脂肪组织分泌物中蛋白浓度对诱导脂肪干细胞成脂的影响

目的 观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响。 方法 培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定。含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7 d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响。 结果 培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3 d时均能诱导ADSCs成脂,第7 d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500 μg/mL组较100 μg/mL、250 μg/mL组成脂率高(P均<0.05),细胞培养2 d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均>0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响。 结论 无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关。     

两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞向脂肪细胞分化的比较

目的比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法提取3例临床患者的脂肪干细胞(h ADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(r ADSCs),将h ADSCs、r ADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导I组和II组,分别使用普通培养基、成脂诱导培养基I和II,培养10 d后以油红O染色,镜下观察及检测490 nm吸光度值(A490),比较脂滴形成情况。结果未诱导的h ADSCs和r ADSCs均呈成纤维细胞样生长,成脂诱导培养3 d后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色,h ADSCs和r ADSCs的成脂诱导II组形成的脂滴均明显大于诱导I组,统计学分析显示h ADSCs的成脂诱导II组测得的A490明显高于诱导I组(P<0.01);而两组的r ADSCs的A490无明显差异(P>0.05)。结论 h ADSCs和r ADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导II组优于成脂诱导I组。     

飞机辅助动力装置引气特性计算方法

目的 观察胎牛血清(FBS)对体外培养获取的脂肪组织分泌物(ATE)诱导大鼠脂肪干细胞(ADSCs)成脂能力有无影响,并探讨ATE中不同蛋白浓度对诱导大鼠ADSCs成脂、细胞增殖和迁移能力的影响.方法 培养大鼠ADSCs并传代,对ADSCs成骨和成神经诱导,采用茜素红染色和神经丝蛋白(NF)免疫荧光检测鉴定.含有FBS和无FBS的培养基对脂肪组织块进行培养并收集ATE,对第4代ADSCs进行诱导,第7d时油红染色鉴定并计算成脂率;收集无FBS培养基获取的ATE,分为不同蛋白质量浓度组(100 μg/mL、250 μg/mL、500μg/mL组),对第4代ADSCs进行成脂诱导,观察各组成脂率;并观察不同蛋白质量浓度组对ADSCs细胞增殖和迁移的影响.结果 培养的ADSCs成骨和成神经诱导后茜素红染色和NF免疫荧光染色阳性;获取ATE时添加或不添加FBS,在第3d时均能诱导ADSCs成脂,第7d时的成脂率差异无统计学意义;ATE 500 μg/mL组较100 μg/mL、250 μg/mL组成脂率高(P均＜0.05),细胞培养2d后,3个不同蛋白质量浓度组均抑制细胞增殖,不同蛋白质量浓度间细胞抑制率差异无统计学意义(P均＞0.05);ATE中不同蛋白质量浓度对细胞的迁移无影响.结论 无FBS的培养基获取的ATE,短期内对ADSCs成脂能力没有影响;ATE蛋白浓度与ADSCs成脂率有关.     

三种浓度瘦素对大鼠自体颗粒脂肪移植的研究

目的实验研究三种浓度瘦素对大鼠颗粒脂肪移植30天后成活情况的效果。方法用生理盐水及l0ng/mL、30ng/mL、50ng/mL三种浓度瘦素处理大鼠自体颗粒脂肪,在30天后取出移植组织称重,行HE染色,观察移植组织成活情况。实验数据使用SPSS18.0统计软件进行处理。结果移植组织重量维持率在移植30天后,NS处理组为45%;l0ng/mL瘦素组为67.5%;30ng/mL瘦素组为75%;50ng/mL瘦素组为77.5%。除30ng/mL瘦素组与50ng/mL瘦素组间差异无显著性意义外,其余各组间重量维持率相比,差异有显著性意义(P0.05)。用瘦素处理的脂肪组织成活较好。结论在0~50ng/mL范围内,增加瘦素的浓度能提高大鼠自体颗粒脂肪移植组织的移植成活率。但瘦素浓度大于30ng/mL后对移植脂肪成活影响可能减弱。     

小鼠、大鼠、食蟹猴与人的脂肪干细胞分离培养方法和生物学特性的比较分析

目的比较分析实验动物脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)与人脂肪间充质干细胞的分离培养方法和生物学特性的差异,为自体脂肪干细胞移植治疗人类疾病的临床前研究提供临床前的实验数据和方法。方法将临床患者、食蟹猴、C57小鼠和SD大鼠的皮下脂肪组织进行分离培养后得到人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)、食蟹猴脂肪间充质干细胞(cynomolgus monkey adipose-derived mesenchymal stem cells,c ADSCs)、小鼠脂肪间充质干细胞(mouse adipose-derived mesenchymal stem cells,m ADSCs)和大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose-derived mesenchymal stem cells,r ADSCs);采用流式细胞术鉴定ADSCs表面标记物;细胞成脂、成骨诱导分化,于诱导后21 d和28 d固定染色,鉴定ADSCs的成脂成骨分化能力。结果 h ADSCs、c ADSCs、m ADSCs和r ADSCs的分离培养方法类似,贴壁培养后均呈成纤维细胞样生长;流式检测显示,不同物种ADSCs间充质干细胞表面标记物CD90、CD29为阳性,少量表达造血干细胞标记物CD34,血管内皮细胞标记物CD31为阴性。成脂和成骨分化能力检测显示,h ADSCs、c ADSCs、m ADSCs和r ADSCs和均具有成脂成骨分化能力,但其成脂成骨分化的时间略有差异。结论实验动物ADSCs与h ADSCs采用相同的分离培养方法,有类似的表面标记物表达及成脂成骨分化潜能,生物学特性具有一致性,是自体脂肪干细胞移植临床前研究的良好模型。     

兔不同部位脂肪间充质干细胞成骨能力的差异

目的观察兔不同部位来源的脂肪间充质干细胞（ADSCs）分化成骨的能力。方法分别从一只新西兰兔的腹股沟、腹膜后、颈背部取出脂肪组织并提取脂肪间充质干细胞,体外培养传至第5代,加入诱导剂分别进行成骨诱导,不加入诱导剂的为对照组。观察通过钙钴染色、茜素红染色、碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力。结果经钙钴染色及茜素红染色后,诱导组大部分细胞呈阳性反应,以腹股沟部脂肪间充质干细胞的结节体积最大,对照组未见明显阳性细胞。细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性检测表明诱导组比对照组ALP活性明显升高（P〈0.05）;腹股沟部脂肪间充质干细胞ALP活性较颈背部及腹膜后高,差异有统计学意义（P〈0.05）;颈背部与腹膜后相比较无明显差异（P〉0.05）。结论兔ADSCs经过体外诱导后,具有成骨能力;腹股沟部脂肪可作为骨组织工程种子细胞来源的较佳取材部位。     

大鼠脂肪干细胞冷冻复苏后的生物学特性及成骨细胞分化潜能的研究

目的 研究冻存复苏后大鼠脂肪干细胞（ADSCs）的生物学特性及其体外诱导成骨细胞分化的潜能。方法 冷冻保存6 个月的大鼠ADSCs 复苏后传代培养,显微镜下观察细胞形态;CCK8 检测细胞增殖,流式细胞仪检测CD44,CD105。第3 代细胞诱导成骨培养2 ～ 3 周后碱性磷酸酶（ALP）和茜素红染色,观察成骨情况。结果 复苏后ADSCs 形态类似成纤维细胞,增殖迅速。成骨诱导培养后表现出成骨细胞特性,ALP 染色活性增加,茜素红染色出现矿化结节。结论 冷冻保存复苏后的ADSCs 细胞生物性能稳定,定向诱导后可分化为 成骨细胞,可作为骨组织工程的种子细胞。     

棕色脂肪干细胞与白色脂肪干细胞移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的对比研究棕色脂肪干细胞（BADSCs）与白色脂肪干细胞（ADSCs）治疗急性心肌梗死大鼠的效果。方法采用酶消化法分别分离大鼠腹股沟脂肪组织及肩胛骨下脂肪组织,获得ADSCs与BADSCs,并进行流式分析与多谱系分化鉴定。30只雄性SD大鼠随机分为PBS对照组、ADSCs移植组及BADSCs移植组,建立急性心肌梗死模型,将各组对应细胞直接注入大鼠心肌梗死边缘区。移植后4周进行心功能检测并利用组织学检测移植细胞的体内分化与血管化作用。结果术后4周,与PBS对照组相比,ADSCs以及BADSCs移植组大鼠心功能均显著提高（P〈0.05）,且纤维化程度显著减弱（P〈0.05）。免疫荧光结果表明,移植的BADSCs成心肌分化数量显著高于ADSCs。免疫组化结果显示,ADSCs移植组以及BADSCs移植组大鼠心肌梗死区血管密度均较PBS对照组显著增加（P〈0.05）,ADSCs移植组血管密度显著高于BADSCs移植组（P〈0.05）。结论不同来源脂肪干细胞移植均具有改善心肌梗死患者心功能的作用,虽然BADSCs体内促血管化作用不如ADSCs,但其具有明显的心肌分化能力,可有效改善心脏功能。     

脂肪来源干细胞体外成骨诱导和成脂诱导分化

目的 探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal ceHs,ADSCs)的多向分化潜能.方法 取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养.分别加入成骨诱导剂和成脂诱导培养.经过倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,并通过Gomori改良钙钴法、yon Kossa染色和油红O染色对其成骨细胞和脂肪细胞表型进行鉴定,进一步比较细胞的转化率.结果 ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.Gomori改良钙钴法染色显示其细胞质内富含碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)颗粒,诱导后15 d和19 d,ALP阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%,von Kossa染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节;倒置显微镜,成脂诱导3、7、14 d后脂肪细胞转化率分别为(22.3±12.5)%、(49.6±7.1)%和(89.4±9.3)%.油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴,14 d油红O染色阳性率高达(92.5±9.1)%.结论 ADSCs经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.     

2型糖尿病患者脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力的实验研究

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者与健康者脂肪间充质干细胞(ADSCs)成脂肪分化能力.方法 取T2DM患者与健康者脂肪组织,分离培养出ADSCs.取第3代细胞接种,比较两组细胞细胞表型及生长速度的差异.加入成脂肪诱导液,观察两组细胞成脂肪分化情况,于第14天加入油红O对细胞进行染色并观察,用异丙醇对油红O进行萃取并比较两组细胞吸光度值,通过实时荧光定量(PCR)法比较两组细胞成脂肪分化14 d时PPAR-γ、C/EBP-α和C/EBP-β的表达水平.结果 T2DM患者和健康者ADSCs在细胞表型及生长速度方面比较差异无统计学意义(P＞0.05),成脂肪诱导分化14 d时T2DM患者ADSCs油红O吸光度值明显高于健康者ADSCs,T2DM患者ADSCs PPAR-γ、C/EBP-a、C/EBP-β表达水平明显高于健康者ADSCs.结论 T2DM患者ADSCs成脂肪分化能力明显高于健康者,其可能是T2DM患者容易并发肥胖的原因之一.     

人、兔、大鼠脂肪基质细胞的生物学性状对比

目的：探讨在同一质量控制条件下,人、兔、大鼠来源脂肪基质细胞(adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs)的体外生物学性状的异同。方法：分离培养人吸脂来源ADSCs、兔及大鼠腹股沟皮下脂肪垫来源ADSCs,体外观察3种细胞原代和传代细胞的形态及生长情况,MTT法检测细胞增殖情况。以相同密度将第2代细胞接种于24孔板,并诱导其成骨及成脂向分化。成骨诱导培养基包含100 nmol/L地塞米松、50 μmol/L抗坏血酸二磷酸酯和10 mmol/L β-甘油磷酸钠,在成骨向诱导后的第3、7、14、21天行碱性磷酸酶染色,第14、28天行茜素红染色,定量分析3种细胞体外钙沉积能力。成脂向诱导培养基包含1 μmol/L地塞米松、10 μmol/L胰岛素、200 μmol/L 吲哚美辛和0.5 mmol/L异丁基黄嘌呤,在成脂向诱导后的第7、14天行油红O染色检测细胞的成脂分化状况。结果：3种来源的脂肪均可分离培养出“成纤维细胞样”细胞,均能成脂向分化和成骨向分化,但兔ADSCs在成骨向分化时碱性磷酸酶染色呈弱阳性,无明显钙结节形成,与其他两种细胞比较,兔ADSCs的成骨向分化能力较差。结论：与人来源和大鼠来源ADSCs比较,兔皮下脂肪来源ADSCs的体外成骨能力较差,将其用于体内成骨研究时需慎重。     

小鼠脂肪源性干细胞的成骨分化研究

目的 体外分离培养和鉴定小鼠脂肪源性干细胞,向成骨方向分化,为后续的实验选取合适的种子细胞奠定基础.方法 从白色脂肪组织中分离培养脂肪源性干细胞,应用流式细胞仪分析其表面的标记.分别通过碱性磷酸酶、茜素红和油红-O染色方法染色方法鉴定向成骨和成脂方向分化.结果 脂肪源性干细胞高表达表面标记CD29、CD44,并且能够向成骨和成脂方向分化.结论 利用胶原酶消化法,在小鼠脂肪组织中成功分离、培养出脂肪源性干细胞,获得的细胞具有多向分化潜能,为后期组织工程技术修复骨组织,提供了坚实的实验基础.     

Neurogenic differentiation of murine adipose derived stem cells transfected with EGFP <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Some studies indicate that adipose derived stem cells(ADSCs)can differentiate into adipogenic,chondrogenic,myogenic,and osteogenic cells in vitro.However,whether ADSCs can be induced to differentiate into neural cells in vitro has not been clearly demonstrated.In this study,the ADSCs isolated from the murine adipose tissue were cultured and transfected with the EGFP gene,and then the cells were induced for neural differentiation.The morphology of those ADSCs began to change within two days which developed i...     

维甲酸对脂肪源干细胞中生殖标记表达的影响

目的探索脂肪源干细胞(ADSCs)在维甲酸(RA)诱导下是否表达原始生殖细胞标记碱性磷酸酶(ALP)及生殖标记基因vasa。方法分离培养2个月龄SD雌性大鼠ADSCs,传至第3代进行成脂、成骨诱导和表面标记鉴定。将第3代ADSCs分别用10-5、10-6、10-7mol/L RA诱导7 d和14 d,采用ALP检测试剂盒检测各组ALP的活性水平。用RT-PCR方法检测10-5mol/L RA组Vasa mRNA表达。结果将第3代ADSCs分别用10-5、10-6、10-7mol/L RA诱导7 d的D520 nm值分别为0.59±0.04,0.27±0.07,0.15±0.03,对照组为0.07±0.01,诱导14 d的OD值分别为0.42±0.02,0.34±0.01,0.19±0.02,对照组为0.07±0.01,说明RA能显著性促进ADSCs碱性磷酸酶的表达(P<0.01)。第3代ADSCs用10-5mol/L RA诱导7 d Vasa mRNA的表达为阴性。结论第3代ADSCs在维甲酸诱导下能够表达原始生殖细胞标记碱性磷酸酶,但用10-5mol/L RA诱导7 d不能表达生殖标记基因Vasa。     

高成脂能力脂肪干细胞的提纯

目的 提纯具备高成脂能力的脂肪干细胞应用于脂肪组织工程的种子细胞,以提高组织工程化脂肪的构建效率.方法 采用CD54-PE免疫磁珠分选法分别分选脂肪组织新鲜分离的间质血管碎片（SVF）及培养后脂肪干细胞（ASCs）,同时采用流式细胞检测分选前、后细胞CD54阳性表达率 并分别进行成脂、成骨诱导,并对诱导结果 进行比较.结果 细胞CD54的表达率随着传代次数的增加而降低 用CD54-PE免疫磁珠分选新鲜分离的SVF及经过培养后的ASCs,CD54的表达率在两种细胞群体中均达到90%以上.培养数代后,从培养后ASCs分离出的细胞CD54表达率维持高水平,从SVF分离的细胞及ASCs CD54表达为阴性.CD54阳性细胞成脂分化率明显高于其余两种细胞,而ASCs成骨能力则在三种细胞中最佳.结论 CD54是高成脂系干细胞特异表达的表面分子之一,从ASCs分离CD54阳性细胞可作为纯化高成脂干细胞系的方法 之一.     

年龄因素对大鼠脂肪干细胞成骨诱导分化能力的影响

目的探讨年龄因素对脂肪干细胞成骨分化能力的影响。方法通过密度梯度离心法分离不同年龄段ADSCs进行培养及传代,观察细胞生长情况,细胞培养至第3代进行诱导分化,各年龄组细胞均在成骨诱导分化后进行检测。观察其形态变化、细胞凋亡率、碱性磷酸酶活性及钙离子浓度测定。结果体外培养的ADSCs呈梭形,诱导条件下,各年龄组细胞形态由梭形变为立方形、多角形;经检测,随年龄的增长细胞的凋亡率在不断增大,幼年组细胞碱性磷酸酶活性较老年组高,钙离子浓度随年龄增加而降低。结论ADSCs成骨分化能力随着年龄的增加而降低。     

人体脂肪干细胞培养及成骨诱导分化

目的 通过成人脂肪体外分离培养脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）研究其生理特性及在特定培养条件下向成骨分化,探讨脂肪源性干细胞作为骨组织工程的种子细胞的前景.方法 从成人脂肪中利用胶原酶消化法分离并体外培养干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标记物,CCK8检测细胞活性,P3代脂肪干细胞通过成骨诱导液诱导向骨细胞分化,BCIP/NBT比色法染色检测碱性磷酸酶（AKP）,茜素红染色检测钙结节形成,RT-PCR检测碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OP）表达变化.结果 成人脂肪间质来源的ADSCs,能稳定传代,增殖能力旺盛;流式细胞检测证实其特异表达相关干细胞表面标记物;成骨诱导后表现出呈典型的成骨细胞形态;ALP染色阳性,茜素红染色阳性,诱导培养0、3、7、14、21、28天后RT-PCR定量检测证实细胞中ALP、OP阳性表达.结论 成人脂肪中可分离得到ADSCs,其稳定表达特异性的表面抗原,并且经过相应诱导培养后可向骨细胞分化,阳性表达OP、ALP,可作为优良的骨组织工程的种子细胞来源.     

糖尿病患者脂肪干细胞（ADSCs）的分离、培养及鉴定研究

目的 建立糖尿病患者ADSCs的分离、培养流程,并检测其生物学标志物与健康人来源ADSCs的差异.方法 取健康人和糖尿病患者脂肪组织,按健康人ADSCs的分离培养流程进行两组细胞的分离、培养;取P3代ADSCs,分别用流式细胞仪检测两组细胞表面标志物CD29、CD44、CD105的表达.结果 糖尿病患者脂肪组织采取和正常ADSCs类似的分离培养流程可以获得呈典型形态的ADSCs,流式细胞仪检测实验组和对照组P3代ADSCs CD29、CD44、CD105均呈阳性表达.结论 成功建立了糖尿病患者来源的ADSCs分离和培养流程,初步证实其具有正常人来源ADSCs的生物学标志物.     

脂肪干细胞的研究进展

脂肪源性间充质干细胞（ADSCs）是从脂肪组织中分离得到的一种成体干细胞,简称脂肪干细胞,它和骨髓间充质干细胞一样,具有自我更新和多向分化潜能,在体外各种诱导条件下可分化为成骨、软骨、脂肪、肌肉、神经、肝和内皮等细胞。脂肪组织在体内含量多、获得容易、创伤小,且ADSCs具有数量多、增殖能力强、可以自体移植等优势,有望成为组织工程理想的种子细胞,在基因治疗、细胞移植等方面具有广泛的应用前景。