一株海洋专性放线菌的分类鉴定及其抑菌活性

[目的]对一株海洋专性放线菌进行菌种鉴定,并考察其抑菌物质的性质。[方法]通过形态特征、生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析,对专性海洋放线菌CMZ023进行鉴定;采用管碟法测定抑菌谱;测定菌株CMZ023抑菌物质的性质。[结果]鉴定菌株CMZ023为Salinispora arenicola,该菌对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌、啤酒酵母以及多种植物病原真菌均有拮抗作用。其抑菌物质粗提液耐酸碱、耐高温,紫外照射不影响抑菌活性。[结论]该菌株具有开发成新型广谱生物农药的潜力。     

轮丝链霉菌(Streptomyces Ys.03)代谢产物的抗植物病毒活性及其分类鉴定

[目的]1株从土壤中分离得到的放线菌的抗植物病毒活性及其分类鉴定。[方法]室内对峙培养、枯斑和系统寄主的保护及治疗试验,菌株形态观察并结合培养特征、生理生化性状及16S rDNA序列测定。[结果]菌株Ys.03对蜡状芽孢杆菌有稳定的拮抗作用;发酵液与烟草花叶病毒(TMV)混合后接种枯斑和系统寄主,对TMV抑制率分别为95.01%和88.67%;接种前、后叶面分别喷施发酵液抑制率均较高;菌株孢子链轮生,16S rDNA测序与师岗轮丝链霉菌(Streptomyces mormookaensis)同源性达100%。[结论]菌株Ys.03代谢产物对TMV有显著的抑制作用,鉴定为链霉菌属轮生类群师岗轮丝链霉菌。     

防治蔬菜灰霉病解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及抑菌特性

[目的]为研制防治蔬菜灰霉病的新型生物农药,进行高效生防菌的分离筛选及抑菌特性研究。[方法]通过形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,对拮抗菌进行鉴定;采用平板扩散法测定发酵液的抑菌特性。[结果]分离筛选出1株对黄瓜灰霉病具有高效拮抗作用解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株在生长对数期产生抗菌物质,并在30-38 h达到最大值;产生的抗菌物质有很好的热、酸碱稳定性,紫外线照射不敏感,常温储存6个月活性保持在80%以上;抗菌谱测定表明其对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等多种病原菌具有显著抑菌效果。[结论]该菌株所产抗菌物质性能稳定,抗菌谱宽,抑菌力强,具有开发成新型广谱生物农药的潜力。     

放线菌TL05-22菌株发酵液的抑菌谱及稳定性

[目的]研究放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱及稳定性。以16种植物病原真菌和6种细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法、杯碟法测定拮抗放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱;以苜蓿尖镰孢根腐病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的传代稳定性、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线稳定性。[结果]放线菌TL05-22发酵液对16种植物病原真菌和6种细菌均具有不同程度的抑菌活性,其中供试真菌以对苜蓿尖镰孢根腐病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达33.68 mm;供试细菌中以对大白菜软腐病菌的抑菌效果最强,抑菌圈直径达29.12 mm。将发酵液于60~100℃处理30、60 min,抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH值6~14时抑菌活性未发生明显变化,但在pH<6条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性无明显变化。[结论]放线菌TL05-22的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

生防菌株AI-05对黄瓜白粉病的防治及菌株鉴定

[目的]明确生防菌株AI-05对黄瓜白粉病的防治效果及其分类。[方法]采用盆栽和田间药效试验测试其防病效果,观测菌株培养性状与形态特征,测定其生理生化指标,并采用16S r DNA序列分析法对菌株AI-05进行鉴定。[结果]生防菌株AI-05对黄瓜白粉病的盆栽和田间试验的防效良好,分别为80.4%和74.9%;菌株AI-05的形态特征和生理生化指标与芽孢杆菌很接近,由16S r DNA序列分析的系统发育树发现,菌株AI-05的序列与Bacillus subtilis菌株HDYM-26同源性高达99%。[结论]效果优于281 g a.i./hm2的50%多菌灵WP,该菌可鉴定为枯草芽孢杆菌B.subtilis。     

一株人参广谱拮抗菌株的筛选、鉴定及抗菌物质性质

[目的]筛选出对人参7种病原菌都具有很好抑菌效果的菌株,明确菌株种类和产生的抗菌物质性质,为进一步研究应用奠定基础。[方法]采用平板对峙培养法筛选获得1株广谱抑菌菌株LG2,通过形态学、生理生化和16S r RNA序列分析鉴定其种类;采用热、酸碱、蛋白酶和紫外照射处理,测定明确LG2产生的活性物质性质;通过田间试验测定发酵液对人参灰霉病的防治效果。[结果]通过筛选获得1株广谱抑菌菌株LG2,鉴定其为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);通过混菌法测定其产生抗菌物质具有很好的耐热、耐酸碱、耐蛋白酶和抗紫外线的性质;田间试验证明,LG2发酵5倍稀释液对人参灰霉病的防治效果达73.99%,与对照药剂50%嘧菌环胺WG 0.67 mg/L的防效相当(74.13%)。[结论]获得1株具有很好应用前景的菌株LG2。     

放线菌BOS-009的分离、拮抗活性及鉴定

对从长白山不同海拔环境中分离筛选出可以产生抗菌活性物质的BOS-009放线菌菌株进行了研究,测定了该菌的抗菌谱,发现该菌株对多种植物病原性真菌及细菌有拮抗作用.通过形态特征、培养特征观察,生理生化特性及抑菌谱等系列比较.发现该菌株与链霉菌属的除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)的特征基本相符;通过16s rDAN序列比对,发现该菌株16s rDAN与除虫链霉菌的16s rDAN同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株暂归入除虫链霉菌类.     

稻曲病生防菌的筛选与鉴定

[目的]为获得优良、高效的稻曲病生防菌株。[方法]通过对峙培养法、菌丝生长速率法和孢子萌发法,综合筛选对稻曲病菌具有拮抗作用的生防菌株,根据形态特征、生理生化特性和16S r DNA序列进行种类鉴定。[结果]筛选出2株抑菌活性较高的生防菌QYQN-3和ZHQN-6,抑菌圈直径分别为33.33、31.67 mm,30%发酵液的菌丝生长抑制率分别为56.06%和50.76%,孢子萌发抑制率分别为47.85%和74.85%。菌株QYQN-3具有广谱抑菌效果。QYQN-3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),ZHQN-6为短小芽孢杆菌(B. pumilus)。[结论]2株生防菌对稻曲病菌均有较高的抑制效果,拓宽了稻曲病生防菌的种类。     

一株拮抗辣椒疫霉的放线菌及其防治效果

[目的]为获得对辣椒疫霉(Phytophthora capsici)具有生防效果的放线菌。[方法]采用平皿对峙法从辣椒根际56份土样中,分离筛选出1株对辣椒疫霉具有明显拮抗作用的放线菌LY26,测定了其对14种植物病原菌的抑菌效果。[结果]菌株LY26对供试病原菌中的卵菌均具有较好的抑制作用,对辣椒疫霉的抑菌效果最佳,抑制率高达97.56%。离体接种试验和盆栽试验结果表明施用LY26发酵液对辣椒疫病具有良好的防效。形态学和16S rDNA序列表明菌株LY26为链霉菌(Streptomyces sp.)。[结论]链霉菌LY26对辣椒疫霉具有生防潜力,有进一步研究鉴定其抗菌活性物质的价值。     

侧柏内生真菌G21抑菌活性及其鉴定

[目的]研究侧柏内生真菌菌株G21在不同培养基中发酵产物抑菌活性,并进行鉴定。[方法]利用生长速率法测定抑菌活性,结合形态分类及ITS-18S rDNA序列分析鉴定菌株。[结果]G21在所有不同培养基中的发酵产物对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌、小麦纹枯病菌及番茄灰霉病菌均有不同程度的抑制作用;G21鉴定为异茎点霉属(Paraphoma),与菊异茎点霉菌(Paraphoma chrysanthemicola)处于同一分支。[结论]G21马丁培养基和淀粉铵盐培养基发酵产物活性值得进一步研究。     

大孔树脂静态吸附番茄内生菌Brevibacillus brevis W4抑细菌成分

[目的]Brevibacillus brevis W4是从番茄茎中分离得到的1株对灰霉病菌有强烈抑制作用的内生菌.为明确其发酵液抑细菌活性,并探索抑细菌物质的大孔树脂吸附条件.[方法]采用管碟法测定了B.brevis W4发酵液对6种病原细菌的抑制活性.并以金黄色葡萄球菌为指示菌,选用大孔树脂对发酵液中的抑细菌活性物质进行静态吸附条件优化.[结果]B.brevis W4发酵液对供试枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜软腐病菌、姜青枯假单孢杆菌均有抑制活性,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈突出,直径分别为21.7、20.1 mm.大孔树脂AB-8对活性物质的吸附效果最好,其较优的静态吸附条件为上样液pH值为8.0,上样量为树脂质量的15倍,最佳的洗脱液体积分数为40％甲醇.[结论]B.brevis W4发酵液具有抑制细菌作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用最强.AB-8可以作为抑细菌活性成分的吸附树脂.     

吸水链霉菌A03抗菌活性产物发酵条件的优化

[目的]吸水链霉菌A03是自主分离的高效拮抗菌株,其活性代谢产物对多种植物病原真菌具有强烈抑制作用;为了建立其高产发酵工艺,并为过程放大提供技术参数,利用正交设计和单因素试验对其发酵培养基和培养条件进行优化。[结果]获得的最适发酵培养基配方(g/L):葡萄糖5,可溶性淀粉5,黄豆粉10,磷酸二氢钾0.5,碳酸钙1,七水硫酸镁0.1;最优培养条件:液体种子菌龄40 h,500 mL摇瓶装液量80 mL,接种量为体积分数12%,摇床转速180 r/min,培养温度28℃,发酵周期216 h;发酵液抑菌直径达3.04 cm。[结论]成功建立了该菌株的小试发酵工艺,发酵水平提高了52.0%,发酵周期缩短30.77%。研究结果为其发酵代谢调控和过程放大提供了基本参数。     

海洋放线菌BM-2菌株的抗菌特性

采用平板对峙法和打孔法测定海洋放线菌BM-2菌株及其无菌发酵液对12种植物病原真菌和5种细菌的抑制作用.结果表明:BM-2菌株及其无菌发酵液对立枯丝核菌等12种植物病原真菌和大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜水气单胞菌3种细菌具有较强的抗菌作用;发酵液能抑制细链格孢菌的分生孢子萌发和芽管伸长;该菌株的抑菌作用对pH值和蛋白酶比较稳定,紫外线、高温对发酵液的抑菌活性有一定的影响.     

培养基组成成分对加利利链霉菌AF1发酵过程影响的初步探索

探索影响加利利链霉菌AF1发酵过程的培养基组成成分。碳、氮源试验结果表明菌株AF1能够较好的利用可溶性淀粉和胰蛋白胨。在基础培养基和培养条件不变的前提下,改变可溶性淀粉质量浓度,在质量浓度为3.5%时,菌株AF1的代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最高,达到15.5 mm。在基础培养基和培养条件不变的前提下,改变胰蛋白的质量浓度,当浓度达到0.25%时,抑菌活性最高,达到13.4 mm。供试的8种氨基酸试验结果表明Arg、Gln和Lys具有明显促进菌体生长的作用,Asn、Phe的促进作用不明显,而其他的氨基酸则表现出对菌体生长无显著效果;在产物合成方面,Arg、Asn、Phe、Tyr、Gln、Lys对产物合成具有较为明显的促进作用,但Met和Cys却表现出对产物合成有抑制作用。不同浓度的各种氨基酸试验结果表明,当基础培养基中Tyr浓度为0.13 mmol/L或者Lys 0.25 mmol/L时菌株生长和活性物质的代谢效果最为明显,100 mL的发酵液中菌体干重和发酵液抑菌活性分别达到0.19 g、14 mm和0.22 g、15.9 mm。     

枸杞发酵液的抗衰老活性和皮肤安全性研究

采用枸杞为原料,德氏乳杆菌为菌种进行发酵获得枸杞发酵液。对枸杞发酵液的生理生化性质与成分进行检测,通过自由基清除实验与成纤维细胞增殖实验对枸杞发酵液的抗衰老活性进行检测,利用人体斑贴实验对枸杞发酵液的安全性进行评估。实验结果表明,枸杞发酵液为黏稠弱酸性液体,主要成分是多糖,具有较强的清除DPPH自由基和羟自由基的能力,在一定体积分数内可促进成纤维细胞增殖。     

黄瓜枯萎病拮抗内生菌BPT-18的鉴定及抗菌物质性质

[目的]为有效防治黄瓜枯萎病,进行了菌种鉴定及其抗菌物质性质的试验。[方法]通过形态特征、生理生化特性以及16S rDNA序列的进化树分析,对拮抗内生细菌BPT-18进行鉴定;采用平板对峙法测定抑菌谱;采用平板扩散法测定经60%硫酸铵沉淀所得粗提液的性质。[结果]鉴定菌株BPT-18为短小芽孢杆菌,该菌对多种植物病原真菌均有拮抗作用。其抗菌物质粗提液耐高温,对酸碱稳定,对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K均不敏感,对氯仿敏感,并能有效抑制枯萎病菌孢子萌发。[结论]该抗菌物质可能是一种抗菌多肽,为黄瓜枯萎病的防治提供新的生防资源。     

利用糖蜜废水产乳酸细菌的分离与鉴定

为获得可利用糖蜜废水产生乳酸的细菌，采用厌氧Hungate培养技术，从糖蜜废水处理生物反应器中获得活性污泥，分离到一株乳酸菌MD-9。对该株细菌进行了形态学特征、生理生化指标、16S rRNA基因序列分析等研究。结果表明与最相近的种属Lactobillus fermnetus的16S rRNA基因序列同源性为99.6%。该株细菌为兼性厌氧杆菌，葡萄糖代谢特征为专性异型发酵，可以利用糖蜜废水产生乳酸。     

微生物源黄酮类化合物的除草活性

菌株SPIR 94166是从广西采集的土壤样品中分离得到的具有产除草活性物质菌株，根据其形态学特征、生理生化特性和分子生物学特性等，认为菌株SPIR 94166是属于淡紫灰链霉菌。通过对菌种发酵液中除草活性物质的分离，得到3个活性组分，经NMR、红外、质谱等手段分析，这些除草活性物质分别鉴定为染料木素、黄烷酮以及槲皮素。