奥巴克拉联合5-氟尿嘧啶对低氧性胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的: 研究在低氧条件下,奥巴克拉(obatoclax)联合5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)对胰腺癌细胞株BxPC-3细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）的影响。方法: 细胞分组为低氧组、5=FU组、obatoclax+5-FU组,利用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖活性;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western blot检测各组BxPC-3细胞中EMT相关基因与蛋白的表达情况。结果: 在低氧条件下,obatoclax联合5-FU可抑制BxPC-3细胞的增殖活性,且具有时间依赖性;obatoclax联合5-FU可进一步促进EMT的管家基因,转录因子Snail与Slug的表达升高;obatoclax联合5-FU促进上皮标记E-Cadherin的表达升高,及间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I、Vimentin的表达下降。结论: 在低氧状态下obatoclax联合5-FU可抑制胰腺癌BxPC-3细胞的增殖活性,可通过抑制转录因子Snail与Slug的表达,上调上皮标记E-Cadherin的表达,下调间质标记N-Cadherin、Fibronectin、Collagen I及Vimentin的表达,从而抑制肿瘤细胞上皮向间质的转化,进而降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力。     

缺氧诱导因子2α对肝细胞癌化疗耐药性的影响

目的:研究缺氧诱导因子2α（HIF-2α）对肝细胞癌化疗耐药性的影响及其机制。方法:选取6种肝细胞癌细胞株,Western blot方法检测HIF-2α的表达; 制备过表达HIF-2α慢病毒颗粒并感染人肝细胞癌细胞株HepG2和PLC/PRF/5细胞,制备稳定表达HIF-2α的细胞株HepG2-HIF-2α和PLC/PRF/5-HIF-2α,Western blot法验证其表达;配置6种常规化疗药物氟尿嘧啶、环磷酰胺、盐酸表柔比星、丝裂霉素、甲氨蝶呤、索拉菲尼的5个浓度,并加入HepG2-HIF-2α及对照细胞中,MTT法检测细胞抑制率;Western blot检测两种过表达HIF-2α的肝细胞癌细胞株及相应对照细胞中耐药基因MDR1、LRP及MRP1的水平。结果:Western blot结果显示HIF-2α在6种肝细胞癌细胞株中均有表达;HIF-2α慢病毒颗粒感染肝细胞癌细胞株后能够在肝细胞癌细胞中稳定过表达HIF-2α;MTT结果显示,与对照组相比,环磷酰胺、甲氨蝶呤和索拉菲尼对HepG2-HIF-2α抑制率明显较低（P<0.05）,提示HIF-2α的表达引起耐药性的增加;而氟尿嘧啶、盐酸表柔比星和丝裂霉素对HepG2-HIF-2α细胞的抑制率与对照组无统计学差异（P>0.05）;Western blot法进一步分析了HIF-2α在肝细胞癌细胞中的表达导致耐药性增加的原因,结果显示,在HepG2-HIF-2α细胞及PLC/PRF/5-HIF-2α细胞中,耐药相关基因MDR1、LRP、MRP1的表达水平均高于对照组（P<0.05）。结论:在肝细胞癌中,HIF-2α能够通过上调MDR1、LRP、MRP1耐药基因的表达引起肝细胞癌细胞的耐药性的增加。     

五味子甲素在人肝星状细胞中的抗纤维化作用

目的: 研究五味子甲素对人肝星状细胞系 LX-2细胞的增殖、纤维化指标及凋亡相关蛋白的影响。方法: 采用不同浓度的五味子甲素与肝星状细胞LX-2共孵育,MTT法检测五味子甲素对细胞的抑制作用,RT-PCR法和Western blot法测定纤维化指标I型胶原α亚基1（collagen type I alpha 1,collagen I-1）和α-平滑肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达量,并检测五味子甲素对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达量的影响。结果: 五味子甲素在不同浓度时可抑制人肝星状细胞系LX-2细胞的增殖,可降低 collagenⅠ和α-SMA的mRNA水平和蛋白表达量 ( P<0.05),并能降低Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达量以及Bcl-2/Bax的比值( P<0.05)。结论: 五味子甲素可能通过抑制细胞增殖、降低纤维化指标的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

17-DMAG对鼻咽癌细胞株HNE1增殖与凋亡的影响

目的: 探讨17-DMAG对鼻咽癌HNE1细胞增殖与凋亡的影响。方法: MTT比色法测定17-DMAG对HNE1细胞活性的影响;溴化丙啶(PI)染色法测定HNE1细胞凋亡;JC-1 染色法测定17-DMAG对线粒体膜电位的影响;Western blot测定细胞Bcl-2/Bax的表达水平。结果: 17-DMAG可抑制鼻咽癌HNE1细胞的增殖,且该抑制作用随作用时间的延长和剂量增加而增强;PI染色显示17-DMAG具有诱导HNE1细胞凋亡作用（P<0.01）;JC-1染色显示17-DMAG可诱导HNE1细胞线粒体膜电位降低;Western blot 显示17-DMAG作用HNE1细胞24 h,Bcl-2表达显著降低（P<0.01）,Bax表达明显增加,尤其在中、高剂量组（P<0.01）。结论: 17-DMAG具有抑制鼻咽癌细胞HNE1细胞增殖的作用,该抑制作用与浓度和时间成正相关。该作用主要通过诱导HNE1细胞凋亡实现,诱导凋亡的机制可能与其下调细胞线粒体膜电位,降低Bcl-2表达,增加Bax水平有关。     

地塞米松对小鼠急性胰腺炎胰腺组织中Notch信号及凋亡相关基因表达的影响

目的: 探讨地塞米松对急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）小鼠胰腺组织中Notch1,Hes1及凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响。方法: 利用蛙皮素建立小鼠急性胰腺炎动物模型,实验分组为生理盐水组（对照组）,模型组（AP组）,地塞米松（dexamethasone,DEX）组,利用ELISA法检测各组动物血清中TNF-α, IL-6的含量;利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组动物胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果: ELISA检测结果显示,与模型组相比较,DEX组动物血清中TNF-α与IL-6的含量显著降低;RT-qPCR与Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bcl-2 mRNA的表达与蛋白的表达均显著降低,而Bax mRNA的表达与蛋白的表达显著升高。结论: DEX可能通过抑制Notch信号的激活,抑制Notch1与Hes1的表达,进一步抑制抗凋亡的Bcl-2蛋白的作用,促进促凋亡蛋白Bax的表达,促进胰腺腺泡细胞的凋亡,减少胰腺腺泡细胞的坏死,减少炎症因子,如TNF-α与IL-6等的合成与释放。     

独一味乙醇提取物诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的机制研究

目的:探索独一味乙醇提取物（ethanol extract of lamiophlomis rotate,EELR）促进人黏液表皮样癌MEC-1细胞凋亡的作用及其机制。方法: 采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）比色法测定细胞活力、细胞克隆形成实验检测细胞增殖率、Hoechst33258/PI荧光染色以及流式细胞术检测EELR对MEC-1细胞凋亡率的影响,采用蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:EELR在一定浓度范围呈时间和剂量依赖性抑制MEC-1细胞增殖,且不同剂量EELR作用于MEC-1细胞48 h后细胞凋亡率有明显差异,Western blot检测表明随EELR作用浓度增加,MEC-1细胞Bcl-2蛋白表达下调,Bax、Casepase-3蛋白表达量升高。 结论:EELR可能通过调节人黏液表皮样癌MEC-1细胞的Bcl-2、Bax、Casepase-3蛋白表达水平进而诱导细胞凋亡。     

脂氧素A4抑制缺氧诱导的滋养细胞氧化应激和凋亡

目的: 探讨脂氧素A₄（LXA₄）对缺氧条件下人早孕细胞滋养细胞氧化应激及凋亡的影响。方法: 选取正常早孕(6～8周)绒毛,分离、纯化、鉴定得到细胞滋养细胞,分为常氧组、缺氧组、缺氧+1 nmol/L LXA₄组、缺氧+10 nmol/L LXA₄组、缺氧+100 nmol/L LXA₄组。各组细胞培养72 h后,采用 DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,分光光度计法检测过氧化氢酶（CAT）活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性,流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果: 与常氧组比较,缺氧组ROS水平升高（P<0.05）,SOD、CAT、GPx活性降低（P<0.05）,凋亡率升高（P<0.05）。与缺氧组比较,缺氧+1、10、100 nmol/L LXA4组ROS水平均降低（P<0.05）,SOD、CAT、GPx活性均升高（P<0.05）,凋亡率均降低（P<0.05）。与常氧组相比,缺氧组的Bcl-2蛋白量减少,Bax蛋白量增加（P<0.05）;缺氧+1、10、100 nmol/L LXA₄组Bcl-2蛋白量较缺氧组均升高,Bax蛋白量较缺氧组均降低（P<0.05）。结论: LXA₄可抑制缺氧诱导的人早孕细胞滋养细胞的氧化应激和凋亡,Bcl-2/Bax表达调控可能是LXA₄抗滋养细胞凋亡的一个重要机制。     

天麻素联合地塞米松保护缺糖缺氧诱导的H9C2细胞损伤

目的：探讨天麻素（gastrodin, GAS）联合地塞米松（dexamethasone, DEX）在缺糖缺氧诱导心肌细胞损伤中的作用及可能机制。方法：建立缺糖缺氧细胞（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型,细胞分为5组,即正常对照组（normal group）,缺糖缺氧组（OGD group）,DEX组,GAS组,DEX+GAS组。利用CCK-8实验检测各组心肌细胞活性,利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性;利用TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡情况;利用ELISA实验检测各组心肌细胞培养液中炎性因子;利用Western blot检测各组心肌细胞中Notch1、Bax、Bcl-2及Beclin1的表达情况。结果：结果显示GAS与DEX联合使用可显著提高损伤心肌细胞的活性,减少心肌细胞的凋亡;降低促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的产生及促进抑炎因子IL-10的产生,降低LDH的释放;Western blot结果显示GAS与DEX联合使用可促进Notch信号通路中Notch1的表达,显著降低受损心肌细胞中促凋亡蛋白Bax的表达,促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进自噬相关基因Beclin1的表达。 结论：GAS与DEX联合使用,可能通过促进Notch信号通路的激活,促进其自噬,提高细胞的活性,抑制心肌细胞的凋亡,减轻炎症反应,从而减轻OGD诱导的心肌细胞损伤。     

3-溴丙酮酸联合多西他赛对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察3-溴丙酮酸（3-Bromopyruvic acid,3-BrPA）联合多西他赛（docetaxel,DTX）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响,并探讨相关分子机制。方法: MTT实验检测不同药物处理后乳腺癌MDA-MB-231细胞株存活情况;流式细胞术PI单染法检测用药后细胞凋亡情况;ATP试剂盒检测3-BrPA对细胞内ATP水平的影响;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测3-BrPA对细胞线粒体膜电位的影响;Western blot 检测用药后HexokinaseⅡ、Bax、Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达情况。结果: 3-BrPA、DTX均可抑制MDA-MB-231细胞的生长,呈现浓度依赖性,低浓度3-BrPA明显增强DTX对MDA-MB-231细胞的抑制作用;3-BrPA作用于MDA-MB-231细胞5 h后,随药物浓度递增细胞内ATP水平递减;3-BrPA作用于MDA-MB-231细胞24 h后,HKⅡ表达减少,且使细胞线粒体膜电位发生降低; 40 μmol/L 3-BrPA联合2 μmol/L DTX处理24 h后,MDA-MB-231细胞凋亡率为63.5%,较单独用药组的凋亡率明显提高(P＜0.01)。3-BrPA与DTX联合作用于MDA-MB-231细胞后,凋亡相关蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达减弱,Bax的表达增强。结论: 3-BrPA可增强DTX对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用以及凋亡诱导作用,其机制可能与下调Mcl-1和Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

小白菊内酯对胰腺癌Panc1细胞的作用研究

目的 研究小白菊内酯对人胰腺癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法 应用MTT法观察不同浓度小白菊内酯对Panc-1细胞增殖的影响;流式细胞术检测药物诱导Panc-1细胞的凋亡;划痕实验观察小白菊内酯对细胞迁移能力的影响;侵袭实验观察小白菊内酯对细胞侵袭能力的影响;Western Blotting检测不同药物处理后Bcl-2和Bax蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示小白菊内酯可抑制胰腺癌细胞的增殖,且这种抑制作用呈剂量依赖性,IC50约为15μM。流式细胞术提示小白菊内酯可以促进胰腺癌Panc-1细胞的凋亡。划痕实验显示小白菊内酯可影响胰腺癌Panc-1细胞的迁移能力。Transwell小室侵袭实验显示小白菊内酯能抑制胰腺癌Panc-1细胞的侵袭能力。Western Blotting结果显示小白菊内酯可以明显降低Bcl-2的表达量,上调Bax的表达水平。结论 小白菊内酯可以抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖并促进其凋亡,同时也影响肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。这过程与其影响一部分Bcl-2家族成员的表达有关,尤其是导致Bcl-2/Bax的表达失衡,促使凋亡。     

Ero1α在缺氧复氧致H9C2细胞内质网应激时的表达变化及意义

目的: 观察内质网氧化还原酶（Endoplasmic oxidoreductin-1-like protein alpha,Ero1α）表达与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)、细胞凋亡的关系。方法: 将培养的H9C2心肌细胞随机分组：对照组(Control组)、缺氧/复氧1、3、6、12 h组(H/R1组,H/R3组,H/R6组,H/R12组)、4-苯基丁酸钠预处理+缺氧复氧6 h组(4PBA+H/R6组)。对照组心肌细胞正常培养至实验结束,H/R组行缺氧3 h后复氧1、3、6、12 h,4PBA+H/R6组分别于缺氧前2 h给4PBA再行缺氧/复氧6 h过程。Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。Western blot测定Ero1α,内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)、半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶12 (caspase-12)的表达。结果: 与对照组比较,Ero1α蛋白表达水平随着复氧时间的延长Ero1α表达量逐渐升高(P<0.01),在复氧3 h明显升高,6 h达到高点。Grp78在缺氧复氧后即明显升高（P<0.01）,在复氧3 h达到高峰。细胞凋亡率也显著升高,其中复氧6 h最为显著。以缺氧3 h复氧6 h作为观测点,H/R6组Ero1α、GRP78、CHOP、Caspase12蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01);给予4PBA干预后,Ero1α、GRP78、CHOP、caspase-12蛋白表达较H/R6组明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论: 缺氧复氧能够诱导心肌细胞凋亡及内质网应激,缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内质网应激时Ero1α的表达可出现相应的变化并与细胞凋亡相关。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的: 观察珠子参总皂苷对H₂O₂诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法: Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H₂O₂建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)孵育 24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果: 珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H₂O₂所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性。结论: 珠子参总皂苷对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

芝麻素联用维生素E对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的: 观察芝麻素（Ses）联用维生素E（Vit E）对自发性高血压大鼠（SHR）心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法: 32只SHR大鼠随机分为SHR组、Ses +Vit E（160 mg·kg^-1·d^-1+ 10 mg·kg^-1·d^-1）组、Vit E（10 mg·kg^-1·d^-1）及Ses（160 mg·kg^-1·d^-1）组，每组8只，另设WKY正常对照组8只（0.5% CMC-Na 5 mL/kg）。每天灌胃一次，连续10周。TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平；免疫组化法检测Bax、Bcl-2的蛋白表达；Western blot法检测心肌组织Bax、Bcl-2、PUMA的蛋白表达及p53的磷酸化水平。结果: 芝麻素联用维生素E可显著降低SHR心肌细胞凋亡率，下调心肌组织Bax、PUMA的蛋白表达及p53磷酸化水平，上调Bcl-2的蛋白表达，提高Bcl-2/Bax比值(P<0.01)。结论: 芝麻素联用维生素E对SHR心肌细胞凋亡具有协同抑制作用，其机制可能与减少SHR心肌组织的PUMA蛋白表达，减少p53磷酸化水平，提高Bcl-2/Bax比值，调节Bax和Bcl-2蛋白表达的平衡有关。     

α-突触核蛋白激活NLRP3炎性小体介导神经细胞焦亡的发生

目的:研究α-突触核蛋白（α-synuclein）对于神经细胞焦亡发生的影响和机制。方法:以小鼠海马神经元细胞HT22细胞株为对象,体外培养后用α-synuclein干预细胞,以CCK-8法检测细胞活力,确定IC50值。设置对照组（Con组）后,采用TUNEL染色法检测细胞焦亡水平,免疫荧光法观察Gasdermin-D-N（GSDMD-N）的表达,Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Gasdermin-D（GSDMD）、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平,酶联免疫吸附法检测培养基中IL-18、IL-1β的表达水平。采用Caspase-1抑制剂预处理HT22后,同样使用IC50值的α-synuclein干预细胞,同时设置α-synuclein组（单纯α-synuclein干预）和α-synuclein+ML132组,检测细胞焦亡的水平。结果:α-synuclein的IC50值为50 nmol/L。α-synuclein干预后细胞焦亡数目显著增高,TUNEL染色显示阳性细胞数目多于Con组,免疫荧光染色结果显示细胞中GSDMD-N的表达水平上调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著高于Con组,而GSDMD水平下调,同时细胞培养基中IL-18、IL-1β的水平上调。Caspase-1抑制剂处理后,50 nmol/L的α-synuclein干预后,细胞焦亡水平显著低于α-synuclein组,同时免疫荧光染色结果显示GSDMD-N的水平下调,细胞中NLRP3、ASC、GSDMD-N、Caspase-1的表达水平显著低于α-synuclein组,而GSDMD水平上调,培养基中IL-18和IL-1β的水平下调。结论:α-synuclein可以通过激活NLRP3炎性小体活化继发神经细胞焦亡的发生,在帕金森病的发生发展中具有一定的作用。