绿原酸减轻脓毒症诱导的小鼠急性肾损伤：基于抑制caspase-1经典细胞焦亡信号通路

目的 探讨caspase-1经典的细胞焦亡信号通路在绿原酸治疗急性肾损伤小鼠中的作用及机制。方法 将24只C57Bl/6J小鼠随机分成4组,每组6只：假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿刺组（CLP组）、CLP+地塞米松组（CLP+DXM组）、CLP+绿原酸组（CLP+CGA组）。Sham组小鼠仅开腹未造模,CLP组CLP+DXM组和CLP+CGA组小鼠均盲肠结扎穿刺（CLP）造模。Sham组、CLP组、CLP+DXM组和CLP+CGA组在造模后持续静脉泵注生理盐水10 mg/kg、生理盐水10 mg/kg,注地塞米松1μg/kg和绿原酸15 mg/kg 6 h。各组均在注射药物结束后8 h,比较各组小鼠7 d生存率,肾组织大体形态、HE染色,肾组织细胞凋亡及肾功能相关指标尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、肾损伤分子1(KIM-1);及肾组织NLRP3炎性小体和caspase-1通路关键蛋白表达情况。结果 绿原酸干预后提高了小鼠7 d生存率,肾组织肾小球毛细血管充血、肾间质水肿、肾小管上皮细胞肿胀程度明显减轻（P<0.05）,降低了肾功能指标BUN、Scr、KIM-1水平;NLRP...     

灯盏花素对脓毒症性急性肾损伤保护作用的实验研究

目的观察灯盏花素对脓毒血症模型大鼠急性肾损伤的保护作用。方法清洁级Wistar雄性大鼠60只,随机分为假手术组、脓毒血症模型组和灯盏花素大、中、小剂量组,每组12只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒血症模型。灯盏花大、中、小剂量组在造模后立即分别给予灯盏花素5、10、20mg/kg尾静脉注射。术后24h处死大鼠,下腔静脉取血测定肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平,采用酶联免疫法（ELISA）测定血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤分子1（KIM-1）的水平;摘取肾组织标本进行病理组织学观察,免疫印迹法检测肾脏NGAL和KIM-1蛋白含量。结果与脓毒血症组比较,灯盏花素大、中剂量组大鼠血清Scr、BUN、NGAL和KIM-1水平及肾组织NGAL和KIM-1蛋白表达水平均显著降低（P均〈0.05）;肾脏病理改变好转。灯盏花素小剂量组肾脏病理改变未见好转（P〉0.05）。结论灯盏花素可以显著改善脓毒血症模型大鼠肾组织损伤,降低血清NGAL和KIM-1水平及肾组织NGAL和KIM-1蛋白表达量,对脓毒血症所致急性肾损伤具有保护作用。     

NGAL和KIM-1检测在儿童脓毒症合并急性肾损伤中的诊断价值

 目的 探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）和肾损伤因子1（kidney injury molecule 1,KIM-1）的检测在脓毒症合并急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）患儿诊疗过程中的临床应用价值。方法 采用病例对照研究,按照纳入标准选取2019年1-12月入住复旦大学附属儿科医院PICU的脓毒症患儿82例,按照排除标准去除13例。按入院后是否发生AKI分为脓毒症AKI组28例和脓毒症非AKI组41例。脓毒症AKI组患儿根据治疗过程中是否进行连续性肾脏替代治疗（continuous renal replacement therapy,CRRT）分为脓毒症AKI-CRRT组和脓毒症AKI-非CRRT组。检测脓毒症AKI和非AKI患儿住院后0 h、24 h和72 h的血NGAL、KIM-1、肌酐、胱抑素C（cystatin C,CysC）和视黄醇结合蛋白（retinol-binding protein,RBP）水平,同时监测24 h和72 h的尿量。用非参数检验统计方法分析数据,通过受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析NGAL、KIM-1、肌酐、尿量、CysC、RBP对脓毒症并发AKI的诊断价值。结果 脓毒症AKI组患儿的NGAL、KIM-1、肌酐、CysC水平在0 h、24 h、72 h时均显著高于脓毒症非AKI组（P<0.05）。脓毒症AKI-CRRT组和非CRRT组各时点NGAL、肌酐的水平均高于脓毒症非AKI组（P<0.05）。KIM-1、CysC、RBP、尿量在24 h和72 h时,脓毒症AKI患儿较非AKI患儿有明显差异（P<0.05）。ROC曲线比较显示：脓毒症AKI-CRRT组和非CRRT组0 h时NGAL的AUC面积均最大（分别为0.907和0.951）、灵敏度最高（分别为92%和100%）。脓毒症AKI-CRTT组患儿的肌酐水平在72 h时呈现下降,并且较24 h时肌酐的AUC面积减小、敏感度和特异性均降低（P<0.05）;NGAL和KIM-1水平在24 h显著升高后,至72 h仍维持在较高水平,且NGAL在3个时点、KIM-1在后2个时点均维持良好的诊断效能。结论 NGAL灵敏度较高,可在早期提示AKI的发生。在血液净化的治疗过程中NGAL、KIM-1受干扰因素较少,可为AKI患儿肾功能真实水平的评估提供参考。     

基于SIRT1/ROR-γt通路探讨白藜芦醇对铜绿假单胞菌诱导的免疫抑制肺炎小鼠的治疗作用

目的 基于沉默信息调节蛋白1（SIRT1）/核孤儿受体-γt（ROR-γt）通路探讨白藜芦醇对铜绿假单胞菌肺炎免疫抑制小鼠的治疗作用。方法 将小鼠随机分成空白组、铜绿假单胞菌肺炎（PA）组、免疫抑制组、免疫抑制＋PA组及免疫抑制＋PA＋白藜芦醇组,每组18只。各组小鼠于造模成功后的4、8、24h处死,苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理变化,进行肺组织病理学评分,酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血中IL-17表达水平,实时荧光定量PCR技术检测肺组织SIRT1、ROR-γt mRNA表达,蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测肺组织SIRT1、ROR-γt蛋白水平。结果 与空白组相比,PA组、免疫抑制组和免疫抑制＋PA组肺泡结构严重破坏,肺泡内可见大量中性粒细胞和炎性细胞浸润,小鼠肺组织病理学评分、IL-17的含量、ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P＜0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与免疫抑制＋PA组相比,免疫抑制＋PA＋白藜芦醇组小鼠肺组织的病理症状减轻,炎性细胞浸润减少,小鼠肺组织病理学评分、IL-17的含量、ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著降低（均P＜0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P＜0.05）。结论 白藜芦醇可能通过上调SIRT1表达,下调ROR-γt表达,抑制炎症反应,从而减轻铜绿假单胞菌诱导的免疫抑制肺炎小鼠的肺组织损伤。     

肾损伤分子-1在肾小管上皮细胞缺氧损伤中的保护作用

目的 观察肾损伤分子-1(KIM-1)对肾小管上皮细胞缺氧损伤时增殖及凋亡的影响,证实KIM-1对肾缺氧损伤的保护作用.方法 以人近端肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,用pcDNA-hKIM-1质粒转染HK-2细胞,获得稳定表达KIM-1的pcDNA-hKIM-1-HK2细胞株.观察pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(A组)和KIM-1抗体预处理pcDNA-hKIM-1-HK2细胞(C组)在缺氧损伤后细胞活力、凋亡指标及凋亡相关信号分子表达,以未转染缺氧HK-2细胞(B组)作为对照.结果 A组细胞活力指数高于B组(0.427±0.046 vs.0.210±0.036,P＜0.05),细胞凋亡数量及流式细胞仪检测的缺氧早、晚期凋亡指数明显低于B组(P＜0.05).A组细胞缺氧时磷酸化ERK、磷酸化Akt表达较C组明显升高(P＜0.05).结论 KIM-1对肾小管上皮细胞缺氧损伤具有保护作用,其机制与激活PI3K-Akt/PKB和ERK信号通路抑制凋亡有关.     

血必净联合法舒地尔对脓毒症急性肾损伤后肾小管细胞凋亡的影响

目的探讨早期应用血必净联合法舒地尔对脓毒症急性肾损伤后肾小管细胞凋亡的影响及机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为分假手术组、脓毒症组、血必净组、法舒地尔组和联合用药组,每组12只。以盲肠结扎穿孔法制造脓毒症模型,假手术组麻醉后开腹翻动肠道,随即关腹;脓毒症组按4ml/kg尾静脉注射0.9%氯化钠注射液;血必净组按4ml/kg注射血必净;法舒地尔组按20mg/kg注射盐酸法舒地尔;联合用药组予等剂量血必净和法舒地尔注射。在造模后6、24h再将每组随机分为2个亚组,每个亚组6只。检测各时间点大鼠的肾功能和炎症指标,观察肾小管病理改变、测定肾小管损伤评分,采用TUNEL法观察肾小管凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI)。用免疫印迹法测定ROCK-1、MYPT-1和caspase-3表达的变化。结果（1）造模后24h时与脓毒症组相比,各用药组肾功能均能明显改善（P＜0.05）,在抑制TNF-α、IL-6表达上联合用药组优于两单药组（均P＜0.05）。（2）造模后24h时联合用药组与两单药组比较,肾小管损伤评分和AI值明显降低（均P＜0.05）。（3）造模后24h时联合用药组与两单药组比较,更能抑制MYPT-1的磷酸化,促使caspase-3表达下降（均P＜0.05）。结论脓毒症早期血必净联合法舒地尔可以通过Rho/ROCK信号通路抑制凋亡蛋白的表达,减少肾小管细胞在脓毒症进程中的凋亡,发挥协同作用减轻脓毒症导致的急性肾损伤。     

血清NGAL、尿液KIM-1及外周血NLR、RDW联合检测对脓毒症发生急性肾损伤的预测价值

目的 分析血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、尿液肾脏损伤分子(KIM-1)水平、外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、红细胞分布宽度(RDW)联合检测对脓毒症患者发生急性肾损伤的预测价值。方法 选取2018年1月—2022年6月苏州市立医院重症医学科收治发生急性肾损伤的脓毒症患者107例作为观察组,选取同期未发生急性肾损伤的脓毒症患者113例作为对照组。比较2组肾功能指标、血清NGAL、尿液KIM-1水平及外周血NLR、RDW;采用偏相关分析血清NGAL、尿液KIM-1水平、外周血NLR、RDW与脓毒症患者肾功能指标的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析NGAL、KIM-1、NLR、RDW单独及联合检测对脓毒症患者发生急性肾损伤的预测价值。结果 观察组急性生理与慢性健康状况评分(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评分(SOFA)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)、NGAL、尿液KIM-1水平及外周血NLR、RDW均显著高于对照组,肾小球滤过率(eGFR)显著低于对照组(t/P=7.034/<0.001、8.273/<0.001、32...     

糖化白蛋白调控肾损伤相关分子与Toll样受体信号通路及齐墩果酸对其干预作用的研究

目的 探讨人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞系）在糖化白蛋白（glycated albumin,GA）与齐墩果酸（oleanolic acid,OA）作用下,肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1,KIM-1）、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）及Toll样受体信号通路相关分子的表达情况。方法 采用GA及OA处理HK-2细胞24 h,real-time PCR检测KIM-1、NGAL以及p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）、白细胞介素-1受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK4）、Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）1、TLR2、TLR7和TLR9的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液KIM-1与NGAL水平,Western blotting法检测细胞内p38 MAPK、IRAK4、TLR1、TLR2、TLR7和TLR9蛋白表达。结果 与对照组比较,GA能显著上调KIM-1、NGAL mRNA与蛋白的含量（P<0.05）,并促进p38 MAPK、IRAK4、TLR1、TLR2 mRNA及蛋白的表达（P<0.05）;加入OA能显著抑制上述作用（P<0.05）。结论 GA能够上调KIM-1和NGAL的表达与释放,激活Toll样受体信号通路,对人近端肾小管上皮细胞造成损伤;而加入OA能够有效干预GA调控的损伤。     

Klotho在急性缺血再灌注性肾损伤中的变化及其与凋亡的关系

目的 观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组（I/R组, n=5）和假手术组（Sham组, n=5）,采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 h留取小鼠的血清及肾组织。应用酶法分别测定血清尿素氮和肌酐,ELISA法检测血清Klotho蛋白水平,TUNEL染色法检测肾脏细胞凋亡水平,Real-Time PCR及Western blotting技术分别检测肾组织Klotho、Bax、Bcl-2和Caspase-3的基因及蛋白表达,应用Pearson直线相关法分析急性肾损伤时小鼠全身及局部的Klotho水平和肾脏凋亡的关系。结果 与Sham组相比,I/R组小鼠术后24 h肾小管上皮细胞明显变性、坏死,肾脏凋亡细胞明显增加,肾组织cleaved Caspase-3蛋白水平、Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白表达比值均显著升高。I/R组小鼠血清Klotho蛋白水平较Sham组小鼠显著降低[（669.89±136.51） pg/mL vs. （2 107.92±549.22） pg/mL,P〈0.01],肾组织Klotho mRNA及蛋白表达分别较Sham组下调约9/10 （P〈0.001）及1/5 （P〈0.05）。相关性分析显示肾组织bax/bcl-2 mRNA比值与血清Klotho蛋白及肾组织klotho mRNA均呈显著负相关（r=-0.833,P〈0.01;r=-0.916,P〈0.001）,肾组织Bax/Bcl-2蛋白比值和肾组织Klotho蛋白也呈显著负相关（r=-0.637,P〈0.05）。结论 缺血再灌注急性肾损伤后小鼠全身及肾组织局部Klotho表达均显著下调,Klotho水平的下降可能与凋亡诱导的肾损害密切相关。     

内毒素致大鼠急性肾损伤早期NGAL和KIM-1的变化

目的研究中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和肾损伤分子-1（KIM-1）在内毒素（LPS）致大鼠急性肾损伤（AKI）早期的表达变化。方法健康雄性Wistar大鼠32只随机分为4组。正常对照组（NC）：经尾静脉注射1ml生理盐水;LPS2、4、6h组：LPS剂量为5mg/kg体重,生理盐水稀释至1ml尾静脉注射,复制AKI模型。造模后在各时间点,ELISA法测大鼠血清和尿液中NGAL的含量及尿液中KIM-1的含量,除蛋白法测定血肌酐（SCr）值并比较各组大鼠光镜下肾脏的病理改变。结果与NC组Scr比较：LPS2h组略升高（P〉0.05）,LPS4、6h组显著升高（P〈0.01）;LPS2、4、6h组血清和尿液中NGAL及尿液中KIM-1的水平均明显高于NC组（P〈0.01）,与LPS2h组相比,LPS4h组血清和尿液中NGAL升高幅度小（P〉0.05）,而尿液中KIM-1显著性升高（P〈0.01）;光镜下,NC组肾组织结构正常,LPS2、4、6h组肾组织出现不同程度的病理改变。结论 NGAL和KIM-1在AKI早期即出现升高,可作为AKI的早期诊断指标,并且KIM-1有明显的时间依赖性,可作为病情监测指标。     

核因子-KB在脓毒症大鼠肾细胞凋亡中的作用

目的 研究脓毒症时核因子-kB（NF-kB）在肾细胞凋亡信号转导中的作用，探讨脓毒症时肾功能降低的机制。方法 将30只大鼠随机分为5组，其中6只作为对照组，另外24只采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制脓毒症模型，以术后2h、3h,4h,5h时限分为4组作为实验组。各组均测定肾脏组织NF-kB蛋白及肾细胞凋亡的情况，同时测定肾功能的变化。结果 CLP术后肾组织NF-kB蛋白表达升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；4h组NF-kB的含量达高峰，3h组相对较弱。CLP术后肾细胞凋亡数目与肾组织NF-kB蛋白表达相反。CLP术后血清尿素氮及肌酐增加，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 CLP所致的脓毒症过程中，NF-kB蛋白表达升高，其活性增强可抑制肾细胞凋亡。     

Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响研究

目的探讨基因Klotho对缺血再灌注急性肾损伤的影响及可能的作用机制。方法60只BALB/c小鼠按随机数字表法分为假手术+0.9%氯化钠注射液组（Sham+veh组）、假手术+Klotho补充组（Sham+kl组）、缺血再灌注急性肾损伤+0.9%氯化钠注射液组（I/R+veh组）、缺血再灌注急性肾损伤+Klotho补充组（I/R+kl组）,每组各15只。各组小鼠再按不同的处死时相（术后第1、2、7天）随机分为D1（5只）、D2（5只）、D7（5只）3个亚组。采用双侧肾蒂夹闭法建立缺血再灌注急性肾损伤模型。Sham+veh组和Sham+kl组小鼠定位肾蒂但不夹闭,其余操作同上。Sham+kl组和I/R+kl组予再灌注后30min腹腔注射360ngKlotho蛋白注射液,Sham+veh组和I/R+veh组腹腔注射0.2ml0.9%氯化钠注射液。于造模术后第1、2、7天收集小鼠血、尿、肾脏标本。分别检测血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）值,HE染色观察肾小管损伤程度,免疫组化法观察肾脏组织炎症细胞浸润情况及Klotho表达情况,ELISA法检测血Klotho和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）水平,real-timePCR及Westernblot法分别检测肾脏组织Klotho、凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、裂解的半胱氨酸蛋白酶（cleavedCaspase）-3的mRNA及蛋白表达。结果I/R+veh组小鼠遭受缺血再灌注损伤后肾功能显著下降,肾小管上皮细胞变性、坏死,至术后第7天明显好转。与Sham+veh组比较,I/R+veh组小鼠血Klotho蛋白水平于术后第1天明显降低,至术后第7天仍未能恢复正常,肾脏组织KlothomRNA及蛋白表达水平于术后第1天同样明显降低（均P＜0.05）。I/R+veh组小鼠肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平均于术后第1天较Sham+veh组明显升高（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润增多。外源性补充Klotho蛋白后,I/R+kl组肾脏组织Bax/Bcl-2mRNA及蛋白、cleavedCaspase-3蛋白表达水平分别较I/R+veh组下降30%、45%、62%（均P＜0.05）,CD68+细胞浸润减少。结论缺血再灌注急性肾损伤时Klotho表达下调;外源性补充Klotho蛋白可能通过抑制细胞凋亡及炎症细胞浸润等途径发挥肾脏保护作用。     

盐酸右美托咪啶对缺血再灌注肾损伤小鼠的肾小管保护作用

目的  缺血再灌注肾损伤（IR）是围手术期常见的疾病,本研究通过构建缺血再灌注肾损伤模型,观察右美托咪啶（Dex）注射对受损肾小管的保护作用及机制。方法  将60只小鼠随机分为对照组、IR模型组和IR+Dex组（简称Dex组）,制备IR模型后24 h分别处死3组小鼠取肾组织。用全自动生化分析仪测定血肌酐（Scr）及尿素氮（BUN）。采用HE染色观察各组小鼠肾组织的形态,评定肾小管损伤程度;免疫组织化学染色测定低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达。结果  对照组的肾小管结构与形态均正常。IR模型组肾小管损害明显、HIF-1α及MCP-1表达均增高。而Dex组肾小管损害程度较轻,HIF-1α及MCP-1表达均较IR模型组减低,肾小管上皮细胞低氧程度及炎症反应均较IR模型组明显减轻。Dex组小鼠的血肌酐及尿素氮水平较IR模型组明显降低。结论  Dex可以通过抑制炎症反应、减轻肾小管上皮细胞低氧程度从而减轻IR小鼠肾小管的损害,保护肾脏功能。

     

姜黄素预处理缓解小鼠脓毒症心肌病的作用和机制研究

目的探究姜黄素(Cur)预处理对脓毒症小鼠心肌损害的保护作用以及SIRT1信号通路是否介导Cur心肌保护作用。方法通过小鼠盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型。术前3 d每日给予Cur(100 mg/kg,灌胃)和SIRT1特异性抑制剂Sirtinol(5 mg/kg,腹腔注射)。CLP 48 h后,通过Millar导管技术检测小鼠心脏收缩与舒张功能,通过试剂盒检测丙二醛含量、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,通过TUNEL染色检测心肌凋亡率,通过Western Blotting检测SIRT1信号通路和凋亡相关蛋白的表达情况。结果与Sham组相比,CLP后小鼠心脏收缩与舒张功能均明显受损,心肌组织丙二醛含量增加,而超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显降低,凋亡率和Bax、Caspase 3表达量显著增加,Bcl-2的表达量明显降低(P 0.05)。Cur预处理可以明显改善心脏功能,抑制心肌氧化应激损伤和凋亡,伴随SIRT1信号通路的激活。用Sirtinol抑制SIRT1信号通路后Cur的心肌保护作用明显减弱。结论 Cur通过激活SIRT1信号通路,抑制氧化应激损伤和凋亡,从而改善脓毒症引起的心肌损害。     

尿液KIM-1、NGAL和IL-18联合检测在大鼠缺血再灌注急性肾损伤早期诊断中的意义

目的探讨尿液肾损伤分子-1（KIM-1）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和白介素-18（IL-18）联合检测在大鼠缺血再灌注急性肾损伤（AKI）早期诊断中的意义。方法将40只SD大鼠随机分为缺血再灌注AKI模型组（IR组,30只）和假手术对照组（对照组,10只）,采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定两组术前及术后6、12、24、48h时的尿液KIM-1、NGAL、IL-18浓度和血肌酐（Scr）值。结果IR组术后各时间点的尿液KIM-1、NGAL和IL-18浓度均较对照组升高（均P〈0．05）。IR组大鼠术后6h时尿液KIM-1、NGAL和IL-18浓度均较术前升高（均P〈0.05）,而此时Scr水平和术前的差异则无统计学意义（P〉O05）;尿液NGAL水平于术后12h时达峰值,后浓度逐渐下降;尿液KIM、IL-18水平均于术后24h时达峰值,术后48h时仍维持较高浓度。ROC分析结果显示：术后6h时的尿液KIM-1、NGAL和IL-18联合检测诊断AKI的ROC曲线下面积最高（P〈0．01）,且显著优于Scr和上述3种标记物的单独检测（均P〈0.05）。结论尿液KIM-1、NGAL和IL-18是AKI发生时较Scr升高更早的生物学指标,且联合应用早期诊断AKI的作用显著优于Scr和各标记物的单独应用。     

香豆素通过调控组蛋白去甲基化酶3和骨髓分化蛋白2改善脓毒症相关AKI的机制研究

目的探讨香豆素（Sco）通过调控组蛋白去甲基化酶3（JMJD3）和骨髓分化蛋白2（MD-2）改善脓毒症相关急性肾损伤（AKI）的作用机制。方法24只C57BL6小鼠根据随机数字表法分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+40mg/kgSco组和LPS+80mg/kgSco组。除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射LPS10mg/kg建立脓毒症相关AKI模型,LPS+40mg/kgSco组和LPS+80mg/kgSco组小鼠在造模成功后分别腹腔注射Sco40mg/kg和80mg/kg,对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液2mL/kg。采用HE染色和原位末端转移酶标记法染色检测小鼠肾脏组织损伤程度和细胞凋亡程度,ELISA法检测小鼠血清血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）水平,Westernblot法检测小鼠肾脏组织中JMJD3和MD-2蛋白表达水平。使用LPS（1μg/mL）处理人肾小管上皮细胞系HK-224h,建立脓毒症细胞模型,随机分为对照组、LPS组、LPS+30μmol/LSco组、LPS+60μmol/LSco组、LPS+60μmol/LSco+过表达对照组和LPS+60μmol/LSco+过表达JMJD3组。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测细胞中JMJD3和MD-2蛋白表达水平。结果与对照组小鼠相比,LPS组小鼠肾组织出现明显病理变化,部分肾小管变形,肾小管上皮细胞水肿,肾间质周围炎症细胞浸润,凋亡信号（棕褐色）增强,JMJD3和MD-2蛋白表达水平升高,血清中Scr、BUN水平均升高。而与LPS组相比,LPS+40mg/kgSco组和LPS+80mg/kgSco组小鼠肾脏组织以上病理变化明显改善,JMJD3和MD-2蛋白表达水平均降低,血清中Scr、BUN水平也均降低,并且LPS+80mg/kgSco组变化更明显。与对照组细胞相比,LPS组细胞凋亡水平升高,JMJD3和MD-2蛋白表达水平升高。而相较于LPS组,使用Sco处理后以上变化趋势发生逆转,且Sco浓度越高,趋势变化越显著。此外,过表达JMJD3后细胞凋亡水平升高,JM-JD3和MD-2蛋白表达水平均升高。结论Sco通过抑制肾小管上皮细胞JMJD3和MD-2表达,减少细胞凋亡,从而改善脓毒症相关AKI。     

miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用

【摘要】 目的 探讨miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用。 方法 取90只小鼠随机分成对照组（Control组）、脓毒症模型组（CLP组）和CLP+miR 140组，每组30只。盲肠结扎穿孔法（CLP法）建立小鼠脓毒症模型，尾静脉注射转染miR-140 agomir，记录30天生存率，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素2（IL-2）表达，流式细胞术检测血清CD4+T和CD8+T细胞百分率，提取腹膜巨噬细胞，流式细胞术分析PD L1阳性百分率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-140和PD-L1基因表达，蛋白印迹（Western blot）检测PD-L1蛋白表达，荧光素酶报告实验检测miR-140和PD-L1靶向作用关系。 结果 与control组相比，CLP组在1 、7、14 d的TNF α、IL-2水平升高（P＜0.01），而TNF-α、IL-2水平呈时间依赖性降低（P＜0.05）；CLP组较control组小鼠生存率降低（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率升高（P＜0.01），miR-140表达水平降低（P＜001），PD-L1基因和蛋白表达水平升高（P＜0.01）；与CLP组比较，CLP+miR-140组小鼠生存率升高（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率下降（P＜0.01），miR-140表达水平升高（P＜0.01），PD-L1基因和蛋白表达水平降低（P＜0.01）；荧光素酶报告实验结果显示miR-140和PD-L1存在靶向作用关系。 结论 miR-140可靶向作用于PD-L1，从而改善小鼠脓毒症引起的免疫抑制。     

肾损伤因子-1在脂多糖诱导的HK-2细胞炎症反应中的作用

目的：分析肾损伤因子-1（KIM-1）在脂多糖（LPS）诱导HK-2细胞炎症模型中的表达并探讨其可能参与的生物学进程。方法：LPS刺激人肾小管上皮HK-2细胞诱导细胞炎症模型,CCK-8比色法分析LPS对HK-2细胞株体外生长的抑制作用;RT-PCR和Western blot实验分析KIM-1在正常组和LPS诱导组中的表达差异;设计siRNA靶向干扰KIM-1基因的表达,分析其对LPS诱导下HK-2细胞生长抑制作用的影响;Hoechst33342/PI双染法分析LPS诱导下对照组和siRNA干扰组细胞凋亡的影响。结果：50、100 μg/mL终浓度的LPS处理24 h和48 h后能抑制HK-2细胞增殖,与对照组比差异有统计学意义（P＜0.05）;KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平在LPS处理组中较对照组明显上调,且具有浓度依赖性,差异有统计学意义（P＜0.05）;LPS处理组中Hoechst33342染色阳性细胞比例明显高于对照组;siRNA转染组中KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平均明显低于siRNA-NC组,在LPS作用下siRNA转染组HK-2细胞增殖率明显高于siRNA-NC组,差异有统计学意义（P＜0.05）;在siRNA转染组中,Hoechst33342染色强度均低于siRNA-NC组,提示靶向KIM-1基因siRNA转染可以抑制LPS诱导的细胞凋亡作用。结论：LPS可以诱导HK-2细胞增殖受抑和凋亡,并且上调KIM-1和IL-6基因表达;KIM-1可能通过调节细胞凋亡和生长抑制过程参与细胞炎症反应。     

氧化苦参碱对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨氧化苦参碱（OMT）对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔（CLP）法复制大鼠脓毒症动物模型.造模后将48只SD大鼠分为6组,即CON（假手术）组、OMT对照组、CLP（模型）组、CLP＋ OMT（52、26、13mg·kg-1）剂量组.采用BL-420生物机能实验设备检测大鼠心功能改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）,放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-a（TNFa）蛋白含量的改变.结果 不同剂量的OMT能明显降低脓毒症大鼠的HR、左室舒张末压（LVEDP）,升高平均动脉压（MAP）、LVSP、±LVdp/dtmax（P＜0.05）,降低心肌组织匀浆中TNF-a蛋白含量（P＜0.05）及心肌细胞凋亡指数（P＜0.05）.结论 OMT（52、26、13mg·kg-1）能减轻脓毒症导致的大鼠心肌细胞凋亡现象,对抗由心肌细胞凋亡引起的心功能损伤.     

川芎嗪对脓毒症小鼠肝组织铁调素的表达调控及机制研究

目的探讨川芎嗪对脓毒症小鼠肝组织铁调素的表达调控及保护机制研究。方法将44只C57BL/6J雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组、肠穿孔手术（CLP）组、CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组,每组各11只。后3组小鼠开腹、结扎并穿刺盲肠制作CLP模型。术后12h取1只CLP组小鼠检测血液载菌量和腹腔液载菌量评估造模情况;观察4组小鼠术后4d生存率,采用ELISA法检测血清生化指标和炎症因子水平情况,采用Westernblot法检测肝组织中铁调素和磷酸化JAK/STAT（p-JAK/STAT）蛋白的表达。结果假手术组小鼠术后12h在血液和腹腔液中均未检测到细菌。CLP组小鼠模型建立评价结果显示,术后12h血液和腹腔液载菌量分别为（15.0±1.3）×103/ml和（8.6±1.0）×103CFU/ml。假手术组小鼠术后4d内无死亡,CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组小鼠CLP术后4d生存率分别为75.0%（6/8）和87.5%（7/8）,高于CLP组0.0%（0/8）,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。CLP+铁调素抑制剂组与CLP+川芎嗪组小鼠术后48h血清ALT、AST、TNF-琢、IL-1、IL-6和铁调素水平均显著低于CLP组,且CLP+川芎嗪组小鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组,铁调素水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。CLP+铁调素抑制剂组和CLP+川芎嗪组术后48h肝组织铁调素表达水平显著低于CLP组,高于假手术组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;而CLP+铁调素抑制剂组p-STAT和p-JAK蛋白表达水平与CLP组相比,差异均无统计学意义（均P＞0.05）;CLP+川芎嗪组p-STAT和p-JAK蛋白表达水平显著低于CLP+铁调素抑制剂组和CLP组,高于假手术组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论川芎嗪能够通过抑制JAK/STAT磷酸化而减少铁调素在小鼠肝组织中的表达,从而减轻肝脏损及全身炎性损伤。