“补肾活血”针刺法对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响

目的 运用蛋白质组学技术观察“补肾活血”针刺法对SAMP8小鼠海马蛋白质表达的影响及探讨其治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制.方法 将5月龄SAMP8 20只随机分为针刺治疗组(n=10)和模型空白对照组(n=10),针刺治疗组予以“补肾活血”针刺法干预,取穴百会、肾腧、血海、膈腧;模型空白对照组未予特殊处理.干预4 w后,取各组小鼠海马组织,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分别分离治疗组和对照组SAMP8海马区组织总蛋白,经胶体考马斯亮蓝染色,利用ImageScanner图像扫描仪及ImageMaster双向凝胶电泳软件对图像进行扫描分析,得到差异蛋白质点,通过质谱分析得到相应肽质量指纹图谱,经蛋白质数据库查询,鉴定差异蛋白质点.结果 针刺治疗组与模型对照组存在13个差异点,初步鉴定了浮舰蛋白1(Flotillin-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑红蛋白(NGb)、α-烯醇酶(α-enolase)等9个差异蛋白质,其中6个表达上调,3个下调;这些蛋白的功能涉及Aβ代谢的调节、氧化应激的调节、神经炎症的调节以及细胞骨架的修复等方面.结论 “补肾活血”针刺法可调节SAMP8海马组织的多种蛋白质表达,提示其具有多靶点治疗的作用,可能通过调节Aβ的代谢、抗氧化应激、抑制神经反应、修复细胞骨架等途径来实现其治疗AD的作用.     

健脑益智汤对拟血管性痴呆大鼠学习记忆的影响

目的 观察健脑益智汤对拟血管性痴(VaD)大鼠的治疗作用,并探讨其机制.方法 采用改进的双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)建立VaD大鼠模型,灌胃给药,用Morris水迷宫法评价健脑益智汤对VaD模型大鼠学习记忆功能的影响,并用免疫组化法检测海马CAI区胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达,比较各组结果 之间的差异.结果 (10.6～42.4) g/kg健脑益智汤可以明显改善大鼠的学习记忆功能,健脑益智汤治疗组大鼠海马CAI区神经细胞ChAT的阳性表达明显高于模型组.结论 健脑益智汤对拟VaD大鼠学习记忆功能有一定的改善作用,其机制可能与增强拟VaD大鼠海马CAI区神经细胞ChAT表达有关.     

小四五颗粒对糖尿病肾病大鼠血浆蛋白质图谱的影响

目的：探讨小四五颗粒对糖尿病肾病（ DN）大鼠血浆蛋白质图谱的影响。方法将24只大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组各8只,正常对照组不处理,模型组和治疗组采用链脲佐菌素（ STZ ）诱导的方法制备DN大鼠模型,造模成功后,治疗组给予小四五颗粒灌胃,模型组与正常对照组给予等体积生理盐水灌胃。4周后采用双向凝胶电泳技术分离各组的血浆蛋白,银染后对凝胶图像进行差异表达分析。结果与正常对照组相比,模型组血浆蛋白质银染双向凝胶电泳图谱中高表达的蛋白质斑点54个,低表达的蛋白质斑点19个;小四五颗粒治疗组上述差异表达的蛋白质斑点有16个较模型组明显恢复。结论小四五颗粒治疗组16个差异表达的蛋白质斑点可能与DN的发生发展密切相关。     

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马CA1区神经元细胞凋亡的影响

目的 研究金属硫蛋白3(MT3)对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马CA1区神经元细胞凋亡的影响及其机制.方法 将7月龄SAMP8小鼠随机分成6组,分为痴呆组、3种浓度的MT3组、MT1组、空白对照组.快速老化小鼠对照(SAMR1)小鼠为正常对照组.连续腹腔注射28 d后灌注取脑,进行海马CA1区原位末端标记(Tunel)试剂盒和免疫组化(SP)试剂盒染色.结果 痴呆组海马CA区神经元细胞凋亡指数明显高于正常对照组.高浓度MT3组凋亡指数最低,Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达最低(P＜0.01,P＜0.05).MT3组对Bax蛋白表达的抑制作用强于MT1对照组,而二组对Bcl-2蛋白表达的差异不显著.结论 SAMP8小鼠海马结构存在大量神经元细胞凋亡,MT3通过减少Bax表达和增加Bcl-2表达,减少细胞凋亡,并有浓度依赖关系;且作用强于MT1.     

快速老化小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及APP17肽的影响

目的　观察快速老化小鼠SAMP10 (senescenceacceleratedmouse / prone 10 )海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及淀粉样前体蛋白 (APP) 17肽对其表达的影响。　方法　 4月龄的SAMP10小鼠 18只被随机分为模型组和APP17肽治疗组 ,正常对照组采用 9只同月龄的抗快速老化小鼠SAMR1。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽 ,每只每次 0 3 4 μg ,每周 3次 ;模型组和正常对照组给予等量的生理盐水 ;2 8周后成模。然后进行免疫组织化学染色 ,观察各组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的表达。　结果　与正常对照组比较 ,模型组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白TrkA、Akt /PKB和bcl 2阳性染色细胞数分别减少 6 3 %、5 0 %和4 5 %(P <0 0 1) ,经APP17肽治疗后上述各种蛋白的表达明显上调 (P <0 0 5 ) ;而神经生长因子(NGF)和抗cAMP应答元件结合蛋白 (CREB)的表达无明显差异 (P >0 0 5 )。　结论　SAMP10小鼠海马脑区存在神经细胞存活信号转导通路的障碍 ,此改变可能是导致海马神经细胞变性死亡的重要机制 ;而APP17肽能激活这一通路 ,部分纠正这些蛋白的异常表达。     

MTH2蛋白在快速老化P8小鼠海马中表达的增龄性变化

目的 观察8氧鸟嘌呤脱氧核苷三磷酸酶同源蛋白2(MTH2)在快速老化P8小鼠(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8增龄性变化的关系.方法 该实验选用1、4、8、12月龄的SAMP8及同龄的抗快速老化R1小鼠(SAMRl)作为实验对象,每组8只,用免疫组化和免疫印迹法分别检测海马中MTH2蛋白的表达.结果 免疫组化结果显示,MTH2主要在SAMP8神经元胞浆内表达;海马不同区域均有表达,尤以CA1和CA3区表达最多.定量结果显示,SAMR1海马各区域MTH2的表达随增龄无显著性改变;而在SAMP8MTH2的表达随月龄增加而下降,8月龄海马CAl区的吸光度值(A值)为0.0473、CA3区为0.0510,显著低于4月龄海马CA1区的0.0619、CA3区的0.0680;12月龄海马CA1区的A值为0.0369、CA3区为0.0465,显著低于8月龄;8月和12月龄A值SAMP8分别显著低于同龄的SAMR1(P＜0.05).免疫印迹结果显示,4～12月龄SAMP8海马内MTH2表达的灰度值(grey level)分别为0.529、0.313、0.032,显著低于同龄SAMR1(P＜0.05).结论 MTH2蛋白的表达量在SAMP8随增龄而下降,8月龄和12月龄SAMP8的MTH2蛋白表达量与同龄对照组比较差异有统计学意义,提示MTH2蛋白表达量的减少与SAMP8的快速老化相关.     

糖尿病大鼠海马超微结构及蛋白质组学研究

目的 研究早期糖尿病大鼠海马超微结构及蛋白质表达谱变化,探寻糖尿病对中枢神经系统早期损害可能的机制.方法 将15只6～8周龄、体重200～250g雄性sD大鼠按随机数字表法分为对照组及糖尿病组.腹腔注射链脲佐菌素(STZ)55mg/kg制备糖尿病模型,5周后用透射电镜观察海马超微结构,采用双向凝胶电泳技术分离海马总蛋白,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.结果 超微病理学观察结果:成模5周时糖尿病组海马神经元固缩,毛细血管管周足突水肿明显;对照组大鼠神经元、毛细血管未见明显异常改变.蛋白质组学研究结果:建立早期糖尿病大鼠海马蛋白质的双向凝胶电泳图谱;质谱鉴定8个差异表达大于2倍的蛋白质,其中线粒体细胞色素b-cl复合物亚型、14-3-3蛋白β/α、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、鸟苷酸结合蛋白g(0)α亚基表达上调,线粒体ATP合成酶d亚基、线粒体硫氧还蛋白依赖性过氧化物还原酶、内质网蛋白(ERP29)表达下调,内吞蛋白只在对照组表达.结论 早期糖尿病大鼠海马已出现病理改变,这种改变可能与氧化应激损伤导致能量代谢异常有关,与老化及神经变性疾病相关的蛋白质可能参与了糖尿病中枢神经系统损害的发病.     

芹黄素对SAMP8小鼠学习记忆及突触可塑性的影响

目的探讨芹黄素对快速老化SAMP8小鼠学习记忆能力及突触囊泡蛋白(Syn)及生长相关蛋白43(GAP43)mRNA及蛋白表达的影响。方法 6月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、芹黄素10、20、40 mg/kg剂量组,同龄SAMP1小鼠作为对照组,用Morris水迷宫训练测试其空间学习能力和记忆能力;用Western印迹及RT-PCR方法测定海马区Syn及GAP43蛋白及mRNA表达。结果芹黄素各剂量组的平均逃避潜伏期均缩短,穿越平台区次数增加,在目标象限的停留时间延长(与SAMP8模型组相比,P0.05),海马区Syn、GAP43蛋白及mRNA表达均较模型组增加(P0.05)。结论芹黄素可能通过促进海马神经突触Syn及GAP43的表达,提高突触修复及再生能力,改善小鼠的学习记忆。     

HBV相关性肝细胞癌及肝硬化患者外周血单个核细胞质谱分析

目的:建立HBV相关性肝细胞癌(HCC)及肝硬化(LC)患者外周血单个核细胞(PBMC)的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离HBV相关性HCC(n=16)及LC患者(n=12)PBMC的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:得到了分辨率较高、重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,HBV相关性HCC及LC患者PBMC凝胶的平均蛋白质点数分别为1186±43及1013±41;组内的平均匹配率分别为91.6%,90.2%.对27个差异蛋白质点进行了质谱分析,鉴定出16个蛋白质,在HBV相关性HCC患者PBMC中表达明显增强的有热休克蛋白质(HSP)27、ras癌基因家族(RAB14)、肌动蛋白、α1-抗胰蛋白及RNA结合蛋白调节亚基等13个蛋白点;而PDX6、HSPA8及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在HCC患者PBMC中低表达.这些差异蛋白质点包括蛋白质合成与分解、分子伴侣、解毒和DAN修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质六类.结论:建立了分辨率高且重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了一些与HBV相关性HCC癌变相关的差异表达的蛋白质.     

益肾化浊方对SAMP8小鼠海马β淀粉样蛋白和磷酸化tau蛋白表达及肝肾功能的影响

目的观察益肾化浊方对快速老化小鼠SAMP8海马β淀粉样蛋白(Aβ)和磷酸化tau(p-tau)蛋白表达及肝肾功能的影响。方法将7月龄SAMP8随机分成SAMP8组、益肾化浊方(YSHZ)组,选择抗快速老化小鼠SAMR1作为对照;益肾化浊方按照6. 24 g/kg灌胃干预,SAMR1组和SAMP8组给予等体积的蒸馏水,每日灌胃1次,持续4 w;治疗后采用免疫组化法检测海马CA1区Aβ和p-tau蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平、肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(Cr)水平、二乙酰-肟法检测血清尿素氮(BUN)水平。结果与SAMR1组比较,SAMP8、YSHZ组Aβ、p-tau表达量、ALT水平显著升高(P0. 05),AST水平显著降低(P0. 05),Cr、BUN水平无显著变化(P0. 05);与SAMP8组比较,YSHZ组Aβ、p-tau表达量显著降低(P0. 05),ALT、AST、Cr、BUN水平无显著变化(P0. 05)。结论YSHZ可降低7月龄SAMP8海马CA1区Aβ和p-tau的表达,从而减轻两者的神经毒性作用,对肝肾功能未出现明显的损伤作用。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.