过表达B细胞淋巴瘤/白血病-2对重度创伤性脑损伤大鼠的治疗作用及其机制

目的观察过表达B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)对重度创伤性脑损伤大鼠神经保护作用。方法2018年1月至2019年9月,60只SD大鼠采用随机数字法分为对照组、模型组和bcl-2组。对照组和模型组大鼠经脑室注射对照腺相关病毒1×10^11 v.g/只,bcl-2组经脑室注射bcl-2过表达腺相关病毒1×10^11 v.g/只,注射24 d后,模型组和bcl-2组大鼠采用自由落体撞击法建立重度创伤性脑损伤模型,对照组大鼠不处理。建模24 h后,采用神经行为学评分评价大鼠的神经功能;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析脑组织的凋亡水平;采用JQ1法检测脑组织细胞线粒体膜电位;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析bcl-2、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平,计量资料比较采用单因素方差分析。结果bcl-2组大鼠神经功能评分(5.72±1.27)低于模型组大鼠神经功能评分(8.59±1.67),差异有统计学意义(t=3.114,P<0.05)。bcl-2组大鼠脑组织细胞线粒体膜电位(1.59±0.13)高于模型组大鼠脑组织细胞线粒体膜电位(1.01±0.10),差异有统计学意义(t=2.011,P<0.05)。bcl-2组大鼠神经细胞凋亡水平[(16.59±3.09)%]显著低于模型组[(39.54±4.09)%],差异有统计学意义(t=3.103,P<0.05)。bcl-2组细胞bcl-2蛋白表达水平(1.79±0.14)高于对照组和模型组(0.96±0.11和1.00±0.12),差异有统计学意义(t=2.019、1.978,P<0.05)。bcl-2组大鼠脑组织Caspase-3和bax蛋白表达水平(1.17±0.09和1.05±0.17)低于模型组(1.32±0.11和1.74±0.12),差异有统计学意义(t=1.280、2.016,P<0.05)。结论过表达bcl-2可显著抑制重度创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡,提高线粒体功能,保护大鼠神经功能。     

神经酰胺信号转导通路在胃泌素抑制大肠癌细胞凋亡中的作用及机制

目的 探讨神经酰胺信号转导通路在胃泌素抑制大肠癌细胞凋亡中的作用及其机制.方法 胃泌素、丙谷胺各设5个浓度梯度,分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 mg/L和8.00、16.00、32.00、64.00、128.00 mg/L.运用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖活力改变,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理HT-29细胞的最佳浓度;流式细胞仪逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测各组细胞凋亡率、神经酰胺、p38磷酸化水平、B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA及其蛋白表达变化.结果 胃泌素能促进大肠癌HT-29细胞的增殖,并抑制凋亡,其最佳浓度为25.00 mg/L(F =31.36,P＜0.05);丙谷胺能明显拮抗胃泌素促进HT-29细胞的增殖作用,其最佳浓度为32.00 mg/L(F =24.31,P＜0.05).胃泌素组细胞凋亡率明显低于对照组和胃泌素+丙谷胺组(q =4.23、4.06,P＜0.05).胃泌素组bax mRNA、蛋白相对表达率以及神经酰胺、p38磷酸化水平明显低于对照组、丙谷胺组及胃泌素+丙谷胺组(q=5.50、6.00、7.50;6.50、7.00、8.50;8.00、8.50、10.00;4.60、4.90、6.53,P＜0.05),而bcl-2 mRNA、蛋白相对表达率与其相反(q =4.95、4.24、7.07;7.07、6.36、7.78,P＜0.05).结论 胃泌素能够通过神经酰胺信号转导通路抑制大肠癌HT-29细胞凋亡,其可能是通过抑制p38活性、上调bcl-2及下调bax表达来实现的,但此信号传导通路能够被胃泌素受体拮抗剂丙谷胺阻断.     

移植骨髓间充质干细胞对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响.方法 以各兔L2/3、L3/4、L4/5、L5/6节段分为正常组、退变组、成纤维细胞(SFs)移植对照组、MSCs移植治疗组.MSCs和SFs分别经绿色荧光蛋白(GFP)转染后,注射植入退变椎间盘的髓核.通过透射电镜观察退变椎间盘凋亡髓核细胞形态;用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测退变组织中髓核细胞凋亡相关基因bcl-2和box mRNA的表达;免疫荧光法标记髓核细胞凋亡相关蛋白Caspase-3,并通过TUNEL法标记凋亡髓核细胞,激光共聚焦显微镜检测髓核细胞凋亡蛋白表达率和细胞凋亡比率.结果 透射电镜下,退变椎间盘中凋亡髓核细胞呈现出核染色质边集,空泡形成,核膜断裂,凋亡小体形成等变化.MSCs移植治疗组bcl-2 mRNA的表达量高于退变组和SFs移植对照组(P<0.05),bax mRNA的表达量与退变组差异无统计学意义(P>0.05).MSCs移植治疗组细胞凋亡率和Caspase-3表达率均高于正常组[细胞凋亡率分别为(16.75±2.14)%和(6.86±1.08)%;Caspase-3表达率分别为[(20.34±1.03)%和(6.09±0.77)%](P<0.05),低于退变组和SFs移植对照组[细胞凋亡率分别为(31.87±4.16)%和(29.02±2.16)%;Caspase-3表达率分别为(31.50±3.78)%和(30.20±4.93)%](P<0.05).结论 髓核细胞凋亡在椎间盘退变过程中起重要作用.MSCs移植能有效抑制椎间盘髓核细胞凋亡,延缓椎间盘退变过程.     

力学刺激对软骨细胞凋亡信号转导分子Caspase-3及bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的 观察力学刺激对软骨细胞凋亡信号转导分子半胱氨酸酶-3( Caspase-3)及B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bax mRNA表达和凋亡的影响.方法 兔膝关节软骨分离培养,在第3代软骨细胞培养瓶中加入不同剂量的Caspase-3、bcl-2、bax抑制剂,力学刺激诱导凋亡,然后检测软骨细胞凋亡率,聚合酶链反应(PCR)半定量分析Caspase-3 bcl-2、bax mRNA表达.结果 力学刺激诱导软骨细胞凋亡,在加入抑制剂的各组和空白组的凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05);各组Caspase-3及bcl-2、bax mRNA表达和空白组差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase-3抑制剂组的凋亡率和Caspase-3表达明显相关(r=0.69,t=3.41,P＜0.01);bcl-2抑制剂组和bcl-2的表达明显相关(r=0.73,t=3.97,P＜0.01);bax抑制剂组和bax的表达明显相关(r=0.89,t =6.69,P＜0.01);各组差异均有统计学意义.结论 Caspase-3、bax抑制剂能对抗力学刺激诱导的凋亡,而bcl-2抑制剂使凋亡增加,各组Caspase-3及bcl-2、bax mRNA表达发生相应改变.     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

高良姜素下调Bcl-2通过线粒体途径促进人肝癌Hep3B细胞凋亡

目的 研究高良姜素对人肝癌Hep3B细胞凋亡的影响并探讨相关机制. 方法 体外培养人肝癌Hep3B细胞,经高良姜素处理后,RT-PCR和Western blot检测Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法测定细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,流式细胞仪分析线粒体膜电位,Western blot检测Caspase-3、9及Cytochrome C蛋白的表达水平. 结果 高良姜素使Hep3B细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平明显下降.不同剂量的高良姜素(40、80、120 μmol/L)对细胞生长抑制率分别为6.38％±1.32％,21.58％±1.97％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(t低剂量组=13.01,t中剂量组=15.12,t高剂量组=14.79,均P＜0.01);细胞凋亡率分别为21.58％±1.97％,34.18％±3.89％和43.18％±3.89％,明显高于对照组(分别t低剂量组=24.67,t中剂量组=32.35,t高剂量组=25.89,均P ＜0.01);线粒体膜电位绿色荧光蛋白表达百分比分别为18.93％±2.3％,31.11％±2.67％和46.06％±2.95％,明显高于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=31.38,t高剂量组=48.15,均P ＜0.01);Caspase-3、9和胞质内Cytochrome C表达水平明显高于对照组(Caspase-3:分别t低剂量组 =11.94,t中剂量组=10.18,t高剂删量组=18.82,均P＜0.01;Caspase-9:分别t低剂量组=15.11,t中剂量组=20.41,t高剂量组=21.25,均P＜0.01;Cytochrome C:t低剂量组=15.11,t中剂量组=28.47,t高剂量组=16.01,P＜0.01),而线粒体中Cytochrome C表达水平明显低于对照组(分别t低剂量组=16.70,t中剂量组=12.00,t高剂量组=27.61,均P＜0.01). 结论 高良姜素可下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达促进人肝癌Hep3B细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径相关.     

氧化苦参碱对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察氧化苦参碱(OXY)对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 噻唑蓝(MTT)法测定OXY对A549人肺癌细胞活力的作用.流式细胞术测定A549细胞凋亡率.荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Westem blot方法测定OXY对A549细胞B淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax) mRNA和蛋白表达的影响.Western blot方法测定OXY对A549细胞的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达的影响.结果 OXY可抑制A549细胞增殖.与对照组[(5.63±0.76)％]比较,OXY组细胞凋亡率[(13.26±2.15)％]上升(P＜0.01);与对照组(1.02±0.27、0.23±0.04)比较,OXY组bax mRNA(1.61±0.19)和蛋白(0.71±0.10)表达上升(P＜0.05,P＜0.01);与对照组比较(0.94 ±0.14、0.64±0.09),OXY组bcl-2mRNA(0.42±0.05)和蛋白(0.21±0.04)表达下降(P＜0.01).与对照组(0.29±0.03)比较,OXY组p-JNK表达水平(0.66 ±0.06)明显升高(P＜0.01),其他蛋白表达均无明显变化.与OXY组(0.66±0.07、0.28±0.03、0.65±0.08)比较,同时给予OXY和p-JNK抑制剂SP600125组bax蛋白表达(0.39±0.05)下降,bcl-2表达(0.50±0.08)上升,p-JNK蛋白(0.26 ±0.04)表达下降(P＜0.01).结论 OXY碱可诱导A549细胞凋亡,可能与升高p-JNK水平有关.     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用

目的 观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽模体的白细胞介素(IL)-24突变体蛋白(RGD-IL-24)对肝癌细胞的抑制作用.方法 肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24(8 mg/L)、IL-24(8 mg/L)和磷酸盐缓冲液(PBS),噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞生长抑制作用;DAPI染色检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bcl-2及Caspase-3蛋白表达;黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附.结果 RGD-IL-24、IL-24治疗4 d后HepG2细胞存活率分别为(0.219±0.015)、(0.397±0.009),与对照组(0.823±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为(0.631±0.027)、(0.472±0.031),与对照组(0.082±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强(P<0.05).与IL-24治疗组比较,RGD-IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加.黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强.结论 含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用.     

小鼠乳腺癌中p53与bcl-2/bax基因表达的相关性研究

目的探讨p53基因和bcl-2/bax基因在乳腺癌发病机制中的作用以及它们之间的相互关系。方法以小鼠乳腺癌BCML-TA299可移植模型为研究对象,用免疫组织化学染色法观测α-干扰素(INF-α)干扰后p53基因与bcl-2/bax表达的关系。结果实验性乳腺癌BCML-TA299治疗组荷瘤鼠生存期较对照组延长,且随着时间的推延治疗组肿瘤的体积明显低于对照组的肿瘤体积;治疗组与对照组比较,肺转移率低。对照组p53蛋白阳性表达率为92.01±0.48,而治疗组中p53呈阴性表达。对照组瘤组织bcl-2蛋白表达为50.21±0.52,bax蛋白表达为12.08±0.13;治疗组瘤组织bcl-2蛋白表达为12.01±0.2,bax蛋白表达为48.19±0.57。对照组p53蛋白表达与bcl- 2呈正相关,而与bax呈负相关(P<0.05);治疗组中p53呈阴性表达,bcl-2和bax表达与对照组结果相反。结论bcl-2和bax的表达受p53调节。p53、bcl-2/bax在乳腺癌发病机制中起着较重要的作用。     

金属卟啉化合物的光动力学作用对人膀胱癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的探讨金属卟啉的光动力学作用对人膀胱癌细胞增殖和凋亡基因bcl-2、bax表达的影响及其诱导细胞凋亡的机制。方法合成水溶性锰卟啉化合物后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、膜联蛋白/碘化丙锭流式细胞术、免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测锰卟啉的光动力学作用对人膀胱癌BI U-87细胞的生长活性、凋亡率和bcl-2、bax蛋白及相应mRNA表达水平变化的影响。结果1μmol/L锰卟啉光动力作用BI U-87细胞30min后,MTT法和流式细胞术结果显示细胞生长抑制率和凋亡率分别为(62.39±9.17)%、(19.15±5.49)%,免疫组化和RT-PCR结果表明bax蛋白及相应mRNA表达水平分别为(46.4±5.67)%、(0.63±0.13),均分别明显高于对照组(2.26±0.04)%、(3.95±0.84)%、(32.7±4.52)%、(0.29±0.02)(P<0.05);而bcl-2蛋白及其mRNA表达水平分别为(31.5±2.59)%、(0.44±0.02),均明显低于对照组(54.8±6.21)%、(0.73±0.07)。结论锰卟啉的光动力作用可以通过抑制bcl-2的表达、促进bax的表达来诱导BI U-87细胞发生凋亡。     

T42肽对CD133阳性肝癌干细胞恶性表型的抑制作用

目的探讨重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(LCSCs)恶性表型的影响及作用机制。方法2018年6月至2019年6月,培养人肝癌细胞系SMMC-7721,利用免疫磁珠法富集CD133+肝癌干细胞LCSCs。实验共分3组:正常组、T42肽(40 mmol/L)处理组和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L)处理组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测处理后第1、2、3、4天的细胞活力;克隆形成实验检测3组细胞处理后第14天的克隆形成情况;流式细胞术检测3组LCSCs处理24 h后的细胞凋亡率;Transwell实验分别检测3组LCSCs处理48 h后的迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测3个不同处理组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、剪切型含半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Cl-Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等的表达。符合正态分布的组间比较采用t检验,不符合正态分布的采用单因素方差分析。结果T42肽、5-氟尿嘧啶处理组LCSCs的克隆形成率[(41.67±8.26)%、(52.03±10.35)%]、细胞迁移数[(97.17±13.73)、(111.51±8.60)个]和细胞侵袭数[(79.02±7.87)、(86.03±6.54)个]显著低于对照组[(98.67±7.37)%、(185.67±12.88)个、(139.83±18.32)个],凋亡率[(13.21±0.38)%、(9.02±0.35)%]显著高于对照组[(4.07±0.38)%],差异均有统计学意义(t=12.613、8.991;11.513、11.732;7.472、6.781;41.503、23.412,P值均<0.05)。Western blot结果显示T42肽、5-氟尿嘧啶通过增加bax和Cl-Caspase-3,抑制bcl-2的蛋白表达来诱导LCSCs凋亡,通过上调E-cadherin同时下调Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平来调节LCSCs的迁移和侵袭。结论T42肽具有抑制LCSCs的增殖、迁移、侵袭,并促进其凋亡的作用。     

长链非编码RNA-XIST对脊髓损伤大鼠神经元凋亡影响及其机制的实验研究

目的探讨长链非编码核糖核酸-X染色体失活基因(lncRNA-XIST)对脊髓损伤大鼠神经元凋亡过程的影响及其作用机制。方法将成年SD大鼠(北京中国科学院实验动物中心提供)随机分为假手术组、脊髓损伤组、观察组,假手术组接受椎板切除术,脊髓损伤组和观察组椎板切除后使用脊髓打击器损伤脊髓。假手术组和脊髓损伤组脊髓内注射空白慢病毒,观察组脊髓内注射转染慢病毒包装短发夹RNA(Lv-shRNA)的慢病毒,比较不同处理方式下各组大鼠运动功能评分、脊髓细胞凋亡及相关蛋白表达,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两组间比较采用t检验。结果在各不同时间点,假手术组大鼠运动功能评分[(21.36±3.52)、(22.16±3.22)、(22.15±4.12)、(21.52±3.25)、(24.26±6.21)、(22.45±6.14)分]显著高于脊髓损伤组[(0.45±0.21)、(1.26±0.26)、(3.12±1.02)、(4.38±1.05)、(10.02±3.45)、(11.14±3.59)分]和观察组[(4.52±2.13)、(6.23±1.02)、(10.14±2.88)、(12.02±3.25)、(16.25±4.25)、(18.05±2.14)分,F=9.505、8.425、2.302、9.565、4.825、3.052,P<0.05],差异均有统计学意义;脊髓细胞凋亡率[(4.25±0.56)%、(4.56±0.74)%、(5.12±1.02)%、(3.85±0.52)%]显著低于脊髓损伤组[(45.85±7.81)%、(43.87±6.85)%、(47.85±3.48)%、(44.85±6.25)%]和观察组[(23.42±3.25)%、(21.05±4.15)%、(26.45±5.87)%、(24.95±6.14)%,F=7.105、8.825、8.114、9.514,P<0.05],差异均有统计学意义;磷酸化-Akt、磷酸化-mTOR显著高于脊髓损伤组[(0.15±0.02)、(0.17±0.03)]和观察组[(0.85±0.05)、(0.74±0.03),F=7.814、8.825,P<0.05],差异均有统计学意义。而观察组大鼠运动功能评分、磷酸化-蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)显著高于脊髓损伤组,细胞凋亡率显著低于脊髓损伤组。结论长链非编码RNA-XIST可以通过促进磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路活化,促进脊髓损伤的神经元凋亡。     

内源性大麻素诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡中Caspase-3的作用

目的 检测内源性大麻素(AEA)是否诱导人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡、以及Caspase-3在细胞凋亡过程中的作用.方法 分别于AEA(100 μmol/L)作用细胞前后,应用Annexin V Binding方法 、流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,检测Caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达.结果 AEA作用细胞3、6、12、24 h,细胞凋亡率分别为(14.13±2.17)%、(27.04±3.21)%、(34.98±7.74)%及(81.35±9.71)%,其中24 h的细胞凋亡率与对照组(12.72±0.44)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).AEA作用细胞24 h,细胞的Caspase-3活性由142.0±5.8增加至226.0±6.4(P<0.01);Caspase-3 mRNA的表达由0.24±0.13升高至0.54±0.32(P<0.05);如预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后再加入AEA,则细胞的Caspase-3活性不再升高90.0±4.3.RT-PCR方法 未检测到bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达.结论 AEA对人肝癌高转移细胞MHCC97H具有凋亡诱导作用,Caspase-3参与了凋亡的调控.     

参芪肝康片保护乙型肝炎病毒大鼠肝功能机制研究

目的:探讨参芪肝康片抑制乙型肝炎病毒(HBV)致肝功能损伤及其机制。方法:将60只SD大鼠分为对照组(未行任何处理)、乙肝病毒模型组(乙型病毒性肝炎模型)、拉米夫定组(拉米夫定处理)以及低、中和高剂量参芪肝康片组[分别将2.5、5.0和10.0 mg/(kg·d)剂量参芪肝康片处理],每组均含有10只SD大鼠。检测并比...     

靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤双应

目的 观察靶向中期因子反义寡核苷酸的体内抗肿瘤效应.方法 构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型48只,随机分6组,生理盐水对照组,MK-AS(每日25、50、100mg/kg)组,MK-Sen(每日50mg/kg)组和5-Fu(每日10 mg/kg)组,放免法检测血清AFP浓度,Western blot检测组织MK、p53、bax、bcl-2和Caspase-3蛋白水平.结果 (1)与生理盐水对照组比较,MK-AS治疗组的肿瘤体积明显减小,[(807.75±195.19)mm3比(552.75±84.38)、(532.00±121.57)、(294.50±70.66)mm3],差异有统计学意义(P<0.01);(2)MK.AS治疗组的肿瘤瘤重与生理盐水对照组比较显著降低,[(1.29±0.13)g比(0.70±0.14)、(0.64±0.18)和(0.44±0.18)g],差异有统计学意义(P<0.01);(3)MK-AS明显下调肿瘤组织MK和bcl-2蛋白的表达,而p53、bax、Caspase-3表达上调.结论 MK-AS具有明显的体内抗肿瘤效应;MK-AS的抗肿瘤效应可能与凋亡相关蛋白p53、bax、Caspase-3表达水平的上调和bcl-2的下调有关.     

硫化氢在肠缺血-再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍中的作用

目的 观察硫化氢(H2S)在肠缺血-再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍中的作用.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分为A(假手术)组、B(缺血-再灌注)组、C(缺血-再灌注+NABS)组(n=8).留取血浆测定H2S、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL),行肝脏组织匀浆检测脂质过氧化物(LPO)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧物歧化酶(SOD)、丙二醇(MDA)和GSH/GSSG,光镜和电镜下观察肝脏组织病理变化,TUNEL染色观察肝细胞凋亡指数(AJ),逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测肝脏组织bcl-2、bax、Caspase-3、STAT3 mRNA和蛋白、pSTAT3和cytochrome C蛋白的表达.结果 C组ALT、AST、肝脏组织MPO、浸润的中性粒细胞数、MDA、LPO、AI、pSTAT3蛋白、Caspase-3mRNA、Caspase-3蛋白、bax mRNA、bax蛋白表达量分别为(47.63±5.04)U/L、(57.63±5.04)U/L、(1.71±0.17)U/mg、(14.13±1.64)个/视野、(23.42±0.69)nmol/mg、(140.13±11.33)nmol/mg、(23.39±1.40)%、0.222±0.019、0.477±0.050、0.214±0.009、0.076±0.004、0.419±0.012,均显著低于B组,高于A组(P<0.01),均与H2S负相关,与AJ正相关.C组H2S、GSH/GSSG、SOD、cytochrome C蛋白、bcl-2 mRNA、bcl-2蛋白表达量分别为(35.27±3.14)μmol/L、9.78±0.56、(90.70±5.69)U/mg、1.132±0.076、0.325±0.052、0.377±0.034,均显著高于B组,低于A组(P<0.01),均与AI负相关,与H2S正相关.pSTAT3与bax、Caspase-3基因表达正相关,与cytochrome C蛋白、bcl-2基因表达负相关.结论 H2s对肠缺血再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍起保护作用.     

多肽K237对PC-3M细胞增殖及bax、bcl-2 mRNA表达的影响

目的:研究多肽K237对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用,及其可能的作用机制。方法:将培养的PC-3M细胞分为4组:实验组(分别以50、100、200μmol/L的多肽K237处理48h)和对照组(K237浓度为0μmol/L),采用MTT法观察多肽K237对前列腺癌PC-3M细胞增殖的影响,用RT-PCR法检测bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果:不同浓度的多肽K237处理48h后,PC-3M细胞形状变圆,体积变小,胞质透亮度下降,部分细胞脱落悬浮于培养液中。在50、100、200μmol/L的多肽K237作用48h后,MTT法检测的细胞生长抑制率分别为(12.6±0.95)%、(17.8±0.99)%、(27.2±1.12)%。RT-PCR结果显示:50、100、200μmol/L实验组和对照组的bax/β-actin值分别为0.919±0.071、0.971±0.083、0.992±0.102,(0.889±0.06),bcl-2/β-actin值分别为0.896±0.085、0.791±0.084、0.764±0.702,0.922±0.097,3组中上述两项指标均较对照组有明显变化(P均<0.01),其中,baxmRNA表达水平上调,而bcl-2mRNA表达水平下调,上述作用呈现剂量效应关系。结论:多肽K237可能通过影响bax、bcl-2mRNA的表达来诱导PC-3M细胞凋亡,从而抑制前列腺癌细胞的增殖。     

ABL-N诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制

目的 探讨旋覆花内酯(ABL)-N诱导前列腺癌细胞凋亡的作用及其机制.方法 0～40μmol/L ABL-N分别处理前列腺痛细胞后,利用噻唑蓝(MTF)检测对细胞增长的抑制作用;流式细胞学、TUNEL染色等方法检测其诱导凋亡的作用,并检测Capase活性,Western blot测定bax、bel-2水平变化.结果 ABL-N明显抑制前列腺癌细胞PC3、LNCaP及DU145的生长,并呈剂量依赖性.40 μmol/L ABL-N作用24 h后,(73.34±4.41)%的PrEC细胞存活,而3种前列腺癌细胞分别为(11.92±2.31)%、(12.55±1.94)%、(13.28±2.26)%.膜联蛋白/碘化丙锭(Annexin V/PI)及TUNEL染色表明ABL-N呈剂量依赖性诱导PC3凋亡.ABL-N可激活Caspase活性,尤其Caspase-3,20μmol/L ABL-N作用24 h后其活性是对照组的4.23倍;bax/bcl-2比率随浓度增加明显增高.结论 ABL-N可通过Caspase途径及bax/bcl-2蛋白途径,诱导PC3等前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞增殖.

Abstract：

Objective To explore the ABL-N-induced apoptosis of human prostate cancer cells and the mechansim. Methods After administration of 0-40 μmol/L ABL-N for 24 h, the effects of ABL-N on the induction of apoptosis in human prostate cancer cells PC3 were measured by methyl thiazol tetrazolium ( MTT) colorimetry, Annexin V/propidium iodide staining and TUNEL staining. The levels of bax and bcl-2 were tested by Western blotting. Caspase activity was assayed. Results ABL-N treatment to PC3,LNCaP, and DU145 cells resulted in a dose-dependent inhibition of cell growth without any substantial effect on normal human prostate epithelial PrEc cells. About (73. 34 ±4. 41)% of PrEC cells were viable following a 24-h exposure to 40 μmol/L ABL-N, whereas only (11. 92 ± 2. 31) % of PC3, (12. 55 ±1. 94) % of LNcap, and (13. 28 ± 2. 26) % of DU145 cells survived under similar conditions of ABL-N treatment. ABL-N treatment resulted in a dose-dependent induction of apoptosis of PC3 cells. Furthermore,ABL-N induced the activation of Caspases, especially Caspase 3. The Caspase-3 activity of PC3 cells treated with ABL-N (20 μmol/L) (0. 95) was significantly increased by about 4. 2-fold of the untreated cells (0. 24) at 24 h. The ratio of bax/bcl-2 was also increased significantly. Conclusion ABL-N induces apoptosis though the activation of Caspase 3 and pro- and anti-apoptotic Bcl-2 family proteins in prostate cancer cells.     

Effects of penehyclidine hydrochloride on apoptosis of lung tissues in rats with traumatic acute lung injury

Objective： To investigate the effects ofpenehyclidine hydrochloride on apoptosis of lung tissue cells and its mechanism in acute lung injury following blunt chest trauma in rats. Methods： Sprague Dawley （SD） rats （n=54） weighing （250-25） g were divided equally and randomly into three groups： normal control group （C group, n= 18）, trauma model group （T group, n= 18） and penehyclidine hydrochloride treatment group （P group, n=18）. Each group was further divided into three subgroups according to the time points of 3, 12 and 24 hours after experiment （at each time point, n=6 for each subgroup）. Rats of P group were intraperitoneally injected with penehyclidine hydrochloride for 2 mg/kg immediately after blunt chest trauma and rats in its 24 hours subgroup were once again injected with penehyclidine hy- drochloride in the same dose 12 hours after injury. Lung tissue samples were collected at every time point and cell apoptosis in lung tissues were measured by TUNEL. Apoptotic index （AI） was calculated, expressions of bax and bcl-2 were detected by immunohistochemical staining of SABC, and lung tissue sections were taken for light and electron microscopic observation. Results： As compared with C group, at every time point, AI and expressions ofbax and bcl-2 in T group were higher （P〈0.05）, and the ratio of bcl-2/bax markedly decreased （P〈0.05）, especially in the 24 hours subgroup. The ratio in T group （0.468±0.007） was lower than that in C group （1.382±0.058, t=12.5, P〈0.01）. Lung tissue injuries were significant under a light microscope, and the number of apoptotic cells increased obviously under a transmission electron microscope. As compared with T group at the same phase, AI and expression of bax decreased in P group （P〈0.05 and P〈0.01）, while the expression of bcl-2 increased significantly （P〈0.01）, and the ratio of bcl-2/bax markedly increased （P〈0.05）, especially in the 24 hours subgroup. The ratio in P group （1.012-0.070） was much higher than that in T group （0.468±0.007, t=-8.3, P〈0.01）. The injury of lung tissues was relieved, and apoptosis of cells decreased obviously under a transmission electron microscopic observation. Conclusions： Apoptosis and expressions ofbax and bcl-2 in lung tissues might be involved in the pathogenesis of lung injury induced by blunt chest trauma. Penehyclidine hydrochloride can alleviate lung injuries by inhibiting apoptosis of lung tissue cells, during which effects ofpenehyclidine hydrochloride on regulating expressions ofbax and bcl-2 may play an important role.