孔雀菊组织培养快速繁殖研究

孔雀菊（Ａｓｔｅｒｅｒｉｃｏｉｄｕｓ）的花蕾、叶片、茎段（带腋芽）为外植体都可诱导产生新的植株．增殖试验研究，在只含有细胞分裂素（ＢＡ、１～２ｍｇ·Ｌ－１）的增殖培养基中有较高的增殖率，在既含有细胞分裂素，又含有生长素（ＮＡＡ、０．０５～０．１ｍｇ·Ｌ－１）的培养基中增殖率较低，但在后种培养基中产生的苗比前者的健壮．孔雀菊对于生根的要求不严格，在ＭＳ培养基上即可生根，但所需时间较长，而在含一定量的生长素（ＮＡＡ、０．１ｍｇ·Ｌ－１）的生根培养基中植株生根时间较短．本文推荐了可用于生产的经济、实惠的增殖培养基及生根培养基     

拟南芥PIN2介导的生长素极性运输调控植物根向地性

主要观察了拟南芥生长素输出载体PIN2及其介导的极性运输、生长素诱导合成对根尖生长素不对称分布和根向地性反应的影响.结果表明:拟南芥PIN2基因突变、诱导内源生长素IAA及用抑制剂NPA或TIBA抑制生长素极性运输都严重影响了根尖生长素不对称分布的形成,最终抑制植物根向地性反应,暗示PIN2介导的生长素极性运输和生长素不对称分布在根向地性反应中起着关键性调控作用.从这些研究结果可进一步理解生长素调控植物根向地性的分子机理.     

怀地黄离体培养再生植株及其生长调控

本文对怀地黄愈伤组织的诱导、分化和再生植株的生长调控进行了研究．结果表明：（１）６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ（单位下同）＋ＮＡＡ０．１的组合有利于叶片愈伤组织的形成，２，４－Ｄ２＋ＮＡＡ２的组合有利于根茎愈伤组织的形成；（２）诱导愈伤组织产生再生植株的最佳组合为６－ＢＡ１＋ＮＡＡ０．０１；（３）ＰＰ３３３对再生植株的生长调控具有良好的效应，ＰＰ３３３１处理后，再生植株生长健壮，根系发达，叶色浓绿．     

植物生长素生物合成的生物学功能

<正>生长素是调控植物生长发育最重要的植物激素之一。自从1880年达尔文发现生长素以来,植物生长素生物合成、极性运输及其信号转导被广泛深入研究。传统观点认为生长素生物合成主要在幼嫩的叶组织和茎尖分生组织。而最近几年的研究发现,在特定发育信号或环境信号诱导下,植物体的所有组织或器官均能快速有效地合成生长素。生长素合成对植物配子体发生、胚胎发育、器官发生和向性生长等过程中具有重要调控功能,因而成为目前植物生长素研究领域中的     

RNA干扰降低烟草植株中内源生长素水平

PCR扩增利用吲哚乙酰胺水解酶基因(iaaH)全长序列,构建iaaH基因序列正、反向连接的的双元载体,通过农杆菌LBA4404介导,转化携带pTiC58 T-DNA的烟草叶片,获得携带正、反向iaaH序列的转基因植株.ELISA分析生长素的结果表明,转基因植物叶片的内源生长素含量明显降低,仅为pTiC58 T-DNA转化植株的56%,说明转基因烟草中发生iaaH基因转录后沉默,为利用该基因序列启动RNA干扰(RNAi),抑制冠瘿瘤病发生提供了实验依据.     

NACl启动子驱动GFP表达的组织特征及对生长素和赤霉素的反应

将拟南芥中转录因子基因NACl上游调控区1kb克隆到pRD420质粒，构建由NACl启动子驱动绿色荧光蛋白基因（GFP）表达的植物表达载体，并以此载体转化烟草，对阳性转基因植株研究表明，GFP在根部有较高水平的表达．进一步用生长素、生长素拮抗剂NPA和赤霉素处理，荧光强度的变化表明：该调控区受生长素作用的同时也受赤霉素诱导．初步说明NACl基因不仅是一个生长素反应基因，同时可能也是一个赤霉素反应基因．     

对氨基苯甲酸在拟南芥根生长发育中对生长素运输的调控

为探究对氨基苯甲酸(PABA)影响拟南芥(Arabidopsis thaliana)根部生长发育的作用机制,以野生型和DR5∷GUS转基因拟南芥为实验材料,研究了PABA外源处理对根系形态结构和生长素运输的影响.结果表明:200μmol/L PABA可以明显抑制拟南芥幼苗主根生长并促进侧根和根毛的发育.PABA可增强生长素类似物2,4-D对幼苗主根生长的抑制作用和对根毛伸长的促进作用;相反,PABA可在一定程度上减弱生长素运输抑制剂NPA对幼苗主根和根毛生长发育的抑制作用.此外,PABA可诱导拟南芥根尖生长素的积累以及生长素极性运输相关基因PIN1、PIN3和AUX1的表达.综上所述,PABA可调节根部生长素运输和分布,在拟南芥根生长发育过程中起重要作用.     

稀有植物东京桐迁地保护研究

１９８４年始,在广西桂林雁山（中亚热带）酸性土壤上引种生长在广西龙州（北热带）石灰（岩）土壤的东京桐（Ｄｅｕｔｚｉａｎｔｈｕｓｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ）种子和野生幼苗,１９９３年植株平均高４．１４ｍ,平均地径７．１ｃｍ,１９９４年开花结果,采集种子育苗,获１８０多株子代,目前子代生长正常。一年生苗在２℃并有北风时,部分叶脱落;没有北风,０℃以上不会受冻;定植多年的植株在－６℃以上时,部分叶受冻,在－２℃以上时,基本不受冻。在引种地,３月下旬开始萌芽,５月下旬开始现蕾,６月上旬开花,９月中旬果基本成熟落地。１５株三种土壤的盆栽试验初步表明,幼苗对石灰土有一定的依赖性。迁地结果还初步表明,东京桐的适应性较同一分布区类型的蚬木、肥牛树、金丝李强。     

转基因烟草中过量生长素对叶片生长发育的影响

分别构建了ｉａａＭ、ｉａａＭ 和ｉｐｔ共表达植物转化载体,农杆菌介导转化烟草,ＲＴ－ＰＣＲ鉴定转基因株系,ＥＬＩＳＡ方法分析叶片ＩＡＡ、ＩＰＡ 和ＺＲ含量．结果表明:叶片ＩＡＡ 含量高低依次为株系ｉａａＭ１０、ｉａａＭ＿ｉｐｔ３和野生型;而细胞分裂素含量高低依次为ｉａａＭ＿ｉｐｔ３、野生型和ｉａａＭ１０．随着内源ＩＡＡ 水平升高,气孔密度 减 小、保卫细胞长度增加、栅 栏 组 织细胞增大和叶片厚度增加．讨论了生长素和细胞分裂素含量对叶片细胞生长发育的影响．      

大针茅(Stipa grandis)和克氏针茅(S.krylovii)对PEG渗透胁迫适应性反应的比较研究

本文以大针茅（Stipa grandis）和克氏针茅（S．krylovii）为实验对象,研究PEG渗透胁迫下,两种植物的种子发芽情况以及不同龄期植株叶片含水量、叶片延伸速率、游离脯氨酸含量与根冠比的变化特征．结果表明：（1）PEG胁迫对大针茅萌发的影响大于克氏针茅;（2）相同龄期的克氏针茅比大针茅更能适应渗透胁迫;（3）四月龄植株较二月龄植株具有更高的胁迫适应性．以上结果为认识大针茅和克氏针茅的干旱适应性规律提供了部分实验证据．     

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害，不能再生正常健壮的植株     

库尔勒香梨自交不亲和SFBB-γ基因F-box区和可变区V3 RNAi表达载体的构建及遗传转化

目的为在分子水平应用RNAi(RNA interference)技术调控梨自交不亲和性状,培育自交亲和梨品种。方法基于本实验室获得的库尔勒香梨(Pyrus bretschneideri Rehd)自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因c DNA全长序列,选取SFBB-γ基因F-box区和可变区V3分别设计141 bp和120 bp的片段作为干扰序列,以棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR (Fusion PCR)构建SFBB-γ基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihpRNA),酶切后与pCAMBIA1304植物表达载体相连,构建SFBB-γ基因RNAi表达载体并转化至农杆菌GV3101中。利用叶盘转化法转化到库尔勒香梨无菌叶片中,用GUS组织化学染色法鉴定侵染叶片。测序结果表明干扰F-box区获得的ihpRNA臂长为141 bp,茎环253 bp;干扰可变区V3获得的ihpRNA臂长为120 bp,茎环253 bp。结果说明SFBB-γ基因F-box区和V3区的ihpRNA结构融合成功。通过双酶切检验及PCR证实,SFBB-γ基因F-box区和V3区的RNAi表达载体p CAMBIA1304-RNAi-SFBB构建成功; PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌GV3101中,GUS染色检验获得蓝色,目的基因已整合进入库尔勒香梨叶片中。结论成功构建库尔勒香梨SFBB-γ基因F-box区及可变区V3的RNAi表达载体,为诱导香梨SFBB-γ基因转录后基因沉默及培育自交亲和梨品种提供参考。     

HAK基因对玉米的遗传转化及其耐盐性研究

摘要：用农杆菌介导法将高亲和性钾离子转运体基因（HAK）和Bar基因转入5个优良玉米自交系7922、P138、265、238和271中,并对影响其遗传转化效率因素进行了优化．经PCR和RT-PCR检测证实获得阳性植株．除草剂涂抹实验证明Bar基因已经整合进玉米基因组．用不同浓度的盐溶液处理转基因植株和对照植株,发现转基因植株叶片中的K＋含量、脯氨酸和叶绿素含量均高于未转化植株,而Na＋含量低于未转化植株,表明HAK基因已经整合进玉米基因组,并通过过量表达提高了植株的耐盐性．     

绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达

用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＧＬ２－ＧＳ导入农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３），两个质粒发生同源重组，形成一个新的二元载体ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ．农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ） 经叶盘法转化烟草，筛选具有卡那霉素抗性的愈伤组织，诱导成苗．ＰＣＲ 扩增发现，绿色荧光蛋白基因在９０％ 的再生植株中存在．在荧光显微镜下，使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现，８０ ％ 以上的再生植株都能不同程度地发出绿色荧光．多数植株的根尖和叶脉都发光，一些植株的气孔、叶表皮或叶绒毛也发光     

中国流行的马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）株系鉴定及其对产量的影响

从河北、内蒙古、山西、黑龙江、福建等省区采集虎头、克疫、紫花白、同薯８号、克新１号、克新４号和克新６号、燕子以及米拉等不同栽培品种感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯样品中，制备ＰＳＴＶｄ粗提取物，以加拿大ＰＳＴＶｄ强毒株系（Ｓ－ＰＳＴＶｄ）和弱毒株系（Ｍ－ＰＳＴＶｄ）作对照，采用往返式聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ｒ－ＰＡＧＥ）进行株系鉴定．结果表明，感染中国不同马铃薯品种ＰＳＴＶｄ的电泳迁移率均与加拿大Ｍ－ＰＳＴＶｄ的迁移率相同．初步表明侵染中国马铃薯的ＰＳＴＶｄ主要是Ｍ－ＰＳＴＶｄ．用ＰＳＴＶｄ虎头分离物，采用针刺块茎幼芽和叶片摩擦接种方法，分别接种到无ＰＳＴＶｄ的健康虎头和克皮上．检测结果表明，在初感染和续发感染植株中，ＰＳＴＶｄ浓度分布有共同的规律，从顶部叶片、中部叶片到基部叶片中ＰＳＴＶｄ浓度依次逐渐减少．ＰＳＴＶｄ接种明显抑制了植株生长，并造成较大的产量损失．由不同品种初感植株收获的块茎，均有很高的ＰＳＴＶｄ感染率．     

丙型肝炎病毒E2基因在转基因番茄植株中的表达

以T-E1E2为模板扩增得到丙型肝炎病毒包膜蛋白基因E2,构建该基因的植物表达载体p35s-E2．通过农杆菌介导的叶盘法转化番茄子叶．转基因番茄植株叶片总DNA的PCR、Southern blot检测结果表明,E2基因已整合进了转基因番茄植株基因组中;RT-PCR,Western blot分析证实E2基因在转基因番茄植株叶片中表达．     

晋西华北落叶松人工林生物量和生产力的研究

本文对华北落叶松人工林生物量和生产力进行了研究,结果表明：（１）华北落叶松胸径（Ｄ）、树高（Ｈ）、冠幅（Ｃ）和冠长（Ｌ）四个测树指标之间,测树指标与干、枝、叶生物量之间以及营养器官生物量之间具有较为密切的关系;（２）应用测树指标对地上部分生物量进行了回归,建立了华北落叶松相对生长方程,根据相关系数ｒ,选择最优模型,干为Ｗｔ＝７０５．３５Ｄ１．８１０５,地上部分为Ｗｏ＝２２４．４９（Ｄ２Ｈ）０．９４８９;枝为Ｗｂ＝－０．３１Ｈ２＋７．１５７７Ｈ－３２．３７８;叶为Ｗ１＝－３．４６０１Ｃ２＋１８．５３１Ｃ－２２．１６３;（３）晋西地区华北落叶松地上部分生物量和生产力分别为４１．９２９９ｔ／ｎａ和１．６７６８ｔ／ｎａ／ｙ;（４）干生物量主要集中在下部,而枝叶生物量主要集中在中部。     

紫参和安祖花不定芽人工种子的研究

在含高浓度细胞分裂素和低浓度生长素的培养基上，紫参（Ｓａｌｖｉａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）和安祖花（Ａｎｔｈｕｒｉｕｍａｎｄｒａｅａｎｕｍ）均以叶片为外植体，诱导产生不定芽，但单个不定芽较难从致从致密愈伤组织上分离，这种不定芽包裹成人工种子，在１／２ＭＳ培养基上培养，分别获得７２．７％和１１．３％的萌发率，但均未成成小植株，用高浓度生长素和低浓度细胞分裂素处理（或低浓度生长素单独处理）上述带芽愈伤组织后     

巨尾桉铜分子伴侣EuCCS基因的克隆及表达分析

以巨尾桉为研究对象,克隆得到巨尾桉铜分子伴侣(CCS)基因(GenBank注册号为KJ755351.1),生物信息学分析表明:EuCCS蛋白定位于叶绿体,与龙眼同源基因的一致性达到99%.巨尾桉CCS的原核表达载体pET-EuCCS在大肠杆菌细胞内可以稳定表达,超氧化物歧化酶(SOD)活检测结果表明:转化菌株的SOD酶活性比对照菌株高,说明外源基因EuCCS具有生物学活性.利用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分析CCS在巨尾桉中的表达特性,结果表明:在植株生长旺盛的部位,CCS表达量较大,如植株幼叶,随植株叶片慢慢衰老,CCS的表达量也随之下降;在组培苗中,叶片的CCS表达量最大,其次是茎.     

NaCl胁迫对箭叶淫羊藿生理生态特性的影响

用含有0,100,200,300和500mmol／LNaCl的Hoagland＇s培养液处理箭叶淫羊藿幼苗,处理一定时间后对其鲜重、干重、叶表面积等形态参数以及根系活力、过氧化氢酶（CAT）和总抗氧化能力（T—AOC）等生理指标进行了测定,结果表明：NaCl胁迫明显抑制了箭叶淫羊藿地上部分和根系的生长,随着NaCl处理浓度的增加,地上部分茎、叶和地下部分根的鲜重和干重均有比较显著的降低,根系活力下降;同时,箭叶淫羊藿总蛋白质含量也受NaCl胁迫浓度的影响;在低浓度范围内,NaCl对箭叶淫羊藿叶片中CAT活性的影响不大,高浓度时CAT活性受到抑制;但其总抗氧化能力由于NaCl胁迫而明显降低．箭叶淫羊藿的生长受NaCl抑制程度随浓度增加而增大．