利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中 的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异; 应用双向电泳-质谱技术, 对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定; 对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索, 获得了19个蛋白质, 其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关; 研究结果表明, 牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白, 并可利用双向凝胶电泳进行分离, 为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异;应用双向电泳-质谱技术,对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定;对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索,获得了19个蛋白质,其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关;研究结果表明,牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白,并可利用双向凝胶电泳进行分离,为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

鼠高,低转移性纤维肉瘤中波形纤维蛋白的分析

为探讨肿瘤细胞生物特性与细胞骨架蛋白表达的关系，选用了鼠的高、低转移性纤维肉瘤细胞，采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳地，对这两株细胞的中等纤维蛋白－波形纤维蛋白进行了分析。结果显示：波形纤维蛋白在高、低转移性纤维肉瘤细胞中，其含量有所不同，并有波形纤维蛋白亚基的变化。     

低剂量辐射后小鼠骨髓造血干、祖细胞的蛋白质组学研究

本文利用双向凝胶电泳方法建立低剂量辐射后不同时间点小鼠骨髓造血干、祖细胞与相应假照组细胞蛋白质组二维凝胶电泳图谱,用图像分析软件分析照射组与假照组差异表达蛋白,并利用MALDI-TOF-MS生物质谱对差异蛋白质进行鉴定分析.结果表明低剂量辐射后骨髓造血干、祖细胞中表达上调的蛋白26个,表达下调的蛋白4个,消失的蛋白4个.其中碳酸酐酶II、蛋白二硫键异构酶、层粘连蛋白受体、嘌呤核苷磷酸化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、氯化琥珀胆碱细胞内信号通道蛋白、中心体肌动蛋白-α、磷酸葡萄糖脱氢酶、原纤维蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂等22种蛋白被鉴定出来.研究表明低剂量辐射使骨髓造血干、祖细胞某些蛋白表达上调或下调,并鉴定出与低剂量辐射作用机制相关的蛋白质.从新的视角探讨了低剂量辐射对造血系统的作用机制,同时也为低剂量辐射作用机制的研究提供了一种新的有效的研究手段.     

黄瓜芽黄突变体叶片的蛋白组学研究

为筛选影响芽黄现象的差异表达蛋白,采用双向电泳-质谱技术研究黄瓜芽黄突变体与正常黄瓜的蛋白表达差异。提取相同生长时期的芽黄突变体黄瓜yh与正常黄瓜的叶片组织的总蛋白,进行双向凝胶电泳,其结果应用PDQuest软件分析。共选取22个蛋白进行MALDI-TOF质谱分析,结果表明,22个蛋白中芽黄突变体中上调表达的有7个,正常黄瓜中上调表达的有6个,无明显差异的蛋白9个。本实验成功建立了黄瓜芽黄突变体双向电泳分析体系,并筛选出差异蛋白,为黄化突变体分子机制研究奠定了一定基础。     

力竭对训练小鼠肝线粒体蛋白质组表达的影响

应用双向凝胶电泳和质谱技术研究训练小鼠力竭运动后的肝线粒体蛋白质组差异表达,探讨力竭对运动训练机体肝线粒体功能的影响.将20只健康雄性ICR小鼠分为训练组(TB)和训练力竭组(TA),分别进行三周游泳训练,休息两日TA组游泳力竭,24 h后取材.提取肝线粒体蛋白质进行2-DE电泳及图谱扫描,PD-quest软件分析图像,质谱鉴定两组间5倍以上差异表达蛋白点.结果显示蛋白质斑点数TB组323±84个和TA组307±106个,TA组和TB组差异表达蛋白点263个,其中2倍以上80个(48个上调和32个下调),5倍以上6个(上下调点各3个).质谱成功鉴定出TA组下调5倍点,为ECHM、ATPD和MMSA.这表明力竭运动使训练机体肝线粒体蛋白质组发生明显差异表达,能量代谢重要酶ECHM、ATPD和MMSA蛋白表达不足,将导致肝线粒体糖、脂代谢及ATP生成障碍,这可能是力竭疲劳和不利于肝脏的重要原因机制.     

白斑综合征中国对虾肝胰腺蛋白质组学研究的技术探索

建立白斑综合征中国对虾肝胰腺蛋白质组学技术体系，以患白斑综合征中国对虾的肝胰腺为研究对象，健康中国对虾肝胰腺为对照组,探索2种蛋白质组学差异蛋白的分离和鉴定的方法. 采用双向凝胶电泳(4～7固相pH梯度干胶条，10%SDS-PAGE)分离蛋白质组，银染显色，图像分析软件比较分析，识别差异蛋白，胶上扣点，处理后通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MOLDI-TOF）得到肽质量指纹图谱，软件分析后应用Mascot数据库搜索软件鉴定蛋白. 分别获得中国对虾患白斑病组及对照组正常肝胰腺蛋白质组表达图谱. 分别识别出203和107个蛋白质点. 筛选并尝试鉴定数个差异蛋白. 对各方法步骤进行了技术探讨，对实验过程提出了一系列建议. 建立了双向电泳及生物质谱方法研究中国对虾白斑病的蛋白质组学技术体系. 该体系拓宽了对虾免疫生理研究的途径，以从蛋白质水平探讨对虾发病机制，寻找有效药物靶点.     

差异蛋白质组学的分离鉴定技术

文章综述了差异蛋白质组学中主要分离技术如双向电泳、差异凝胶电泳、多维色谱技术及以质谱为基础的分离鉴定技术。     

成年大鼠急性脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白组学研究

为进一步阐明脊髓损伤(SCI)的修复机制,对SD成年大鼠进行急性全横断损伤,将损伤前后的大鼠脊髓总蛋白质进行固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE),经考马斯亮蓝染色后,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出38种蛋白质.其中表达上调的蛋白质有电压依赖的阴离子选择通道蛋白1,α-烯醇酶、硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶3、生长因子受体结合蛋白2等,表达下调的蛋白质有谷氨酰胺合成酶、14-3-3 epsilon、磷脂酰乙醇胺结合蛋白1、血红蛋白β-1等.鉴定出的差异蛋白多数涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程.     

聚焦超声近场辐照内皮细胞前后的差异蛋白质组学研究

比较聚焦超声近场辐照内皮细胞前后蛋白质的差异,可为聚焦超声近场所致生物学效应提供依据.用聚焦超声近场辐照内皮细胞株HUECV304,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离聚焦超声近场辐照与未辐照HUECV304细胞的蛋白质,切取差异蛋白质条带,采用液相色谱电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-ITMS/MS)鉴定差异表达的蛋白质.LC-ESI-ITMS/MS识别相对分子量在(95～130)×103区域的2条差异条带中的7个差异表达蛋白质.Western印迹分析证实了肌动蛋白(Actin)在聚焦超声近场辐照与未辐照HUECV304细胞中的差异表达水平.7个差异表达蛋白质为进一步研究聚焦超声近场辐照内皮细胞所致生物学效应提供了线索.     

正常与性早熟河蟹视神经节蛋白的二维电泳初步分析

利用双向电泳技术比较正常和性早熟河蟹视神经节蛋白的表达差异,旨在探索蛋白质组学技术在甲壳动物中尤其是河蟹的性早熟研究当中的应用.结果发现,明显差异的蛋白点共24个,为以后通过蛋白质组学手段筛选出真正影响性早熟发生的蛋白质或酶奠定了基础.     

DMSO处理后中国仓鼠卵巢细胞的蛋白质组变化分析

在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考马斯亮蓝G-250染色,GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,测得每张图谱平均斑点数量为1852±123,以其中一块胶为参考胶进行4块胶间的斑点匹配,其平均匹配的点数达1326±100,平均匹配率为71.6%以上.通过分析得到18个蛋白质点在添加了DMSO后表达量有明显变化(其中12个蛋白表达量明显降低,6个蛋白表达量明显增加.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹谱图和串级质谱图,用GPS软件查询NCBI数据库进行了鉴定.鉴定结果表明,这些差异蛋白中一些是与细胞周期有关的蛋白,一些是与细胞能量代谢相关的蛋白,还有一些是与蛋白翻译后修饰有关的酶,这些结果进一步深化了对DMSO提高CHO细胞表达HBsAg的机理的理解.     

脉冲电场对中国红豆杉细胞的影响

通过二维电泳（2-DE）技术来研究脉冲电场作用后48 h中国红豆杉细胞在蛋白表达上的变化.共进行了3次二维电泳重复实验，经过相关因子分析证实具有较高的重复性.比较对照组和经过脉冲电场处理的实验组的二维电泳图谱，发现有较明显的差异.用基质辅助激光解析-飞行时间质谱和液相色谱-电喷雾质谱对其中的部分蛋白进行分析鉴定.鉴定结果表明：核糖核酸蛋白粒、醛糖差向异构酶和铁氧还蛋白-NADP(+)还原酶这三个蛋白可能是与脉冲电场诱导相关的蛋白.     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

Proteomic comparison of four maize inbred lines with different levels of resistance to Curvularia lunata （Wakker） Boed infection

Protein profiles of leaves in four maize inbred lines with different disease resistance to pathogen Curvularia lunata(Wakker)Boed were studied by two-dimensional electrophoresis(2-DE)and mass spectrometry.Proteins were extracted from the forth leaf of maize seedlings 24 h after fungal inoculation,and fractionated by polyethylene glycol to precipitate the most abundant leaf protein,Rubisco,before gel separation.Protein profiles from 2-DE showed that total numbers of protein spots were increased in all four inbred lines inoculated with C.lunata CX-3 strain compared with the control.The numbers of changed protein spots in abundance were higher in resistant inbred lines than in susceptible ones,which implied that resistant inbred lines were more sensitive than susceptible ones to pathogen infection.Among proteins identified by MALDI-TOF MS,germin-like protein GLP and translation initiation factor eIF-5A were supposed to play important roles in maize resistance against C.lunata infection.     

Proteomic comparison of four maize inbred lines with different levels of resistance to Curvularia lunata(Wakker)Boed infection

Protein profiles of leaves in four maize inbred lines with different disease resistance to pathogen Curvularia lunata(Wakker)Boed were studied by two-dimensional electrophoresis(2-DE)and mass spectrometry.Proteins were extracted from the forth leaf of maize seedlings 24 h after fungal inoculation,and fractionated by polyethylene glycol to precipitate the most abundant leaf protein,Rubisco,before gel separation.Protein profiles from 2-DE showed that total numbers of protein spots were increased in all four inbred lines inoculated with C.lunata CX-3 strain compared with the control.The numbers of changed protein spots in abundance were higher in resistant inbred lines than in susceptible ones,which implied that resistant inbred lines were more sensitive than susceptible ones to pathogen infection.Among proteins identified by MALDI-TOF MS,germin-like protein GLP and translation initiation factor eIF-5A were supposed to play important roles in maize resistance against C.lunata infection.     

适用于小麦叶片总蛋白分析的双向电泳技术

双向电泳技术越来越成为植物蛋白质组研究中的关键技术,样品制备、固相预制胶条水化、等电聚焦及SDS—PAGE都是影响双向电泳结果的重要步骤,本研究以晋麦47号小麦叶片为研究材料,在样品除盐、预制胶条水化方式、第二向SDS—PAGE电压选择方面进行了探索与优化,通过比较双向电泳图谱,建立适用于小麦叶片总蛋白质分析的双向电泳技术体系．结果表明：样品经多步除盐并加长除盐时间后进行双向电泳,蛋白能较好地被分离,2-DE图谱蛋白点较多,分辨率较高;IPG胶条先后经被动水化与主动水化比仅主动水化的2-DE图谱蛋白点损失少;第二向SDS—PAGE中电压选择120V较200V的2．DE图谱蛋白点拖尾少,纹理现象少．     

Two-dimensional gel electrophoresis analysis of the proteomes expressed in the human hepatoma cell line BEL-7404 and normal liver cell line L-02

Proteome analysis technology has been used extensively in conducting discovery research of biology and has become one of the most essential technologies in functional genomics. The proteomes of the human hepatoma cell line BEL-7404 and the normal human liver cell line L-02 have been separated by high resolution two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) with immobilized pH gradient isoelectric focusing (IPG-IEF) in the first dimension and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) in the second dimension (IPG-DALT). The resulting images have been analyzed using 2-D analysis software. Quantitative analysis reveals that 7 protein spots are detected only in hepatoma BEL-7404 cells, 14 only in L-02 cells, and 78 protein spots show significant fluctuation in quantity in both cell lines (P< 0.01). These protein spots have been displayed on a proteome differential expression map. Analysis for the reproducibility of 2-DE indicates that the positional variability in the IEF dimension is 0.73 mm, while the variability in the SDS-PAGE dimension is 0.44 mm, and the quantitative variability is 17.6%–19.2%. These results suggest that the reproducibility of 2-DE has been suitable for the study of differential expression of proteomes. Proteome differential expression maps can be useful tools for disease diagnosis, drug-target validation analysis and biological process elucidation.     

Proteomics of a toxic dinoflagellate Alexandrium catenella DH01: Detection and identification of cell surface proteins using fluorescent labeling

Alexandrium catenella DH01 is a toxic dinoflagellate species that is able to not only produce paralytic shellfish toxins,but also cause harmful algal blooms along the coast of China.In this study,we presented a new protocol for specific labeling and detection of the cell surface proteins(CSPs) of A.catenella DH01 cells using CyDye difference gel electrophoresis(DIGE) fluor minimal dyes.CSPs were identified using two-dimensional gel electrophoresis(2-DE) and MALDI TOF-TOF mass spectrometry(MS).The results showed that the fluorescent cyanine dye Cy3 could specifically label the CSPs of A.catenella DH01,with minimal labeling of intracellular proteins.Among three protein extraction methods evaluated,the Trizol method was the most efficient to extract CSPs with respect to protein spot number and resolution.Forty-one CSPs were separated and identified from A.catenella DH01 by 2-DE,in which 14 were identified in the protein database using MALDI TOF-TOF MS analysis.This work represents the first attempt to investigate the CSPs of A.catenella using the CyDye DIGE fluor dyeing method that provides a potentially important tool for future comprehensive characterization of CSPs and elucidation of the physiological functions of CSPs in dinoflagellates.     

日本囊对虾性腺蛋白质双向电泳的样品制备方法的改进

采用一种能同时提取RNA、DNA和Protein的试剂(RDP试剂)进行日本囊对虾性腺总蛋白质的制备,并通过双向电泳(2 - DE)技术与传统的裂解液法比较提取效果.RDP法所得2- DE图谱清晰,条纹少,蛋白质点数多,而裂解液法存在横向和纵向拖尾,其碱性端蛋白质点大量缺失,说明RDP法能有效去除蛋白质样品中盐离子、脂...