碱性成纤维细胞生长因子促体外培养人晶状体上皮细胞株增殖及细胞周期的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）与体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）株增殖之间的关系及其对细胞周期的影响.方法 对人晶状体上皮细胞株（SRA01/04）进行无血清培养液培养,取对数生长期细胞进行实验,分别加入不同终浓度的bFGF （0.01、0.10、1.00、10.00及100.00μg/ L） ）共同培养24、48、72 h后MTT法测定细胞增殖情况,以流式细胞仪分析bFGF对细胞增殖周期的影响.结果 bFGF浓度为0.1μg/L、1.00μg/ L、10.0μg/ L、100.00μg/ L时,对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;100.00μg/ L作用24h増殖率最大112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性; bFGF促进HLEC细胞周期发生变化,S期和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞减少,说明bFGF通过促进HLEC细胞越过G1期限止点进入增殖状态.结论 bFGF可促进HLEC的增殖,改变细胞周期,是HLECs强有力的促增殖因子.     

亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响

目的：探讨亚砷酸钠对人皮肤细胞增殖作用的影响。方法：使用原代培养的人真皮成纤维细胞和表皮细胞，采用直接细胞计数法和MTT法检测亚砷酸钠对两种细胞系生长的影响。结果：成纤维细胞较表皮细胞易于培养；MTT法检测，不同剂量的亚砷酸钠与对照组比较，吸光度值均有提高，有剂量－效应关系（P＜0.01)；0.5-8.0μmol/L的亚砷酸钠对成纤维细胞有明显增殖作用；低浓度（0.8μmol/L、1.6μmol/L)对表皮细胞有明显的增殖作用，浓度高于3.2μmol/L时，表皮细胞生长受抑制；10.00μmol/L亚砷酸钠对成纤维细胞有毒性作用。结论：无机砷诱导人皮肤细胞的增殖作用可能是引起慢性砷中毒皮肤损伤的重要原因，具体作用机制有待进一步研究。     

非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖活性的影响

目的研究观察人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和N端缺失27个氨基酸残基的非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfactor,nm-haFGF)对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞增殖活性的影响。方法用不同浓度(0.01～100ng/ml)的人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)及nm-haFGF分别刺激鼻咽癌细胞及血管内皮细胞,作用48h后采用MTT法测定haFGF和nm-haFGF对两种细胞的增殖活性。结果在各浓度(>0.01ng/ml)下,nm-haFGF组对鼻咽癌细胞(除浓度为50ng/ml外)和血管内皮细胞的促增殖作用都显著低于haFGF组。结论nm-haFGF对鼻咽癌细胞及血管内皮细胞的促分裂活性下降。     

琥珀酸对人纤维细胞胶原合成的影响

目的探讨琥珀酸对人成纤维细胞胶原合成的影响以及在细菌感染、创面愈合中的作用.方法体外培养人皮肤成纤维细胞,以不同浓度(5、10、20和30mmol/L,pH5.5)琥珀酸刺激,24h后检测琥珀酸对细胞胶原合成及前胶原蛋白mRNA表达的影响,并进行相关性分析.结果随着加入的琥珀酸浓度升高,细胞胶原合成下降,前胶原蛋白mRNA表达下降;当琥珀酸浓度为20和30 mmol/L时,细胞胶原合成Ⅰ型前胶原蛋白mRNA表达明显低于对照组(P＜0.05).结论琥珀酸能抑制成纤维细胞胶原合成,在创面感染时,细菌能通过代谢产生琥珀酸从而抑制创面愈合,使得感染持续存在.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔皮肤成纤维细胞增殖的作用

目的：评价碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔皮肤或成纤维细胞增殖的影响。方法：在培养的兔皮肤成纤维细胞中添加浓度为10^-1-10^2μg/L的bFGF，应用甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞增殖情况。结果与结论：10^-1－10^2μg／L的bFGF对兔皮肤成纤维细胞增殖有促进作用，且以50μg／L浓度作用最佳。     

RhaFGF联合rhEGF促进兔耳全层皮肤缺损创面愈合的实验研究

目的：观察重组人酸性成纤维细胞生长因子（recombint human acidic fibroblast growth factor,rhaFGF）联合重组人表皮细胞因子（recombined human epidermal growth factor,rhEGF）对创面愈合的影响。方法：建立兔耳全层皮肤缺损创面模型,随机分为A组（rhaFGF 60 U/cm2+rhEGF 20 U/cm2）、B组（rhaFGF 60 U/cm2）、C组（重组牛碱性成纤维细胞生长因子 60 U/cm2）和D组（等量生理盐水）,共4组。采用透明薄膜描记法记录建模后不同时间点各组创面愈合面积,计算创面愈合率,并记录创面愈合时间。在第3、7、14 天取创面组织,作HE染色,观察不同时相点创面愈合情况。结果：A组创面愈合时间为（13.33±0.12） d,与其他组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。A组创面愈合率与其他组比较,差异具有统计学意义。造模后第3、7天,HE染色示A和C组创面成纤维细胞、毛细血管生成较B、D组丰富。第14 天,A组创面基本愈合,成纤维细胞、毛细血管较其他组少。结论：rhaFGF联合rhEGF对兔耳创面愈合有促进作用,可促进创面肉芽组织生长、毛细血管与上皮形成。在创面愈合后期,毛细血管及成纤维细胞生成数目少,有可能减少瘢痕形成。     

富组蛋白1促进人成纤维细胞增殖和迁移

目的了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人成纤维细胞增殖和迁移功能的影响。方法将人成纤维细胞按常规方法传代培养,分为空白对照组(DMEM+1%小牛血清)、A组(100μg/ml Hst1)、B组(30μg/ml Hst1)、C组(3μg/mlHst1),细胞计数法观察不同浓度Hst1(3～100μg/ml)在不同时相点(24、48、72 h)对人成纤维细胞增殖功能的影响;将已融合的人成纤维细胞分为丝裂霉素C处理组及丝裂霉素C未处理组,各组中再次分为空白对照组(DMEM+1%小牛血清)、Ⅰ组(30μg/ml Hst1)、Ⅱ组(10 ng/ml rhEGF)、Ⅲ组(30μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF)、Ⅳ组(15μg/ml Hst1+5 ng/mlrhEGF)、Ⅴ组(15μg/ml Hst1+10 ng/ml rhEGF),通过体外细胞划痕实验考察Hst1对人成纤维细胞迁移功能的影响。结果①不同浓度的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,与浓度及时间无明显依赖关系,24 h时间点A、B组细胞数显著高于其余各组(P<0.01);②30μg/ml Hst1能促进细胞划痕创面愈合,8 h划痕愈合率约37.7%,与rhEGF联合应用时促划痕愈合率高于单独用药;利用丝裂霉素C排除细胞增殖作用后,30μg/ml Hst1较空白对照组无促进细胞迁移功能(P>0.05),划痕愈合率较丝裂霉素C未处理对应组下降,但无统计学意义,且与rhEGF联合应用时促划痕愈合率与单独用药无统计学差异(P>0.05)。结论 Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,但促迁移功能不明显。Hst1联合rhEGF使用时对人成纤维细胞划痕创伤愈合具有协同促进作用。     

Histatin1 improves proliferation and migration in human human skin fibroblasts

目的 了解富组蛋白1(histatin1,Hst1)对人成纤维细胞增殖和迁移功能的影响.方法 将人成纤维细胞按常规方法传代培养,分为空白对照组(DMEM+1％小牛血清)、A组(100 μg/ml Hst1)、B组(30 μg/ml Hst1)、C组(3μg/mlHst1),细胞计数法观察不同浓度Hst1(3～ 100μg/ml)在不同时相点(24、48、72 h)对人成纤维细胞增殖功能的影响;将已融合的人成纤维细胞分为丝裂霉素C处理组及丝裂霉索C未处理组,各组中再次分为空白对照组(DMEM +1％小牛血清)、Ⅰ组(30 μg/ml Hst1)、Ⅱ组(10 ng/ml rhEGF)、Ⅲ组(30 μg/ml Hst1+ 10 ng/ml rhEGF)、Ⅳ组(15 μg/ml Hst1 +5 ng/ml rhEGF)、Ⅴ组(15 μg/ml Hst1+ 10 ng/ml rhEGF),通过体外细胞划痕实验考察Hst1对人成纤维细胞迁移功能的影响.结果 ①不同浓度的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,与浓度及时间无明显依赖关系,24h时间点A、B组细胞数显著高于其余各组(P ＜0.01);②30μg/ml Hst1能促进细胞划痕创面愈合,8h划痕愈合率约37.7％,与rhEGF联合应用时促划痕愈合率高于单独用药;利用丝裂霉素C排除细胞增殖作用后,30 μg/ml Hst1较空白对照组无促进细胞迁移功能(P＞0.05),划痕愈合率较丝裂霉素C未处理对应组下降,但无统计学意义,且与rhEGF联合应用时促划痕愈合率与单独用药无统计学差异(P＞0.05).结论 Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,但促迁移功能不明显.Hst1联合rhEGF使用时对人成纤维细胞划痕创伤愈合具有协同促进作用.     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

表皮生长因子对角膜成纤维细胞生长的影响

目的　研究表皮生长因子 (EpidermalGrowthFactor,EGF)对角膜成纤维细胞生长的影响。方法　通过含不同浓度EGF的培养基培养角膜成纤维细胞 ,分别于 2 4、48和 72h用 0 .5 %台盼蓝法对每组进行细胞活力的测定。结果　 0 .1、1.0mg/L的EGF在细胞培养 48、72h后对细胞生长有一定的促进作用 (P <0 .0 5 ) ,但在 2 4h时对细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。浓度为 0 .0 1mg/L的EGF对角膜成纤维细胞生长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的EGF对角膜成纤维细胞的生长具有促进作用     

人乳头瘤病毒在人大肠癌中检出

用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)法对28例大肠癌(均为分化程度不同的腺癌)及18例相应癌旁组织中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16和18型DNA分别进行检测。在28例大肠癌组织中分别检测到3例(10.8％)呈HPV16DNA阳性和18例(64.5％)呈HPV18DNA阳性。而相应的18例癌旁组织中仅检测到3例(16.7％)呈HPV18DNA阳性,未检测到HPV16DNA。为了证实扩增产物的特异性,我们用限制性内切酶对PCR产物分别进行了酶切分析,结果与预期的完全相符。本文提示HPV感染可能是大肠癌的发病因素之一。     

赖氨酰氧化酶样基因3在人皮肤成纤维细胞株中的表达

目的研究体外培养的人皮肤成纤维细胞株中赖氨酰氧化酶样基因3（lysyloxidase-likegene3,LOXL3）的表达模式。方法提取不同生长阶段的人皮肤成纤维细胞株的不同组分,用NorthernBlot和WesternBlot分别从mRNA和蛋白水平分析LOXL3表达,并以免疫荧光方法观察LOXL3的分布部位。结果 LOXL3mR-NA和蛋白含量在细胞汇合前低于细胞汇合期,汇合后最高,且LOXL3分布在整个细胞浆和细胞核。结论 LOXL3的表达量在细胞生长的不同阶段有所不同,可能与其功能有关。