不同茶类的高效液相色谱特征指纹图谱研究

目的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立普洱茶等不同品种茶叶样品的指纹图谱。方法 28批茶叶样品经80%甲醇水溶液超声辅助提取,采用Waters C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),以乙腈-0.5%乙酸为流动相进行梯度洗脱,流速0.7 mL/min,紫外检测器于270 nm波长进行目标化合物的检测。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进行数据分析,并建立不同品种、不同厂家茶叶的指纹图谱集。结果不同品种茶叶的相似度在0.772-0.981之间,有18个共有峰,指认了其中儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯7个共有峰。相似度结果结合聚类分析结果表明不同品种的茶叶能被准确识别分开,此方法实现了不同茶叶样品的准确分类和识别。结论不同品种、不同厂家茶叶的品质差异明显,高效液相指纹图谱结合化学计量学工具能够很好地提取茶叶的化学信息,并且能够准确地分类和识别不同品种茶叶,为茶叶的品种分类识别和质量控制提供参考依据。     

不同品种茶叶指纹图谱的 建立及其相似度评价

目的:运用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法建立不同品种茶叶的指纹图谱,为其质量控制和科学应用提供参考依据。方法:以10个茶叶品种33批样品为实验材料,采用75%甲醇水回流提取2次,并进行梯度洗脱(A相为0.2%磷酸水溶液,B相为乙腈),柱温30 ℃,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm,采用指纹图谱相似度软件进行数据分析,并建立不同品种茶叶的指纹图谱共有模式。结果:10个品种茶叶的相似度在0.681~0.999,有5个共有峰,其中确认了没食子酸、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯3个共有峰。聚类分析结果将33批茶叶样品分为3类,即湄潭翠芽、凤岗锌硒茶、都匀毛尖、碧螺春、西湖龙井、天柱茶叶及绿宝石聚为一类,大红袍与铁观音茶聚为一类,遵义红茶聚为一类。结论:不同品种茶叶的品质差异显著,同品种不同等级、不同厂家的茶叶品质差异较小,此方法简便、准确、重复性好,可区分不同发酵工艺的茶叶,为茶叶的质量控制和科学应用提供参考依据。     

基于聚类分析的白茶高效液相色谱指纹图谱研究

采用高效液相色谱法对白茶样品中儿茶素类和生物碱类成分进行分析,建立白茶的特征性指纹图谱,为白茶的质量评价提供参考依据。以福鼎、政和等地的多种类白茶为样品,经提取溶剂、流动相、波长、流速、柱温等条件筛选,确定白茶指纹图谱高效液相色谱条件为:用70%甲醇在70 ℃条件下进行提取,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈-0.5%乙酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长258 nm,柱温35 ℃,进样量为10 μL;咖啡碱作为参照峰,计算共有峰相对保留时间和相对峰面积;选取中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）进行相似度评价;采用系统聚类分析法（Hierarchical cluster analysis,HCA）对其进行聚类分析。建立了白茶高效液相色谱法的指纹图谱,确认了28个共有峰;相似度评价结果显示,12批不同品种白茶相似度在0.98以上,表明不同年份不同产地的白茶样品成分组成一致;对没食子酸（Gallic acid,GA）、咖啡因（Caffeine,CAF）、表儿茶素（Epicatechin,EC）、表儿茶素没食子酸酯（Epicatechin gallate,ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）、表没食子儿茶素（Epigallocatechin,EGC）六个成分进行了峰指认;系统聚类分析结果表明,存放时间对白茶成分的组成及含量有一定的影响,聚类分析将测定的白茶样品分为两类,2013、2014年为一类,2017~2020年为一类。该方法方便、快捷、简单、准确可靠,可为白茶的质量控制提供参考依据。     

晒青茶、普洱茶(生茶)紧压茶实物样研制及其品质特征分析

根据普洱茶(生茶)拼配规则及各普洱茶生产企业的产品质量生产情况,为进一步推动普洱茶(生茶)实物标准样的科学制备,规范普洱茶原料及普洱茶(生茶)产品,揭示影响云南大叶种晒青茶滋味品质的物质基础,并探讨影响因素间的相互作用。以临沧、普洱、大理、西双版纳的春、夏、秋三个季节的云南大叶种晒青茶为原料：(1)通过筛选可拼配单样、小样试拼及排序、大样拼堆及评定等程序,严格通过品质水平均匀性、稳定性检验,制备出二套实物标准样：晒青茶实物标准样、普洱茶(生茶)实物标准样。(2)通过理化分析及感官审评,通径分析表明,茶多酚与氨基酸、黄酮是影响晒青茶滋味品质的主要因素,其中,黄酮对晒青茶的滋味品质直接作用最明显,茶多酚通过其余变量对晒青茶滋味品质的间接作用综合影响最大。本研究不仅为普洱茶的质量标准信息化研究、茶饮料开发等方面提供分析方法参考,更为促进普洱茶的高质量、绿色化、品牌化发展提供科学依据。     

花果香与陈香型普洱茶生化成分与香气物质的比较

本研究选择同一企业生产的花果香型与陈香型普洱茶为材料,应用分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱联用质谱(GC-MS)和感官审评等技术,研究比较该两种香型普洱茶的品质特征与物质基础。审评发现花果香型滋味浓厚酸醇,具有花果香或焦糖香,而陈香型滋味醇厚、陈香显著。分析结果表明花果香型的水浸出物、游离氨基酸、可溶性糖、没食子酸、茶黄素、茶红素、表没食子酸儿茶素的含量均高于陈香型(p<0.05),陈香型的表儿茶素含量高于花果香型(p<0.05)。GC-MS一共鉴定到532个化合物,显著差异化合物55个(vip>1.00,p<0.05,FC>1.50);花果香型具有花香、熟果香的(3R,6S)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氢-2H-吡喃-3-醇、苯乙醇、氧化芳樟醇(呋喃类)、苄醇、芳樟醇、香叶醇等物质相对含量明显高于陈香型,而陈香型显陈香的1,2-3-三甲氧基苯、1,2,3-三甲氧基-5-甲基苯等甲氧基苯类及烷烃类物质相对含量高于花果香型。综上,花果香型普洱茶中没食子酸、水浸出物、游离氨基酸等生化成分含量显著高于陈香型,(3R,6S-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氢-2H-吡喃-3-醇等显花果香的物质相对含量高于陈香型;而甲氧基苯等显陈香的物质低于陈香型,构成了花果香型(BJ)普洱茶滋味浓厚酸醇、显花果香的品质特征。综合来看,花果香型普洱茶是一款内含成分更为丰富、香气独特的新型普洱茶产品。     

不同浓度福林酚试剂对茶多酚检测结果影响的研究

目的 研究市售不同来源和不同浓度的福林试剂对固态速溶茶中茶多酚含量测定结果的影响。方法 以4种速溶茶样品为检测对象, 使用市售3种不同来源的福林试剂进行测定, 并应用统计学方法分析不同来源的福林酚试剂对速溶茶中茶多酚检测结果的影响。结果 4种福林酚试剂检测茶多酚的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)在0.88%~1.60%之间, 具有较高的精密度; 不同浓度的福林酚, 对检测结果有显著性的差异(P<0.05), 不同厂家相同浓度的福林酚试剂, 对检测结果没有显著性差异(P>0.05)。结论 不同浓度的福林酚, 对检测结果有显著性的差异, 为确保茶多酚检测结果的准确性和一致性, 使用前应对福林酚试剂的浓度进行确认。     

信阳毛尖茶指纹图谱分级标准样品的研制方法

建立一套基于指纹图谱分级的茶叶标准样品研制方法,研制3 个级别（120 个样,每样50 g）的信阳毛尖茶标准样品。依据国标方法制备茶汤,采用高效液相色谱法进行茶汤滋味成分指纹图谱分析,并采用新改良程度相似度法进行相似度计算。以指纹图谱的相似度作为评价指标,按照《标准样品工作导则》的要求,对所研制标准样品进行均匀性检验（F检验）、稳定性检验（t检验）和8 家实验室联合定值。结果表明,所研制的各级茶样均匀性、稳定性良好,对各级茶样的指纹图谱相似度的定值结果和不确定度（95%置信度）分别为0.918±0.027（一级）、0.662±0.033（二级）、0.400±0.074（三级）,且与感官评审等级一致。该标准样品具有量化分级的特征,是国内首套指纹图谱分级茶叶标准样品。已获得全国标准样品技术委员会颁发的有证标准样品证书,可用于信阳毛尖茶的分等定级。     

广东岭头单枞茶高效液相色谱指纹图谱的研究

应用高效液相色谱方法研究了广东岭头单枞茶品种的指纹图谱，根据其高效液相色谱中的相对保留时间、相对面积、共有峰、重叠率、八强峰及其相对总面积等对色谱指纹图谱进行了分析和对比研究，建立了鉴定广东岭头单枞茶品种的色谱指纹图谱分析方法。结果表明，该方法为茶叶品种的鉴定提供了较全面的信息，为指纹图谱技术在茶叶品种和品质方面的研究提供新的途经。     

云南大叶种晒青毛茶提取物对产毒黄曲霉生长及产毒的影响

普洱茶在发酵过程中,微生物组成十分复杂,尤其是黑曲霉等霉菌起到主要作用,因此一些消费者担心普洱茶在发酵过程中受到黄曲霉毒素(AFS)的污染。本文通过测定菌落直径、孢子萌发及菌丝体干重等方法研究云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AS3.4408生长的影响;采用紫外荧光法和HPLC法研究云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AFS生物合成的影响;并将产毒黄曲霉AS3.4408接种到云南大叶种茶叶中,检测茶叶中的AFS含量,以求对普洱茶的安全性进行评估。研究表明,云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AS3.4408菌落的生长及产毒均具有显著的抑制作用,且存在明显的剂量依赖关系;将产毒黄曲霉AS3.4408接种到云南大叶种茶叶中,菌株生长良好,但茶叶基质经HPLC检测,未检测到黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,表明云南大叶种茶中的某种(些)成分对黄曲霉毒素的生物合成具有抑制作用。     

普洱茶发酵过程中不同外源添加物对氧化酶活性与成分变化的影响

研究了添加不同外源物对云南普洱茶发酵过程中氧化酶活性及成分变化的影响。结果表明,添加不同外源物的发酵普洱茶中抗坏血酸酶活性变化较大:发酵10 d时,酶活性大小依次表现为焦性没食子酸(没食子酸(水(甘氨酸(葡萄糖;发酵20 d时,酶活性大小依次表现为水(没食子酸(葡萄糖(焦性没食子酸(甘氨酸;发酵30 d时,酶活性大小依次表现为焦性没食子酸(葡萄糖(水(甘氨酸(没食子酸。而多酚氧化酶酶活性均呈下降趋势,以一翻样(发酵10 d)最高。发酵前后,添加不同外源物的发酵茶样中茶黄素无明显变化,茶多酚和茶红素含量大幅减少,茶褐素含量大幅增加。这说明,外源添加葡萄糖、没食子酸、焦性没食子酸和甘氨酸对普洱茶发酵过程中酶活性和成分有较大影响,可加速茶褐素的形成。     

南路边茶高效液相色谱指纹图谱的建立

应用高效液相色谱法初步建立了南路边茶的指纹图谱。采用线性梯度洗脱,乙腈和0．3％甲酸水溶液为流动相,柱温为30℃,检测波长为280nm,流速为1．0mL／min。根据平均相对保留时间、共有峰、平均相对峰面积等对色谱指纹图谱进行了分析。方法的精密度、重复性和稳定性良好。通过对48批不同生产企业、不同生产年限的南路边茶样品进行分析,以咖啡碱为参照峰,共确定了37个色谱峰作为南路边茶的特征指纹峰。运用相似度评价和聚类分析法对各批次南路边茶样品指纹图谱进行了化学模式识别研究。各批次南路边茶样品与对照指纹图谱共有模式的相似度均大于0．90;对相对峰面积的聚类分析结果表明,当临界值为15时,48批南路边茶样品可聚为2类。该研究为南路边茶的鉴别和质量控制提供了参考。     

Discrimination of cinnamon bark and cinnamon twig samples sourced from various countries using HPLC-based fingerprint analysis

A simple and efficient HPLC method was developed to evaluate the quality of traditional herbal medicines made from cinnamon bark (CB) and cinnamon twig (CT). Seven major bioactive ingredients in 56 samples (24 CB and 32 CT) collected from China, Vietnam, and Indonesia were separated and quantified. The method was validated following the International Conference on Harmonisation (ICH) guidelines. A fingerprint analysis method to discriminate between CB and CT using major component content levels was developed. The discrimination process included the use of similarity indices and partial least-squares discriminant analysis (PLS-DA). Classification accuracy by the PLS-DA method was about 98%. The pattern analysis method was specific and could be readily used for the comprehensive evaluation of cinnamon samples. Therefore, an HPLC fingerprint in combination with pattern analysis provides a very flexible and reliable method for quality assessment of herbal drugs.     

Characterization of volatile compounds of pu-erh tea using solid-phase microextraction and simultaneous distillation–extraction coupled with gas chromatography–mass spectrometry

Two extraction methods, namely, solid-phase microextraction (SPME) and simultaneous distillation–extraction (SDE) both followed by gas chromatography–mass spectrometry were applied for the determination of a wide range of volatile compounds in pu-erh tea. The conditions of solid-phase microextraction including fiber selections and sampling condition optimization have been previously investigated. By the two methods, 79 volatile compounds belonging to different categories were identified. Among them, 61 volatile compounds were extracted by SDE and 67 by SPME. Qualitative and quantitative differences of pu-erh tea volatile profiles were observed by applying the two aforementioned extraction methods. SDE technique achieved higher percentages of high molecular weight alcohols, acids, and esters of low volatility, whereas SPME technique was found useful for analyzing low molecular weight alcohols, methoxy-phenolic compounds, aldehydes, ketones, and hydrocarbons of high volatility that were closely related to the characteristics of pu-erh tea aroma and its sensory perception. Therefore, SPME technique was a reliable extraction method for controlling pu-erh tea quality flavor.     

基于滋味成分HPLC指纹图谱的判别分析及相似度评价在信阳毛尖茶分等定级中的应用

采用高效液相色谱方法分别建立信阳毛尖7 个等级茶汤滋味特征指纹图谱。基于15 种特征成分,采用判别分析技术对2 个系列41 个信阳毛尖茶样进行了良好的等级判别,判别正确率近100%;通过建立7 种指纹图谱相似度计算方法发现,各相似度计算方法均能反映茶叶等级间的差异大小,其中以新改良程度相似度法最佳。采用相似度计算方法对茶叶分等定级的结果与其实际等级相一致,并可实现对等级差异的量化分析。     

Tentative identification,quantitation, and principal component analysis of green pu-erh,green, and white teas using UPLC/DAD/MS

Tea (Camellia sinensis L.), an important drink and a natural medicine for thousands of years, contains many health beneficial compounds. Growing season, geographical region, and fermentation methods create many variations in tea compositions, which contribute to each tea’s uniqueness. In this study, a simple, rapid, and efficient ultra-performance liquid chromatography (UPLC) method combined with diode array detector (DAD) and mass spectroscopic (MS) detection and chemometrics analysis was used to analyse three different types of teas (green pu-erh, green tea, white tea). Using the developed method, 68 compounds were identified and 54 were quantified based on retention times, UV spectra, and MS spectra by referencing to available standards and data in the literatures. The results showed the chemical differences between the tested teas. Principal component analysis (PCA) was applied to classify and distinguish between tea samples.     

不同储存时间普洱生茶和熟茶香气成分分析

采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取不同储存时间普洱茶的香气成分,经GC-MS联用分析,共鉴定出83种香气物质、其中普洱生茶鉴定出47种,普洱熟茶鉴定出70种,组分增加48.9%。大量萜烯类和甲氧基苯类化合物的形成是普洱茶香气成分的重要特色。试验结果证明:生茶和熟茶中主要香气成分种类基本一致,且所占的香气比重和基本一致,但主要香气成分之间的含量差异极为显著。生茶香气以具有木香、花香的萜烯类和具有强烈的新鲜叶草香气的二氢猕猴桃内酯为主。熟茶以具有霉味和陈香的甲氧基苯类为主。     

安化黑茶水溶性成分高效液相色谱指纹图谱及定量分析

目的:运用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法研究湖南安化黑茶指纹图谱,并对安化黑茶的主要成分进行定量分析,为湖南安化黑茶的成分分析与鉴别提供理论依据。方法:以22个安化黑茶样品与4种外省黑茶(云南普洱茶、湖北青砖茶、广西六堡茶、四川土司黑茶)为实验材料,采用梯度洗脱(A相为0.17%乙酸溶液,B相为乙腈),柱温30℃,检测波长280 nm,流速1.0 m L/min,建立安化黑茶HPLC指纹图谱,并进行了相似度评价与主成分分析,确定共有色谱峰。结果:22个安化黑茶样品具有19个共有色谱峰,这些黑茶样品在共有模式下的相似度为0.783~0.958,而广西六堡茶、四川土司黑茶、湖北青砖茶以及云南普洱茶与安化黑茶相似度很低(0.3);定量分析表明,安化黑茶中没食子酸、表没食子儿茶素没食子酸酯的含量明显高于4种外省黑茶,而广西六堡茶中的咖啡因和云南普洱茶中的没食子儿茶素含量明显高于安化黑茶;此外,茯砖素A仅在安化黑茶中检出,可作为安化黑茶的标志性成分。结论:根据所构建的安化黑茶HPLC指纹图谱及找到的标志性成分茯砖素A,可用于安化黑茶的鉴定与评价。     

普洱生茶和熟茶香气中萜烯类和甲氧基苯类成分分析

采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取,经GC-MS联用测定不同储存时间普洱生茶和熟茶的香气成分。实验结果表明:萜烯类和甲氧基苯类化合物是普洱茶香气的主要成分。其中的萜烯类化合物主要以单萜类及其含氧衍生物为主,还含有部分倍半萜类及其含氧衍生物、类胡萝卜素及紫罗兰酮的氧化降解产物;甲氧基苯类化合物以1,2,3-三甲氧基苯、1,2,3-三甲氧基-5-甲基苯为主。     

化学计量学用于解析江西白酒的高效液相色谱指纹图谱

采用高效液相色谱法对江西五个不同生产厂家的36 个样品进行了测定,构建了它们的指纹图谱,并运用基于主成分分析的投影判别法及聚类分析法对白酒的指纹图谱进行了模式识别研究,再运用主成分分析对指纹图谱的数据进行降维处理,构建反传人工神经网络,并对未知样品的属性进行了预报。结果表明,不同厂家生产的白酒其高效液相色谱指纹图谱存在一定差异,且主成分分析的投影判别法和聚类分析法均能对样品进行正确分类,经优化的反传人工神经网络具有稳定性好,预测结果准确度高的特点,可用于对未知样品的属性进行预报。本研究为白酒样品的鉴别提供了一种新的手段,为白酒的质量控制提供了一定的科学依据。     

利用非线性化学指纹图谱技术鉴别评价茶饮料

通过向稳态体系“溴酸钠-硫酸锰-硫酸-丙酮”中加入不同的茶饮料,获得来自不同产家、不同品种的茶饮料的非线性化学指纹图谱,并对其进行相似度计算。非线性化学指纹图谱的直观信息、定量信息、相似度计算结果都能很好的将冰红茶从其他茶饮料中鉴别出来,且振荡寿命与检测用量有很好的函数关系。通过比较不同掺水量的茶饮料的非线性化学指纹图谱的参数信息,对茶饮料的质量进行评价。非线性化学指纹图谱技术可为茶饮料的鉴别和评价提供一种新的方法。