大鼠肝再生的肝细胞周期启动及终止中骨髓瘤基因mRNA与其他非编码RNA的表达变化与作用

目的 了解大鼠肝再生(LR)0 h、6 h和72 h时骨髓瘤基因(MYC)及其mRNA相互作用的微小RNA(miRNA)和环状RNA(circRNA)调节肝细胞周期启动及终止的途径与方式。方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型，按Smedsrod等方法分离肝细胞，用大规模定量检测技术测定大鼠肝再生中肝细胞的mRNA、miRNA和circRNA[合称内源竞争RNA(ceRNA)]表达变化，用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网，用ceRNA综合分析等方法解析它们的表达相关性和作用相关性。结果 在PH后肝细胞周期启动0～6 h间的0 h和6 h时，MYC mRNA的比值为0.15±0.03和2.36±0.2,miR-134-5p为3.22±0.61和0.08±0.02,circRNA＿12112为0.68±0.21和13.35±3.53。同时，PH后0 h时，MYC促进的细胞周期启动相关基因Ras关联域家族成员1(RASSF1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)表达下调，抑制的细胞周期启动相关基因嵌套蛋白(NES)...     

大鼠部分肝切除术后Hedgehog信号分子的表达

目的: 探讨部分肝切除术后Hedgehog(Hh)信号分子的表达及其意义。方法: 切除肝脏左叶和中叶以建立SD大鼠部分肝切除术模型。18只雄性SD大鼠随机均分为3组:假手术组(A)、部分肝切除术组1(B)、部分肝切除术组2(C)。A、B组于术后24 h、C组于术后48 h取肝组织,用免疫组化染色法和Western blotting检测肝组织Ki-67、Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Glioblastoma-2(Gli-2)的表达。结果: HE染色显示B、C组可见肝细胞水肿,点状坏死。C组可见处于不同分裂期的细胞。B、C组Ki-67、Shh、Ihh和Gli-2的表达明显高于A组(P<0.01),C组Ki-67、Shh、Ihh及Gli-2的表达高于B组(P<0.01)。结论: 部分肝切除术后Hh信号通路被激活,可能参与促进肝脏修复再生。     

肝细胞生长和分化相关基因在大鼠肝再生中的表达方式及作用分析

目的在基因转录水平了解肝再生中肝细胞的生长和分化情况。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝细胞生长和分化基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(LR)中的表达情况,通过比较手术组和假手术组中基因表达差异性以确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中110个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为63、11、43和3,基因总表达的次数为63、43、101和80,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调488次,下调248次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动的多样性和复杂性。结论肝细胞生长和分化贯穿于整个肝再生中。     

肝纤维化时肝脏OPN和PAI-1的表达变化

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化。方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型,大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色,采用SABC法做免疫组织化学染色及Western blotting检测OPN和PAI-1蛋白表达,抽提肝组织总RNA,RT-PCR检测OPN mRNA表达。结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞浆、枯否氏细胞、汇管区的部分肝细胞、肝窦壁内皮细胞。PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色。Western blotting检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(P0.01)。与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强。RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(P0.05)。研究结果证明,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高。结论:肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制ECM降解、加速肝纤维化进程。     

高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及可能机制

目的 探究高表达miR-20b对甲状腺癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响及其可能机制.方法 将TPC-1细胞分为空白对照组、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-20b模拟物组(转染miR-20b mimics),实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-20b和CCND1的表达,双荧光素酶报告基因实验分析miR-20b和CCND1的靶向关系.MTT方法检测各组TPC-1细胞第24h、48h、72h的增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力.结果 实时定量PCR和Western blot结果显示,转染miR-20b模拟物后,TPC-1细胞中miR-20b的表达升高,CCND1的表达下降(P＜0.05),生物信息学和双荧光素酶实验表明CCND1是miR-20b的靶基因.转染miR-20b模拟物后,TPC-1细胞的增殖和侵袭能力下降(P＜0.05).结论 高表达miR-20b可抑制甲状腺癌细胞TPC-1的增殖和侵袭能力,其机制可能与CCND1表达受到抑制有关.     

血管内皮生长因子在大鼠肝再生过程中的表达变化

目的通过检测血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠肝再生过程中表达量的变化，探讨VEGF在肝再生中的作用。方法300只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组。实验组大鼠切除2／3肝，分别于术后不同时段取肝组织或原位灌注分离肝实质细胞。用免疫组织化学和Western blotting技术检测肝组织和肝实质细胞中VEGF的表达变化。结果正常肝组织的VEGF阳性细胞很少；肝切除（PH）后24h阳性细胞数显著增加（P〈0．01），主要分布于门管区周围；PH72h时阳性细胞数达到高峰，几乎遍及整个肝小叶；从PH120h起VEGF阳性细胞数逐渐减少至正常。Western blotting检测结果表明，肝实质细胞的VEGF表达量于PH0～12h较少，PH12h后增多，PH24—72h的表达量约为PH0～12h的2倍，PH72h后逐渐下降，至120h恢复正常；肝组织VEGF的表达量于PH0～12h较少，PH12h后逐渐增多，PH72h时出现高峰，约为PH0～12h的4倍；肝组织VEGF的表达量大于肝实质细胞的表达量。结论VEGF可能是参与肝脏组织结构重建的重要的生长因子：肝实质细胞是肝中VEGF的雷耍来源之一。     

miRNA27a 靶向GOLM1 对非小细胞肺癌生物行为学的影响

目的:探讨miR-27a在非小细胞肺癌中的生物学功能及其作用机制。方法:构建miR-27a过表达和阴性对照慢病毒A549稳定细胞系,分别为miR-27a OE组和miR-27a NC组,采用生物信息学和双荧光素酶报告系统分析miR-27a与GOLM1靶向关系。采用Western blot检测miR-27a NC组、miR-27a OE组以及未转染Control组细胞GOLM1的蛋白表达水平;采用CCK-8法检测各组细胞在24、36、48和72 h时的增殖活力;采用Transwell检测各组细胞的侵袭能力;采用TUNEL染色检测各组细胞的凋亡水平;采用体内移植瘤实验分析各组细胞肿瘤生长状态和转移情况。结果:生物信息学分析显示GOLM1可能是miR-27a的作用靶点;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与转染GOLM1-WT的miR-27a NC组细胞相比,转染GOLM1-WT的miR-27a OE组细胞的荧光素酶相对活性显著降低(P0.05);Western blot结果表明miR-27a OE组(0.54±0.05)GOLM1的蛋白表达水平显著低于Control组(1.35±0.08)和miR-27a NC组(1.31±0.09)(P0.05);与Control组和miR-27a NC组相比,miR-27a OE组细胞的增殖活力均受到显著抑制(P0.05);Transwell结果显示,miR-27a OE组(39.66±5.74)细胞的侵袭能力显著低于Control组(80.26±8.03)个和miR-27a NC组(77.51±10.18)个(P0.05);TUNEL染色表明,与Control组(49.17±6.56)个和miR-27a NC组(44.84±7.01)个相比,miR-27a OE组(82.49±9.70)个细胞凋亡水平显著增加(P0.05);体内移植瘤实验结果显示miR-27a OE组肿瘤生长速度和腹膜内转移病灶数量(8.85±1.57)均显著低于Control组(14.25±3.04)和miR-27a NC组(14.69±2.73)(P0.05)。结论:miR-27a可能通过靶向下调GOLM1的蛋白表达,抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,并诱导其凋亡,从而抑制非小细胞肺癌的发生发展。     

miR-27b对IL-17诱导下MCP-1表达的影响作用

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种基因表达调控因子,本研究旨在研究miR-27b对IL-17诱导下的单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。我们转染miR-27bmimic于H9C2细胞中,采用SYBR green I荧光定量PCR检测H9C2心肌细胞中miR-27b和MCP-1基因的表达情况,以ELISA分析H9C2细胞培养上清液中MCP-1蛋白的表达。在IL-17对MCP-1表达的影响的研究中,结果显示,IL-17作用2h后MCP-1mRNA的表达量开始升高,4h时达到高峰,尔后开始下降,而MCP-1蛋白的表达量0~24h逐渐升高。在miR-27b对IL-17诱导下MCP-1表达的影响的研究中,结果显示,IL-17组与空白对照组比较,MCP-1mRNA和蛋白水平显著升高(P0.05);IL-17组与转染miRNA阴性对照+IL-17组比较,两组的MCP-1mRNA和蛋白水平无显著差异(P0.05);转染miR-27bmimic+IL-17与转染miRNA阴性对照+IL-17组比较,MCP-1mRNA和蛋白水平显著下降(P0.01)。本研究表明,(1)IL-17可上调MCP-1的表达,这与IL-17的作用时间有关。(2)过表达miR-27b可下调IL-17诱导下MCP-1的表达水平。     

5-羟色胺4受体调节剂对肝部分切除大鼠胃肠5-羟色胺分泌和肝再生的影响

目的 探讨5-羟色胺4(5-HT4)受体调节剂(激动剂和抑制剂)对肝部分切除(PH)后大鼠胃肠道5-羟色胺(5-HT)和肝再生的影响. 方法 60只成年SD大鼠PH后分为对照组、西沙必利(激动剂)组和GR113808(抑制剂)组3组;西沙必利组PH后每12 h按10mg/kg体重的西沙必利灌胃,GR113808组PH后每12 h按3mg/kg体重的GR113808腹腔注射;分别于PH后0 h、24 h、48 h、72 h计算肝/体重比,并取血液、胃、小肠和肝组织;用免疫组织化学技术显示胃肠中5-HT免疫阳性(5-HTIR)细胞,用图像分析系统测定胃肠5-HTIR细胞平均灰度,用酶联免疫吸附法(ELESA)检测血液中的5-HT,用银染技术显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs). 结果 与对照组比,1. 西沙必利组胃肠中5-HTIR细胞数于PH后48～72 h显著下降(P<0.05)、细胞的灰度于PH后24～72 h显著上升(P<0.05),血中5-HT的含量于PH后24～72 h显著上升(P<0.05),肝/体重比和肝组织AgNORs颗粒数在PH后48～72 h显著增加(P<0.05);2. GR113808组在PH后24～72 h期间,5-HTIR细胞数较对照组无显著性差异,但细胞的灰度显著下降(P<0.05或P<0.01),血中5-HT的含量显著下降(P<0.05或P<0.01),肝/体重比于48～72 h显著下降(P<0.05或P<0.01),肝中AgNORs颗粒数于24～72 h显著减少(P<0.05或P<0.01). 结论 用5-HT4受体调节剂改变胃肠道5-HT的分泌量,可导致肝/体重比和肝细胞的转录活性发生相应的改变;胃肠道分泌的5-HT具有促进肝细胞增殖的作用.     

肝干细胞的生长和分化与大鼠肝再生的相关性分析

目的在基因转录水平了解肝干细胞在大鼠肝再生中的作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝干细胞生长和分化的基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠部分肝切除(PH)后肝再生中的表达情况,用比较真、假手术中基因表达差异性确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中50个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为24、10、21和2;基因总表达次数为242、3、46和26,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调153次、下调123次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动多样和复杂。结论肝再生中肝脏干细胞的生长和分化活动加强,与某些基因表达状态和方式有关。     

核酸及其衍生物的代谢?加工?运输相关基因在大鼠肝再生中表达模式的分析

目的在基因转录水平了解核苷酸及其衍生物、DNA及RNA代谢、加工、运输相关基因在大鼠肝再生(LR)中的表达变化。方法用搜索网站资料和查阅相关论文等方法获得核苷酸及其衍生物、DNA及RNA代谢、加工、运输相关基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用手术组和假手术组比较的方法确定肝再生相关基因。结果初步证实,上述基因中有240个基因与大鼠肝再生相关。肝再生早期[部分肝切除(PH)后0.5~4h]、前期(PH后6~12h)、中期(PH后16~66h)、后期(PH后72~168h)等4个时期起始表达的基因数分别为65、14、150和11,基因的总表达次数为133、87、627和169,它们的表达模式分别为6、5、22和9种,共表达上调768次,下调248次。肝再生前期和中期mRNA降解增强;前期、中期和后期DNA重组、修饰、转录及mRNA加工和运输增强;几乎整个肝再生中核苷酸及其衍生物代谢、DNA复制、包装和分解活动增强。结论肝再生相关基因主要在肝再生早期起始表达,在不同时期发挥作用。     

miR-34a调控HMGB1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-34a对膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法合成miR-34a的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-34a的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot方法检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性HMGB1 m RNA及蛋白的表达变化。结果 miR-34a的模拟物转染至T24细胞的效率为80%,转染miR-34a模拟物48 h后,T24细胞内miR-34a的表达显著升高(P0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P0.05),且呈时间依赖性,HMGB1 m RNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P0.05)。结论 miR-34a抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向HMGB1基因相关。     

miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在LO2人正常永生化肝细胞及Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、E-cadherin、vimentin的蛋白水平。结果 miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低。PPARγsiRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用。结论 miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭。     

血清miR-181b和miR-27a表达与颈动脉粥样硬化程度相关

目的分析血清微小RNA(miR)-181b、miR-27a表达与颈动脉粥样硬化(CAS)病变程度的关系。方法选取血脂异常患者102例,健康人100名为对照组,RT-qPCR检测血清miR-181b和miR-27a的表达。对比血脂异常患者与对照组血清miR-181b、miR-27a表达差异,分析血脂异常患者发生CAS的影响因素及血清miR-181b、miR-27a表达与CAS病变程度的相关性。结果血脂异常患者的血清miR-181b相对表达量低于对照组,而miR-27a相对表达量高于对照组(P0.05);硬化组血清miR-181b相对表达量低于未硬化组,miR-27a相对表达量、hs-CRP、LDL-C水平、高血压占比高于未硬化组(P0.05),Logistic回归分析显示以上指标均是血脂异常患者发生CAS的独立影响因素(P0.05);ROC显示血清miR-181b、miR-27a相对表达量预测血脂异常患者发生CAS的灵敏度分别为84.75%、81.36%,特异度分别为76.74%、74.42%,准确度分别为81.37%、78.43%,AUC分别为0.791、0.750;Pearson相关性分析显示血清miR-181b相对表达量与Crouse积分呈负相关(P0.05),miR-27a相对表达量与Crouse积分呈正相关(P0.05)。结论血清miR-181b与miR-27a在血脂异常患者表达异常,且二者均是CAS发生的独立影响因素,其表达水平与病情严重程度有关。     

MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平。Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化。Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平。应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因。采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系。结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P0.05)。M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P0.05)。M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P0.05)。ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因。结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程。     

细胞凋亡相关基因表达谱与大鼠再生肝的细胞凋亡关系

目的在基因转录水平探讨细胞凋亡相关途径对大鼠肝再生的作用。方法采用大鼠2/3部分肝切除(PH)方法,制备再生肝模型,同时设对照手术(假手术)。用查阅网站资料和相关论文等方法获得凋亡相关基因,用大鼠基因230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,通过比较真、假手术中上述基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果细胞凋亡相关基因中,252个基因与肝再生相关。在肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和结构功能重建期(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为81、231、55和16,总表达的基因数为161、100、733和192,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共上调795次,下调291次,表明肝再生中大部分基因表达增强。它们的表达模式分为35种,表明肝再生中细胞凋亡相关基因的表达情况多样和复杂。结论15条细胞凋亡途径参与肝再生调控。     

大鼠肝再生终止阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白αmRNA、微小RNA-144-3p和3种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生终止阶段CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα) mRNA、miR-144-3p、rno-LOC100365958_0001、mo-Usp3_0010和mo-AC241873_0010调节肝细胞进入G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA(ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后6h和72 h时,CEBPα mRNA的比值为1.12±0.27和2.52±0.15,miR-144-3p为2.97±0.81和0.99±0.36,rno-LOC 100365958_0001为0.16±0.05和6.78±0.62,rno-Usp3_0010为0.13±0.01和7.61±0.69,rno-AC241873_0010为0.09±0.02和7.53±0.69.CEBPα促进的G1期相关基因细胞周期蛋白G2(CCNG2)为0.25±0.06和1.10±0.22,抑制的G1期相关基因ETS变异转录因子6(ETV6)为2.22±0.68和0.99±0.27,MAPK14为2.01±0.32和0.85±0.11,信号转导子和转录激活因子3(STAT3)为2.88±0.24和1.08±0.07,肿瘤坏死因子(TNF)为2.29±0.51和0.86±0.51.CEBPα促进的G0期相关基因G0/G2期开关2(G0S2)为0.64±0.08和4.71±0.91,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为0.42±0.13和2.83±0.62.结论 PH后6h时,rno-LOC 100365958_0001、rno-Usp3_0010、rno-AC241873_0010和miR-144-3p的相互作用加强了后者对CEBPα mRNA的抑制,不利于CEBPα形成,有利于CEBPα抑制的G1期相关基因表达和肝细胞处于G1期.相反,PH后72 h时,CEBPα mRNA上调,有利于CEBPα促进G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.     

大鼠肝再生终止阶段肝细胞CCAAT增强子结合蛋白αmRNA、微小RNA-144-3p和3种环状RNA的表达和作用

目的 了解大鼠肝再生终止阶段CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα) mRNA、miR-144-3p、rno-LOC100365958_0001、mo-Usp3_0010和mo-AC241873_0010调节肝细胞进入G1期的途径和方法.方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量分析技术检测大鼠肝再生中肝细胞竞争性内源RNA(ceRNA)表达的变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网络,用ceRNA综合分析等方法解析它们表达的相关性和作用相关性.结果 PH后6h和72 h时,CEBPα mRNA的比值为1.12±0.27和2.52±0.15,miR-144-3p为2.97±0.81和0.99±0.36,rno-LOC 100365958_0001为0.16±0.05和6.78±0.62,rno-Usp3_0010为0.13±0.01和7.61±0.69,rno-AC241873_0010为0.09±0.02和7.53±0.69.CEBPα促进的G1期相关基因细胞周期蛋白G2(CCNG2)为0.25±0.06和1.10±0.22,抑制的G1期相关基因ETS变异转录因子6(ETV6)为2.22±0.68和0.99±0.27,MAPK14为2.01±0.32和0.85±0.11,信号转导子和转录激活因子3(STAT3)为2.88±0.24和1.08±0.07,肿瘤坏死因子(TNF)为2.29±0.51和0.86±0.51.CEBPα促进的G0期相关基因G0/G2期开关2(G0S2)为0.64±0.08和4.71±0.91,磷脂酶A2-IVA(PLA2G4A)为0.42±0.13和2.83±0.62.结论 PH后6h时,rno-LOC 100365958_0001、rno-Usp3_0010、rno-AC241873_0010和miR-144-3p的相互作用加强了后者对CEBPα mRNA的抑制,不利于CEBPα形成,有利于CEBPα抑制的G1期相关基因表达和肝细胞处于G1期.相反,PH后72 h时,CEBPα mRNA上调,有利于CEBPα促进G0期相关基因表达和肝细胞处于G0期.     

miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用

目的构建miR-181b慢病毒过表达载体,探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用。方法分别构建p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1过表达载体,转染HEK-293T细胞后,用实时荧光定量PCR(RTq PCR)法检测MAPK1 mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系。结果成功构建了p SicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1重组质粒,miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平(P0.05),抑制miR-181b的表达后,MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调(P0.05)。结论成功构建p SicoR-miR-181b慢病毒载体,并证实通过靶向作用MAPK1-3'UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。