氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期和周期蛋白表达的影响及其调控机制

目的探讨氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期及周期蛋白表达的影响及其调控机制。方法以不同浓度的氨氯地平处理对数生长期的MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞仪分析细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21和p53的表达。结果氨氯地平呈剂量和时间依赖性抑制MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol/L;经7.220μmol/L(0.5IC5)0、14.439μmol/L(1IC5)0和28.880μmol/L(2IC50)氨氯地平处理48h,G0/G1期细胞比例较对照组明显增高;经7.220μmol/L氨氯地平处理48h,MCF-7细胞中cyclinD1蛋白表达降低,p21和p53蛋白表达升高。结论氨氯地平对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用,此作用与使细胞阻滞于G1期有关,其机制与调控细胞周期相关蛋白cyclinD1、p21和p53的表达有关。     

Survivin基因干扰和过表达对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的观察凋亡抑制蛋白Survivin基因干扰和过表达对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法将Survivin基因shRNA干扰质粒和过表达质粒pcDNA3.1-GFP-Survivin在脂质体介导下转染MCF-7细胞,并设空白对照组和脂质体对照组,转染后48 h,荧光显微镜下观察转染效率;荧光定量RT-PCR法检测转染细胞中Survivin基因mRNA的转录水平;MTT法检测转染细胞的凋亡率。结果转染MCF-7细胞后48 h,Survivin基因RNAi质粒和过表达质粒的转染效率为50%～60%;shRNA质粒转染组MCF-7细胞中Survivin基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显高于空白对照组和脂质体对照组(P<0.05);shRNA质粒转染组MCF-7细胞的凋亡率明显高于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显低于空白对照组和脂质体对照组(P<0.05)。结论 Survivin基因对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有一定的抑制作用,可作为人乳腺癌生物治疗的候选基因。     

联氨基姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化。结果联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征;凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性;联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加。结论联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关。     

白芦藜醇对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白芦藜醇(resveratrol,Res)对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞U-2OS,用不同浓度的Res(5、10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)后,MTT法检测Res对U-2OS细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对细胞周期和凋亡的影响;应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶活性;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达水平。结果 Res作用24 h时,与空白对照组及DMSO组比较,20和40μmol/L Res组的细胞增殖抑制率、G0/G1和G2/M期的细胞比例、细胞凋亡率、Caspase-3酶活性显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05);20μmol/L Res组U-2OS细胞中Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论 Res通过诱导提高Caspase-3酶活性,上调促凋亡基因Bax、Caspase-3及下调抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达水平,从而抑制U-2OS细胞的增殖,促进其凋亡,为Res治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的观察NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(8~10周),按常规分离方法获得滋养细胞,进行原代培养。通过上/下调NIRF在滋养细胞中的表达后,采用qRT-PCR法检测p53基因mRNA的转录水平;Western blot法检测p53蛋白的表达水平;MTT法检测滋养细胞的增殖能力;Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况。结果与未转染组比较,NIRF上/下调后,p53基因m RNA转录水平差异无统计学意义(P0.05);NIRF上调,p53蛋白表达水平明显下降(P0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力显著增强(P0.05),凋亡率差异无统计学意义(P0.05);NIRF下调,p53蛋白的表达水平明显升高(P0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力明显减弱(P0.05),凋亡率明显上升(P0.05)。结论 NIRF在蛋白水平上抑制了p53的表达,促进了滋养细胞的增殖。     

FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的构建脑脂肪酸结合蛋白(BLBP/B-FABP,FABP7)基因的真核表达载体,并检测其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法采用逆转录方法从星型细胞瘤组织中扩增FABP7基因,双酶切后插入线性化的pcDNA3.1载体真核启动子下游,构建重组真核表达载体,转染人乳腺癌细胞MCF-7后,采用半定量RT-PCR检测FABP7基因mRNA的表达,MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的周期变化情况,并对细胞进行计数。结果FABP7基因重组真核表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染MCF-7细胞后48、72和96h,pcDNA3.1-FABP7组的细胞数和细胞的A490值均比pcDNA3.1空质粒组明显降低,G1期细胞百分含量均明显升高。结论已成功构建了FABP7基因的真核表达载体,该载体可抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

抗坏血酸与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的相关性

目的 探讨抗坏血酸与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的相关性。方法分别用0.5、1.0、2.0和4.0mmol/L的抗坏血酸处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖水平;RT-PCR检测细胞p53和bcl-2基因mRNA的转录水平;West-ern blot检测细胞P53和bcl-2蛋白的表达;流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果不同浓度的抗坏血酸均可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡,并使细胞p53基因mRNA转录水平及P53蛋白的表达水平明显升高,而bcl-2基因mRNA转录水平及bcl-2蛋白表达水平明显降低,且均呈剂量依赖性。结论抗坏血酸能抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能是通过上调P53,下调bcl-2介导的。     

PML(NLS~-)干扰对HL-60细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨缺失核定位信号的PML,即PML(NLS-)干扰对急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法将靶向PML(NLS-)基因的3组干扰质粒pGpu6-PML(NLS-)shRNA和阴性对照质粒pGpu6-NCshRNA分别转染HL-60细胞,转染后48 h,G418筛选阳性克隆,分别命名为Si-1、Si-2、Si-3和NC组,并设空白对照组。采用RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞中PML(NLS-)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术分析细胞的细胞周期及凋亡情况。结果 Si-1和Si-2组HL-60细胞PML(NLS-)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平与空白对照组相比明显减低(P<0.05),有干扰效果;Si-1组HL-60细胞的增殖水平与空白对照组相比明显降低(P<0.05),以转染后48 h降低最为显著(P<0.01);抑制PML(NLS-)表达可引起HL-60细胞S期比例增高,G1和G2期比例下降(P<0.05);Si-1组细胞凋亡率明显高于NC组和空白对照组(P<0.05)。结论干扰PML(NLS-)的表达可促进HL-60细胞的凋亡,抑制其增殖。     

3种茶提取物对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B的相关性

目的 探讨红茶、绿茶及普洱茶提取物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B(Protein ki-nase B,PKB)的相关性。方法用不同浓度的3种茶提取物处理MCF-7细胞不同时间,MTT法检测其对MCF-7细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;实时定量PCR检测细胞PKB基因mRNA的转录水平。结果 3种茶提取物对MCF-7细胞的增殖均具有明显的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;3种茶提取物处理的细胞早期凋亡率均高于未处理细胞,PKB基因mRNA的表达量明显降低。结论 3种茶提取物均含有可以抑制PKB转录活性的天然成分,并可诱导MCF-7细胞凋亡;其中绿茶诱导MCF-7细胞凋亡效果最明显。