三妙丸中牛膝引药作用的机理研究

目的通过药代动力学组织分布研究法，研究牛膝在正常大鼠体内对三妙丸中主要有效成分小檗碱组织分布的影响．以探讨其引药的作用。方法大鼠均分成两组，分别灌胃给予含或不合牛膝的三妙丸水提物，给药后2h，4h，6h和7d处死动物．取血浆和心脏、后肢关节组织的匀浆，用高效液相色谱（HPLC）法测定组织中小檗碱的浓度。结果含牛膝三妙丸组动物给药后关节药物浓度在2h时与去牛膝三妙丸组相近，4h明显高于去牛膝组，6h与去牛膝组相近，多次给药后明显高于去牛膝组。含牛膝组的关节／心脏药物浓度比始终明显大于去牛膝组。结论牛膝有促进三妙丸中有效成分小檗碱向关节组织分布的作用。     

四妙丸中3种生物碱在正常和2型糖尿病大鼠尿液、粪便和胆汁中的排泄研究

考察四妙丸中3种生物碱及其4个代谢产物在正常和2型糖尿病模型大鼠体内的排泄动力学差异。通过链脲佐菌素诱导模型大鼠，采用LC-MS/MS检测正常和糖尿病大鼠尿液、粪便和胆汁中生物碱成分，探究糖尿病对四妙丸生物碱排泄过程的影响。结果显示，大鼠口服四妙丸提取物72 h后，粪便为四妙丸中生物碱的主要排泄途径，木兰花碱、小檗碱在正常大鼠的粪便总排泄率分别为4.87%、56.54%,在糖尿病大鼠减小为2.35%、35.53%,差异具有统计学意义(P<0.05);糖尿病大鼠尿液中黄柏碱、木兰花碱和小檗碱的总排泄率明显降低，分别为正常大鼠的53.57%、60.84%、52.78%。口服四妙丸12 h后，糖尿病大鼠胆汁中小檗碱总排泄率明显增加，为正常大鼠的253.33%。糖尿病状态下，小檗碱的代谢产物唐松草酚定在尿液和粪便的总排泄率明显减小，在胆汁中明显增大；药根碱和巴马汀的总尿排率明显增大，t_1/2和K_e发生显著改变。结果表明，糖尿病影响四妙丸生物碱的体内过程，使其以原型药物的形式排泄减少，影响小檗碱的生物转化，最终使生物碱体内暴露量增加，这将有利于生...     

三妙丸抗急性痛风关节炎配伍机制研究

目的：探讨三妙丸中二妙丸配伍牛膝的合理性。方法：首次采用高尿酸血症致尿酸盐结晶沉积于关节的急性痛风关节炎大鼠模型,观察三妙及缺牛膝三妙丸对血尿酸值、炎症因子IL-1β和IL-6 及关节病理组织的影响;HPLC-ESI-MS/MS 分析给药模型大鼠血清和关节中移行成分及其离子峰强度的相对变化。结果：三妙及缺牛膝三妙丸均有显著的抗急性痛风炎症及降血尿酸作用,而三妙丸抑制痛风大鼠足肿胀、保护关节组织的炎症损伤及抑制炎症因子IL-1β水平优于缺牛膝三妙丸;三妙及缺牛膝三妙丸给药血清均检测出5 个移行成分,关节中1 个移行成分,其中2 个为黄柏生物碱代谢物、2 个为苍术糖苷类成分代谢物,且三妙方血清及关节中移行成分离子强度均高于缺牛膝三妙方。结论：牛膝有促进二妙丸中黄柏生物碱及苍术倍半类成分在血液及关节中的分布,增强抗急性痛风关节炎药作用。     

三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制研究

目的：研究三妙丸中牛膝对关节炎大鼠引药作用的机制。方法：用弗氏完全佐剂和湿热处理法制备大鼠湿热痹症关节炎模型，造模成功的大鼠分为3组：模型组，含牛膝的三妙丸（18 g·kg-1）组，不含牛膝三妙丸（10 g·kg-1）组。HPLC法测定三妙丸中主要成分小檗碱在心脏、关节组织中的分布情况，体积法测定大鼠足关节肿胀度，同时观察组织病理变化；测定血浆血液流变学指标。结果：含牛膝三妙丸组在给药后2，4，6 h和多次给药14 d后关节浓度均高于不含牛膝组，关节／心脏小檗碱浓度比显著大于不含牛膝组。含牛膝的三妙丸明显改善关节炎模型大鼠的关节肿胀和组织病理改变。含牛膝三妙丸组明显改善关节炎大鼠血液流变学指标，与不含牛膝三妙丸组比P<0.01,与模型组相比也有显著性差异（P<0.01）。结论：牛膝能够引导三妙丸中主要有效成分小檗碱的靶组织分布，并与其药效作用相吻合。其促进小檗碱组织分布的作用和其活血作用可能有一定关系。     

二妙丸多指标化学成分质量研究

目的:建立二妙丸(苍术,黄柏)挥发油中β-桉叶醇含量的气相色谱测定法;对二妙丸单煎合并与合煎的挥发油及提取干膏进行多指标化学成分的测定和比较.方法:以丹皮酚为内标物,采用内标法和程序升温的气相色谱条件对二妙丸单煎与合煎的挥发油中的B-桉叶醇含量进行测定和比较;采用高效液相色谱法对二妙丸中的小檗碱、巴马汀、药根碱成分进行含量测定和比较.结果:二妙丸合煎的挥发油中的β-桉叶醇含量比单煎中的含量略高,分别为73.34 mg/g和70.04 mg/g;但从图谱的峰数和保留时间进行比较,结果无明显差别.单煎合并的小檗碱、巴马汀、药根碱的含量明显高于合煎的含量.结论:确立二妙丸挥发油中B-桉叶醇含量测定的方法.并且说明苍术、黄柏配伍,彼此相互影响.     

HPLC法测定黄柏生物碱成分含量及在二妙丸类方中的比较研究

目的:比较黄柏生物碱配伍二妙丸类方前后含量的变化,探讨类方方剂物质基础配伍变化的特征。方法:采用HPLC,Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50,每100 mL加十二烷基磺酸钠0.17 g),流速0.8 mL·min-1,柱温30℃,检测波长345 nm。测定黄柏及其二妙丸类方(二妙方、三妙方、四妙方、加味四妙方)中小檗碱、巴马汀及药根碱成分含量。结果:3种生物碱在四妙方中含量基本没变化,在二妙方、三妙方中含量减少,在加味四妙方中减少较多,药根碱较小檗碱、巴马汀在二妙丸类方中减少量大。结论:黄柏配伍二妙丸类方后,黄柏生物碱成分在基本方二妙及不同类方中呈现一定的变化规律。     

基于脑微透析联合LC-MS/MS技术的交泰丸在正常与失眠大鼠的脑内药动学特性比较研究

目的：比较交泰丸口服给药后,其主要活性成分（小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱）在正常和失眠大鼠的脑内药动学特性。 方法：运用液相色谱-串联质谱结合脑微透析方法对五种原小檗碱型生物碱进行测定。于大鼠的大脑海马体内植入脑微透析探针,交泰丸提取物灌胃给药后每30 min 收集一管透析液,持续10 h。采用BDS Hypersil C18色谱柱进行分离,流动相为乙腈-水（含5 mmol 乙酸铵并调pH至5.0）,时长4 min。检测方式为多反应检测模式,MS/MS条件分别为小檗碱m/z 336.0-320.1,巴马汀m/z 352.0-336.1,药根碱m/z 338.0-322.1,表小檗碱m/z 336.0-320.1,黄连碱m/z 320.0-292.1,四氢巴马汀（内标）m/z 356.4-192.1。 结果：建立的LC-MS/MS方法的线性、准确度、精密度、稳定性和基质效应均符合要求,定量下限为0.05 ng•mL-1。五种原小檗碱型生物碱能迅速分布于脑内,其在正常组和模型组的脑内药动学行为具有显著性差异,主要表现在AUC和半衰期。 结论：本实验有效地使用了LC-MS/MS结合脑微透析的方法对交泰丸中的五种原小檗碱型生物碱进行脑内药动学研究。结果显示,这五种原小檗碱型生物碱能直接作用于海马体,且其在失眠大鼠中的吸收显著高于正常大鼠。     

四妙丸HPLC指纹图谱建立

目的 建立四妙丸HPLC指纹图谱.方法 四妙丸50%乙醇提取物的分析采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长280 nm(0~65 min)和330 nm (65~90 min).结果 11批样品指纹图谱中有31个共有峰,指认其中8个峰为绿原酸、黄柏碱、木兰花碱、阿魏酸、药根碱、巴马汀、盐酸小檗碱、苍术素;相似度大于0.994.结论 该方法简便可靠,稳定性好,可用于四妙丸质量评价.     

LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究

目的:建立灵敏、特异、准确、可靠的药根碱、巴马汀、小檗碱在大鼠血清中液质联用(LC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中3种生物碱在正常大鼠体内药代动力学研究.方法:优化药根碱、巴马汀、小檗碱及内标延胡索乙素质谱检测条件,确定相关条件并开展方法学考察.正常大鼠灌胃给予黄连解毒汤,经时取血,样品经处理后将该方法用于3种成分的测定.DAS药代动力学软件拟合房室模型,计算药动参数.结果:在ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式,用,m/z 338～322,351.9～308,336-319.8来分别检测药根碱、巴马汀、小檗碱,同时以m/z 356.1～192.1来检测内标延胡索乙素.药根碱在0.2～25μg·L~(-1)、巴马汀、小檗碱在O.4～50μg·L~(-1)呈良好线性关系.3种生物碱在高、中、低3个浓度的准确度、精密度、稳定性等均符合要求.药根碱、巴马汀、小檗碱在正常大鼠体内药动学过程符合一室开放模型.结论:应用LC-Ms-s技术建立了测定药根碱、巴马汀、小檗碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法.     

黄连生物碱在大鼠体内的代谢转化及分布

目的:测定黄连生物碱在大鼠体内的药代动力学、组织分布,及药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱4种生物碱在大鼠体内的转化。方法:大鼠分别灌胃黄连总碱、小檗碱,采用反相高效液相色谱法测定大鼠的血浆、组织、胃肠道中黄连4种生物碱的含量。结果:小檗碱在大鼠体内的血药浓度出现2个峰值,达峰时间分别2,5h,其中血药浓度分别为Cmax3.7,2.8mg.L-1;小檗碱在大鼠血液中可以转化为药根碱;给大鼠灌胃黄连总生物碱后,小檗碱在大鼠胃中的浓度单调下降,而黄连碱、巴马汀和药根碱逐渐增加,表明在大鼠的胃中小檗碱可转化为药根碱;小檗碱和巴马汀主要分布在动物的肺部,其次分布在肝脏中,而药根碱和黄连碱主要分布在动物的肝脏中,其次分布在肺部。结论:小檗碱可以转化为药根碱,根据胃肠道推进实验部分解释了小檗碱在血液中出现2次峰值的原因。     

HPLC法测定成药二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黄丸中小檗碱、掌叶防己碱和药根碱的含量

建立了反相高效液相法测定成药二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黄丸中小檗碱、掌叶防己碱和药根碱含量的方法。固定相为Nova-PakC184μm, 3.9mm(i.d)×150mmHPLC柱;流动相为乙腈-水(1:1, 每1000mL含磷酸二氢钾3.4g及十二烷基硫酸钠1.7g);检测波长为345nm;小檗碱、掌叶防己碱和药根碱的加样回收率分别为98.67±2.38%, 98.75±1.67%, 98.38±2.31%。     

用生苍术与用麸炒苍术的四妙丸中盐酸小檗碱大鼠体内药代动力学比较研究

目的以四妙丸中的君药黄柏中的主要有效成分盐酸小檗碱为指标,对分别以生苍术及麸炒苍术入药的四妙丸大鼠体内的药代动力学差异进行比较。方法以吴茱萸碱为内标物,采用高效液相色谱法,建立了盐酸小檗碱大鼠体内的血药浓度测定方法,并对分别以生苍术及麸炒苍术入药的四妙丸灌胃给药后盐酸小檗碱的血药浓度进行测定,采用DASS2.0数据处理。结果以生苍术入药的四妙丸中,盐酸小檗碱在大鼠体内的C_(max)为0.123 mg/L,T_(max)为1.05 h,MRT_(0-24)为8.69 h,AUC_(0-24)为0.778 mg/L·h;以麸炒苍术入药的四妙丸中盐酸小檗碱在大鼠体内的C_(max)为0.096 mg/L,T_(max)为1.03 h,MRT_(0-24)为9.04 h,AUC_(0-24)为0.728 mg/L·h。结论以生苍术或麸炒苍术入药的四妙丸中盐酸小檗碱在大鼠体内的药代动力学参数无显著差别。     

二妙胶囊和二妙丸的药代动力学比较

目的:以盐酸小檗碱为主要考察指标进行二妙丸和二妙胶囊的药代动力学比较研究,从药代动力学角度看不同剂型在动物体内的血药浓度变化。方法:灌胃给药,采用HPLC法测定家兔体内盐酸小檗碱的血药浓度,血药浓度-时间数据经DAS2.0药代动力学分析软件处理,分别测得二妙丸和二妙胶囊中的盐酸小檗碱在家兔体内的药代动力学参数。结果:家兔血浆样品中,盐酸小檗碱的线性范围为0.0043～0.427μg/mL,提取回收率高,日内日间精密度试验RSD均小于10%,二妙丸的盐酸小檗碱在家兔体内最大血药浓度为0.082μg/mL,达峰时间为8h;二妙胶囊的盐酸小檗碱在家兔体内最大血药浓度为0.303μg/mL,达峰时间为5h。结论:建立了HPLC法测定黄柏中盐酸小檗碱血药浓度的方法,为二妙胶囊的合理用药提供了药代动力学数据,同时也为中药复方的药代动力学研究提供了可借鉴的方法。     

HPLC法测定成药二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黄丸中小檗碱、掌叶防己碱和药根碱的含量

建立了反相高效液相法测定成药二妙丸、三妙丸、四妙丸及知柏地黄丸中小檗碱、掌叶防己碱和药根碱含量的方法。固定相为Nova－PakC184μm，3．9mm（i.d）×150mmHPLC柱；流动相为乙腈-水（1：1，每1000mL含磷酸二氢钾3．4g及十二烷基硫酸钠1．7g）；检测波长为345nm；小檗碱、掌叶防己碱和药根碱的加样回收率分别为98．67±2．38％，98．75±1．67％，98．38±2．31％。     

戊己丸中活性成分在正常大鼠和肠易激综合征大鼠体内药代动力学行为的差异性分析

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定戊己丸中10个活性成分口服给药后不同时间点的血药浓度,比较其在正常大鼠和慢性内脏高敏感肠易激综合征（CVH-IBS）大鼠体内药代动力学特征的差异。方法 采用乳鼠结肠经皮冠状动脉腔内血管成形术（PTCA）球囊刺激法制备CVH-IBS大鼠模型,灌胃给予戊己丸（给药剂量0.245 g·kg^-1）后于不同时间点从颈静脉采血,采用UPLC-MS/MS同时检测血浆中10个戊己丸活性成分（盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱、盐酸药根碱、表小檗碱、二氢小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸内酯、芍药苷、芍药内酯苷）的血药浓度,计算各成分在正常大鼠和CVH-IBS大鼠体内药代动力学参数的差异。结果 建立的UPLC-MS/MS能够灵敏、准确地检测10个戊己丸活性成分在大鼠体内的血药浓度。与正常组比较,CVH-IBS大鼠体内10个戊己丸活性成分的吸收速率均有一定程度的降低,达峰时间（t_max）延长,其中盐酸小檗碱和盐酸药根碱的t_max分别从54 min和39 min均显著延长至90 min（P<0.05, P<0.01）;各成分的药-时曲线下面积（AUC_0-t）均增加,其中吴茱萸碱和芍药苷差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）;10个活性成分的清除率（CL/F）均降低,其中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和吴茱萸碱差异有统计学意义（P<0.05, P<0.01）。结论 戊己丸中活性成分在正常大鼠和CVH-IBS大鼠体内的药代动力学行为存在明显差异,这可能与IBS病理状态下肠道上皮细胞的微结构被破坏和肝脏酶的活性改变有关。     

二妙丸与四妙丸的组方及功能比较

二妙丸是燥湿清热的一个经典方。历代医家以二妙丸方为基础方的加减方颇多,最典型是加牛膝、薏苡仁而成“四妙丸”。二妙丸专于清热燥湿,适于一切湿热症;四妙丸偏于利湿除痹,是治疗湿热痿痹证的主要方剂,应用于各种湿热浸淫偏虚疾患。     

交泰丸中肉桂对黄连小檗碱在大鼠体内药动学的影响

目的 考察肉桂挥发油和水提液对黄连小檗碱在大鼠体内药动学的影响.方法 将20只大鼠随机分为4组,分别灌服黄连提取物、黄连提取物加肉桂总提物、黄连提取物加肉桂挥发油、黄连提取物加肉桂水提液,采用HPLC测定大鼠血浆中小檗碱的质量浓度.结果 黄连配伍肉桂总提物后小檗碱的Cmax和AUC均明显增大,达蜂时间提前;肉桂水提液对黄连小檗碱的药动学参数影响不显著,而肉桂挥发油使小檗碱的Cmax和AUC显著增大,但增加的幅度小于肉桂总提物.结论 交泰丸中黄连、肉桂配伍,肉桂能提高黄连小檗碱的的生物利用度,其中肉桂挥发油是小檗碱药动学参数变化的影响因素之一.     

何顺华新用四妙丸经验

何顺华系樟树中医院主任中医师 ,第二批“江西省名中医” ,临证三十余年 ,学验俱丰。临床审疾多注重辨证与辨病相结合 ,谨守病机 ,圆机灵活 ;遣方用药 ,不拘一格。余在实习期间 ,有幸侍诊左右 ,翻阅何师病案 ,每多获益 ,其中何师对四妙丸多有阐发。四妙丸出自清·张秉成所撰《成方便读》 ,脱胎于元·朱丹溪所撰《丹溪心法》中的二妙丸及明·虞抟所撰《医学正传》中的三妙丸 ,由苍术、黄柏、川牛膝、薏苡仁四味药组成 ,药少而精专。功效为清热燥湿 ,通利筋脉 ,用治于湿热所致诸症。今何师对其加味后用于盗汗、阳痿、崩漏、痛风等症 ,疗效显著…     

液-质联用研究黄连生物碱类成分在大鼠体内的组织分布

目的:建立UPLC-MS同时测定大鼠组织中黄连生物碱类成分的分析方法,研究黄连生物碱类成分在大鼠体内的组织分布特征。方法:以延胡索乙素为内标,组织样品经乙酸乙酯萃取后进行UPLC-MS分析。色谱柱为Waters BEHC18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.2%的甲酸水-乙腈,梯度洗脱,流速为0.2 m L/min。正离子检测模式,选择的检测离子质荷比分别为:降氧化北美次碱m/z 191.904/118.973,8-氧黄连碱m/z 335.877/308.072,盐酸巴马汀m/z 351.94/294.554,表小檗碱m/z 335.94/262.112,非洲防己碱m/z 337.94/322.422,黄连碱m/z 319.904/292.037,延胡索乙素m/z 355.977/192.036,盐酸小檗碱m/z 335.94/320.036,氧化小檗碱m/z351.94/321.995,药根碱m/z 337.94/322.949。结果:在大鼠不同组织中,9个生物碱成分在测定的线性范围内线性关系良好(r0.9901);方法的精密度RSD小于15%,准确度和稳定性均在±15%以内,提取回收率在72.1%~82.9%之间,RSD≤15%。黄连碱、表小檗碱、小檗碱、药根碱、非洲防己碱、巴马汀成分在大鼠体内分布广泛,降氧化北美次碱、8-氧黄连碱、氧化小檗碱仅在肝及心/肾中检测到。结论:本实验建立的方法简便易行、准确可靠,应用于检测大鼠体内生物碱类成分的组织分布研究是可行的。     

戊己丸不同配伍对小檗碱、巴马汀吸收的影响

目的:应用大鼠原位循环肠肝灌流模型,考察戊己丸不同配伍对戊己丸中黄连代表成分小檗碱、巴马汀的吸收的影响。方法:采用L9(34)正交设计得到戊己丸12个配伍方(3个单味药和9个配伍方),经十二指肠给药,于不同时间(0,1,5,10,15,30,60,90,120 min)采集灌流液,LC-MS检测小檗碱、巴马汀的含量,计算其吸收分数,吸收速率常数(Ka)。结果:吴茱萸与小檗碱、巴马汀的吸收分数,吸收速率常数(Ka)之间呈负相关,并得到了促进小檗碱、巴马汀吸收的最优配伍比例黄连-吴茱萸-白芍3∶1∶3。结论:吴茱萸抑制黄连代表成分的吸收,而且黄连、吴茱萸、白芍配伍比例不同,小檗碱、巴马汀的吸收量、吸收速度也有较大差异。