黄芪多糖对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2、Bax蛋白及NO含量的影响

目的:探讨黄芪多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织Bcl-2、Bax蛋白及NO含量的影响。方法:将SPF级Wistar大鼠72只分为假手术组、模型组、阳性对照组及黄芪多糖高、中、低剂量组,采用改良的线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,各药物组分别给予相应药物15天后采用免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白含量的表达,采用硝酸盐还原酶法检测NO蛋白含量的表达。结果:1)Bcl-2、Bax的含量模型组较假手术组表达明显增加;与模型组比较,Bcl-2表达黄芪多糖高、中剂量组增加(P0.05);Bax含量黄芪多糖高剂量组表达显著减少(P0.05)。与假手术组比较,模型组Bcl-2/Bax比值明显降低,阳性对照组与黄芪多糖各剂量组比较比值升高。2)与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中NO的水平明显升高(P0.05),与模型组比较,黄芪多糖高剂量组中NO含量明显降低(P0.05)。结论:黄芪多糖可增加凋亡抑制基因Bcl-2蛋白和降低凋亡促进基因Bax蛋白的表达,通过增加Bcl-2/Bax比例,降低NO含量,减少细胞凋亡的凋亡程度。     

灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法 48只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组、硝苯地平组、灯盏花素组。肾脏缺血60min再灌注24h,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况,免疫组化方法检测肾组织Bax和Bcl-2蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠血清BUN和Cr浓度增高(P0.05),肾细胞凋亡指数升高,Bax蛋白表达明显上调(P0.05),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显下降(P0.05)。与缺血再灌注组比较,灯盏花素组血清BUN和Cr水平降低(P0.05),肾细胞凋亡指数降低,Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bcl-2/Bax升高(P0.05)。结论灯盏花素可以抑制大鼠肾脏缺血再灌注细胞凋亡,其机制可能与改变Bax和Bcl-2蛋白的表达有关。     

莱菔承气汤对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡的影响

[目的]探讨中药莱菔承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。[方法]健康Wistar大鼠72只,随机分为空白对照组(24只)、SAP模型组(24只)和莱菔承气汤治疗组(24只)。3组大鼠均于术后6 h,12 h,24 h心脏采血,检测血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测肾脏细胞凋亡指数,RT-PCR检测肾脏组织Bax、Bcl-2 mRNA的表达。[结果]与对照组相比较,随着时间变化,SAP模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P0.01),肾脏细胞凋亡指数趋于升高,Bax mRNA表达明显升高(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显下降(P0.01)。与SAP模型组相比较,莱菔承气汤治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降(P0.01),肾脏细胞凋亡指数下降,Bax mRNA表达明显下降(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显升高(P0.01)。[结论]中药莱菔承气汤可能通过调节凋亡相关基因,减少肾脏细胞凋亡以减轻肾脏病理损伤,从而改善SAP时并发的急性肾功能障碍。     

川芎嗪对重症胰腺炎大鼠肾细胞凋亡的影响

目的评价川芎嗪对重症急性胰腺炎大鼠肾细胞凋亡的影响及保护机制。方法雌性SD大鼠45只,随机分为对照组、重症急性胰腺炎模型组、川芎嗪治疗组,以4%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射方法复制大鼠重症急性胰腺炎模型。光镜下观察大鼠肾脏病理变化,动态检测血清淀粉酶(AMY)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)水平,TUNEL法检测肾小管细胞凋亡率,Western blotting法检测肾脏Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组及川芎嗪组肾脏病理损伤程度随病情进展逐渐加重,血清AMY、Cr、BUN水平均明显升高,肾小管细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2/Bax比值显著减少;川芎嗪处理后,Bcl-2/Bax比值较模型组同时间点均显著升高,其余指标较模型组同时间点均显著降低,川芎嗪治疗组肾脏病理损伤改善程度优于模型组。结论川芎嗪可能促进Bcl-2高表达并减弱Bax表达,抑制肾小管细胞凋亡,对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤产生保护作用。     

红芪多糖对脾虚型糖尿病大鼠Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察红芪多糖对脾虚型糖尿病大鼠Bcl-2/Bax表达的影响,探究其对脾虚型糖尿病大鼠胃黏膜细胞凋亡的作用机制。方法 SPF级GK大鼠雄性65只,随机选出10只作为空白组,正常饮食喂养。剩余采用苦寒泻下法合并饮食不节法制备脾虚证模型,造模成功后,分为5组:即模型组,二甲双胍组,红芪多糖高、中、低剂量组。红芪多糖高剂量组、中剂量组、低剂量组分别以0.2,0.1,0.05g·kg~(-1)·d~(-1),二甲双胍组以0.675g·kg~(-1)·d~(-1)进行灌胃,连续灌胃8周后处死大鼠,取胃窦部组织采用TUNEI(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测胃窦部组织胃黏膜细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测Bcl-2,Bax基因表达含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bax蛋白表达含量。结果与空白组比较,模型组大鼠胃窦组织胃粘膜细胞凋亡率明显升高(P0.05),胃窦组织中Bcl-2 mRNA表达及蛋白表达降低(P0.05),Bax mRNA表达及蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,红芪多糖高、中剂量组胃窦组织胃粘膜细胞凋亡率显著降低(P0.01),胃窦组织中Bcl-2 mRNA表达(P0.05)及蛋白表达升高(P0.01),Bax mRNA表达及蛋白表达降低(P0.05)。结论红芪多糖可能通过提高Bcl-2/Bax的表达,抑制脾虚型糖尿病大鼠胃窦组织胃黏膜细胞的凋亡。     

六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨六味地黄汤对慢性肾衰竭大鼠肾脏Bax和Bcl-2表达的影响。方法将45只雄性SD大鼠随机分为空白组(10只)、假手术组(10只)及手术组(25只),手术组予以5/6肾切除造模,造模成功后随机分为模型组及治疗组。治疗组予六味地黄汤灌胃,其余3组予等体积蒸馏水灌胃。干预8周后检测各组大鼠血肌酐、血尿素氮、尿蛋白定量水平;HE、Masson染色观察大鼠肾脏组织形态学变化;免疫组化及实时荧光定量PCR分别检测大鼠Bax及Bcl-2蛋白及mRNA的表达水平。结果空白组及假手术组大鼠肾脏未观察到明显病理变化,模型组存在不同程度的肾小管及肾间质病变,治疗组较模型组病灶明显减轻;模型组血肌酐、血尿素氮、尿蛋白定量水平明显升高(P 0.01),治疗组较模型组降低(P 0.05);Bax和Bcl-2主要在肾小管区表达,模型组Bax表达水平明显升高(P 0.01),Bcl-2表达水平明显降低(P 0.01);与模型组比较,治疗组Bax表达水平降低(P 0.05),Bcl-2表达水平升高(P 0.05)。结论六味地黄汤可通过调控凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,改善慢性肾衰竭大鼠肾纤维化程度,延缓肾功能进展。     

黄芪多糖对溃疡性结肠炎大鼠的作用及其机制研究

目的:探讨黄芪多糖对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠的作用及其机制。方法:选取雄性Wistar大鼠72只,采用随机数字表法分为空白组、模型组、黄芪多糖组、阳性对照组,每组18只,模型组、阳性对照组和黄芪多糖组采用三硝基苯磺酸灌肠建立大鼠UC模型,建模成功后,黄芪多糖组用黄芪多糖按200 mg/kg剂量灌肠,阳性对照组用硫唑嘌呤按60 mg/kg的剂量灌肠,模型组和空白组予以等量生理盐水,连续灌肠10天。对比各组大鼠结肠炎症评分,结肠上皮细胞中B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax蛋白的表达,结肠上皮凋亡细胞计数,血清D-乳酸、二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)的水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠的DAI评分、大体形态损伤评分、结肠损伤评分、Bax蛋白表达水平、血清D-乳酸、DAO水平、结肠上皮凋亡细胞计数均显著升高(P 0.05),结肠上皮细胞中Bcl-2表达显著降低(P 0.05);与模型组比较,黄芪多糖组和阳性对照组的DAI评分、大体形态损伤评分、结肠损伤评分、Bax蛋白表达水平、血清D-乳酸、DAO水平、结肠上皮凋亡细胞计数均显著降低(P 0.05),结肠上皮细胞中Bcl-2显著升高(P 0.05);与阳性对照组比较,黄芪多糖组DAI评分、大体形态损伤评分、结肠损伤评分、Bax蛋白表达水平、结肠上皮凋亡细胞计数均较高(P 0.05),结肠上皮细胞中Bcl-2、血清D-乳酸、DAO水平较低(P 0.05)。结论:黄芪多糖能显著减轻UC大鼠的炎性反应,且可能是通过上调Bcl-2,下调Bax蛋白表达,改善肠道屏障功能,达到治疗效果。     

黄芪保心汤对心肌缺血大鼠的血流动力学和凋亡作用的研究

目的观察黄芪保心汤对冠状动脉结扎大鼠的血流动力学、凋亡及Bax、Bcl-2,Caspase-3蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白组、假手术组、模型组、黄芪保心汤组,除空白组、假手术组外,结扎冠状动脉造成大鼠心肌缺血损伤模型,假手术组只开胸不结扎,各组予相应药物干预4周后,观察黄芪保心汤对冠状动脉结扎大鼠心肌缺血血流动力学、左室质量指数、心肌细胞凋亡以及Bax、Bcl-2,Caspase-3蛋白表达。结果黄芪保心汤能改善心肌缺血大鼠血流动力学、减少凋亡、降低Bax、Caspase-3水平,升高Bcl-2水平,具有显著差异(P0.05或P0.01)。结论黄芪保心汤具有良好的抗心肌缺血作用,其作用机理与减轻心肌细胞凋亡,降低Bax、Caspase-3表达,升高Bcl-2表达相关。     

天麻钩藤饮对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响

目的 研究天麻钩藤饮对帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响.方法 采用6-羟基多巴胺注射于脑右侧黑质造成单侧PD损毁模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组和天麻钩藤饮组(给药浓度为5.13g/ml),共给药14天.同时设立正常对照组、假手术组.应用TUNEL、透射电镜观察多巴胺能神经元凋亡的变化,免疫组化法观察黑质Bcl-2、Bax的表达.结果 模型组均能检测到TUNEL染色阳性细胞核,且模型组凋亡细胞数明显多于正常对照组、假手术组(P＜0.01).天麻钩藤饮组也能检测到凋亡细胞核,但与模型组比较,凋亡细胞数较少(P＜0.01).与正常对照组及假手术组比较,模型组Bax和Bcl-2表达水平均显著升高(P＜0.01),且以Bax蛋白升高为主;而与模型组比较,天麻钩藤饮组Bcl-2显著升高,Bax显著降低(P＜0.01).电镜结果显示,天麻钩藤饮组神经细胞病理变化比模型组明显为轻.结论 天麻钩藤饮对PD模型大鼠多巴胺能神经元凋亡有明显抑制作用,其作用机制可能是通过抗氧化应激,升高Bcl-2,抑制Bax激活而实现的.     

电针对缺血性学习记忆障碍大鼠氧自由基及凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察电针对脑缺血大鼠学习记忆障碍的影响,从氧自由基与细胞凋亡的角度探讨电针治疗该病的机制。方法:用Morris水迷宫实验筛选学习记忆良好的健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、药物组、电针组,每组15只。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备缺血性学习记忆障碍模型。造模成功后第7天进行干预。电针组采用"智三针"通电治疗,每日1次,每次30min,共3周。药物组给予安理申灌胃,剂量为0.03mg/kg,每日1次,共3周。在不同时间点用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;TUNEL法检测海马区细胞凋亡;免疫组化法检测海马区Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达的情况;化学比色法测量血清及海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,造模后模型组大鼠学习记忆能力明显降低(P0.01);治疗14d时,两治疗组大鼠的学习记忆能力较模型组明显升高(P0.01);治疗21d时,电针组大鼠学习记忆能力提高的程度优于药物组(P0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠海马凋亡细胞数目明显增多(P0.01),两治疗组较模型组明显减少(P0.01)。与假手术组比较,模型组Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高(P0.01);两治疗组Bcl-2蛋白表达较模型组升高(P0.01),且电针组Bcl-2蛋白表达较药物组升高明显(P0.01),两治疗组Bax和Caspase-3蛋白表达较模型组降低(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠血清及海马组织SOD、GSH-Px活性明显降低(P0.01),MDA含量明显升高(P0.01);两治疗组与模型组比较,SOD、GSH-Px活性明显升高(P0.01),MDA含量明显降低(P0.01);电针组血清中3项指标及海马GSH-Px活性的改善程度较药物组明显(P0.01,P0.05)。结论:电针"智三针"可降低缺血性学习记忆障碍大鼠血清及海马内氧自由基含量,进而抑制细胞凋亡,改善学习记忆能力。     

丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 研究丹红注射液对大鼠移植肾缺血再灌注损伤的保护作用.方法 建立近交系雄性SD大鼠同基因肾移植模型.共设4个实验组,即假手术组,移植缺血再灌注模型组,丹红注射液预处理组,丹红注射液治疗组.检测术后24 h各组大鼠的尿素氮(Bun)和肌酐(Cr)情况,采用免疫组化法检测Bcl-2和Bax的表达,采用TUNEL检测细胞凋亡指数.结果 与假手术组相比,各组细胞凋亡率明显增加;丹红注射液预处理组与移植缺血再灌注模型组及丹红注射液治疗组相比,细胞凋亡率显著下降,均具有非常显著性差异(P<0.01).与假手术组比较,移植缺血再灌注模型组Bax表达显著增强(P<0.01),Bcl-2表达增强(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.01);丹红注射液治疗组同移植缺血再灌注模型组比较无显著性差异(P>0.05);丹红注射液预处理组与移植缺血再灌注模型组比较,Bcl-2表达增强(P<0.01),Bax表达明显下降(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著上升(P<0.01).结论 丹红注射液可能通过下调凋亡相关基因Bax表达,上调Bcl-2基因表达,抑制细胞凋亡,从而起到对移植肾的保护作用.     

黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤的修复机制

【目的】 探讨半仿生提取的黄芪多糖对乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的修复作用及机制。【方法】 将50只雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,胃乃安组,黄芪多糖低、高剂量组,每组10只。各组分别灌胃给药,1次/d,连续2 d。末次给药2 h后,除正常组外,其余各组分别按照 1.4 mL/只灌胃给予无水乙醇诱导急性胃黏膜损伤。1 h后处死大鼠,取胃进行胃黏膜损伤评分和病理损伤评分,免疫组织化学法检测凋亡信号通路B细胞白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）的蛋白表达。【结果】 黄芪多糖高、低剂量组均能显著降低胃黏膜的损伤分数和病理损伤评分（P＜0.05）,呈剂量依赖关系。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平降低（P＜0.05）,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平增加（P＜0.01）。与模型组比较,黄芪多糖低、高剂量组胃黏膜组织中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平增加（P＜0.05或P＜0.01）,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平降低（P＜0.05或P＜0.01）。【结论】 半仿生提取黄芪多糖对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤具有明显的修复作用,可通过升高抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达发挥作用。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

大蒜素对慢性肾衰大鼠肾组织细胞凋亡的抑制作用与机制研究

目的观察大蒜素对慢性肾衰(CRF)大鼠肾脏组织细胞凋亡的影响并初探其机制。方法100只实验用大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、大蒜素[5、10、20 mg/(kg·d)]组,采用腺嘌呤溶液[250 mg/(kg·d)]灌胃21 d的方法建立CRF大鼠模型,大蒜素[5、10、20 mg/(kg·d)]组腹腔注射给药治疗,疗程28 d。测定24 h尿量、24 h尿蛋白量及血清肾功能指标(BUN、SCr、UA含量),HE染色法观察肾脏组织病理变化;TUNEL染色法观察肾脏组织细胞凋亡状况,Western blotting法检测Bcl-2、Bax、NF-кB表达并进行半定量分析,化学比色法检测肾脏组织抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量。结果与模型对照组比较,大蒜素10、20 mg/(kg·d)组24 h尿量显著减少,24 h尿蛋白量显著降低(P0.05或P0.01),血清BUN、SCr、UA含量显著降低(P0.05或P0.01);经大蒜素治疗28 d能够明显改善CRF大鼠肾脏组织病变及细胞凋亡状况,大蒜素10、20 mg/(kg·d)组凋亡指数(AI)显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白表达显著上调、Bax显著下调且Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.05或P0.01),NF-κB表达显著下调(P0.05或P0.01),抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)]活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01),其中大蒜素20 mg/(kg·d)组过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(P0.05)。结论大蒜素可能通过抑制肾脏组织细胞凋亡而对CRF大鼠起到一定的保护作用,可能与其调节凋亡相关蛋白表达及抑制氧化应激损伤有关。     

中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤（MIRI）心肌细胞相关凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组。采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注2h复制大鼠MIRI模型,分别以HE染色、TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌组织病理学、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞Bcl-2、Bax的阳性表达。结果 MIRI组与假手术组比较心肌细胞凋亡指数值显著升高（P〈0.01）,而冠心康组明显降低（P〈0.01）;抑凋亡因子Bcl-2在MIRI后表达明显降低,而促凋亡因子Bax表达则明显升高,冠心康可明显升高Bcl-2的表达,同时降低Bax的表达（P〈0.01）。结论中药复方冠心康对大鼠MIRI心肌细胞具有明显的保护作用,其作用机制与调控心肌细胞的凋亡因子Bcl-2、Bax的表达有关。     

额尔敦-乌日勒预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的通过观察蒙药额尔敦-乌日勒预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞凋亡及相关蛋白的影响,探讨额尔敦-乌日勒预处理对MIRI的保护机制。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组、MIRI模型组、复方丹参滴丸组、额尔敦-乌日勒高、中、低剂量组,每组10只大鼠。给药组分别灌胃给予不同药物预处理。假手术组只穿线不结扎,其余各组大鼠通过结扎冠状动脉左前降支30 min,然后再灌注120 min的方法制作MIRI模型。采用末端标记(tunel)方法检测心肌细胞凋亡率;运用Western Blot技术检测大鼠心肌细胞中Bcl-2,Bax,Caspase-3蛋白表达。结果 (1)与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率显著上升(P0.01);与模型组比较,额尔敦-乌日勒能降低MIRI大鼠心肌细胞凋亡率(P0.01),其中额尔敦-乌日勒中、低剂量组优于高剂量组(P0.01)。(2)与假手术组比较,模型组大鼠Bcl-2表达显著下调(P0.01),Bax、Caspase3表达明显上调(P0.01),Bcl-2/Bax比值下降(P0.01);与模型组比较,额尔敦-乌日勒能增加MIRI大鼠心肌Bcl-2表达,减少Bax、Caspase3蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax比值(P0.01),其中以额尔敦-乌日勒中剂量组作用较明显(P0.01)。结论额尔敦-乌日勒可通过抑制心肌细胞凋亡对大鼠MIRI起到保护作用,其抗心肌细胞凋亡的机制可能与通过上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase3的表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

金水清对IgA肾病大鼠细胞凋亡和Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察金水清对免疫球蛋白A(IgA)肾病大鼠细胞凋亡和调控基因Bcl-2、Bax及肾脏病理改变的影响,阐明金水清治疗IgA肾病的可能作用机制。方法采用口服、尾静脉注射BSA+皮下注射四氯化碳、蓖麻油+尾静脉注射脂多糖+高温高湿环境+高糖高脂饮食的复合法,复制大鼠IgA肾病模型,并给予金水清治疗,通过光镜、电镜下观察大鼠肾组织病理改变,TUNEL法检测大鼠细胞凋亡情况,SABC法检测肾组织中Bcl-2和Bax的表达。结果与模型组比较,治疗组大鼠病理改变明显减轻。与正常组比较,模型组细胞凋亡指数、Bax、Bax/Bcl-2明显升高,且有显著性差异(均P0.05);与模型组比较,治疗组细胞凋亡指数、Bax、Bax/Bcl-2明显降低,且有显著性差异(均P0.05);与正常组比较,模型组Bcl-2明显降低,且有显著性差异(P0.05);与模型组比较,治疗组Bcl-2明显升高,且有显著性差异(P0.05)。结论金水清能够有效抑制系膜细胞凋亡,有效地上调肾组织中Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值,从而达到减轻肾脏组织的病理损伤的目的。     

黄芪甲苷对大鼠肺缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的:研究黄芪甲苷(Astragalosides)对大鼠肺缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法:100只实验用大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芪甲苷低、中、高剂量(20、40、80mg/kg)组,每组20只。各组大鼠分别于术前30min腹腔注射给药或生理盐水,除假手术组以外,其余各组大鼠采用夹闭左肺门45min后松夹的方法制备肺缺血再灌注损伤模型,假手术组行手术通路,不夹闭。再灌注2h后,测定各组大鼠肺组织湿/干重比(W/D),HE染色法观察肺组织病理学改变,末端标记法(TUNEL)观察肺细胞凋亡状况并计算凋亡指数(Apoptosis Index,AI),逆转录-PCR(RT-PCR)法检测肺组织中Bcl-2 m RNA、Bax m RNA表达并计算Bcl-2/Bax比值,测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,采用Western blotting法测定肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较,黄芪甲苷中、高剂量组大鼠肺组织W/D、肺细胞凋亡指数显著降低,肺组织形态结构变化和肺细胞病变显著减轻,肺组织中Bcl-2 m RNA表达显著升高,Bax m RNA表达显著降低,Bcl-2/Bax比值显著升高,肺组织中SOD、CAT活性显著升高,MDA含量显著降低,NF-k B蛋白表达量显著降低,上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01),其中以黄芪甲苷高剂量效果最为显著。结论 :黄芪甲苷对大鼠肺缺血再灌注损伤后肺细胞凋亡有一定的抑制作用,其作用机制可能与黄芪甲苷能够上调抑凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值以及提高抗氧化酶活性,降低氧化应激反应,上调NF-k B蛋白表达有关。     

快捻久留针刺法对后循环缺血眩晕大鼠前庭神经核细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:观察快捻久留针刺法对后循环缺血眩晕大鼠前庭神经核细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞因子相关X蛋白(Bax)表达的影响。方法:将70只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组、普通针刺组、快捻久留组,每组14只。除假手术组外各组大鼠给予手术结扎右侧颈总动脉(CCA)和右侧锁骨下动脉(SCA)建立后循环缺血眩晕模型,假手术组剥离右侧CCA和右侧SCA,不进行结扎,直接缝合。药物组给予盐酸氟桂利嗪混悬液(10 mL/kg)灌胃;两针刺组均选取"百会""率谷""风池"穴进行针刺,普通针刺组给予常规针刺并留针30min;快捻久留组常规针刺后行频率200~300次/min的快速捻转1 min,并留针60 min;假手术组和模型组不予干预。干预均为每日1次,共干预10 d。观察各组大鼠前庭神经核局部血流下降率;采用TUNEL法观察大鼠前庭神经核细胞凋亡情况;免疫组化法检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠右侧前庭神经核局部血流下降率明显升高(P<0.01),前庭神经核细胞凋亡指数(AI)明显升高(P<0.01);与模型组比较,两针刺组及药物组大鼠右侧前庭神经核局部血流下降率显著降低(P<0.01),前庭神经核细胞AI明显降低(P<0.01);快捻久留组大鼠右侧前庭神经核局部血流下降率低于药物组和普通针刺组(P<0.01,P<0.05),前庭神经核细胞AI低于普通针刺组和药物组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠前庭神经核Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,两针刺组及药物组大鼠前庭神经核Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.01);快捻久留组Bcl-2蛋白表达高于普通针刺组和药物组(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达低于普通针刺组和药物组(P<0.05)。结论:快捻久留针刺法能有效抑制后循环缺血眩晕大鼠前庭神经核的细胞凋亡,其机制可能与改善前庭神经核供血,调节Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

姜黄煎对大鼠血管损伤后Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义

目的:探讨姜黄煎对大鼠血管损伤后血清中Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义。方法:模拟PCI术,采用ELISA法检测144只大鼠血清中Bcl-2与Bax和p53含量。其中姜黄煎干预组36只,生理盐水干预组36只,并与36只假手术组和36只正常组作为对照。结果:姜黄煎组,生理盐水组,假手术组,血清Bcl-2与Bax和p53含量与正常对照组比较差异明显(P0.05);假手术组血清Bcl-2水平含量接近于正常对照组,差异不明显(P0.05);姜黄煎组血清Bcl-2与Bax含量和p53含量与生理盐水干预组,假手术组比较有明显差异(P0.05);与正常对照组比较差异不明显(P0.05)。结论:姜黄煎可上调大鼠Bcl-2蛋白表达,使Bax的蛋白表达明显下降,说明Bc1-2过量表达,Bax/Bc1-2的比值增大,能抑制内皮细胞过度凋亡。二者的比例是决定细胞是否发生凋亡的重要调控因素。同时姜黄煎能够阻滞细胞周期降低P53蛋白的表达,迅速恢复内皮功能,保持完整血管内皮结构。因此,Bcl-2与Bax和p53参与了再狭窄的病理生理变化。检测患者血清Bcl-2与Bax和p53含量的异常变化,可能有助于评估血管损伤后凋亡因子对血管内皮功能和结构的影响。