两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析

虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TOF-MS)对两种蜘蛛毒素的酶解产物进行分析,获得其酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)图谱,在用软件和手工的方式对含有未知序列的肽段进行解析后,得到未知部分确切氨基酸序列。研究表明:利用质谱的从头测序(denovosequencing)方法获得HWTX-和JZTX-完整的氨基酸序列。该方法在蛋白质和多肽的结构分析和鉴定与传统方法相比具有高灵敏度和快速的优势,是对传统Edman化学降解法的一个很好的补充。     

基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法进行肌红蛋白的从头测序

蛋白质的序列测定对于蛋白质的鉴定具有重要意义.传统的Edman降解测序法对样品纯度有很高的要求,而且操作比较繁琐.在蛋白质组研究中广泛采用串联质谱法测定蛋白质水解肽段的部分氨基酸序列(肽序列标签),通过数据库检索来鉴定蛋白质[1,2].本工作采用反相色谱法分离肌红蛋白的酶切肽段,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOFMS)技术测定各个肽段的氨基酸序列,拟提高蛋白质的序列覆盖率和鉴定的可靠性.     

兴奋剂生长激素的MALDI-TOF质谱研究

采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI TOF MS）法对生长激素（GH）标准品和国产GH制剂进行比对研究。在完整分子的相对分子质量测定中,GH的精确分子质量为22 124 u,检测灵敏度达74 fmol。实验还发现1种GH制剂的相对分子质量为22 254 u,质量数比理论质量多131 u,经胰蛋白酶解产物的二级质谱测序证实是N端多一甲硫酸残基(Met)的GH。GH酶解后的肽段样品可以鉴定出8个GH肽段,覆盖率为45.5%,Mascot蛋白谱库检索蛋白质评分值为132,蛋白质置信区间为100%。测序结果说明,N端的甲硫酸残基可以作为鉴定外源GH的分子标记。     

LC/MS用于匹多莫德有关物质结构鉴定

采用液相色谱-质谱（LC/MS）技术鉴定匹多莫德的有关物质,选取Sepax GP-C8色谱柱(250 mm×4.6 mm×5 μm),以甲醇-三氟乙酸溶液为流动相,梯度洗脱,对匹多莫德有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-高分辨飞行时间质谱法（ESI-TOF MS）测定各有关物质离子的准确质量和元素组成,三重四极杆串联质谱（ESI-MS/MS）测定子离子特征。结果表明：在所建立的条件下,匹多莫德及其有关物质的分离良好,检测并鉴定出11个主要有关物质。该技术能有效地分离鉴定匹多莫德中的有关物质,其鉴定结果可为质量控制和工艺优化提供参考。     

液相色谱-离子淌度-四极杆/飞行时间串联质谱法快速检测烟叶中蔗糖酯

本研究利用液相色谱-离子淌度-四极杆/飞行时间串联质谱（LC-IM-Q TOF MS）技术,建立了快速检测烟叶中蔗糖酯的定性分析方法。采用甲酸-甲醇-水混合流动相系统和正离子模式下的电喷雾离子化技术,使烟叶甲醇提取液中的蔗糖酯分子形成加钠的准分子离子,然后通过离子淌度漂移管的分离,被四极杆/飞行时间串联质谱仪检测。从烟叶中共检测出6类蔗糖四酯,它们在色谱柱上的分离相差0.2~0.8 min,在漂移管中的分离相差0.4~0.5 ms,质谱检测中的离子质量相差14 u。在此基础上,利用二级质谱解析,准分子离子的元素组成测定以及碰撞截面的测定等手段,对烟叶中6类蔗糖四酯进行结构上的定性分析。结果表明,LC-IM-Q TOF MS技术可以快速检测复杂样品中的蔗糖酯,结合多维数据定性技术能够显著提高定性分析的准确性。     

超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法快速分析烟草中7种潜香物质

使用超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱(UPLC-ESI-MS/MS)在多反应离子监测(MRM)模式下分离鉴定了烟草中7种潜香物质。烟样经甲醇提取,XAD-2柱分离纯化,选择中性丢失162u扫描确定母离子。通过对母离子二级质谱扫描(MS2),并根据m/z192.7、179.2、163.1、134.7、133.2等特征碎片离子峰分析结果确定了7种潜香型物质,分别为熊果苷、香豆酸-葡萄糖苷、香豆素奎尼酸、新绿原酸、绿原酸、葡萄糖基阿魏酸、3-氧化紫罗兰醇葡萄糖苷。     

电喷雾-串联四极杆-飞行时间质谱法测定药物的葡萄糖醛酸结合物

本文采用电喷雾 -串联四极杆 -飞行时间 ( ESI-QQ-TOF)质谱对生物样品中的乙氧苯柳胺、3 H-1 ,2 -二氢 -2 -( 4-甲基苯胺基 )甲基 -1 -吡咯里嗪酮 ( SFZ-4 7)和利胆酚的β-D-葡萄糖醛酸结合物进行了质谱分析。在负离子条件下均有响应 ,而且 MS2均产生碎片 m/ z1 75 .0 2 4 1与葡萄糖醛酸的负离子质量数吻合 ,MS3分析均产生 m/ z 1 1 3 .0 2 3 8即葡萄糖醛酸去掉一分子 H2 O和 CO2 。此规律可用于分析鉴定药物的葡萄糖醛酸结合物     

UPLC-ESI-TOF MS/MS分析太子参中环肽类成分

建立超高效液相色谱-电喷雾飞行时间串联质谱（UPLC-ESI -TOF MS/MS）分析太子参中环肽类成分的方法。实验采用反相C18色谱柱,梯度洗脱,分离并检测太子参中11种环肽类成分。通过信息关联采集（IDA）模式,运用动态背景扣除(DBS),消除背景离子干扰,在获得11种环肽类成分MS/MS图谱的同时,也得到其精确的分子质量信息。     

芋螺毒素cr5a的电喷雾四极杆飞行

cr5a是从中国南海软体动物芋螺的毒液中分离出的一种新的芋螺毒素。为了验证已得到的氨基酸序列分析结果,利用纳升电喷雾四极杆飞行时间串联质谱对cr5a的碘代乙酰胺(IAM)衍生物进行了串联质谱从头测序分析,采用MassLynx 3.5系统进行数据采集与处理,通过MassSeq软件提取串联质谱所得的氨基酸序列。软件提取的序列CCKFQFLNFCCNE与N末端序列分析结果相符,使得cr5a的氨基酸序列得到进一步验证。     

高效液相色谱检测器——高分辨飞行时间质谱仪的研制

本文研制的质谱仪是具有电喷雾离子源和射频四极杆接口的高分辨飞行时间质谱仪（ESI-QQQ-TOF-MS）。该仪器的特点如下：采用可三维调节、带有加热雾化气的电喷雾源液质联用接口；采用由三组四极杆组成、可有效调制离子束的离子光学系统；采用正负双脉冲推斥和垂直引入方式；采用经优化设计的二级有网反射器。该仪器分辨本领优于11 000（Full Width at Half Maximum, FWHM），质量测定精度优于10×10^-6，最低检测限低于3 fmol/μL。可作为高效液相色谱优良的质谱检测器。     

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用鉴定椴树蜂蜜中的抗氧化活性肽

应用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用法(UPLC-Q-Exactive)鉴定椴树蜂蜜蛋白经胰蛋白酶水解后获得的肽类物质的组成和结构,并探讨椴树蜂蜜酶解多肽与其抗氧化活性的关系。椴树蜂蜜经三氯乙酸溶液沉淀,所得蛋白用胰蛋白酶酶解,酶解肽段经C18固相萃取柱富集净化后,采用0.1%甲酸(A)-乙腈(B)作为流动相进行梯度洗脱,以高分辨质谱(Q-Exactive)的Full MS/ddMS2模式对其进行鉴定。采用MaxQuant软件分析质谱结果,所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比,共鉴定出52种椴树蜂蜜胰蛋白酶解多肽,其中71.15%来自蜂王浆主要蛋白(MRJPs),鉴定出的肽段归属于10种蛋白质,其中6种(60%)属于MRJP家族蛋白。对椴树蜂蜜酶解多肽质谱鉴定结果进行重复性分析,2次以上重复质谱分析可实现对椴树蜂蜜多肽(87.1%)的可靠鉴定。结合文献报道的蜂蜜多肽抗氧化活性的构效关系,筛选出11条可能具有抗氧化活性的多肽。化学合成11条多肽后,进行4种不同的抗氧化活性实验。结果表明,这11条多肽的抗氧化活性存在较大差异,其中1 g/L VIYEWK多肽显示出较强的ABTS自由基清除活性(33.8%±0.6%)、DPPH自由基清除活性(96.5%±0.0%),并表现出一定的还原力(0.010±0.001)和Fe2+螯合活性(4.0%±0.2%)。该方法能快速有效鉴定椴树蜂蜜多肽结构,可为揭示椴树蜂蜜多肽结构与抗氧化活性的关系提供依据。     

直接注射-多级质谱全扫描法快速分析枸杞子化学成分组

由于色谱分离需要耗费大量的时间,导致传统LC-MS研究中药成分的分析通量较低,而多级质谱全扫描（MS/MSALL）采用了气态分段技术（GPF）,可以在直接注射（DI）模式下,采集每个表观质量数MS1信号的MS2图谱,实现MS1-MS2数据列表的高通量构建。为快速表征枸杞子化学成分组,本研究采用DI-MS/MSALL全面采集枸杞子提取物中各化学成分的多级质谱数据,根据高分辨MS1和MS2碎片离子信息推导质谱裂解途径,结合数据库检索以及相关文献,从枸杞子中初步鉴定了38个化学成分,包括1个氨基酸类、19个有机酸类、2个糖脂类、6个苯丙素类、1个黄酮类、6个生物碱类以及3个酰胺类化合物。DI-MS/MSALL可作为中药等复杂体系快速全面定性分析的有力工具。     

基于UPLC-Q-TOF MS技术的血栓心脉宁片成分分析

为全面了解中药大品种血栓心脉宁片(XXT)化学成分,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱联用技术(UPLC-Q-TOF MS)测定该复方制剂的小分子成分(100～1 500 u),通过UNIFI天然产物分析平台,比对各成分的精确分子质量、保留时间及质谱碎片离子信息,分析鉴定各化合物结构。结果表明,在XXT中共鉴定出187种化学成分,包括三萜皂苷类、菲醌类、蟾蜍甾二烯类和甾体类及其他结构类型的化合物。血栓心脉宁片富含小分子化学成分且结构类型多样,是其发挥抗血瘀活性及多靶点作用机制的物质基础。该研究可为阐明XXT的药效物质基础和提升质量控制标准提供数据参考。     

一种能预测多肽和多肽类似物的质谱碎片质量的程序

根据已知算法编写了一种预测多肽和多肽类似物质谱碎片质量的程序。采用C++语言编写,具有良好的移植性,可与EXCEL等表格处理软件联用。它不但可处理天然多肽,也可以处理含有由用户定义的非天然氨基酸残基的多肽类似物。对多个多肽类似物的质谱碎片质量进行了预测,与实测结果比较后证明预测全部成功,说明本程序的结果有效、可靠。使用该程序对多肽和多肽类似物的质谱碎片质量进行预测,可以大幅简化该类化合物质谱解析过程。     

CLE家族植物小肽激素的质谱碎裂特征研究

CLE(CLAVATA3/Embryo surrounding region)小肽是植物小肽激素中最大的家族,在调控植物分生组织干细胞的分化和分裂中发挥着关键性作用.本工作采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF MS)研究5种典型CLE小肽的质谱特征,并总结质谱碎裂行为的规律,即CLE小肽的最强准...     

基于质谱的核酸指纹识别技术

基因转录是继基因组计划完成后基因功能研究的基本内容。基因转录研究迫切需要有新方法的支持。人们从蛋白的指纹分析技术中得到启发,开发基于质谱分析的核酸指纹识别技术。通过对核酸进行酶解处理,使其核酸片段分子量位于质谱检测的范围内,通过高分辨质谱技术获得所检测酶解核酸片段的分子量列表;利用基因组研究所获得的大量数据,通过计算机技术,模拟产生核酸酶解产物数据库,通过独特的算法以及基于这些算法开发的工具软件,把酶解的核酸质谱数据和虚拟的核酸酶解产物数据库进行比对,以发现和鉴别核酸。随着这一技术的逐渐应用和发展,将来还可能直接建立基于质谱数据的核酸数据库。相信这一技术在转录组研究中将发挥重要作用。     

甲胎蛋白纯品的同位素稀释质谱法测定

建立了基于特征肽段的甲胎蛋白的液相色谱-同位素稀释串联质谱检测方法。选取3条同位素标记的甲胎蛋白特征肽段作为内标,准确称其质量后与酶切后的甲胎蛋白样品定量混合,采取Phenomenex Kinetex 2.6 μm C18色谱柱分离,电喷雾三重四极杆串联质谱多反应监测模式（MRM）测定,并对最优酶切条件、酶切效率以及定值结果的不确定度进行了考察和评定,得到的甲胎蛋白标准物质的最终测量结果为（0.329±0.016）mg/g。