PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成激酶3β（GSK3β）信号通路及内质网（ER）分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化。方法：54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（Con组）,1个周期受压组（1c组）、3个周期受压组（3c组）、6个周期受压组（6c组）、9个周期受压组（9c组）和恢复期1 d组、3 d组、5 d组、7 d组,每组各6只。取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹（Western blotting）法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化。结果：HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势。结论：难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程。     

大鼠压疮局部不同温度治疗对PI3K/Akt/GSK3β 信号通路的影响

目的 探讨不同局部温度对大鼠压疮PI3K/Akt/GSK3β 通路的影响，为压疮的临床治疗提供基础实验依据。方法 用缺血再灌注（IRI）法复制大鼠压疮模型。将40 例无特定病原体级（SPF）健康成年雄性SD 大鼠随机分为4 组：假手术组（Sham 组）、常温IRI 组（NTI）、低温IRI 组（LTI）和高温IRI 组（HTI）。HE 染色观察骨骼肌病理变化；Western blot 检测Akt、GSK3β 的磷酸化情况；免疫荧光观察p-Akt、p-GSK3β 的表达情况。TUNEL 检测大鼠压疮组织细胞凋亡情况。结果 与常温IRI 组比较，高温IRI 组的骨骼肌细胞病理损伤加重，凋亡细胞增加，Western blot 和免疫荧光结果显示Akt 和GSK3β 的磷酸化水平均降低（P <0.05）；而低温IRI 组骨骼肌细胞病理损伤减轻，Western blot 和免疫荧光结果显示Akt 和GSK3β 的磷酸化水平均上升（P <0.05）。结论 局部高温能抑制Akt 和GSK3β 的磷酸化水平而加重大鼠压疮损伤，局部低温能提高Akt 和GSK3β 的磷酸化水平减轻大鼠压疮损伤。     

抵抗素通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究

目的探讨抵抗素激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大的分子机制。方法取生长状态良好的H9c2心肌细胞,使用含1 g·L~(-1)胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)处理24 h使其细胞同步化后进行不同干预。随机将H9c2心肌细胞分为Con组、R50组、LY294002+R50组和LY294002组,Con组为空白对照;R50组细胞应用50μg·L~(-1)抵抗素处理48 h组;LY294002+R50组细胞预先应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预2 h后再用50μg·L~(-1)抵抗素处理46 h;LY294002组细胞应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理2 h组。4组心肌细胞加含药物DMEM培养48 h后进行细胞面积、单细胞蛋白质合成量测定,Western blot检测心肌细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、原癌基因c-myc蛋白及PI3K/Akt非磷酸化及磷酸化水平表达。观察抵抗素(50μg·L~(-1))处理细胞不同时间(0、1、2、3 h)后运用Western blot测定磷酸化(p-Akt)的蛋白表达水平,检测抵抗素处理1 h后4组心肌细胞PI3K/Akt信号通路磷酸化表达水平。结果抵抗素处理H9c2心肌细胞0、1、2、3 h组p-Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.26、0.71±0.67、0.52±0.32、0.51±0.32;与0 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞1 h组p-Akt蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与1 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞2、3 h组pAkt蛋白表达水平显著降低(P<0.01);抵抗素处理H9c2心肌细胞2 h与处理3 h后H9c2心肌细胞中p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,与Con组比较,R50组、LY294002+R50组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而LY294002组其心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与R50组比较,LY294002+R50组、LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与LY294002+R50组比较,LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。Con组、R50组、LY294002+R50组、LY294002组c-myc蛋白表达水平分别为0.45±0.30、0.68±0.32、0.56±0.33、0.16±0.20,4组间比较差异有统计学意义(F=178.91,P<0.05);与Con组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,R50组c-myc蛋白表达水平显著增高(P<0.05);而LY294002+R50组c-myc蛋白表达水平较Con组、LY294002组升高但低于R50组(P<0.05)。经抵抗素处理H9c2心肌细胞3 h后,R50组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平较Con组、LY294002+R50组、LY294002组显著升高(P<0.05),其余各组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素通过激活PI3K/Akt通路,提高Akt磷酸化水平来诱导H9c2心肌细胞肥大。     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。     

脓毒症通过抑制AKT/GSK3β磷酸化导致骨骼肌细胞膜nAChRs聚集障碍

目的 探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）聚集障碍中的作用。方法 小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组：Sham组：假手术小鼠血清处理;Sepsis组：脓毒症小鼠血清处理;Sepsis+D组：脓毒症小鼠血清和二甲基亚砜（DMSO）处理;Sepsis+SB组：脓毒症小鼠血清和GSK3β抑制剂SB216763处理,各组在作相应处理前均加入Agrin蛋白诱导nAChRs聚集。血清处理 5.5 h后采用 Alexa Fluor 594-conjugated α-bungarotoxin（α-BTX）标记肌管膜上 nAChRs聚集簇,采用 Western blotting检测AKT、磷酸化AKT（p-AKT）、GSK3β、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）、细胞质连接蛋白相关蛋白2（CLASP2）的表达水平,采用免疫共沉淀（Co-IP）检测磷酸化CLASP2（p-CLASP2）以及CLASP2与微管蛋白α-tubulin的结合水平。结果 与Sham组相比,Sepsis 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均降低,p-AKT、p-GSK3β水平下降,p-CLASP2 水平升高,CLASP2 与 α-tubulin 的结合减少;与 Sepsis+D 组相比,Sepsis+SB 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均增加,p-CLASP2水平降低,CLASP2与α-tubulin的结合水平增加。结论 脓毒症小鼠血清通过抑制Akt/GSK3β磷酸化导致下游信号分子CLASP2与α-tubulin结合减少,引起C2C12肌管膜上nAChRs聚集障碍。     

绿原酸通过PI3K/Akt信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的 探讨绿原酸（CGA）通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路抑制异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌肥大的作用机制。方法 采用ISO诱导H9c2心肌细胞,建立心肌肥大模型。将细胞随机分为5组： 空白对照组（Control组）、异丙肾上腺素组（ISO组）、绿原酸处理组（ISO+CGA组）、抑制剂LY294002组（ISO+LY组）、绿原酸处理＋LY294002(ISO+CGA+LY组)。检测各实验组H9c2心肌细胞的心肌表面积及存活率;各组心肌细胞凋亡率和活性氧类（ROS）水平;各组细胞中Caspase、Akt、p-Akt、Gsk-3β、p-Gsk-3β蛋白的表达水平。结果 与Control组相比,ISO组心肌细胞严重受损,细胞存活率明显降低（P<0.05);比较ISO+CGA组和ISO组,ISO刺激显著增加心肌细胞表面积（50%）,而CGA预处理可防止ISO诱导的细胞肥大。与ISO组相比,ISO+CGA组p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,H9c2心肌细胞存活率明显提高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达降低（P<0.05）。与ISO+CGA组相比,ISO+LY组细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）;ISO+CGA+LY组的心肌细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）。结论 CGA可能是通过PI3K/Akt信号通路调控细胞凋亡,进而抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。     

高原肺动脉高压大鼠重返平原后Caspase-3的表达

目的探讨低氧性肺动脉高压大鼠重返平原后肺组织Caspase-3的表达。方法将80只大鼠随机分为高原组（10、20、30d）、平原组（10、20、30、90d）、正常对照组。以低压低氧复制肺动脉高压模型。进行免疫印迹方法测定凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）在各组的表达。结果 （1）高原20d后caspase-3的表达与正常对照组相比明显减少（P〈0.05）;（2）重返平原20、30d较高原20、30dcaspase-3的表达有所恢复（P〈0.05）。结论重返平原后肺动脉高压大鼠的caspase-3表达增加。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用

目的通过活体阿霉素（ADR）大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的 表达、尿蛋白变化相关性及其意义。方法应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组（NC组）,阿霉素肾病组（ADR组）,阿霉 素+地塞米松治疗组（DEX组）,阿霉素+地塞米松+LY294002干预组（LY294002组）。分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定 量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平。结果ADR组蛋白 尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异（P<0.05）;DEX组 尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT 比值升高和Bad 蛋白表达下调、Bad mRNA 表达减少,与NC 组无统计学差异（P>0.05）; LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差 异（P<0.05）。结论地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002 干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用。这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导 机制之一。     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的调节作用及其机制

目的：观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、PI3K和Akt的调节作用,初步探讨丝胶降血糖的作用机制。方法：36只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和实验组,每组12只。模型组和实验组大鼠采用高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,35 mg·kg^-1·d^-1,连续2 d）的方法制备2型糖尿病模型,以STZ注射结束后72 h的空腹血糖≥ 11.1 mmol·L^-1作为成模标准。模型建立成功后,实验组大鼠给予2.4·kg^-1·d^-1丝胶灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续用药35d。取各组大鼠血液标本,采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;取各组大鼠肝组织,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测各组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白的表达,采用过碘酸-Schiff染色法检测各组大鼠肝糖原含量。结果：模型组大鼠血糖水平明显高于正常组（P<0.05）,实验组大鼠血糖水平明显低于模型组（P<0.05）。正常组和实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,小部分呈弥散状;模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达量明显减少,呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,其中IR、IRS-1和Akt蛋白主要位于肝细胞胞膜和胞质,PI3K蛋白主要位于肝细胞胞质。各组大鼠肝切片均可见肝糖原阳性染色的红色或紫红色颗粒,其中模型组大鼠肝糖原染色浅,面积较小。与正常组比较,模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显升高（P<0.05）。结论：丝胶可通过上调糖尿病大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt的表达以增强肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的转导效应,从而起到降低血糖的作用。     

黄芪苷Ⅳ通过 PI3K/Akt 信号通路抗 H2O2 诱导的H9c2 细胞氧化损伤

目的 研究黄芪苷Ⅳ对H2O2诱导的 H9c2 细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。 方法 建立H2O2诱导的 H9c2 细胞氧化损伤模型，MTT 法检测细胞存活率，DNA 抽提及琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258 染色、caspase-3 活性检测细胞凋亡，Western blotting 检测 t-Akt 和 p-Akt 蛋白的表达。 结果 与H2O2组比较，10、20 mg/L 的黄芪苷Ⅳ均显著提高细胞存活率，降低 caspase-3 活性，减轻细胞凋亡；且均显著上调 p-Akt 蛋白的表达；PI3K/A kt 抑制剂 LY294002 部分阻断 10、20 mg/L 黄芪苷Ⅳ的保护作用。 结论黄芪苷Ⅳ部分通过 PI3K/Akt 通路发挥对H2O2诱导的 H9c2 细胞氧化损伤的保护作用。     

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。     

远志汤有效成分对APP/PS1 小鼠氧化损伤的保护作用机制研究

目的 通过观察远志汤有效成分即β- 细辛醚+ 远志皂苷（TEN）对APP/PS1 双转基因小鼠磷脂酰肌醇3- 激酶（PI3K）/ 蛋白激酶B（Akt）/ 糖原合成激酶3β（GSK-3β）信号通路的调控,探讨远志汤防治阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法 将3 月龄APP/PS1 双转基因小鼠分为模型组、盐酸多奈哌齐组（0.33 mg/kg·d）、β- 细辛醚+TEN 低、中和高剂量组[18.5、37.0 和74.0 mg/（kg·d）],选同月龄C57BL/6 小鼠为空白对照组,采用Morris 水迷宫法和新物体识别实验检测小鼠的学习记忆能力,采用分光光度法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活性,以及丙二醛（MDA）含量。采用Western blot 检测GSK-3β、Akt,以及两者磷酸化蛋白表达。结果 β- 细辛醚协同TEN 可增强APP/PS1 双转基因小鼠的学习记忆功能,同时还能升高SOD、CAT 和GSH-PX 的活性,降低MDA 含量,诱导Akt 的蛋白表达,抑制GSK-3β 的表达。结论 远志汤有效成分即β- 细辛醚+TEN 可通过调控PI3K/Akt/GSK-3β 信号通路,对APP/PS1 双转基因小鼠氧化应激损伤发挥保护作用。     

PI3K/Akt信号通路介导莱菔硫烷预处理对大鼠供心冷缺血再灌注损伤的影响

目的：探讨脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路介导莱菔硫烷（SFN）预处理对大鼠心肌冷缺血再灌注损伤（IRI）的作用,阐明其作用机制。方法：64只健康雄性SD大鼠随机分为冷IRI组、SFN组、LY（PI3K抑制剂）+冷IRI组和LY+SFN组,每组供、受体各8只。将冷藏于组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK液）9 h供心移植到受体大鼠的腹腔,建立同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供心心肌组织,采用苏木精-伊红（HE）染色观察心肌组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测心肌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,即蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、Bax、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）的蛋白表达水平。结果：心肌组织形态表现,冷IRI组和LY+冷IRI组大鼠心肌组织损伤最严重,SFN组心肌组织损伤最轻,LY+SFN组心肌组织损伤介于冷IRI组和SFN组之间。免疫组织化学法和Western blotting法,与冷IRI组比较,SFN组p-Akt蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）,Bcl-2蛋白表达水平升高（P < 0.05）,而Bax蛋白表达水平降低（P < 0.05）;应用阻滞剂LY294002后,与LY+冷IRI组比较,LY+SFN组p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）,但Bcl-2蛋白表达水平仍升高（P < 0.05）,Bax蛋白表达水平仍降低（P < 0.05）,Bcl-2/Bax比值升高（P < 0.05）。结论：SFN可能通过PI3K/Akt信号通路减轻心脏移植心肌冷IRI。     

氯化锂对脑缺血预处理后PI3K/AKT/GSK3β通路的影响机制

目的：研究脑缺血预处理（CIPC）中氯化锂对PI3K/AKT/GSK3β信号通路调节变化及影响。方法：制作脑缺血、CIPC及氯化锂干预模型,进行神经功能缺损评分;TTC法脑组织染色计算脑梗死体积;应用Western blotting检测AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β（ser9）、Mcl-1的蛋白表达。结果：与脑缺血组比较,氯化锂组及CIPC组p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达均增高,神经功能缺损评分及脑梗死体积降低（P〈0.05）;与CIPC组比较,氯化锂组进一步提高了p-AKT、Mcl-1、p-GSK-3β（ser9）的蛋白表达、降低了神经功能缺损评分及脑梗死体积（P〈0.05）。结论：脑缺血预处理增高p-GSK-3β（ser9）表达,增加p-AKT、Mcl-1的表达。氯化锂可加强脑缺血预处理的这一神经保护作用。     

P4HA2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肝癌的发生和发展

目的 探讨脯氨酸4-羟化酶II（P4HA2）在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况,利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系,采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体,用携带P4HA2 shRNA和Con shRNA的慢病毒载体分别转染肝癌SNU-449和Hep-3B细胞系,建立沉默表达P4HA2的细胞株（shP4HA2组）和对照组细胞株（NC组）。采用CCK-8、集落形成试验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 在线数据库分析结果显示,肝癌组织中P4HA2表达高于正常肝组织（P<0.05）。同时,肝癌细胞系中P4HA2 mRNA和蛋白表达水平也高于正常肝细胞（P<0.01）。慢病毒干扰后,与NC组相比,shP4HA2组中mRNA和蛋白表达水平下降（P<0.05）。P4HA2基因表达沉默后,细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。Western blot显示,相对于NC组,shP4HA2组的E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin、Snail蛋白表达下降（P<0.05）,在PI3K/AKT/mTOR通路中,磷酸化的PI3K（P-PI3K）、AKT（P-AKT）和mTOR（P-mTOR）显示出较低的水平（P<0.05）。结论 P4HA2通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进肝癌的发生发展。     

PI3K/Akt通路在UC-MSCs移植治疗新生大鼠HIBD中的作用机制

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B （PI3K/Akt）通路在脐带间充质干细胞（UC-MSCs）移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的机制。方法 10日龄SD大鼠分为假手术组、移植组（MSCs组）、抑制剂组（LY组）及HIBD组,制作HIBD动物模型,5-溴脱氧嘧啶尿苷标记UC-MSCs后侧脑室移植,移植后24 h、48 h, TUNEL、Western blot分别检测细胞凋亡及caspase3、磷酸化Akt（P-Akt）蛋白表达。结果 移植后24 h、48 h, MSCs组细胞凋亡数及caspase3蛋白表达量较LY组及HIBD组减少（ P<0.05）,而P-Akt表达较LY组及HIBD组增加（ P<0.05）,且随移植后时间的延长,各指标的表达均呈下降趋势（ P<0.05）。结论 UC-MSCs移植治疗HIBD新生大鼠时,脑组织细胞凋亡减少,caspase3表达下调,P-Akt表达上调,PI3K/Akt信号通路可能为其重要机制。     

艾灸对压疮大鼠皮肤损伤修复及PI3K/Akt信号通路的影响

背景　近年来研究发现,艾灸能够促进压疮（PU）愈合,但其作用机制尚未明确。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路通过参与细胞增殖、分化和凋亡等多种生物过程,在皮肤损伤的愈合过程中发挥重要的调节作用。目的　观察艾灸对PU大鼠创面愈合及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨艾灸在皮肤损伤与修复过程中的作用机制。方法　2018年3月—2019年2月选取SPF级成年雌性SD大鼠30只,20只大鼠参照缺血-再灌注原理进行PU造模,造模后按1∶1比例随机分为艾灸组和模型组,另外10只为空白组不予造模。模型组给予碘伏清洁创面,1次/d,10 d为1个疗程;艾灸组采用艾灸在创面局部治疗,15 min/次,1次/d,10 d为1个疗程。干预1、3、5、7、10 d观察比较创面愈合率、创面病理损伤情况、磷酸化Akts473、磷酸化Bads136、磷酸化Caspase-9s196蛋白表达水平。结果　干预3、5、7、10 d艾灸组创面愈合率均高于模型组（P<0.05）。HE染色显示,与模型组相比,艾灸组炎性细胞浸润较少,可见较多新生肉芽组织及血管。干预1、3、5、7、10 d模型组与艾灸组磷酸化Akts473蛋白表达水平高于空白组（P<0.01）;干预1、3、5、7、10 d艾灸组磷酸化Akts473蛋白表达水平高于模型组（P<0.05）。 干预1、3、5、7、10 d模型组与艾灸组磷酸化Bads136蛋白表达水平高于空白组（P<0.01）;干预1、3、5、7、10 d艾灸组磷酸化Bads136蛋白表达水平高于模型组（P<0.01）。干预1、3、5、7、10 d模型组与艾灸组磷酸化Caspase-9s196蛋白表达水平高于空白组（P<0.01）;干预1、3、5、7、10 d艾灸组磷酸化Caspase-9s196蛋白表达水平高于模型组（P<0.01）。结论　艾灸能够促进PU大鼠创面皮肤愈合,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路,发挥抗凋亡作用有关。     

RhoGDI2调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮间质转化研究

目的：探讨PI3K/Akt信号通路活化在RhoGDI2诱导的气道上皮-间质转化（EMT）中的作用。方法：体外培养人气道上皮细胞16HBE,通过质粒转染过表达RhoGDI2,然后加入PI3K抑制剂LY294002,荧光显微镜观察质粒转染后不同时间的细胞形态变化,评估转染效率。Western blot法检测RhoGDI2、EMT标记蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）以及PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果：细胞转染36小时后荧光表达量达到高峰,转染效率70%~80%。转染组RhoGDI2表达量明显高于正常组和空载组,证明转染成功（P<0.001）;转染组PI3K、Akt及p-Akt表达较正常组、空载组明显升高（P<0.001）,表明PI3K/Akt信号通路被激活。PI3K抑制组PI3K（P<0.01）、Akt（P<0.05）及p-Akt（P<0.01）表达量较转染组明显下降,说明PI3K/Akt信号通路被成功抑制。与正常组、空载组比较,转染组E-cadherin表达明显减少（P<0.001）,N-cadherin（P<0.01）、Snail（P<0.001）表达明显升高,差异均有统计学意义,表明RhoGDI2可以促进气道上皮细胞间质转化;与转染组比较,LY294002抑制组E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.001）,N-cadherin（P<0.05）、Snail（P<0.001）表达明显降低,差异均有统计学意义,表明阻断PI3K/Akt信号通路可有效控制EMT过程。结论：RhoGDI2可以通过调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮-间质转化。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠caspase-3及caspase-9表达的影响

目的：通过检测caspase-3,caspase-9的表达情况,探讨高压氧（HBO）对缺氧缺血新生大鼠脑细胞凋亡的影响及分子机制．方法：建立缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠模型,将其分为HIBD组（24只）及HBO干预组（24只）,同时设立假手术（Sham）组（24只）．分别于造模后18,24,48和96h4个时间点断头取脑观察其病理改变（海马及皮层区）,并用免疫组化的方法检测caspase-3及caspase-9的蛋白表达．结果：HIBD组18,24,48和96h时间点海马及皮层区caspase-3,caspase-9蛋白的表达均明显高于Sham组（P〈0．05）,HBO干预组则显著缓解,caspase-3,caspase-9表达的升高程度均低于HIBD组（P〈0．05）．结论：HBO能减轻新生大鼠HIBD模型海马及皮层区脑细胞的凋亡,其作用可能是通过下调caspase-9进而影响caspase-3的活性表达来完成的．     

中和白介素⁃17对博来霉素诱导的特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的：研究中和白介素?17（interleukin?17,IL?17）对博来霉素（bleomycin,BLM）诱导特发性肺纤维化及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、BLM组、中和抗体组和自噬抑制组。BLM组、中和抗体组和自噬抑制组利用BLM（5 U/kg）诱导特发性肺纤维化模型形成,对照组给予等量生理盐水。造模第1天起自噬抑制组小鼠腹腔注射3?甲基腺嘌呤（3?methyladenine,3?MA）,每周5次,连用4周,其他3组则注射等量的生理盐水。中和抗体组和自噬抑制组小鼠分别从造模后第3 d起,每隔3 d尾静脉注射抗鼠IL?17抗体,于28 d取材,采用Masson三色染色和羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量测定评价肺纤维化程度和胶原蛋白的表达变化,利用ELISA检测肺泡灌洗液中转化生长因子?β1（transform growth factor?β1,TGF?β1）的含量,Western blot分析LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin?1、p62、p?PI3K/PI3K、p?Akt/Akt和p?mTOR/mTOR的蛋白表达。结果：与BLM组相比,中和抗体组羟脯氨酸和TGF?β1含量显著下降（P < 0.01）,肺纤维化程度明显降低（P < 0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin?1表达明显上调（P < 0.01,P < 0.05）,p62表达减少（P < 0.05）,而p?PI3K/PI3K、p?Akt/Akt、p?mTOR/mTOR比值显著降低（P < 0.05）。结论：IL?17在肺纤维化中的作用与抑制细胞自噬有关。中和内源性IL?17,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低TGF?β1产生,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,激活细胞自噬。