力竭对训练小鼠肝线粒体蛋白质组表达的影响

应用双向凝胶电泳和质谱技术研究训练小鼠力竭运动后的肝线粒体蛋白质组差异表达,探讨力竭对运动训练机体肝线粒体功能的影响.将20只健康雄性ICR小鼠分为训练组(TB)和训练力竭组(TA),分别进行三周游泳训练,休息两日TA组游泳力竭,24 h后取材.提取肝线粒体蛋白质进行2-DE电泳及图谱扫描,PD-quest软件分析图像,质谱鉴定两组间5倍以上差异表达蛋白点.结果显示蛋白质斑点数TB组323±84个和TA组307±106个,TA组和TB组差异表达蛋白点263个,其中2倍以上80个(48个上调和32个下调),5倍以上6个(上下调点各3个).质谱成功鉴定出TA组下调5倍点,为ECHM、ATPD和MMSA.这表明力竭运动使训练机体肝线粒体蛋白质组发生明显差异表达,能量代谢重要酶ECHM、ATPD和MMSA蛋白表达不足,将导致肝线粒体糖、脂代谢及ATP生成障碍,这可能是力竭疲劳和不利于肝脏的重要原因机制.     

补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证“方证相关”的蛋白质组学研究

揭示补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础,制作高血压病气虚血瘀证细胞模型。用补阳还五汤含药血清干预细胞模型,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点。并对其进行生物学分析。结果高血压病气虚血瘀证组与健康对照组比较,差异蛋白质点有30个。其中,有16个蛋白上调,14个蛋白质下调。补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组比较,差异蛋白质点有14个。其中,有9个蛋白上调,5个蛋白质下调。MALDI-TOF-MS/MS鉴定出:高血压病气虚血瘀证组与健康对照组差异蛋白点共有8个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有肽基脯氨酰异构酶A、肽基脯氨酸顺反异构酶A样1亚型、真核翻译起始因子5A-1 B亚型、微管蛋白beta-2C、CRA_b亚型、3-羟酰辅酶A脱氢酶2型异构体2。表达下调的蛋白有丙酮酸激酶同工酶M1亚型、抑制蛋白-1、抑制蛋白-1 1亚型、补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组差异蛋白点共有3个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有丙酮酸激酶CRA_c亚型、热休克蛋白27;表达下调的蛋白有膜联蛋白A1,CRA_b亚型。这些蛋白多与促进或抑制细胞凋亡有关。说明高血压病气虚血瘀证存在着细胞凋亡,补阳还五汤可以纠正高血压病气虚血瘀证引起的细胞凋亡。这些差异蛋白可以作为高血压病气虚血瘀证的标志蛋白或补阳还五汤的作用靶点,抑制细胞凋亡可能是补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础之一。     

阿胶酶解成分对贫血小鼠造血系统的保护机制

运用5-氟脲嘧啶制备的小鼠贫血模型研究降解分离后所得阿胶有效组分A、B的升高红、白血球的作用机制.结果显示:体外消化液中提取的A、B组分能促进贫血小鼠外周血白细胞和红细胞的升高,促进骨髓和脾造血干/祖细胞集落BFU-E,CFU-E,CFU-GM的增加,提高外周血GM-CSF,IL-6,EPO的含量,降低负相造血因子INF-γ、TGF-β含量,刺激肝和肾EPO和GMCSF mRNA表达.从而说明从体外模拟人胃、肠的消化系统分离的阿胶组分A、B能够刺激造血.该有效补血活性成分的升高红、白血球的作用机制可能与保护贫血小鼠造血微环境和造血干、祖细胞,刺激髓外造血器官相关造血细胞因子表达有关.     

成年大鼠急性脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白组学研究

为进一步阐明脊髓损伤(SCI)的修复机制,对SD成年大鼠进行急性全横断损伤,将损伤前后的大鼠脊髓总蛋白质进行固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE),经考马斯亮蓝染色后,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出38种蛋白质.其中表达上调的蛋白质有电压依赖的阴离子选择通道蛋白1,α-烯醇酶、硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶3、生长因子受体结合蛋白2等,表达下调的蛋白质有谷氨酰胺合成酶、14-3-3 epsilon、磷脂酰乙醇胺结合蛋白1、血红蛋白β-1等.鉴定出的差异蛋白多数涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程.     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

烟草烟碱转化相关蛋白质筛选分析研究

为了研究烟草中烟碱转化机理,应用比较蛋白组学方法研究了高烟碱烟草中烟碱转化相关蛋白质表达情况.采用双向电泳联用质谱技术比较了实验组高烟碱转化烟草叶片和对照组野生型烟草叶片的蛋白质差异,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.选取了34个差异蛋白质点,采用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,最终有12个蛋白质点得到了可靠鉴定,其中在实验组中相对下调的蛋白有7个,相对上调的蛋白有5个.通过比对蛋白质组库数据,发现这些差异表达的蛋白质主要是参与碳水化合物代谢、能量代谢等功能,而且亚细胞定位主要是在叶绿体和线粒体,表明这些蛋白表达水平与烟碱转化具有密切关系,为研究高烟碱转化率烟叶的形成机理提供了新的依据.     

拟南芥T-DNA插入突变体scc8-D的蛋白质组学研究

采用双向凝胶电泳对拟南芥T-DNA插入突变体scc8-D和对照材料cry1cry2的植株总蛋白进行了分离,通过考染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.然后选取30个差异蛋白质点用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,有22个蛋白质点得到了可靠鉴定.其中在scc8-D突变体中有3个蛋白上调,16个蛋白下调,有3个蛋白仅在cry1cry2中表达.分析发现,这些差异蛋白可能参与了碳水化合物代谢、光合作用、光呼吸、胁迫响应、蛋白质合成和氧化还原平衡等过程.这些蛋白中光合蛋白占32%,说明这些与矮化相关的调节性蛋白和功能性蛋白丰度的表达受到光的调控,从而抑制了植物下胚轴的伸长.     

双向电泳技术研究镉诱导后牙鲆肝的差异蛋白质组

采用改良的TCA/丙酮法直接提取牙鲆肝脏蛋白质组,并采用双向凝胶电泳技术予以分离.实验结果表明:经氯化镉诱导后,牙鲆肝表达出16个差异蛋白质(斑点),其中4个斑点上调,2个斑点下调,6个斑点消失,新增4个斑点;并且蛋白质斑点在凝胶上的分布表现出较高的重复性.一旦这些差异蛋白质点在双向凝胶电泳图谱上实现标准指纹化后,其图谱中的差异蛋白斑点分布规律可用于监测与评价流动水体中镉污染程度及危害性.     

玉米大斑病菌StNPS6基因缺失突变体的转录组与蛋白质组差异表达分析

用T-DNA插入法构建一个玉米大斑病菌突变体库, 并筛选到一株致病力明显下降的突变体. 该突变体T DNA插入位点为非核糖体肽合成酶基因6（StNPS6基因）的上游启动子区. 先敲除StNPS6基因, 再对StNPS6基因敲除突变体和野生型进行转录组差异表达分析及蛋白质组差异表达分析. 结果表明: 在1 767个差异表达基因中的上调表达基因903个, 下调表达基因864个; 在突变体中鉴定30个差异表达蛋白质中的上调表达蛋白质8个, 下调表达蛋白质22个.     

As2O3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的：探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响．方法：①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况．②采用实时荧光定量HR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达．结果：①造血于祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达,②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达．结论：①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一．②As2O3能下调HOXB6基因的表达．     

白光下拟南芥隐花素双突变体及其野生型的蛋白质组学比较分析

隐花素是植物的蓝光受体,在植物中调节多种光形态建成,包括抑制下胚轴的伸长、子叶的伸展和调节植物的开花时间等,但隐花素依赖蓝光调节光形态建成的分子机制仍然不清楚.采用双向凝胶电泳对生长在白光下的拟南芥隐花素双突变体及野生型的幼苗全蛋白进行分离,通过考马斯亮蓝染色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.选取了55个差异蛋白质点采用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,最终有33个蛋白质点得到了可靠鉴定.其中在crylcry2中相对于野生型下调的有9个蛋白,其他蛋白均表现为上调.这些在白光处理下差异表达的蛋白质主要是参与碳水化合物代谢、能量代谢、细胞组织结构、抵抗压力和解毒、蛋白质的折叠和细胞壁的形成等功能,而且亚细胞定位主要是在叶绿体和线粒体.对其中5个蛋白质点的基因进行了半定量RT-PCR分析,发现这几个蛋白质点的表达与基因的表达基本一致.这些分析结果表明光控制拟南芥的发育是通过共调节许多相关基因的表达而实现的.     

全反式维甲酸对脐血红系祖细胞增殖过程中HOXB6基因表达的影响

探讨脐血造血干祖细胞向红系增殖过程中HOXB6 mRNA表达及全反式维甲酸对HOXB6 mRNA表达的影响.采用体外培养技术,以全反式维甲酸持续干扰造血干祖细胞,观察集落生成情况,采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平,用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量表示HOXB6基因相对表达量.结果表明,人类造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化过程中,各祖细胞HOXB6基因均表达,与正常对照组比较,全反式维甲酸可上调HOXB6基因的表达,说明HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞正常增殖分化过程中的调控基因之一.     

双向电泳联用质谱技术研究水稻明恢63对细菌性条斑病侵染的应答

水稻细菌性条斑病是由细条病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzicola (Xooc)引起的一种细菌性病害,是我国南方稻区的主要病害.为了探明水稻对细条病的应答机制,我们应用双向电泳联用质谱技术,研究了水稻品种明恢63在水稻细条病病菌侵染后不同时期的全蛋白变化,并对差异蛋白进行了鉴定以及分析归类.共鉴定出17种表达上调的蛋白和10种表达下调的蛋白,这些蛋白参与了水稻对细条病侵染的信号识别及防卫应答,其中包括信号转导类蛋白、防卫相关蛋白、代谢相关蛋白和参与蛋白质合成的蛋白等.     

牛至精油对嗜热四膜虫基因表达的影响

牛至精油(Oregano Essential Oil, OEO)具有抗菌、杀菌、抑制寄生虫生长等功效.为了解牛至精油影响细胞生长的分子调控过程,对牛至精油作用下0 h和24 h的嗜热四膜虫的基因表达情况进行分析.高通量转录组测序结果表明,对照组即未加入牛至精油24 h与0 h的样本数据,比较分析后鉴定到了6 297个差异表达基因(包括下调4 232个、上调2 065个),而实验组即加入牛至精油24 h与0 h的样本数据,比较分析后鉴定到7 596个差异表达基因(包括下调6 254个、上调1 342个).通过与对照组差异表达基因的比较发现,实验组特异上调和下调差异表达基因分别有257个和2 329个.GO功能富集发现,特异上调差异表达基因无功能富集,特异下调差异表达基因功能主要富集在RNA加工、蛋白质分解代谢、细胞定位和信号转导等过程.KEGG通路分析发现,特异下调差异表达基因主要涉及细胞自噬及细胞周期等通路.而这些过程或通路上基因表达水平的下调可能会抑制细胞的生长.对通路中7个下调的差异表达基因和3个无明显差异表达变化的基因进行实时荧光定量PCR检测,实验结果和转录组测序数据结果的相关...     

高血压病气虚血瘀证患者血清对CRL-1730凋亡相关基因、miRNA表达的影响及补阳还五汤的干预作用

为探讨高血压病气虚血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)凋亡的影响与其作用机制。应用实时定量PCR(polymerase chain reaction)芯片技术检测与miRNA芯片技术分别检测与人细胞凋亡相关的89个关键基因和384个miRNAs的表达。高血压病气虚血瘀证组与非气虚血瘀证组比较,有1个上调及3个下调miRNA,与健康对照组比较,89个基因有22个上调基因和1个下调基因,有8个上调及2个下调miRNA,有统计学差异(P0.05);高血压病非气虚血瘀证组与健康对照组比较,89个基因有19个上调基因和1个下调基因,有12个上调及2个下调miRNA,有统计学差异(P0.05)。补阳还五汤高剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因中有5个上调基因和1个下调基因,有6个上调miRNA,有统计学差异(P0.05);中剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因有7个上调基因和3个下调基因,有3个下调miRNA,有统计学差异(P0.05);低剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因中有5个上调基因和3个下调基因,有3个上调及1个下调miRNA,有统计学差异(P0.05)。高血压病气虚血瘀证患者血清诱导内皮细胞凋亡的机制可能与凋亡相关的mRNA和miRNA表达失调有关,其中,TNFSF10具有关键作用,补阳还五汤对上述部分差异表达的凋亡相关分子表达具有调节作用。     

嗜水气单胞菌感染暗纹东方鲀脾脏的蛋白质组学分析

为了解暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)受到病原菌感染后参与应答的主要蛋白的功能与调控作用,采用TMT标记、高效液相色谱(HPLC)分级技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术,分析了暗纹东方鲀感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)12 h后脾脏组织的蛋白表达水平,鉴定差异表达蛋白,并通过亚细胞定位、GO(Gene Oncology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)对差异表达蛋白进行进一步分析.本次实验共鉴定到306个差异表达蛋白,其中120个上调表达蛋白,186个下调表达蛋白;利用平行反应检测实验(PRM)对4个(1个上调,3个下调)与免疫相关的差异蛋白进行验证,其结果与蛋白质测序结果一致;亚细胞定位结果显示:差异表达蛋白主要定位在细胞质、细胞核和胞外;GO分析发现:差异表达蛋白参与的主要生物进程有代谢过程、细胞进程和单一生物进程,主要的分子功能有结合、催化活性和机构分析活性;KEGG通路分析结果显示:差异表达蛋白主要参与了核糖体、视黄醇代谢、卟啉和叶绿素代谢、ECM受体相互作用、吞噬体、叶酸生物合成、药物代谢、酪氨酸代谢等通路.研究结果为进一步探究病原菌感染暗纹东方鲀的致病机理提供了一定的理论基础.     

COC1/DDP亚细胞中波形纤维蛋白的肽质谱指纹分析

目的寻找与鉴定卵巢癌耐药株中的差异表达蛋白质。方法应用高分辨二维凝胶电泳分离卵巢癌细胞中差异表达的波形纤维蛋白,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对其进行分析与鉴定。结果获得了分辨率和重复性均较佳的凝胶电泳图谱,图像分析显示波形纤维蛋白表达明显下调。结论与其他方法相比,应用凝胶电泳和生物质谱联用技术分析与鉴定未知蛋白具有简单快捷的特点。     

用蛋白质组学技术分析家兔MODS血清蛋白质组的方法初探

应用蛋白质组学技术比较家兔肠源性多器官功能障碍综合征(MODS)模型复制前后的血清蛋白质组表达差异,探索该技术在家兔肠源性MODS研究中应用的可能性.取家兔肠源性MODS模型复制前后血清各50 μL,去除高丰度蛋白后用丙酮将洗脱液中的蛋白沉淀,加入水化液使沉淀中的蛋白充分裂解,离心后取上清液上样.双向电泳后银染,用PDQuest7.4软件进行胶图分析,比较两组血清双向电泳图谱中的差异蛋白点.家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好,可以满足进一步研究的需要.其中11个点在复制MODS后表达上调,8个点下调.复制家兔肠源性MODS前后血清双向电泳图谱存在显著差异;初步建立的家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

双向电泳联用质谱技术研究水稻明恢63对细菌性条斑病侵染的应答

水稻细菌性条斑病是由细条病菌物Xanthomonas oryzae pv.oryzicola（Xooc）引起的一种细菌性病害，是我国南方稻区的主要病害．为了探明水稻对细条病的应答机制，我们应用双向电泳联用质谱技术，研究了水稻品种明恢63在水稻细条病病菌侵染后不同时期的全蛋白变化，并对差异蛋白进行了鉴定以及分析归类．共鉴定出17种表达上调的蛋白和10种表达下调的蛋白，这些蛋白参与了水稻对细条病侵染的信号识别及防卫应答，其中包括信号转导类蛋白、防卫相关蛋白、代谢相关蛋白和参与蛋白质合成的蛋白等．     

白光下拟南芥隐花素双突变体及其野生型的蛋白质组学比较分析

隐花素是植物的蓝光受体,在植物中调节多种光形态建成,包括抑制下胚轴的伸长、子叶的伸展和调节植物的开花时间等,但隐花素依赖蓝光调节光形态建成的分子机制仍然不清楚．采用双向凝胶电泳对生长在白光下的拟南芥隐花素双突变体及野生型的幼苗全蛋白进行分离,通过考马斯亮蓝染色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱．选取了55个差异蛋白质点采用MALDI—TOF—TOF—MS进行肽质谱指纹图分析,最终有33个蛋白质点得到了可靠鉴定．其中在crylcry2中相对于野生型下调的有9个蛋白,其他蛋白均表现为上调．这些在白光处理下差异表达的蛋白质主要是参与碳水化合物代谢、能量代谢、细胞组织结构、抵抗压力和解毒、蛋白质的折叠和细胞壁的形成等功能,而且亚细胞定位主要是在叶绿体和线粒体．对其中5个蛋白质点的基因进行了半定量RT—PCR分析,发现这几个蛋白质点的表达与基因的表达基本一致．这些分析结果表明光控制拟南芥的发育是通过共调节许多相关基因的表达而实现的．