瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

摘要：【目的】探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达，以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用。【方法】免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达，MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用。【结果】胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达；47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例，有瘦素受体表达23例，两者共同表达17例；19例新鲜胃癌组织标本，有瘦素mRNA表达13例，瘦素受体mRNA表达12例，两者共同表达10例；与对照组相比，100ng／mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1．45、1．56及1．54。【结论】胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达，瘦素可促进胃癌细胞株增殖。     

穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响

[目的]明确穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响.[方法]以不同浓度的穿心莲内酯处理低分化(MKN45)、中分化(SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株,分别温育24h、48h,72h;采用噻唑蓝比色法检测各和穿心莲内酯对癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50),比较穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用的异同.[结果]穿心莲内酯对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用,并且呈剂量效应和时间效应关系.低分化的MKN45细胞株对穿心莲内酯的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和中分化的SGC7901细胞株.[结论]穿心莲内酯对不同分化程度的胃腺癌细胞株体外增殖抑制作用不同.     

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方法免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系SGC7901的增殖及凋亡。     

3种胃癌细胞株中GSTP1基因表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的研究候选基因GSTP1在胃癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨胃癌细胞株GSTP1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot技术分别检测GSTP1在人胃癌细胞株MGC803、BGC823和SGC7901中的mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法检测启动子区域甲基化状态。分别用不同浓度的去甲基化药物5-氮杂胞苷处理GSTP1基因启动子区高甲基化状态细胞后,再检测GSTP1基因蛋白表达水平。结果人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中GSTP1 mRNA和蛋白呈阳性表达,MGC803中mRNA和蛋白呈阴性表达;BGC823和SGC7901细胞GSTP1基因启动子区域未发生甲基化,而MGC803细胞启动子区呈高甲基化状态;经5-氮杂胞苷药物干预后,MGC803细胞的GSTP1蛋白表达明显增强。结论胃癌MGC803细胞株中GSTP1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关。     

温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株的作用

目的 研究湿热化疗对不同分化程度胃癌细胞株的细胞形态、增殖抑制和细胞周期的影响。方法 以中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45为研究对象，用酸性磷酸酶法比较温热化疗对这两种胃癌细胞株的生长抑制作用，用流式细胞仪测定温热化疗后两种细胞株细胞周期的变化，于透射电镜下观察细胞形态的改变。结果 （1）温热化疗对中分化胃癌细胞株SGC7901的生长抑制作用优于低分化胃癌细胞株MKN45；（2）温热化疗可引起SGC7901细胞株G1期阻滞，S期细胞减少，对MKN45细胞周期的影响较小；（3）温热化疗后SGC790和MKN45在电镜下均有凋亡的典型特征，SGC7901细胞质中有大量空泡样改变。结论 温热化疗对不同分化程度的胃癌细胞株的作用不同，其疗效与胃癌细胞的分化程度有关。     

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

瘦素受体异构体ob-Ra和ob-Rb在胃腺癌组织中的表达

目的:研究瘦素受体异构体ob-Rao、b-Rb mRNA在胃腺癌组织及细胞中表达,探讨瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb表达在胃腺癌发生、发展过程中作用和意义。方法:采用RT-PCR方法检测26例具有瘦素和瘦素受体蛋白双重表达的胃腺癌组织标本中瘦素受体异构体ob-Rao、b-Rb mRNA的表达情况,同时采用组织原位RT-PCR方法检测胃癌细胞中瘦素受体ob-Ra、ob-Rb mRNA的表达定位情况。结果:26例胃腺癌组织标本ob-Ra、ob-RbmRNA表达均为阳性,ob-Rao、b-Rb mRNA表达定位于胃腺癌细胞,表现为细胞质染成紫蓝色颗粒。结论:胃腺癌组织中有瘦素受体异构体ob-Ra、ob-Rb的表达,可以通过激活胃腺癌细胞上ob-Ra、ob-Rb受体下游的信号通路介导其促进肿瘤生长的生物学效应。     

3’3-二吲哚甲烷联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨3’3-二吲哚甲烷(DIM)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞增殖的影响。方法 MTT法检测DIM、5-FU单药及联用对不同分化程度胃癌细胞株(MKN28、SGC7901、AGS、MKN45、HGC27)增殖的影响,计算药物对不同胃癌细胞的半数抑制浓度IC50及联用效应。结果 DIM及5-FU单药对不同分化程度胃癌细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)范围分别为23~42μmol/L及9.5~95.9μmol/L,两者联用对胃癌细胞的抑制率较单药高,但仅对中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45的联用指数(CI)均介于0和1之间。结论 DIM及5-FU单药均能抑制体外培养的不同分化程度胃癌细胞增殖,两者联用对抑制中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45的增殖具有协同效应。     

艾恒与传统化疗药物在不同分化程度胃癌细胞株中敏感性的研究

目的:探讨不同分化程度胃癌细胞对艾恒、5-FU、MMC和VP-16的敏感性。方法:将不同浓度的化疗药物与两株不同分化程度的胃癌细胞株共同温育,采用MTT方法检测化疗各药物对胃癌细胞增殖的影响。结果:四种化疗药物对两株胃癌细胞的增殖均具有显著的抑制作用,MKN45细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>VP-16>艾恒>5-FU,而SGC7901细胞株对各化疗药物敏感性顺序为:MMC>艾恒>VP-16>5-FU。中分化的SGC7901对艾恒、MMC、VP-16的敏感性均显著高于低分化的MKN45,而MKN45对5-FU的敏感性高于SGC7901。结论:不同分化程度的胃癌细胞对药物的敏感性不同。     

乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究

目的 探讨乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 用CCK-8法测定不同浓度LfcinB对胃癌细胞株MGC803 24、48和72 h细胞增殖影响.用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化.用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况.用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果 LfcinB对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);LfcinB能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着LfcinB浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01).结论 LfcinB通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡.     

瘦素及其受体在子宫内膜异位症中的表达

目的测定瘦素(leptin)及其受体在子宫内膜异位症组织中的表达,探讨瘦素及其受体与子宫内膜异位症的相关性。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测21例手术后病理确诊的子宫内膜异位症患者的异位内膜及其诊刮的子宫内膜组织中瘦素受体mRNA表达,同时以17例因功能性子宫出血而行全子宫切除手术的子宫内膜组织中瘦素受体mRNA表达水平为对照。并采用放射免疫法(RIA)检测两组患者血清中瘦素水平。结果子宫内膜异位症患者与对照组血清瘦素水平比较差异无显著性(P>0.05)。异位子宫内膜组与自体子宫内膜及对照子宫内膜均有瘦素受体表达,而前者与后两者之间有显著性差异(P<0.05),后两者之间无显著性差异(P>0.05)。结论瘦素及其受体并非通过影响体内激素代谢而导致子宫内膜异位症的发生,可能参与腹腔内环境的改变而成为子宫内膜异位症发生的相关因素之一。     

生长抑素2型受体mRNA在人胃上皮永生细胞及肿瘤细胞株中的表达

目的 了解多种癌细胞上是否较广泛表达生长抑素 2型受体,同时了解 p53突变与否对生长抑素 2型受体的表达有无影响。方法 用 RT-PCR和克隆的人生长抑素 2型受体 cDNA为探针检测人胃上皮永生细胞、人胃癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞共 10株细胞上该受体 mRNA的表达。结果 发现除 1株胰腺癌细胞外,其余 9个细胞株均表达生长抑素 2型受体。一株胃癌细胞分别转染了野生型和突变型的 p53基因,也同样表达生长抑素 2型受体。 结论 提示生长抑素 2型受体在癌细胞的表达有较大的普遍性,在胃癌细胞中生长抑素 2型受体的表达与 p53是否突变可能无关。     

瘦素及其受体系统在子宫内膜的表达

目的　研究瘦素 (Leptin)及其受体 (Obgenereceptor ,Ob -R)在子宫内膜的表达 ,探讨Leptin对女性生殖的影响。方法　分别用免疫组织化学和原位杂交技术检测Leptin、具信号传导功能的Leptin长受体 (Ob -Rb)在子宫内膜 (39例 ,增殖期 2 4例 ,分泌期 15例 )的表达。结果　 (1)Leptin、Ob -RbmRNA及其蛋白在人的子宫内膜的腺体及间质均呈阳性表达。 (2 )Ob -Rb蛋白在分泌期子宫内膜的表达明显高于增殖期 ,差异有极显著性P <0 0 1)。Leptin蛋白在不同期子宫内膜的表达差异无显著性。 结论　瘦素和瘦素受体系统在孕卵着床和种植过程中可能发挥重要作用。     

胃腺癌组织瘦素、瘦素受体表达及其临床意义

目的:研究瘦素和瘦素受体蛋白在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测60例胃腺癌组织中瘦素、瘦素受体蛋白的表达,以其细胞阳性表达率积分和染色强度积分乘积半定量计算其蛋白表达水平,分析其蛋白表达水平与临床病理参数的关系。结果:56例(96.7%)胃腺癌组织具有瘦素蛋白表达,55例(91.7%)具有瘦素受体蛋白表达,其中55例(91.7%)具有瘦素和瘦素受体的双重表达。UICC分期中Ⅳ期瘦素蛋白表达水明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期(P<0.05)。发生远处转移胃腺癌组的瘦素蛋白表达水平均值显著高于未发生远处转移胃腺癌组[(8.00±1.19)vs(6.44±1.33),P<0.01]。结论:①胃腺癌组织存在瘦素和瘦素受体的双重表达;②胃腺癌组织瘦素蛋白表达水平有助于判断其预后;③瘦素可能在胃腺癌远处转移过程中起重要作用。     

MAPKs通路在Leptin促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨MAPKs信号转导通路在瘦素(Leptin)促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制。方法:用MTT比色法观察不同浓度瘦素促MCF-7细胞的增殖效应,以及用JNK、ERK特异性抑制剂(SP600125,PD98059)阻断MAPKs信号通路对瘦素促MCF-7细胞增殖效应的影响;Westem blot检测瘦素干预不同时间对p-JNK、JNK、p-ERK、ERK蛋白表达水平的影响;RT-PCR检测在瘦素作用下以及MAPKs信号通路阻断情况下对MCF-7细胞表达瘦素受体(Ob-R)mRNA水平的影响。结果:50 ng/ml瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应最强,该浓度瘦素可使MAPKs信号通路中的靶蛋白发生磷酸化激活;50 ng/ml瘦素作用于MCF-7细胞30 s后p-ERK蛋白表达即显著增加,3 min后p-JNK蛋白表达亦显著增加;分别用SP600125和PD98059阻断JNK、ERK信号通路可显著抑制瘦素促MCF-7细胞的增殖效应.亦可抑制瘦素作用下MCF-7细胞Ob-R mRNA表达水平的增加。结论:瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应可能与激活MAPKs信号通路有关,亦调控MCF-7细胞中瘦素受体的表达,在肿瘤细胞周围形成瘦素自分泌环,促进乳腺癌的发生发展。     

重组人瘦素对慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核细胞的影响

目的：探讨瘦素对 CITP 骨髓巨核细胞的影响。方法以急性巨核细胞白血病细胞株 M07e 和 CITP 骨髓 CD34＋细胞经诱导分化的巨核细胞为研究对象。运用 RT-PCR 检测 M07e 细胞瘦素受体 mRNA 表达,运用 Brdu-ELISA 法检测瘦素对 M07e 细胞的增殖作用,运用 Annexin V/ PI 双标流式检测瘦素对 M07e 细胞的凋亡作用。经TPO、SCF 诱导磁珠分选后获得的 CITP 骨髓 CD34＋细胞分化为巨核细胞,运用流式测定瘦素对其分化过程中CD41a ＋、CD61＋的表达以及 CD41a ＋细胞的凋亡是否有影响。结果瘦素受体长型 Ob-RL 和短型 Ob-RS 在 M07e细胞均有 mRNA 表达。瘦素对 M07e 细胞的增殖有促进作用,并呈现一定的剂量依赖性,浓度为5 ng/ ml 即显示出促增殖效应（P =0.037）,但浓度在5、10、25 ng/ ml 之间无明显统计学差异,浓度为100 ng/ ml 时其增殖效应最大。在时间依赖效应上,瘦素作用48 h,其细胞增殖明显高于24 h,而作用72 h 其细胞增殖介于两者之间（P =0.000）。瘦素对 M07e 细胞具有抑制凋亡作用（P =0.001）,而且在作用72小时后凋亡率最高。瘦素对骨髓 CD34＋细胞分化为巨核细胞过程中 CD41a ＋、CD61＋表达的影响,与不加瘦素组相比无明显统计学差异（P ＞0.05）。对 CD41a ＋细胞凋亡的影响与不加瘦素组相比亦无明显统计学差异（P ＞0.05）。结论瘦素通过促进 M07e 细胞的增殖,抑制其凋亡来参与巨核细胞白血病的发生、发展。瘦素在 TPO ＋ SCF 诱导 CITP 骨髓巨核细胞分化中无明显协同作用,对分化产生 CD41a ＋巨核细胞的凋亡亦无明显作用。     

Effect of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion

The effects of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion activity were investigated. Immunohistochemistry was used to determine the placental expression of leptin in first-trimester pregnancy. By using RT-PCR and quantitative real-time PCR, the expression of leptin in cytotrophoblast and the effect of leptin on cytotrophoblast secretion were detected. The potential of cell proliferation, invasiveness and migration was assessed by MTT, Transwell invasion assay and migration assay respectively when the cytotrophoblast was cultured with different concentrations of leptin. The results showed that： （1） Leptin was distributed diffusely around cell membrane, in cytoplasma, and on nuclear mem- brane of cytotrophoblast; （2） Leptin mRNA was expressed in cytotrophoblast. Ten ng/mL leptin could promote the secretion of cytotrophoblast significantly （P〈0.01）; （3） After culture with different concentrations of leptin for 24 h or longer, the proliferation of cytotrophoblast was inhibited, while in 24 h leptin could promote cytotrophoblast invasion and migration. Leptin at a concentration of 500 ng/mL could promote cytotrophoblast invasiveness and migration significantly as compared with controls （P〈0.05）. It was suggested that leptin could inhibit cytotrophoblast proliferation, and promote cytotro- phoblast invasion and migration activity.     

STZ糖尿病大鼠心肌短型瘦素受体基因的转录表达及心脏纤维化观察

目的　研究瘦素受体在STZ糖尿病大鼠心肌中转录表达及心脏的纤维化情况。方法　用STZ制备糖尿病大鼠模型 ,在病程 12周时测定大鼠血压和心功能后处死 ,取心肌组织和分离、培养心脏成纤维细胞 ,用RT PCR检测长、短型瘦素受体mRNA转录表达 ,PCR产物测序 ,电镜观察心肌的超微结构。血清瘦素、胰岛素放射免疫测定。结果　STZ糖尿病大鼠和对照鼠心肌均可转录表达短型瘦素受体mRNA ,两组之间无显著差别 ,但糖尿病心肌成纤维细胞短型瘦素受体mRNA表达较高 ,伴心功能减退和显著的心脏纤维化病理改变。结论　糖尿病大鼠心脏成纤维细胞短型瘦素受体表达增加与心脏纤维化并存。