弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立

目的 探讨乙底酚(己烯雌酚，DES)处理时，弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立条件。方法 采用不同数量(0、200、400、800、1600、3200)复苏的弓形虫速殖子，于不同妊娠期(妊娠第6、8、10天)按种小鼠，并用一定剂量DES处理后，于妊娠第18天处死，观察其流产情况及未流产小鼠的胎仔脑组织弓形虫感染情况。结果妊娠第6天按种速殖子，流产率高，垂直传播率低；妊娠第10天接种时，流产率低，垂直传播率高。流产率和垂直传播率都随着接种速殖子数量的增加而升高。结论 于妊娠第8天接种复苏后的弓形虫速殖子400个／只建立的弓形虫垂直传播的小鼠动物模型，既可以使流产率控制在较低水平，又不会全部发生垂直传播。     

激光照射弓形虫诱导的免疫保护力

本实验采用激光致弱弓形虫速殖子接种ＩＣＲ小鼠腹腔,以期提高小鼠抗弓形虫感染的免疫保护力。结果表明：激光照射能够抑制虫体的繁殖和分裂能力。照射虫体免疫小鼠能诱导产生持续升高的ＩgＧ抗体。免疫鼠经弓形虫ＲＨ株攻击后,其发病和死亡时间延长,表现出部分的免疫力。提示：激光对弓形虫速殖子的作用明显,可望在弓形虫形虫病的治疗和预防中得到应用。     

激光照射对弓形虫活力及免疫原性的作用

目的 观察激光照射对弓形虫活力及免疫原性的影响.方法 分别用经2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5,6.0 W/cm2光通量1 min激光照射的RH株弓形虫速殖子常规腹腔内感染BALB/c小鼠,观察存活小鼠体内弓形虫包囊的形成和抗体效价、弓形虫速殖子的活力及繁殖力.结果 4.5-6.0 W/cm2光通量激光照射后的虫体接种小鼠,小鼠全部存活,并能诱导IgG抗体的产生.此外,该光通量激光照射能使弓形虫的分裂繁殖及包囊形成抑制,活力明显减弱,死亡虫数增加.结论 激光照射能有效抑制弓形虫繁殖和分裂能力,照射后的虫体能有效诱导小鼠体液免疫应答.     

鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子的实验研究

目的用鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子及观察弓形虫速殖子入侵鼠巨噬细胞及在其内繁殖的过程.方法按培养传代细胞的常规方法培养鼠巨噬细胞,将鼠巨噬细胞接种到盖玻片上,用弓形虫RH株速殖子感染巨噬细胞,每隔1.5小时取出盖玻片,经吉氏染色、二甲苯透明后,镜下观察摄片.结果弓形虫速殖子大多在感染后0.5 ～1小时侵入巨噬细胞,10小时后,假包囊形成,20小时后,假包囊破裂,在室温条件下,速殖子可在巨噬细胞中存活20天.结论鼠巨噬细胞可代替小鼠用于弓形虫病的诊断及保种.     

弓形虫速殖子死活快速鉴别的实验研究

目的寻求快速鉴别弓形虫速殖子死活的染色方法。方法用0．1％伊文思蓝、0．4％台盼蓝和0．5％溴酚蓝三种染液分别对死、活弓形虫速殖子进行染色。结果前二种染液均能使死亡弓形虫速殖子在1min内着色,活虫则不着色;后一种染液能使活动弓形虫速殖子在1min内着色,死虫则不着色。结论3种染液染色均可快速鉴别弓形虫速殖子死活。     

弓形虫慢性感染鼠形成包囊的实验研究

目的分别采用弓形虫Fukaya株速殖子和包囊感染小鼠,观察其脑内成囊情况,以期寻求一个稳定、易建立的慢性感染动物模型,为研究弓形虫的致病机理提供一个良好的实验工具.方法用弓形虫Fukaya株速殖子4×104个和包囊5～10个经腹腔感染昆明小鼠,给适量药物使之形成慢性感染,统计小鼠的死亡率、脑内包囊数和成囊率.结果感染弓形虫速殖子组小鼠的死亡率为30%,脑内包囊数约为15个,成囊率为42.9%;感染弓形虫包囊组小鼠的死亡率、脑内包囊数、成囊率分别为0、40个和100%.接种包囊比速殖子小鼠死亡率低,脑内包囊数多,成囊率高.结论接种虫体感染阶段(包囊或速殖子)是影响成囊的重要因素,感染包囊小鼠脑内易成囊.     

红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫作用的研究

目的　比较阿奇霉素、红霉素、磺胺嘧啶、大蒜素体外抗弓形虫的效果。方法　用弓形虫RH株速殖子感染培养的巨噬细胞 ,每一种药物根据预实验设立 2至 3个浓度 ,分别在速殖子侵入细胞前和侵入细胞后用不同浓度的药物处理 ,每隔 1h在倒置显微镜下观察细胞及弓形虫的形态及生长情况 ,9d后取出盖玻片 ,染色透明后 ,镜下观察。再将培养液及培养细胞注入鼠腹腔 ,观察小鼠的发病情况。结果　阿奇霉素的浓度在 2 0 μg/ml时具有抑制虫体生长的作用 ,>40 μg/ml时对巨噬细胞有明显的毒性。红霉素的浓度在 10 0 μg/ml、15 0 μg/ml时可抑制弓形虫的生长与繁殖 ,但不能完全杀死虫体 ,形成假包囊。将假包囊及培养液接种小鼠腹腔 6d后小鼠发病死亡 ,解剖小鼠后 ,可见大量的虫体。没有观察到 10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml的磺胺嘧啶及 2 0 μg/ml、40 μg/ml的大蒜素有抑制弓形虫生长的作用。 结论　阿奇霉素具有明显杀灭速殖子的作用。低浓度的红霉素有利于包囊形成。磺胺嘧啶、大蒜素体外无杀灭速殖子的作用。     

细胞内外弓形虫速殖子的形态观察

目的 观察细胞内（假包囊）、外弓形虫速殖子的形态差异。方法 收集小鼠腹腔内和体外培养中的细胞内、外弓形虫，染色后镜检，观察细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异。结果 假包囊内的速殖子明显大于细胞外的速殖子，结构疏松，近圆形和椭圆形。随着繁殖数量的增加，虫体可排列成弧形及花瓣状。结论 细胞内、外弓形虫速殖子的形态差异较大。     

地塞米松对弓形虫感染小鼠细胞免疫的影响

目的通过测定T淋巴细胞转化率和细胞因子，观察地塞米松对弓形虫感染小鼠细胞免疫功能的影响。方法将小鼠分成正常对照组（不进行特殊处理），感染组（经口感染5×10^4个速殖子／只小鼠）和抑制感染组（在接种前48h开始肌肉注射地塞米松2mg／kg/d，48h后用5×10^4个速殖子／只小鼠经口感染小鼠），处理后0．5、10、15d采血。分别用MTTN、ELISA法测定T淋巴细胞转化率和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4含量。结果抑制感染组T淋巴细胞转化率和细胞因子IFN-γ、IL之含量均低于感染组（P〈0．05）。结论地塞米松有抑制弓形虫感染小鼠细胞免疫功能的作用。     

刚地弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征研究

目的 研究弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征.方法 分别以刚地弓形虫速殖子感染昆明种及Babl/c小鼠,观察小鼠感染发病情况,并用病理组织切片,直接染色或免疫组化法检测小鼠体内弓形虫包囊或抗原.正常对照组小鼠未感染弓形虫.结果 两种小鼠对刚地弓形虫均易感,昆明种小鼠感染刚地弓形虫后2、3 d开始发病,感染后7～10 d死亡,死亡率95.00%;Babl/c小鼠于感染后4、5 d开始发病,呈一过性急性发作,绝大多数小鼠能度过急性期逐步恢复而长期存活,仅少数小鼠死亡,死亡率为10.00%.昆明种小鼠感染后主要表现为肝细胞变性、坏死、大量炎细胞浸润,小肠黏膜坏死脱落,腹腔内可见大量弓形虫速殖子;Babl/c小鼠在急性感染期表现为肝细胞水变性,腹腔内可见弓形虫速殖子,度过急性期后继续存活的小鼠体内虽未见到大量包囊、但在肝、脑等组织中可检出弓形虫抗原.对照组小鼠在实验期间无任何异常.结论 两种小鼠对刚地弓形虫的易感性不同,Babl/c鼠感染弓形虫后经历了急性和慢性感染的转换过程,是研究弓形虫感染与免疫的良好模型.     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过测定弓形虫感染小鼠大蒜素治疗后黏膜部位SIgA含量,研究大蒜素在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗组、感染组和对照组,用5×10~4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗,每天1次,于治疗后第0、2、4、6、8、10、12周断颈处死,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内,治疗组SIgA含量高于对照组和感染组,治疗后4、6、8周差异具有显著性(P0.05)。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠,能提高黏膜(特别是消化道黏膜)SIgA抗体含量,保护机体抵御病原体感染。     

调控宿主细胞自噬对弓形虫在宿主细胞内增殖的影响

目的：研究细胞自噬在弓形虫增殖复制中的作用。方法分别用自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂作用于人胚胎成纤维细胞( HEF),然后将弓形虫( RH株)速殖子悬液分别以虫/细胞2∶1、4∶1、8∶1、16∶1感染HEF细胞,作用1、2、4、8、24、48、96 h。采用吖啶橙( AO)荧光染色和丹酰尸胺( MDC)荧光染色检测HEF细胞自噬情况,采用Giemsa染色检测不同时间点的弓形虫感染复制动力学。结果 AO 和 MDC 荧光染色结果表明自噬抑制剂Bafilomycin A1及自噬诱导剂氯化锂可分别抑制和促进HEF细胞自噬,Giemsa染色结果显示使用自噬诱导剂氯化锂可以促进弓形虫在 HEF细胞内的增殖,使用自噬抑制剂 Ba-filomycin A1可以抑制弓形虫在HEF细胞内的增殖。结论调控宿主细胞自噬可调控弓形虫增殖复制。     

Protective effect of DNA- mediated immunization with a combination of SAG1 and IL- 2 gene adjuvant against infection of Toxoplasma gondii in mice

Objective To characterize the immune response induced by SAG1 encoding plasmid combined with IL- 2 gene adjuvant in mice and to assess the protective effect of this vaccination against toxoplasmosis. Methods Mice were co- injected intramuscularly with plasmid encoding Toxoplasma gondii SAG1 plus murine IL- 2 expression vector at a dose of 100 μg. Booster immunizations were employed 2 more times at 3- week interval. As controls, mice were inoculated with PBS or empty plasmid pcDNA3. Humoral and cellular responses were assayed using ELISA for the determination of Ab, Ab isotype and IFN- γ, as well as IL- 4. To detect the integration and dissemination of DNA in the injected mice, PCR and in situ hybridization were performed. All mice were then infected with highly virulent RH tachyzoites of Toxoplasma gondii intraperitoneally. Results Significant increases in specific IgG levels were observed in mice after immunization three times with SAG1 expression plasmid. With respect to the IgG isotype, co- inoculation of IL- 2 expression plasmid enhanced the level of IgG2a and the production of IFN- γ. Challenging mice by vaccinating with combined plasmids with RH tachyzoites resulted in prolonged survival. Conclusion Humoral and cytokine responses elicited by SAG1 DNA immunization can be modulated by co- inoculation with IL- 2 expression plasmid. The use of DNA vaccine in combination with an appropriate cytokine gene to prevent T. gondii infection warrants further investigation.     

经口感染弓形虫垂直传播小鼠模型的建立

目的建立经口感染弓形虫RH株速殖子垂直传播小鼠模型。方法将54只妊娠0天的BALB/c孕鼠随机分为6组,于妊娠第8天,分别用0,1000,2000,4000,8000,16000个弓形虫速殖子灌胃感染,妊娠第18天处死,记录活胎率,测定母鼠肝、胎盘和胎仔脑组织弓形虫抗原。结果经ELISA检测弓形虫循环抗原证实,孕鼠死亡率与胎盘和胚胎感染率均随感染剂量的增加而升高,而活胎率下降。1000,2000组的胎盘、胚胎未发生感染,4000组的胚胎感染率5.13%,16000组的胚胎感染率20.00%,但孕鼠的健康状况差、死亡率高,均不适宜建立弓形虫垂直传播动物模型。综合分析表明,8000组孕鼠既有较高的存活率,又可保证胎盘和胚胎较高的感染率。结论每只孕鼠灌胃感染8000个速殖子为建立弓形虫垂直传播小鼠模型的适宜剂量。     

复方一枝蒿颗粒体外抗弓形虫RH株速殖子的超微结构观察

目的 探索复方一枝蒿颗粒体外对弓形虫RH株速殖子超微结构的影响。方法 收集弓形虫RH株速殖子感染72 h后的昆明（KM）小鼠腹腔冲洗液,加入复方一枝蒿颗粒水溶液使药物终浓度达到0.8 mg/mL,并以0.04 mg/mL剂量阿奇霉素作为阳性药物对照,同时设立空白对照组。置二氧化碳孵箱作用2 h,分别制备吉瑞氏复合染色涂片和透射电镜样本,比较观察各实验组弓形虫速殖子光镜下形态和透射电镜下超微结构。结果 空白对照组虫体符合弓形虫速殖子超微结构正常形态,而阳性药物对照组和复方一枝蒿颗粒作用组均显示着色较浅的异常形态虫体：虫体肿胀变形,两端钝圆。细胞质着色浅且偶见空泡,个别虫体细胞膜似有断裂缺如,胞膜不完整。透射电镜下可见阳性药物对照组和复方一枝蒿组弓形虫速殖子细胞质疏松并出现大量不规则空泡等异常形态,复方一枝蒿颗粒还可使弓形虫速殖子超微结构发生胞膜断裂、破损,核膜破损,致密颗粒增多等改变。结论 复方一枝蒿颗粒具有损伤弓形虫速殖子超微结构的直接作用。     

孕期弓形虫感染对胎盘的入侵和病理损害的研究

目的探讨孕期弓形虫感染对胎盘的入侵和病理损害情况。方法孕8dBALB/c小鼠经腹腔接种弓形虫速殖子,在孕10、12、14、16和18d剖腹取胎鼠,分离胎盘并精确称重。采用HE染色观察胎盘的病理损害情况,RNA原位杂交检测胎盘组织弓形虫速殖子的动态入侵。结果在孕10、12d,感染组胎盘重量与对照组比较无明显差别。而在孕14、16、18d,感染组的胎盘重量明显低于对照组(P0.01)。随着感染时间的延长,胎盘组织切片可见有大量淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞浸润,绒毛血管减少,显示有炎症表现;滋养层细胞破坏明显,可见凋亡小体形成。感染组小鼠在孕10d未检测到虫体,感染孕12d偶见虫体。孕14、16、18d虫体数目明显增多(P0.01),虫体主要位于滋养层细胞内、细胞间质和血管中,并有假包囊形成。结论孕期弓形虫感染可影响胎盘生长,胎盘出现炎症反应和凋亡等病理损害。虫体可侵入胎盘组织细胞间质和血管中,并侵入滋养层细胞内增殖,跨越胎盘屏障传播给胎儿。     

IL-12和IL-12受体在刚地弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

目的探讨IL-12和IL-12受体（IL-12R）在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将24只C57BL/6孕鼠随机分为感染组（n=12）和对照组（n=12）,感染组小鼠于孕8d每只腹腔注射400个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量无菌PBS,所有孕鼠均于孕14d时安乐死,观察胎盘及胎鼠的发育情况,采用流式细胞仪的方法检测小鼠子宫自然杀伤细胞（uNK）表面的IL^-12受体表达水平的高低,用ELISA的方法检测小鼠胎盘分泌的IL-12细胞因子水平的高低。结果在孕14d感染组小鼠的胎盘出血坏死较多,未感染的对照组小鼠胎盘血供丰富。感染组小鼠的死胎率比对照组小鼠显著增加（P〈0.01）。弓形虫感染组孕鼠子宫自然杀伤细胞表面的IL^-12受体表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）,感染组孕鼠胎盘中的IL-12水平明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论 IL-12水平升高和IL-12受体的高表达在弓形虫感染致不良妊娠结局中发挥重要作用。     

黄芪对急性弓形虫感染小鼠肝脏的影响研究

目的：研究黄芪对10^2速殖子感染小鼠肝脏的影响，探讨黄芪对急性弓形虫感染小鼠的保护作用机制。方法：建立10^2速殖子感染小鼠模型．设黄芪治疗组和对照组。2组小鼠定期分批处死．取血清和肝脏。用荧光定量PCR检测感染后第4．8天小鼠肝脏的虫荷。用赖氏法测定感染后第4、5、6．7天血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平。取感染后第2、4、6、8天肝脏做冷冻切片．黄递酶组织化学染色方法进行iNOS酶组化染色。结果：感染后第4天和第8天肝脏虫荷两组差异无显著性。感染后黄芪组和对照组血清ALT水平持续上升，黄芪组感染后第4天为87．20U（卡门单位），显著高于对照组（34．44U，P〈0．05）；感染后第8天为172．50U．显著低于对照组（225．69U．P〈0．05）。对照组iNOS表达局限于小叶中央，汇管区浅染。结论：黄芪对急性弓形虫感染小鼠的肝脏功能存在双向调节的作用．可能与其诱导iNOS的作用有关。