丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的:研究丹皮酚对氧应激致人源肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)LX2增殖及TGF-β1、Smad4和Collagen I mR-NA表达的影响。方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,用MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA及SOD,荧光定量PCR检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和Collagen ImRNA表达的影响。结果:丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,抑制细胞MDA含量及增加SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显,与DMSO组比较差异有显著性(P<0.01);丹皮酚各剂量组作用24 h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和Collagen ImRNA的水平降低,与DMSO组比较(P<0.01),且作用呈剂量依赖性。结论:丹皮酚预处理肝星状细胞可下调TGF-β1、Smad4mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞Collagen I的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的:研究丹皮酚对氧应激致肝星状细胞HSC-LX2增殖及TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA含量及SOD活性,荧光定量PCR检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。结果:与DMSO组比较,丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,降低细胞MDA含量并提高SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显(P<0.01);丹皮酚各剂量作用24 h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA的水平降低(P<0.01),并作用呈剂量依赖性。结论:丹皮酚预处理可下调肝星状细胞TGF-β1、Smad4 mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞CollagenⅠ的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

三七总皂苷对H2O2损伤的皮肤成纤维细胞的保护作用

目的探讨三七总皂苷对H2O2诱导的人皮肤成纤维细胞氧化应激损伤的保护作用。方法用不同浓度(12.5～50μg.ml-1)的三七总皂苷预处理细胞24 h,100μmol.L-1 H2O2干预4 h,MTT法测定细胞活力,流式细胞技术检测凋亡细胞百分率,紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)的含量,羟脯氨酸比色法检测胶原含量。结果三七总皂苷可显著降低H2O2对皮肤成纤维细胞的生长抑制率,减少细胞凋亡数量,降低MDA含量,增强SOD和GSH-Px的活性,增加胶原含量,各指标差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可拮抗H2O2诱导的皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤,保护机制与其抗氧化作用有关。     

蓬子菜总黄酮对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB/IκB信号途径的影响

目的:研究蓬子菜总黄酮(FGV)对过氧化氢(H2O2)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)保护作用的机制。方法:采用体外培养的HUVECs,取对数生长期的细胞调整细胞密度为7.5×104/m L,置培养箱中培养至细胞达80%融合时,将细胞随机分为5组:空白组、模型组(仅加入浓度为100μmol·L-1的H2O2培养4 h),FGV保护组(质量浓度分别为12.5,25,50 mg·L-1的FGV培养24 h,之后加入浓度为100μmol·L-1的H2O2培养4 h),每组设4个复孔。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;荧光分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)的含量;酶联免疫分析方法(ELISA)检测血栓调节蛋白(TM)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的分泌水平。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测核因子-κB(NF-κB)/NF-κB抑制因子(IκB)mRNA表达。结果:模型组细胞MDA,TM,VEGF分泌水平以及NF-κB mRNA表达均显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01);FGV保护组可显著降低模型细胞增殖抑制率,MDA,TM,VEGF分泌水平以及NF-κB mRNA表达(P<0.05,P<0.01),提高SOD活性(P<0.01)。结论:FGV具有明显的抗氧化损伤及保护HUVECs的作用,其机制可通过对NF-κB/IκB信号途径的调节。     

姜黄素对TGF-β2刺激下小鼠肺成纤维细胞PPAR-γ/PDGF-β信号通路的影响

目的探讨姜黄素对转化生长因子(TGF-β_2)刺激下小鼠肺成纤维细胞过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPAR-γ)/血小板衍生生长因子β(PDGF-β)信号通路的影响。方法体外培养小鼠肺成纤维细胞(C57BL/6),采用细胞生长计数板检测空白组、姜黄素组(姜黄素5、25、50μmol/L)、TGF-β_2组(10 ng/mL)及TGF-β_2加姜黄素组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50μmol/L)细胞数;逆转录PCR检测空白组、TGF-β_2组(10 ng/mL)及TGF-β_2加姜黄素组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素5、25、50μmol/L)PPAR-γ、PDGFR-β及FGFR1m RNA转录水平;Western blot法及ELISA法检测空白组、TGF-β_2组(10 ng/m L)及TGF-β_2加姜黄素50μmol/L组(TGF-β_2 10 ng/mL及姜黄素50μmol/L)PPAR-γ蛋白表达及胶原蛋白-1水平。结果与空白组比较,姜黄素组50μmol/L时在48、72 h时对细胞增殖抑制最明显;与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时同样在48 h、72 h时对细胞增殖抑制最明显。与空白组比较,TGF-β_2组PPAR-γ、PDGF-βmRNA表达及PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达增加(P0.05)。与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素组25、50μmol/L时PPAR-γmRNA表达水平明显升高,且高于TGF-β_2加姜黄素组5μmol/L时(P0.05),而TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时PPAR-γmRNA表达水平高于TGF-β_2加姜黄素组25μmol/L时(P0.05)。TGF-β_2加姜黄素组各浓度PDGF-βmRNA表达低于TGF-β_2组(P0.05),且TGF-β_2加姜黄素组50μmol/L时PDGF-βmRNA表达低于TGF-β_2加姜黄素组5、25μmol/L时(P0.05)。TGF-β_2组及TGF-β_2加姜黄素组各浓度FGFR1mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与TGF-β_2组比较,TGF-β_2加姜黄素50μmol/L组PPAR-γ蛋白表达升高,胶原蛋白-1表达降低(P0.05,P0.01)。结论姜黄素不仅抑制TGF-β_2诱导的小鼠肺成纤维细胞增殖,而且还抑制胶原合成,其可能与使PPAR-γ表达上调及PDGF-β表达下调相关。因此,姜黄素可能是通过PPAR-γ/PDGF-β信号通路阻止肺纤维化的发生发展。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的调控作用

目的探索白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法用200μmol.L-1H2O2作用2 h复制HUVECs损伤模型,白藜芦醇分为3个浓度干预组(13.75,27.5,55μmol.L-1)于损伤前2 h加入;MTT法测定细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光染料JC-1标记法检测线粒体膜电位。结果 13.75μmol.L-1白藜芦醇能显著增强H2O2损伤HUVECs后的细胞活力(P<0.05,与H2O2组比较),提高SOD活性(P<0.05,与H2O2组比较)及GSH含量(P<0.05,与H2O2组比较),降低细胞凋亡率(P<0.01,与H2O2组比较),恢复线粒体膜电位;而55μmol.L-1白藜芦醇对H2O2诱导的HUVECs细胞活力降低、细胞内SOD的活性和GSH的含量以及线粒体膜电位的下降无明显影响,但却能进一步促进H2O2诱导的HUVECs凋亡率(P<0.05,与H2O2组比较)。结论白藜芦醇在低浓度时对H2O2诱导的HUVECs凋亡具有抑制作用,而在高浓度时却对凋亡有促进作用。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

珠子参总皂苷减弱炎症应答和对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察珠子参总皂苷对H2O2致心肌细胞氧化应激性损伤保护作用及MCP-1和相关炎症因子表达的影响。方法:Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100,200μg/ml)孵育24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对心肌细胞活力的影响,Hoechst33258染色检测细胞内ROS含量的影响,比色法测定培养液中LDH、CK含量,同时检测培养液中SOD、CAT、GSH-Px的活性及MDA含量,ELISA检测培养液中MCP-1、TNF-α、TGF-β1含量,Western blot检测细胞内MCP-1、NF-κBp65蛋白表达。结果:珠子参总皂苷(100,200μg/ml)处理能显著增加存活率,改善细胞形态,降低细胞内ROS含量;减少LDH、CK释放量,增强SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量;降低培养液中MCP-1、TNF-α、TGF-β1含量及细胞内MCP-1、NF-κBp65蛋白表达水平,其中以珠子参总皂苷200μg/ml剂量组效果更为显著。结论:珠子参总皂苷对H2O2致心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其保护作用主要与抑制心肌细胞内ROS的产生与聚集,增强抗氧化酶的活性,减少心肌酶的释放及抑制MCP-1、TNF-α、TGF-β1和NF-κB p65的表达有关。     

补骨脂酚对TGF-β诱导人肝星状细胞损伤的保护作用

目的:探讨补骨脂酚对转化生长因子-β(TGF-β)诱导人肝星状细胞损伤的保护作用及其机制。方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人肝星状细胞活性,筛选出补骨脂酚安全有效浓度;本实验分为空白组、模型组、补骨脂酚组(1×10-5mol·L-1)及雌二醇组(1×10-6mol·L-1),同样检测各组细胞的活性,除空白组外,其余各组均加入10μg·L-1TGF-β诱导人肝星状细胞损伤;分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1),胶原蛋白-Ⅰ(Col-Ⅰ)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MMP-1,Col-Ⅰ蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,1×10-5mol·L-1补骨脂酚显著提高TGF-β诱导人肝星状细胞及细胞中SOD,GSH-Px活性,显著降低细胞中MDA含量及Col-Ⅰ,MMP-1 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:补骨脂酚对TGF-α诱导人肝星状细胞损伤的保护作用,主要是通过提高细胞中抗氧化酶的活性、降低细胞中MMP-1,Col-ⅠmRNA和蛋白的含量。     

竹节参总皂苷通过ERK/Nrf2通路对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用及其分子机制。方法:H2O2作用SH-SY5Y细胞建立氧化应激损伤模型,以不同浓度竹节参总皂苷(0.1、1、5、20μg/m L)预处理12 h,再加入H2O2继续培养12 h。通过MTT检测细胞活力;酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;Western blotting检测Nrf2、p-ERK、p-P38蛋白表达;Real-Time PCR检测NQO1、GCLC的mRNA表达。结果:各浓度竹节参均能显著提高H2O2所导致的细胞活力降低、提高SOD活性、降低MDA含量,并能上调Nrf2、p-ERK蛋白及NQO1、GCLC mRNA表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控ERK/Nrf2通路,从而增强抗氧化基因表达有关。     

葛根素通过Nrf2/ARE通路调控小神经胶质BV-2细胞的氧化应激损伤

[目的]研究葛根素对双氧水(H2O2)诱导小神经胶质BV-2细胞氧化应激损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。[方法]体外常规培养BV-2细胞,用H2O2诱导细胞氧化应激损伤模型,并同时将细胞分为正常对照组、H2O2诱导模型组、H2O2+5μmol/L葛根素组、H2O2+10μmol/L葛根素组及H2O2+20μmol/L葛根素组,CCK8试剂盒检测葛根素对细胞存活率的影响,相关试剂盒检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹方法检测核转录因子(Nrf2)、GCLC、NQO1及HO-1蛋白表达水平。[结果] H2O2能诱导BV-2细胞氧化应激损伤;与H2O2诱导组相比,不同剂量的葛根素可明显增加细胞的存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放及增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);免疫印迹结果显示葛根素可明显增强Nrf2的转位,并诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H2O2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。[结论]葛根素可明显降低BV-2细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路的有关。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,用H2O2(300μmol·L-1)处理0.5 h,建立H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,SGI组:H9c2细胞用(100,200,400μmol·L-1)SGI处理6 h后,另设空白组与模型组,再用H2O2处理0.5 h。利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP);用MTS法检测细胞存活率;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)的表达情况。结果:在300μmol·L-1H2O2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与模型组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.01),明显减少H9c2细胞内ROS含量(P0.01),并使MMP丢失减少(P0.01),Western blot表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护H9c2心肌细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。     

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降;Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.     

复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究

该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与复方银杏叶颗粒(80,160,320,640 mg·L-1)预孵育,合并使用H2O2(1 200μmol·L-1)建立氧化应激损伤模型。采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响,检测细胞培养上清中的LDH,MDA,NO含量及SOD活性,判断药物对内皮细胞的保护作用。通过Casepase-3活性检测以及Annexin V-FITC/PI流式细胞术,检测药物对细胞凋亡的保护作用。使用Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。研究发现1 200μmol·L-1H2O2能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤,使细胞存活率降低,且细胞增殖抑制程度与H2O2的作用时间呈正相关。而80,160,320,640 mg·L-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤,恢复细胞正常增殖水平,改善细胞状态,抑制细胞凋亡,同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达。该实验证明了复方银杏叶颗粒对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关。     

地黄梓醇对椎间盘髓核细胞NLRP3炎性体的调控作用

目的研究地黄梓醇对椎间盘髓核细胞NLRP3炎性体的调控作用。方法采用H2O2刺激大鼠原代椎间盘髓核细胞建立细胞模型,地黄梓醇预给药。CCK8法测定细胞活力,流式细胞仪检测髓核细胞凋亡,ELISA测定细胞上清液T-SOD、MDA、IL-1β水平,实时荧光定量PCR测定TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA表达,Western blot检测TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β、NF-κB p65蛋白表达,免疫荧光法检测TXNIP、NLRP3表达。结果地黄梓醇(5、10μmol/L)能上调细胞上清液T-SOD水平,下调MDA、IL-1β水平(P<0.05),抑制H2O2诱导髓核细胞凋亡(P<0.05),降低髓核细胞TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01),并且10μmol/L地黄梓醇能抑制NF-κB p65蛋白表达(P<0.05)。结论地黄梓醇可有效抑制H2O2导致的髓核细胞凋亡,可能与调控ROS/NLRP3/IL-1β通路轴有关。     

当归芍药散通过调控NF-κB炎性通路改善H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用

目的:研究当归芍药散(Danggui Shaoyaosan,DSS)含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)氧化应激和炎症反应的调控作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定SH-SY5Y细胞存活率构建最佳时间和最佳剂量的H2O2诱导的细胞损伤模型。实验设空白组,模型组,当归芍药散含药血清高、中、低剂量组(2.5%,5%,10%)。采用MTT比色法检测DSS干预后细胞活率,分光光度法测定抗氧化指标丙二醛(MDA),过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达水平,采用免疫荧光检测核转录因子-κB(NF-κB)p65的核移位情况。结果:H2O2浓度为250μmol·L-1干预24 h后SH-SY5Y细胞存活率约55%为最佳造模条件,DSS高、中、低剂量干预后,与模型组比较,细胞活率呈剂量依赖性上升(P<0.05),MDA明显下调(P<0.05),抗氧化指标CAT,SOD和GSH明显上升(P<0.05);H2O2能显著上调SH-SY5Y细胞炎性因子TNF-α,IL-1β和IL-6 mRNA表达水平,并介导胞质NF-κB的激活和向核移位,当归芍药散含药血清能呈剂量依赖性抑制NF-κB p65的入核并降低IL-1β,IL-6和TNF-α等细胞炎性因子的mRNA表达水平。结论:当归芍药散含药血清可以显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的氧化损伤通过改善其抗氧化状态,同时也能降低炎症反应通过抑制NF-κB信号通路。     

铁皮石斛多糖通过抑制TGF-β_(1)/Smad2/3通路对抗二氧化硅致肺损伤作用北大核心

目的:明确铁皮石斛多糖对二氧化硅(SiO_(2))致矽肺的保护作用及对TGF-β_(1)/Smad2/3通路的影响。方法:采用SiO_(2)致人肺细胞A549损伤模型,铁皮石斛多糖干预后,MTT法检测细胞活力,荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用滴鼻法给予SiO_(2)复制致小鼠肺组织损伤模型,分别设正常对照组、模型组、铁皮石斛多糖高(500 mg/kg)、低(250 mg/kg)剂量组,HE染色和天狼星红染色观察小鼠肺组织病理学变化;试剂盒检测小鼠血清SOD、MDA水平和肺组织中羟脯氨酸(HYP)水平;蛋白免疫印迹法检测细胞和肺组织中TGF-β_(1/2)、p-Smad蛋白表达。结果:铁皮石斛多糖(200μg/mL)可显著降低SiO_(2)对细胞增殖的抑制作用,降低细胞内ROS水平(P<0.05或P<0.01)。铁皮石斛多糖各剂量组小鼠肺组织炎症细胞和胶原分布均较模型组明显减少。铁皮石斛多糖可有效逆转SiO_(2)引起的血清SOD活性降低及血清MDA和肺组织中HYP含量升高,抑制细胞和肺组织内TGF-β_(1/2)蛋白表达和Smad蛋白磷酸化水平(P<0.05或P<0.01)。结论:铁皮石斛多糖可减轻SiO_(2)诱导人肺泡细胞损伤,改善矽肺小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β_(1)/Smad2/3信号通路有关。     

补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨补骨脂二氢黄酮甲醚对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法采用Aβ(1.5×10-4mol·L-1)诱导的PC12细胞作为阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,并以补骨脂二氢黄酮甲醚(1×10-6mol·L-1)、雌二醇(1×10-5mol·L-1)进行干预。实验设置空白组、Aβ组、补骨脂二氢黄酮甲醚组、雌二醇组。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞线粒体膜电位,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western Blot法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与空白组比较,Aβ组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-a蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与Aβ组相比,补骨脂二氢黄酮甲醚组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,可能与提高其抗氧化酶活性及线粒体膜电位,减少炎症因子分泌有关。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。