基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法进行肌红蛋白的从头测序

蛋白质的序列测定对于蛋白质的鉴定具有重要意义.传统的Edman降解测序法对样品纯度有很高的要求,而且操作比较繁琐.在蛋白质组研究中广泛采用串联质谱法测定蛋白质水解肽段的部分氨基酸序列(肽序列标签),通过数据库检索来鉴定蛋白质[1,2].本工作采用反相色谱法分离肌红蛋白的酶切肽段,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOFMS)技术测定各个肽段的氨基酸序列,拟提高蛋白质的序列覆盖率和鉴定的可靠性.     

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用鉴定椴树蜂蜜中的抗氧化活性肽

应用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用法(UPLC-Q-Exactive)鉴定椴树蜂蜜蛋白经胰蛋白酶水解后获得的肽类物质的组成和结构,并探讨椴树蜂蜜酶解多肽与其抗氧化活性的关系。椴树蜂蜜经三氯乙酸溶液沉淀,所得蛋白用胰蛋白酶酶解,酶解肽段经C18固相萃取柱富集净化后,采用0.1%甲酸(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,以高分辨质谱(Q-Exactive)的Full MS/ddMS2模式对其进行鉴定。采用MaxQuant软件分析质谱结果,所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比,共鉴定出52种椴树蜂蜜胰蛋白酶解多肽,其中71.15%来自蜂王浆主要蛋白(MRJPs),鉴定出的肽段归属于10种蛋白质,其中6种(60%)属于MRJP家族蛋白。对椴树蜂蜜酶解多肽质谱鉴定结果进行重复性分析,2次以上重复质谱分析可实现对椴树蜂蜜多肽(87.1%)的可靠鉴定。结合文献报道的蜂蜜多肽抗氧化活性的构效关系,筛选出11条可能具有抗氧化活性的多肽。化学合成11条多肽后,进行4种不同的抗氧化活性实验。结果表明,这11条多肽的抗氧化活性存在较大差异,其中1 g/L VIYEWK多肽显示出较强的ABTS自由基清除活性(33.8%±0.6%)、DPPH自由基清除活性(96.5%±0.0%),并表现出一定的还原力(0.010±0.001)和Fe2+螯合活性(4.0%±0.2%)。该方法能快速有效鉴定椴树蜂蜜多肽结构,可为揭示椴树蜂蜜多肽结构与抗氧化活性的关系提供依据。     

HPLC-ESI-Q-TOF-MS鉴定重组人白细胞介素-11的一级结构

用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11（rhIL-11)的一级结构。利用电喷雾四极杆飞行时间质谱（ESI-Q-TOF-MS）测定rhIL- 11的精确分子质量，采用高效液相-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱技术（HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS）测定其胰蛋白酶酶切后肽段的部分氨基酸序列并结合数据库检索进行结构鉴定。rhIL-11的实测分子质量为19 047.38 u，与理论分子质量19 047.29 u相比非常接近。HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS测定 m/z 664.45、m/z 609.40的肽段的部分氨基酸序列分别为Glu-Pro-Glu-Leu-Gly-Thr-Leu和Leu-Asp-Ser-Thr-Val-Leu。将这两段序列在MASCOT数据库检索，结果表明rhIL-11的结构正确。     

芬太尼类新精神活性物质的质谱特征研究

采用气相色谱-质谱(GC/MS)法和超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)法对2015~2016年国内检测发现的8种芬太尼类新精神活性物质进行分析。GC/MS分析采用电子轰击源(EI)模式采集数据,UPLC-Q-TOF MS分析采用电喷雾正离子碰撞诱导解离（CID）模式采集数据。通过总结该类物质在两种模式下获得的碎片离子与分子结构的关系,推测其可能的碎裂途径,并归纳了通过谱图推导未知芬太尼类新精神活性物质结构的方法,结果可为该类物质的鉴定提供参考。     

液相色谱—质谱法（LC—MS）分析细胞色素C酶解肽谱及一级结构

本文采用液相色谱—质谱联用法（LC／MS）,对一种蛋白质—细胞色素C（Cyt．C）的胰蛋白酶酶解产物进行了质量肽谱分析,确定了各肽段在蛋白质中的位置。并用串联质谱（MS／MS）分析了大部分肽段的序列,均获得满意的结果。     

样品制备对MALDI-TOFMS测定低浓度多肽的影响

随着人类基因组序列测定完成,人们关注的焦点转移到蛋白质组上.基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)以其快速、准确、灵敏而成为蛋白质组主要的分析技术,它根据蛋白质酶解后的肽质量指纹谱和肽序列信息去搜索蛋白质或核酸序列库以鉴定蛋白质.提高MALDI-TOFMS测定多肽的灵敏度以及提高样品在靶上分布的均一性,是实现高通量鉴定蛋白质的关键.本工作利用MALDI-TOFMS技术,探讨了样品制备对低浓度多肽测定的影响,并对结果加以讨论.     

二甲基二硫逐焦膦酸二甲酯合成样品中化合物的质谱特征、碎裂机理及其鉴定

为了掌握二甲基二硫逐焦膦酸二甲酯的质谱特征,开展了该化合物合成样品的气相色谱 质谱(GC/MS)和串联质谱(MS/MS)分析鉴定研究。利用GC/MS联用技术对混合物进行分析,得到10个组分的电子电离（EI）和化学电离（CI）全扫描质谱信息。根据CI谱图中的同位素比值,推测化合物可能的元素组成;通过EI谱图与数据库谱图比对,鉴定了其中6个组分的结构。然后,对二甲基二硫逐焦膦酸二甲酯和4个未知化合物采用MS/MS模式获得各自的裂解碎片,通过分析不同的裂解碎片,推测未知化合物可能的结构,并解释其可能的碎裂途径。实验共鉴定出合成样品中10个化合物,并总结了不同化合物的质谱特征,可为相关化合物的分析和鉴定提供参考。     

UHPLC/LTQ Orbitrap MS法解析一种未知西地那非衍生物

基于已知药物合成新的衍生物,以避开法定检验方法,是目前化学药物非法添加的趋势之一。本工作采用超高分辨的线性离子阱-静电场轨道阱质谱(LTQ Orbitrap MS),在标示中药来源的样品中检出一种未知的西地那非衍生物。基于LTQ Orbitrap MS超高分辨率细分同位素的能力,并结合精确质量数,准确地获得了未知衍生物的元素组成。通过与西地那非和硫代艾地那非二级质谱的比较,进一步推断了该衍生物的结构,并对文献中离子的归属进行了纠正。经核磁共振解析,鉴定该衍生物为丙氧酚艾地那非(propoxyphenyl aildenafil),系由艾地那非苯环上乙氧基衍生为丙氧基而成,其结构与质谱推断的一致。通过总结丙氧酚艾地那非的质谱裂解规律,并结合UHPLC/LTQ Orbitrap质谱分析方法,可有效地鉴定PDE-5型抑制剂及其衍生物,这是打击此类化合物非法添加的有力手段。     

碰撞诱导解离下二甲胺衍生多肽的碎裂特征研究

串联质谱技术可以测定蛋白质酶解产物的分子质量、定位修饰位点、获取氨基酸序列信息等，已成为蛋白质组学领域的重要分析手段。鉴于酸性氨基酸能够在串联质谱分析中对多肽的裂解过程产生重要影响，本文通过二甲胺将多肽的羧基酰胺化，从而改变肽段在碰撞诱导解离模式下的碎裂特征。较未衍生多肽而言，被衍生多肽既可以产生特征性碎片离子，例如m/z 129.10/135.14,也易于产生种类更丰富的a、b、y、z离子。此外，羧基的中性化可在一定程度上抑制磷酸化多肽的中性丢失。这些特点使得基于羧基酰胺化的衍生方法有望展现在肽段表征分析方面的应用价值。     

多肽间非共价作用的质谱研究

为了研究多肽间的非共价作用,将多肽按摩尔比1:1混合,待平衡后用电喷雾电离质谱分析多肽间的相互作用.结果表明,其中部分五肽相互作用未形成非共价复合物,也有部分五肽相互作用容易形成非共价复合物,通过改变五肽的氨基酸序列和加长肽链后,用电喷雾电离质谱分析多肽间作用的变化,研究巯基、氢键和疏水作用对多肽非共价作用的影响.五肽...     

芋螺毒素cr5a的电喷雾四极杆飞行

cr5a是从中国南海软体动物芋螺的毒液中分离出的一种新的芋螺毒素。为了验证已得到的氨基酸序列分析结果,利用纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱对cr5a的碘代乙酰胺(IAM)衍生物进行了串联质谱从头测序分析,采用MassLynx 3.5系统进行数据采集与处理,通过MassSeq软件提取串联质谱所得的氨基酸序列。软件提取的序列CCKFQFLNFCCNE与N末端序列分析结果相符,使得cr5a的氨基酸序列得到进一步验证。     

������Ⱦ��Ѫ�쵰�׼Ӻ���N-��������Ӱ�������׷����о�

????????????????????????????????????????????ī?N-?????????????????????????????????????????????????????????????а???????Edman????????????????????????????????????LC-HRMS????????????MS/MS???????з????????????HRMS/MS???????????λ????????????????????????N-????????????[M+H]⁺????????????????????????????????2-?????????????????HETE?????????????C-N???????HETE?????????????????????????????????????m/z 105.036 3?????????C₄H₉OS??N-???????????????????????HFBI??????????????????-?????GC/MS???????????     

电喷雾质谱研究人参皂苷Re与氨基酸的相互作用

The interaction between ginsenoside Re and twenty amino acids were studied by electrospray ionization mass spectrometry, and eleven of those amino acids can interact with ginsenoside Re. The complexes were detected in both positive mode and negative one. The MS/MS analysis was performed. The dissociation constants of complexes between ginsenoside Re and amino acid were obtained.     

β-环糊精催化磷酰化氨基酸水解反应的电喷雾电离质谱研究

利用电喷雾离子阱质谱对 β-环糊精和 N-二异丙氧磷酰化氨基酸的相互作用进行了探讨。结果发现 :β-环糊精能够催化 N-二异丙氧磷酰化氨基酸的水解反应 ,并对 β-环糊精对 N-二异丙氧磷酰化氨基酸的水解反应机制进行了推测。而且还对β-环糊精和 N -二异丙氧磷酰化氨基酸以及氨基酸形成的复合物进行了碰撞诱导裂解 ( CID)研究 ,发现二者具有不同的裂解规律     

基于LC-Triple TOF MS/MS技术分析杜仲不同药用部位化学成分差异

为探讨杜仲不同药用部位(杜仲、杜仲叶和杜仲雄花)化学成分的差异,采用液相色谱-串联三重四极杆飞行时间高分辨质谱(LC-Triple TOF MS/MS)结合多元统计分析技术对杜仲不同药用部位的化学成分进行差异分析。通过对多级串联质谱数据进行峰匹配、峰对齐、滤噪处理等分析,提取特征峰;用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行数据处理;通过一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合软件数据库搜索、标准品比对及相关文献进行成分鉴定。结果显示:杜仲、杜仲叶与杜仲雄花三者的化学组成可得到明显区分;初步筛选鉴定出23种差异显著的化学成分,且呈现不同的变化规律。杜仲、杜仲叶及杜仲雄花化学成分的差异及其变化规律,可为揭示三者药效差异的物质基础提供依据。     

（2,4-二甲氧基苯基）烯丙基丙二酸二乙酯异构体的GC/MS研究

为了研究钯催化的2,4-二甲氧基苯甲酸与烯丙基丙二酸二乙酯的脱羧Heck反应的产物结构,建立了（2,4-二甲氧基苯基）烯丙基丙二酸二乙酯同分异构体的分离与鉴定的气相色谱-离子阱质谱方法。首先通过脱羧Heck反应制得（2,4-二甲氧基苯基）烯丙基丙二酸二乙酯异构体混合物,然后利用GC/MS联用技术对混合物进行分析,得到各组分的EI和CI全扫描模式质谱信息。通过对照各组分的分子离子峰确定互为异构体的组分,再对异构体组分采用MS/MS模式获取各自的裂解碎片。通过分析异构体的不同的裂解碎片,讨论质谱裂解方式,从而确定异构体的结构。该方法省时、经济、高效,可为此类化合物的分析与鉴别提供参考。     

基于质谱的核酸指纹识别技术

基因转录是继基因组计划完成后基因功能研究的基本内容。基因转录研究迫切需要有新方法的支持。人们从蛋白的指纹分析技术中得到启发,开发基于质谱分析的核酸指纹识别技术。通过对核酸进行酶解处理,使其核酸片段分子量位于质谱检测的范围内,通过高分辨质谱技术获得所检测酶解核酸片段的分子量列表;利用基因组研究所获得的大量数据,通过计算机技术,模拟产生核酸酶解产物数据库,通过独特的算法以及基于这些算法开发的工具软件,把酶解的核酸质谱数据和虚拟的核酸酶解产物数据库进行比对,以发现和鉴别核酸。随着这一技术的逐渐应用和发展,将来还可能直接建立基于质谱数据的核酸数据库。相信这一技术在转录组研究中将发挥重要作用。     

LC/MS用于匹多莫德有关物质结构鉴定

采用液相色谱-质谱（LC/MS）技术鉴定匹多莫德的有关物质,选取Sepax GP-C8色谱柱(250 mm×4.6 mm×5 μm),以甲醇-三氟乙酸溶液为流动相,梯度洗脱,对匹多莫德有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-高分辨飞行时间质谱法（ESI-TOF MS）测定各有关物质离子的准确质量和元素组成,三重四极杆串联质谱（ESI-MS/MS）测定子离子特征。结果表明：在所建立的条件下,匹多莫德及其有关物质的分离良好,检测并鉴定出11个主要有关物质。该技术能有效地分离鉴定匹多莫德中的有关物质,其鉴定结果可为质量控制和工艺优化提供参考。