温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株的作用

目的 研究湿热化疗对不同分化程度胃癌细胞株的细胞形态、增殖抑制和细胞周期的影响。方法 以中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45为研究对象，用酸性磷酸酶法比较温热化疗对这两种胃癌细胞株的生长抑制作用，用流式细胞仪测定温热化疗后两种细胞株细胞周期的变化，于透射电镜下观察细胞形态的改变。结果 （1）温热化疗对中分化胃癌细胞株SGC7901的生长抑制作用优于低分化胃癌细胞株MKN45；（2）温热化疗可引起SGC7901细胞株G1期阻滞，S期细胞减少，对MKN45细胞周期的影响较小；（3）温热化疗后SGC790和MKN45在电镜下均有凋亡的典型特征，SGC7901细胞质中有大量空泡样改变。结论 温热化疗对不同分化程度的胃癌细胞株的作用不同，其疗效与胃癌细胞的分化程度有关。     

3’3-二吲哚甲烷联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨3’3-二吲哚甲烷(DIM)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞增殖的影响。方法 MTT法检测DIM、5-FU单药及联用对不同分化程度胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、AGS、MKN45、HGC27)增殖的影响,计算药物对不同胃癌细胞的半数抑制浓度IC50及联用效应。结果 DIM及5-FU单药对不同分化程度胃癌细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)范围分别为23~42μmol/L及9.5~95.9μmol/L,两者联用对胃癌细胞的抑制率较单药高,但仅对中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45的联用指数(CI)均介于0和1之间。结论 DIM及5-FU单药均能抑制体外培养的不同分化程度胃癌细胞增殖,两者联用对抑制中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45的增殖具有协同效应。     

穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响

[目的]明确穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响.[方法]以不同浓度的穿心莲内酯处理低分化(MKN45)、中分化(SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株,分别温育24h、48h,72h;采用噻唑蓝比色法检测各和穿心莲内酯对癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50),比较穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用的异同.[结果]穿心莲内酯对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用,并且呈剂量效应和时间效应关系.低分化的MKN45细胞株对穿心莲内酯的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和中分化的SGC7901细胞株.[结论]穿心莲内酯对不同分化程度的胃腺癌细胞株体外增殖抑制作用不同.     

葡萄糖调节蛋白78与胃癌细胞化疗敏感性的关系

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulated protein 78,GRP78)在不同胃癌细胞株中的表达和对化疗药物敏感性的关系,并探讨其初步机制.方法:用RT-PCR及Western blot法检测分化程度不同的胃癌细胞株MKN45、SGC7901和NCI-N87中GRP78的表达,并分别观察经c...     

化疗药物对人胃癌细胞体外生长抑制作用的初步研究

目的:探讨5种常用化疗药物对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法:选用不同浓度的化疗药物采用体外短期培养法,结合H3-TdR掺入技术测定其对新鲜人胃癌标本细胞生长的抑制率。结果:5种化疗药物对19例胃癌细胞的抑制率从高到低顺序为:5-FU、VP-16、MTX、MMC、ADM。其抑制率有随药物浓度提高而增高的趋势,各个体间的抑制率不同。药物中浓度对分化不良型(低分化及印戒细胞癌)的敏感性明显高于分化良好型(高,中分化型)。结论:化疗药物对不同个体胃癌细胞体外抑制率有显著差异,体外检测化疗药物的敏感性可为临床化疗提供指导。     

RASSF1A基因表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的:研究RASSF1A提高肝癌细胞化疗药物敏感性的作用。方法:通过脂质体介导的基因转染法将RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染肝癌细胞株QGY-7703,G418筛选稳定表达株,并以RT-PCR和Western Blot进行鉴定目的基因的表达。化疗药物阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)分别作用各细胞株后,检测各细胞株的生长抑制率。结果:经800μg/ml的G418最佳筛选浓度筛选QGY-7703细胞株,成功建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。以QGY-7703细胞为对照,MMC对表达RASSF1A基因的肝癌细胞的生长抑制率最大为21%。结论:RASSF1A基因的表达可明显提高肝癌细胞对MMC的敏感性。RASSF1A的表达不影响肝癌细胞QGY-7703对ADM、VP-16、5-FU和DDP敏感性。     

胃癌耐药细胞株SGC7901/阿霉素中miR-185的表达及对细胞多药耐药性的影响

目的 检测miR-185在胃癌组织及细胞株中的表达,探讨miR-185在胃癌多药耐药性（MDR）发生机制中的作用。方法 选取2014年3-5月于河北医科大学第四医院行胃癌切除术的20例患者胃癌及癌旁组织标本,荧光定量PCR技术检测胃癌及癌旁组织和人胃腺癌细胞株SGC7901、正常胃上皮细胞株GES-1、耐阿霉素（ADR）的胃癌MDR细胞株SGC7901/ADR的miR-185表达水平。采用miR-185模拟物或无关对照序列转染细胞株SGC7901/ADR,检测其对化疗药物ADR、5-氟尿嘧啶（5-FU）、草酸铂（L-OHP）的敏感性,荧光定量PCR和Western blotting技术检测多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、LRP的mRNA及蛋白表达水平。结果 癌旁组织和胃癌组织miR-185相对表达水平分别为（0.910±0.142）、（0.243±0.045）,差异有统计学意义（t=20.025,P＜0.001）。细胞株GES-1、SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平分别为（0.903±0.117）、（0.630±0.101）和（0.191±0.030）,差异有统计学意义（F=46.850,P＜0.001）。其中,细胞株SGC7901、SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于GES-1,细胞株SGC7901/ADR miR-185相对表达水平低于SGC7901（P＜0.05）。ADR、5-FU和L-OHP对不同转染处理后的细胞株SGC7901/ADR抑制率比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中,ADR、5-FU和L-OHP对miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR抑制率高于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。经不同转染处理后,细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。其中,miR-185模拟物转染的细胞株SGC7901/ADR多药耐药基因MDR1/P-gp、MRP-1和GST-π mRNA和蛋白相对表达水平低于未转染和无关对照序列转染（P＜0.05）。结论 胃癌细胞miR-185表达下调,通过上调miR-185的表达可提高胃癌细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能是miR-185调控部分多药耐药基因的表达。     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

[目的]探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达,以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用.[方法]免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达,MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用.[结果]胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达;47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例,有瘦素受体表达23例,两者共同表达17例;19例新鲜胃癌组织标本,有瘦素mRNA表达13例,瘦素受体mRNA表达12例,两者共同表达10例;与对照组相比,100ng/mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1.45、1.56及1.54.[结论]胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达,瘦素可促进胃癌细胞株增殖.     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

摘要：【目的】探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达，以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用。【方法】免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达，MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用。【结果】胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达；47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例，有瘦素受体表达23例，两者共同表达17例；19例新鲜胃癌组织标本，有瘦素mRNA表达13例，瘦素受体mRNA表达12例，两者共同表达10例；与对照组相比，100ng／mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1．45、1．56及1．54。【结论】胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达，瘦素可促进胃癌细胞株增殖。     

GM-CSF联合5-FU对胃癌细胞凋亡和周期的影响

目的通过GM-CSF联合5-FU作用于SGC7901胃癌细胞,以初步探究其对胃癌细胞凋亡和周期有何影响,为临床胃癌化疗的联合用药提供参考依据。方法体外培养胃癌SGC7901细胞,Annexin V-FITC/PI流式检测细胞凋亡情况,PI流式检测细胞周期情况。结果 Annexin V-FITC/PI流式检测结果显示5-FU能显著诱导胃癌细胞凋亡,而加入GM-CSF后抵抗了5-FU诱导的凋亡(P0.05)。流式周期结果显示5-FU和GM-CSF均能导致胃癌细胞周期阻滞,并且两者具有互相拮抗作用。结论 GM-CSF能够有效抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡和周期阻滞,在增强胃癌细胞5-FU化疗耐药性方面具有重要作用。     

Stat3在人胃癌细胞株和组织中的组成性激活及其临床意义

目的探讨信号传导及转录活化因子Stat3在不同类型的人胃癌细胞株和组织中的激活情况及其与胃癌临床病理因素的关系。方法分别采用Western印迹法和凝胶阻滞电泳(EMSA)法检测人正常胃黏膜上皮细胞3T3和5种不同分化类型的人胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、MKN45、AGS和NCI-SNU-1)中Stat3蛋白的表达和Stat3 DNA的结合活性;免疫细胞化学染色确定磷酸化Stat3(P-Stat3)蛋白在胃癌细胞内的定位;免疫组织化学法检测50例胃癌组织及正常胃黏膜中P-Stat3蛋白的表达。结果与正常胃黏膜上皮细胞3T3相比,Stat3在5种不同分化类型的人胃癌细胞株中有较高的活性。中分化和低分化胃腺癌细胞株(SGC7901、MKN45和AGS)中Stat3的激活水平高于其他类型的细胞株(MKN28和NCI-SNU-1)。P-Stat3的染色定位于AGS细胞的细胞核。胃癌组织中P-Stat3蛋白的表达水平较正常胃黏膜高,特别是中分化和低分化胃癌组织尤为显著(P＜0．05)。Ⅱ、Ⅲ期胃癌组织中P—Stat3蛋白表达水平显著高于Ⅰ期胃癌(P＜0．05),Ⅳ期胃癌组织中P-Stat3的蛋白表达水平与Ⅰ期胃癌之间差异无显著意义(P＞0．05)。P—Stat3蛋白的表达水平与胃癌的分化程度相关。结论Stat3在各种类型的人胃癌细胞和胃癌组织中都有较高的活性;JAK／STAT信号传导途径可能在胃癌的发生、发展中起重要的作用。     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

原癌基因c—met在胃癌细胞株中的表达

目的：观察原癌基因c—met在不同分化的胃癌细胞株中的表达水平。方法：采用实时荧光定量PCR仪和Westernblotting检测高分化胃癌MKN28、中分化胃癌SGC-7901、低分化胃癌MKN45和正常胃细胞GESl中c—met的表达情况。结果：荧光定量PCR显示原癌基因c—met在三个胃癌细胞株中均有高表达，但以中分化的胃癌细胞SGC-7901的表达（0．064606＋0．0025）显著高于低分化的胃癌细胞株MKN45（0．016657±0．0002）和高分化的胃癌细胞株MKN28（0．002419±0．0002）（P〈0．01）；Westernblotting显示c—met在蛋白水平的结果与前-致。结论：四个胃癌细胞株中，原癌基因c—met均有表达，以SGC-7901表达量最高。     

顺铂、阿霉素和VP—16在胃癌细胞系中药物敏感性的研究

目的:探讨化疗药物在胃癌细胞系中的药物敏感性。方法：应用MTT方法在胃癌细胞系HSC－39,MKN28,MKN45及MKN74中对化疗药物顺铂,阿霉素及VP－16的药物敏感性进行检测。结果：胃癌细胞存在自主多药耐药机制,胃癌细胞系MKN1对化疗药物顺铂、阿霉系和VP－16比MKN28,MKN45,MKN74有更好的药物敏感性。结论：胃癌细胞在最初化学治疗前已经存在原发性多药耐药机制。     

胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞bcl-2和Caspase3的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养、P1染色、流式细胞仪检测的方法，观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞周期及细胞凋亡率，western blot方法分析4种胃癌细胞中bel-2和Caspase3的表达。结果 TRAIL300ng／ml作用于胃癌细胞24h后，胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-790I的凋亡率分别为36．05％、20．27％、16．50％和11．80％。Western blot结果显示MKN28细胞Caspase3的表达高于其它细胞，而bel-2的表达在各细胞间并无明显差别。结论 胃癌细胞对TRAIL的敏感性与Caspase3的高表达有关，而与bel-2的表达无关。     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

阿斯匹林对胃癌细胞株SGC-7901的细胞毒作用及体外增效作用

目的：观察阿斯匹林（ASA）对胃癌细胞株SGC－7901的细胞毒作用以及联用其它抗肿瘤药的增效作用。方法：应用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期,噻唑蓝（MTT）法测定药物细胞的抑制率。结果：MTT显示体外ASA对SGC－7901有细胞毒作用,与ASA的浓度和作用时间有显著的相关性。同时可使SGC－7901细胞周期中S期及G2／M期比例升高,G1期比例下降,呈一定的剂量效应关系。低浓度ASA与5－氟脲噻啶（5－Fu)、阿霉素（DOX）和丝列霉素（MMC）合用,可增强它们对SGC－7901的杀伤作用,与各药物有相加或协同作用。结论：ASA体外对SGC－7901有细胞毒作用,可明显阻断SGC－7901细胞在S期和G2／M期;增强上述药物对SGC－7901的杀伤作用。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同,提示ASA的体外增效作用可能与此相关。     

吉非替尼联合5-氟尿嘧啶对HER-1高表达胃癌细胞的体外实验研究

目的初步探讨吉非替尼（Iressa）联合5-FU对HER1高表达胃癌细胞的生长抑制作用。方法以Her-1基因高表达的胃癌细胞株SGC7901为研究对象,以MTT法检测两药物各自及合用时对胃癌细胞株增殖影响的抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡;以RT-PCR分析药物对靶蛋白酶mRNA的影响。结果吉非替尼可增强化疗药对HER-1阳性胃癌细胞的毒性作用。先吉非替尼和5-FU联合再序贯使用分子靶向药吉非替尼的方案效果最佳;联合方案对细胞周期的改变影响明显;同时吉非替尼能增强5-FU对胸苷酸合成酶（TSmRNA）表达的抑制。结论吉非替尼联合5-FU对Her-1/EGFR过表达胃癌细胞有明显的杀伤性增强作用而且存在最佳联合方案。