照，免疫组化检测ｐ５３或Ｒｂ基因的表达。加入化疗药物４８ｈ后掺入３Ｈ－ＴｄＲ，１８ｈ后检测ＣＰＭ值。结果成功地构建了分别含野生型ｐ５３、Ｒｂ或反义ｐ５３的逆转录病毒载体，转染ＳＭＭＣ７７２１细胞系后获得了ｐ５３或Ｒｂ的表达；与亲代７７２１细胞相比，ｐ５３或Ｒｂ的表达阳性的７７２１细胞的生长速度均明显减慢，ｐ５３表达阳性的７７２１细胞对阿霉素的敏感性明显增强，同样条件下，Ｒｂ在７７２１细胞系内的表达则对阿霉素敏感性无影响。结论野生型ｐ５３基因转染能提高人肝癌７７２１细胞对阿霉素的敏感性     

乙型肝炎病毒基因组中p53应答成分结合序列的确定及意义

目的：探讨ＨＢＶ与肿瘤抑制基因ｐ５３相互作用的机制及其在原发性肝癌发生中的意义．方法：应用计算机程序对ＨＢＶ全基因组进行比较分析，合成含ＤＮＡ－蛋白质结合位点的基因片段作为探针，与肝癌细胞核蛋白作用．通过凝胶电泳移动试验，凝胶电泳超移动试验，原位紫外线交联试验，确定ＨＢＶ与ｐ５３蛋白的特异性结合．应用带报道基因ＣＡＴ与ｐ５３，ＨＢＶＸ基因共转染，观察ＨＢＶ与ｐ５３蛋白相互作用的生物学功能．结果：ＨＢＶ基因组增强子Ｉ上游区域（１０４７～１０５９）存在ｐ５３基因应答成份结合位点序列，能特异性地与ｐ５３蛋白结合，使ｐ５３蛋白在细胞内积聚．结论：ＨＢＶ与ｐ５３存在ＤＮＡ－蛋白质结合关系，在ＨＢＶ感染相关的肝癌发生中具有非常重要的理论意义．     

胃癌中p53基因杂合性丢失的研究

目的：了解ｐ５３基因杂合性丢失与胃癌发生、发展的关系。方法：应用位于１７ｐ１３区域的ｐ５３ｃＤＮＡ探针和ｐＹＮＺ２２ＶＮＴＲ探针，对胃癌及癌旁正常组织基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。结果：在２２例胃癌中，１２例正常组织被检出有杂合性，其中６例标本癌组织发生了杂合性丢失，检出率为５０％。结论：ｐ５３基因杂合性丢失是胃癌发生过程中一种常发事件     

p53基因cDNA突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系

１００份大肠癌组织,用ＲＴ、ＰＣＲ－ＳＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变;Ｐａｂ１８０１单抗免疫组化检测ｐ５３基及其蛋白高表达并对大肠癌术后病人作５年生存随访,比较上述二结果与大肠癌预后的关系。１００例大肠癌中,ＲＴ－ＰＣ、ＳＳＣＰ显示引例大肠癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变（５１％）;Ｐａｂ１８０１阳性率６２％。ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和ｐ５３基因蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ分期无关,ｐ５３基因ｐＤＮＡ突变与ｐ５３基因蛋白高表达相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示,Ｐａｂｌ８０１单抗检测ｐＪ３基因蛋白高表达直接相关（ｐ＜０．０５）,ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变是大肠癌预后差的分子生物学标志物（ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因蛋白产物受多种因素影响不能反映大肠癌的预后。     

野生型p53基因的表达及其对子宫颈癌细胞株的生长抑制作用

构建了可在哺乳动物细胞中表达人ｐ５３蛋白的重组质粒ｐ５３─ｐＳＶ２ｎｅｏ，分别转染猴肾细胞株ＣＶ─１及人子宫颈癌细胞株ＳｉＨａ。用ＰＣＲ法检测出转染细胞中的ｐ５３ｃＤＮＡ；用免疫组化ＡＢＣ法检测出ｐ５３蛋白的表达定位于细胞核内，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测出转染细胞中存在ｐ５３蛋白。结果表明，外源性野生型ｐ５３基因的表达可以使ＳｉＨａ细胞的细胞克隆形成效减少５０％，使细胞生长速度降低，但对ＳｉＨａ细胞的软琼脂克隆形成效无明显影响。提示ｐ５３基因的肿瘤抑制作用与野生型ｐ５３蛋白的量有关，并且是细胞类型特异性的。     

维吾尔族妇女子宫颈癌中 p53 基因的表达和 HPV DNA 检测研究

应用Ｅ６特异性引物ＰＣＲ检测新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织标本中的ＨＰＶ６，１６和１８ＤＮＡ。并应用免疫组化研究ｐ５３基因的表达。结果显示，６５例标本中７例不适应用于ＰＣＲ，其余５８例中ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性４５例（７７．６％），而ＨＰＶ６ＤＮＡ和１８ＤＮＡ为阴性。免疫组化显示，６５例中ｐ５３表达阳性４９例（７５．４％）。在４５例ＨＰＶＤＮＡ阳性标本中，ｐ５３表达阳性３４例（７５．６％）；１３例ＨＰＶＤＮＡ阴性标本中，ｐ５３表达阳性１１例（８４．６％）。提示，ＨＰＶ阳性或阴性与ｐ５３表达之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

乙型肝炎病毒相关性肝癌与p53基因变化的关系

目的：探讨与ＨＢＶ感染相关的肝癌其ｐ５３基因变化及意义，方法：收集１６例西安地区的肝癌及其旁肝组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测了组织中ＨＢＶＤＮＡ的状态，免疫组化确定ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ，ＨＢｘＡｇ和肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白的分布，采用ＰＣＲ扩增后直接ＤＮＡ序列分析，检测了ｐ５３基因第５～８外显子的基因序列。结果：１６例中１３例ＨＢＶＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性，１０例癌组织和１３例癌旁组织ＨＢｘ     

胃癌中p53基因杂合性丢失的研究

了解ｐ５３基因杂合性丢失与胃癌发生，发展的关系。应用位于１７ｐ１３区域的５３ｃＤＮＡ探针和ｐＹＮＺ２２ ＶＮＴＲ探针，对胃癌及癌旁正常组织基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。在２２例胃癌中，１２例正常组织被检出有杂合性，其中６例标本癌组织发生了杂合性     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

人肝癌裸鼠移植瘤株p53基因突变及测序研究

目的 研究从厦门同安肝癌高发区所建的裸鼠移植瘤（ＨＨＣ，ＨＨＣ１５）是否存在ｐ５３基因突变。方法 从两移瘤提取的总ＤＮＡ用分子生物学方法检测并测序，如ＰＣＲ方法扩增ｐ５３基因部分第７外显子，地高辛标记ＤＮＡ探针斑点杂交法，ＤＮＡ限制性酶切片段长度多态分析和激光荧光ＤＮＡ测序等。结果 ＨＨＣ４细胞ＤＮＡ有ｐ５３基因第２５０密码子（Ｃ→Ａ）的突变；ＨＨＣ１５有ｐ５３基因第２４９密码子（Ｇ→Ｔ）的突变。     

p53基因突变能预测卵巢癌进展

ｐ５３基因突变能预测卵巢癌进展最近美国南加州大学医学院Ｚｈｅｎｇ医师等对４６例卵巢癌、２１例卵巢交界性肿瘤、１６例卵巢囊腺瘤和位于癌组织邻近部位的６例外观良性的囊肿进行了研究。他们采用免疫组化及ＤＮＡ序列检测方法，测得ｐ５３突变在癌组织中占５２％（２...     

胃癌组织中p53基因产物阳性表达与其生物学意义的关系初探

应用免疫组织化学ＡＢＣ法，用ｐ５３单克隆抗体（ＤＡＫＯｐ５３ＤＭ７００１）检测分析ｐ５３蛋白表达特征与６９例胃癌标本临床病理特性、疾病预后的关系及临床应用价值。结果：ｐ５３基因突变在胃癌中具有很高的频度，与胃癌的形成和发展密切相关；ｐ５３蛋白阳性表达对判定肿瘤的生物学行为有重要意义，是肿瘤预后不良的新的标志之一；检测组织中ｐ５３蛋白积累对胃癌早期发现可能有重要的临床意义。