淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素表达的影响

目的 探讨不同浓度淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素（OPG）表达的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,用四唑盐（MTT）法检测不同浓度淫羊藿苷（0、0.001、0.01、0.1、1 μg/ml）及50μg/ml牙龈卟啉单胞菌超声提取物,不同时间（24、48、72h）作用下人牙周膜细胞的增殖水平.用RT-PCR及Western blot检测48h人牙周膜细胞骨保护素mRNA和蛋白的表达.结果 淫羊藿苷从0.01～1μg/ml对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白的表达有促进作用（P＜0.01）,浓度为0.1μg/ml作用最显著.结论 淫羊藿苷可抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,促进人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达.     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素联合作用对体外骨吸收的影响

目的研究淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素单独及联合作用对体外骨吸收的影响。方法将从新生兔长骨分离的细胞与牙本质磨片共培养,建立体外骨吸收模型,并加入白细胞介素(IL)-1β及淫羊藿苷0.01μg/ml、黄芩苷0.01μg/ml、大黄素10μg/ml或其等比组合进行干预,动态观察并测量吸收陷窝的数量和面积。结果分离的细胞与牙本质片共同培养24 h后,牙本质片上出现少量吸收陷窝。体外共培养10 d,加入IL-1β的阴性对照组的陷窝数量和面积大于空白对照组(P<0.05)。同时加入提取物的各组陷窝数量和面积均小于阴性对照组(P<0.05)。其中,淫羊藿苷组、黄芩苷组和大黄素组3组之间无显著差异(P>0.05),而组合组陷窝数量和面积均小于上述3组(P<0.01)。结论淫羊藿苷0.01μg/ml、黄芩苷0.01μg/ml、大黄素10μg/ml等比组合可抑制IL-1β诱导的骨吸收。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及内毒素作用下IL-6表达的影响

目的初步研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLC)增殖以及在内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)作用下淫羊藿苷对h PDLC白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法组织块法原代培养并鉴定h PDLC,采用MTT方法检测淫羊藿苷(0、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)作用下h PDLC增殖的变化;利用PCR、ELISA方法检测淫羊藿苷对在LPS刺激下的人牙周膜细胞IL-6分泌的情况。结果一定浓度范围下(10-6~10-7mol/L)淫羊藿苷对h PDLC的增殖具有积极作用;在10μg/m L LPS作用下h PDLC的IL-6表达增多、活性增强,加入10-6mol/L淫羊藿苷处理后,对此加强效果有一定的抑制作用。结论在一定浓度范围作用下淫羊藿苷可促进h PDLC的增殖;同时,淫羊藿苷对LPS导致h PDLC的IL-6表达增强有一定的抑制作用。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用

目的：探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGF）产生前列腺素E：（prostaglandin E2,PGE2）的影响。方法：以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度：然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE：的影响。结果：LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率。LPS作用6h后培养上清中PGE,含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE：含量显著低于对照组qo〈o．01）。结论：淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2。     

淫羊藿苷对腺样囊性癌细胞Bcl－2、Bax表达的影响

目的：①探讨淫羊藿苷体外抑制涎腺腺样囊性癌细胞（SACC－M）的最佳浓度和时间点及作用于SACC－M后相关细胞因子Bcl－2、Bax的表达变化。方法：①以不同浓度（0μg／mL、6．25μg／mL、12．5μg／mL、25μg／mL、50μg／mL、100μg／mL、200μg／mL、400μg／mL、800μg／mL）的淫羊藿苷分别作用于SACC－M（24 h、48 h、72 h）,选择淫羊藿苷对高转移SACC－M细胞株的最佳作用浓度和作用时间,通过形态学观察淫羊藿苷对SACC－M细胞形态的改变。②正常对照组中加入同种剂量的药物溶剂,实验组中加入不同浓度的淫羊藿苷处理高转移SACC－M细胞株,免疫组化检测Bcl－2、Bax表达量的变化。结果：①与对照组（0μg／mL）相比较,淫羊藿苷在不同浓度（50、100、200、400、800μg／mL）对SACC－M细胞株的增殖具有抑制作用（P＜0．05）。在同一药物浓度下,从50μg／mL浓度开始,与同浓度24 h淫羊藿苷比较有统计学意义（P＜0．05）,但到了800μg／mL浓度时已经没有时间依赖性（P＞0．05）。当用（50、100、200、400μg／mL）作用于细胞24 h后,显微镜下观察显示ACC－M细胞具有典型的凋亡细胞形态学特征。②淫羊藿苷能呈浓度依赖性下调ACC－M中Bcl－2同时上调Bax蛋白的表达。结论：体外淫羊藿苷可以抑制ACC－M的增殖,其机制可能与下调Bcl－2和上调Bax的表达有关。     

淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLC）增殖及对内毒素（Lipopolysaccha-ride,LPS）干扰下碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的影响。方法：原代培养PDLC,MTT法检测不同浓度（0、10^-5～10^-9mol／L）淫羊藿苷对PDLC增殖的影响;RT—PCR、对硝基苯酚法测定淫羊藿苷对LPS抑制PDLC的ALPmRNA表达和分泌的影响。结果：淫羊藿苷在一定浓度下（10^-6～10^-7mol／L）可促进PDLC增殖;10υg／mLLPS可抑制PDLC的ALP活性;加入10^-6mol／L淫羊藿苷干扰后,对LPS抑制PDLC的ALP有拮抗作用,可提高其mRNA表达和活性。结论：淫羊藿苷在一定浓度时可促进PDLC增殖;可能通过拮抗LPS抑制其ALP的活性。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝(MTT)比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果:作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.     

淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成骨、成脂分化的影响。方法:将淫羊藿苷配制成终浓度为1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L的溶液,以0 mol/L组为空白对照组,分别用于体外培养犬BMSCs。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。然后实验分为淫羊藿苷组和对照组,分别在含或不含成骨、成脂诱导液条件下,行成骨、成脂诱导分化实验,通过茜素红和油红O染色检测各组钙沉积和脂质形成面积。结果:发现淫羊藿苷1×10-6 mol/L组促进犬BMSCs增殖,而1×10-4mol/L组抑制增殖。碱性磷酸酶活性与淫羊藿苷浓度呈剂量依赖性关系。不含成骨、成脂诱导液条件下,各组均几乎未见明显钙沉积和脂质形成;含成骨、成脂诱导液条件下,淫羊藿苷组(1×10-6 mol/L)钙沉积面积高于对照组,脂质形成面积低于对照组。结论:淫羊藿苷能促进犬BMSCs增殖和成骨分化,并抑制其成脂分化。