γ射线对啮齿动物细胞DNA聚合酶β活力的影响

采用＾３Ｈ－ＴＴＰ掺入法和ＤＮＡ聚合酶α、γ选择性抑制剂－乙基马来酰亚胺，研究了不同剂量、不同剂量率γ射线照对重组大鼠ＤＮＡ聚合酶β、ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠肝细胞和ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ肝细胞核内ＤＮＡ聚合酶β活力的影响。     

浓缩铀(UO2F2)诱发免疫活性细胞DNA合成刺激作用的研究

作者研究了不同水平浓缩铀内污染机体后，对中枢和外周免疫活性细胞ＤＮＡ合成的刺激作用与免疫毒理效应。结果发现，当浓缩铀摄入量为１０－５００μｇ／ｋｇ体重时，脾Ｔ，Ｂ淋巴细胞和胸腺淋巴细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入显著降低，其ＤＮＡ合成呈现明显抑制效应。然而，当浓缩铀摄入量为０１μｇ／ｋｇ体重时，脾ＰＨＡ反应性Ｔ淋巴细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量显著高于对照组，其ＤＮＡ合成呈现明显的刺激作用。诱发细胞增殖刺激作用的     

浓缩铀(UO_2F_2)诱发免疫活性细胞DNA合成刺激作用的研究

作者研究了不同水平浓缩铀（ＵＯ２Ｆ２）内污染机体后。对中枢和外周免疫活性细胞ＤＮＡ合成的刺激作用与免疫毒理效应．结果发现，当浓缩铀摄入量为１０～５００μｇ／ｋｇ体重时，脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞和胸腺淋巴细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入显著降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），其ＤＮＡ合成呈现明显抑制效应．然而，当浓缩铀摄入量为０．１μｇ／ｋｇ体重时，脾ＰＨＡ反应性Ｔ淋巴细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），其ＤＮＡ合成呈现明显的刺激作用．诱发细胞增殖刺激作用的浓缩铀剂量与不同免疫活性细胞的辐射敏感性有关．应用数学方法拟合出不同免疫活性细胞的剂量效应曲线方程，呈直线平方模型．浓缩铀内污染１４天后，各免疫活性细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率未见恢复正常．     

应用原位聚合酶链反应对肝细胞癌组织中HBVDNA进行再评价

为探讨ＨＢＶ感染与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生之间关系，作者应用原位聚合酶链反应（ＰＣＲＩＳ）对２６例肝癌、２３例癌旁肝组织的石蜡切片进行了ＨＢＶＤＮＡ的检测，检出率分别为８４．６％和９１．３％，明显高于原位核酸杂交（ＩＳＨ）的５３．８％（１４／２６）和５６．５％（１３／２３）；亦高于从患者血清和ＨＣＣ组织提取ＤＮＡ后行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的５７．７％（１５／２６）和５５．６％（５／９）。用ＰＣＲＩＳ方法，ＨＣＣ组织细胞中ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒强度、ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞数和组织切片的清晰度均高于ＩＳＨ。ＰＣＲＩＳ既显示了ＰＣＲ技术的高敏性和特异性，又能在细胞内定位。本结果显示我国ＨＣＣ的发生与ＨＢＶ感染密切相关。     

PDGF-B基因表达及其对成纤维细胞增生和胶原合成的促进作用

目的建立稳定表达人血小板衍生生长因子－ＢＢ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ＢＢ，ＰＤＧＦ－ＢＢ）的细胞株，并考察该重组蛋白与损伤修复有关的生物学作用。方法将含ＰＤＧＦ－Ｂ基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３转染小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３中，在Ｇ４１８选择压力下得到抗性克隆，收集扩增的抗性克隆培养液并制备细胞膜上ＰＤＧＦ－ＢＢ蛋白质，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法表达产物的生物学活性，并以３Ｈ－Ｐｒｏ掺入测胶原合成率。结果免疫荧光染色法证实抗性细胞中ＰＤＧＦ－ＢＢ的表达，膜上ＰＤＧＦ－ＢＢ显著促进ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，活性可达约３１．２Ｕ／１０６细胞，而培养液的致丝裂活性低于可检测水平。抗性细胞的胶原合成率显著增高。结论ＰＤＧＦ－ＢＢ的真核表达系统已得以成功构建，该重组蛋白可促进成纤维细胞增生和胶原合成，提示其在损伤修复中有潜在应用价值     

HBsAg阴性应招飞行学员血清HBV-DNA检测研究

目的为控制ＨＢＶ慢性携带者进入航校提供对策，对应招飞行学员中ＨＢｓＡｇ阴性者的ＨＢＶ感染情况及对ＨＢＶ的免疫状态作一探讨。方法用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果ＨＢｓＡｇ阴性应招飞行学员中抗－ＨＢｓ阳性２０６／９６２例（２７．６％），抗ＨＢｃ阳性２２９／９６２例（２２．８％），ＨＢｅＡｇ阳性０／４５０例，抗ＨＢｅ阳性３／４５０例（０．６７％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１５／２２８例（６．６％）。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性主要集中在单一抗ＨＢｃ阳性者中１４／７５例（１８．７％）。获得ＨＢＶ免疫者为３４．０％。结论在应招飞行学员中对单一抗ＨＢｃ阳性者应做ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，未获ＨＢＶ免疫者应接种乙肝疫苗     

芹灵冲剂对雏鸭体内DHBV-DNA的抑制作用

目的：观察芹灵冲剂（ＱＬ） 在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ） － ＤＮＡ 的抑制效果。方法：用ＤＨＢＶ感染雏鸭进行药物治疗试验，芹灵冲剂设３ 个剂量组，疗程１０ｄ，分离血清，样品点膜，标记ＤＨＢＶ－ ＤＮＡ探针，（ 血清） 斑点杂交，放射自显影膜片斑点检测。以杂交斑点光密度值（ＯＤ 值） 进行自身和组间比较，并作鸭肝病理检查评价。结果：芹灵冲剂高剂量组（５、１０ｇ·ｋｇ－１）能降低ＤＨＢＶ感染鸭血清ＤＨＢＶ－ ＤＮＡ 水平，给药ｄ５ 和ｄ１０ 的抑制率与病毒对照组比较，均有极显著性差异（ Ｐ ＜０ ．００１） ，并呈量效关系。低剂量组（２．５ｇ·ｋｇ－１）也有一定的疗效。肝病理镜检结果证实，空白对照组鸭肝细胞的变性坏死较重，而芹灵冲剂治疗组（ 大、中剂量） 则较轻。结论：芹灵冲剂不仅对ＤＨＢＶ有明显的抑制作用，而且有保护鸭肝细胞的作用。     

5-羟色胺及其受体在人肝癌细胞系HCC-9204上的免疫组织化学定位

目的：探讨５－羟色胺及其受体与人肝细胞性肝癌之间的关系。方法：应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对培养的人肝癌细胞系ＨＣＣ－９２０４细胞爬片进行染色。结果：５－羟色胺及其受体在肝癌细胞上皆有表达,其分布范围大体一致。结论：５－羟色胺可能参与人肝细胞性肝癌的增殖,ＨＣＣ０－９２０４细胞系可以作为研究５－羟色胺与肝癌关系的一种有用材料。     

人肝细胞癌中整合素α5,β1亚基和纤维连接蛋白mRNA表达的生？…

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交对１５份人肝细胞癌（ＨＣＣ）、５例癌旁肝硬变和３例正常肝组织标本中整合α５、β１亚基和纤维连接蛋白（ＦＮ）ｍＲＮＡ表达作杂交分析。结果：低分化ＨＣＣ癌组织中整合素α５、β１亚基和ＦＮ ｍＲＮＡ表达水平明显低于高分化ＨＣＣ及癌旁和正常肝组织（Ｐ〈０．０１）；ＨＣＣ伴肝内浸润和（或）转移组癌组织内３种ｍＲＮＡ水平较无浸润转移组低，差异有显著性意义（Ｐ〈０．０５）；５例伴肝内转     

估算含氚细胞核吸收剂量不同模式的相互比较

作者以~３Ｈ－ＴｄＲ掺入体外培养人淋巴细胞的实验资料，用不同模式估算了细胞核的平均吸收剂量。结果表明，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｒｏｓｓｉ和Ｇｏｏｄｈｅａｒｔ法的结果基本一致。Ａｐｅｌｇｏｔ法的结果偏高，且对细胞核半径不敏感，经适当调整后偏差降低，对半径的敏感性提高。质量平均法的结果也较其他方法高。但对半径为３μｍ的细胞核，经边缘效应校正后，其结果与其他方法相近。０．２７ｃＧｙ／ｄｉｓ只对半径为４μｍ的细胞或细胞核有效，不宜盲目应用。     

HBV—DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡ Ｃ基因区的一对外引物（ＨＢＣ１和ＨＢＣ２，护增片段长度为５６６ ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ３和ＨＢＣ４，护增片段长度为３０１ ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、特异，与分子杂交的灵敏度相当。     

聚合酶链反应检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术是本世纪分子生物学重大进展之一，在体外可将特异ＤＮＡ序列呈百万倍扩增，具有高灵敏度和高特异性。随着该技术的不断改进和完善，其在ＨＢＶ感染研究中的应用也越来越多，大大丰富和更新了人们对ＨＢＶ感染的认识［１］。本文应用ＰＣＲ技术检测不同ＨＢＶ感染患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，旨在探讨急、慢性乙型肝炎及与ＨＢＶ感染相关的肝硬变和肝癌患者血清ＨＢＶＤＮＡ的存在情况及其与乙型肝炎病毒血清标志物（ＨＢＶＭ）在反映体内病毒复制方面存在的差异，…     

HBV－DNA套式一次PCR方法的建立

应用乙型肝炎病毒ＤＮＡＣ基因区的一对外引物（ＨＢＣ＿１和ＨＢＣ＿２，扩增片段长度为５６６ｂｐ）及一对内引物（ＨＢＣ＿３和ＨＢＣ＿４，扩增片段长度为３０１ｂｐ）对不同稀释度的ＨＢＶ－ＤＮＡ（ａｄｒ亚型）进行套式一次ＰＣＲ扩增，结果表明灵敏度可达到１０ａｇ水平。此方法快速、简便、灵敏、材异，与分子杂交的灵敏度相当。     

PDGF-AB对成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ ＡＢ促进伤口愈合及其在瘢痕增生中的作用机理。方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ｎｏｒｍａｌｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＮｓＦｂ,ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＨＴｓＦｂ） ,用ＭＴＴ和３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法观察ＰＤＧＦ－ ＡＢ对两种细胞增殖及ＤＮＡ合成的影响。结果：ＰＤＧＦ－ ＡＢ对两种成纤维细胞增殖及ＤＮＡ合成均有明显刺激作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异。结论：ＰＤＧＦ－ ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖及ＤＮＡ合成促进伤口愈合,但同时在瘢痕增生性疾病中可能起重要促进作用。     

微量混合淋巴细胞培养影响因素的比较

微量混合淋巴细胞培养影响因素的比较陈兴国，孙成文，孔繁华（军事医学科学院附属医院）微量混合淋巴细胞反应分为单相反应和双相反应，主要表现为细胞内蛋白质、糖、ＲＮＡ和ＤＮＡ合成增加。可用氖标记胸腺嘧啶核苷（３￣Ｈ－ＴｄＲ）掺入量的多少快速准确予以反映。可...     

γ－32P标记反义核苷酸对HBV基因表达的封闭效应

人工构建特异性互补于ＨＢＶ基因ｍＲＮＡＳＰⅡ增强子区的１５－聚反义硫代脱氧核苷酸（１５Ｓ－ａｓＯＮ）并用ｌ－３２Ｐ进行末端标记，以２μＬｍｏ１／Ｌ剂量作用于ＨＢＶ基因转染的ＨｅｐＧ２细胞（２．２．１５细胞），培养２４ｈ及４８ｈ后检测掺入２．２．１５细胞的１５－Ｓ－ａｓＯＮ分别为６９．４ｎｍｏ１／Ｌ和７５．８ｎｍｏ１／Ｌ；对ＨＢ３ｓＡｇ的抑制率分别为５０％和７０％；斑点杂交检测ＨＢＶＤＮＡ，结果表明实验组与对照组无显著性差异，提示本实验所选用的反义核苷酸对ＨＢＶ基因的封闭环节可能发生在翻译水平。实验组与对照组的细胞形态及细胞计数结果表明：我们设计的反义核酸只特异性抑制ＨＢＶ基因表达，而对宿主细胞无明显毒害作用。     

丙型、乙型肝炎病毒在人原发性肝内胆管细胞癌中分布的免疫组化研究

应用原位分子杂交及免疫组化方法，使用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区探针及抗ＨＣＶＮＳ３区Ｃ３３ｃ单克隆抗体检测３５例人原发性肝内胆管细胞癌，癌旁肝组织内ＨＣＶＲＮＡ及其ＮＳ３抗原，发现ＨＣＶＲＮＡ在肝内胆管细胞癌中的阳性率为８３％。ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞胞浆中，个别病例在淋巴细胞、肝窦内皮细胞和枯否细胞中发现阳性信号。ＨＣＶＮＳ３区Ｃ３３ｃ抗原在肝内胆管细胞癌中的阳性率为８９％，阳性反应主要位于癌细胞胞浆内或肝细胞胞浆内，阳性细胞在癌组织中以灶性分布为主，在癌旁肝组织以弥漫分布为主。ＨＢ－ｘＡｇ在本组病例的阳性率为７７％。本文结果提示，在肝内胆管细胞癌的发生中，除ＨＢＶ以外，ＨＣＶ感染与其发生也有密切关系，是其致病因素之一。     

大鼠肠缺血-再灌注早期多个器官内细胞凋亡的研究

目的探讨细胞凋亡在多器官功能障碍综合征发病中的作用。方法夹闭和放松大鼠肠系膜上动脉复制肠缺血－再灌注模型；显微镜检测分别用ＨＥ、吖啶橙－溴化乙锭、Ｇｏｍｏｒｉ银－ＨＥ染色的肠、肝、肾组织的连续切片，观察３个器官组织内细胞凋亡的分布及变化；分离缺血－再灌注不同时间组的肝细胞、流式细胞仪检测肝细胞凋亡百分率。结果（１）大鼠肠缺血－再灌注早期（术后３小时内），肝、肠、肾内凋亡的实质细胞都呈多部位局灶性分布的特点。（２）肝细胞凋亡百分率随缺血－再灌注时间延长而升高（Ｐ＜０．００１），且显著高于假手术组（Ｐ＜０．００１）。结论肠缺血－再灌注早期多个器官组织内细胞凋亡相当广泛，在多器官功能障碍发病中可能具有重要意义     

人肝细胞癌中整合素α5、β1亚基和纤维连接蛋白mRNA表达的生物学意义

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交对１５份人肝细胞癌（ＨＣＣ）、５例癌旁肝硬变和３例正常肝组织标本中整合素α５、β１亚基和纤维连接蛋白（ＦＮ）ｍＲＮＡ表达作杂交分析。结果：低分化ＨＣＣ癌组织中整合素α５、β１亚基和ＦＮｍＲＮＡ表达水平明显低于高分化ＨＣＣ及癌旁和正常肝组织（Ｐ＜０．０１）；ＨＣＣ伴肝内浸润和（或）转移组癌组织内３种ｍＲＮＡ水平较无浸润转移组低，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；５例伴肝内转移的ＨＣＣ癌组织ＦＮｍＲＮＡ呈异质性表达（５．０ｋｂ位置）。提示：ＦＮ及其受体整合素α５、β１基因转录水平的改变与ＨＣＣ细胞分化、浸润和转移密切相关；异质性ＦＮｍＲＮＡ及其编码的ＦＮ蛋白可能在ＨＣＣ转移中有意义。     

巢式聚合酶链反应检测幽门螺杆菌方法的建立及临床初步应用

在ＨＰ高度保守的尿素酶Ａ基因内合成两对引物，建立了巢式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）检测ＨＰＤＮＡ的方法，实验证明有很高的特异性和敏感性，与其它４株肠道菌无交叉反应，最小检出量为１ｆｇＨＰＤＮＡ。对Ｎ－ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如Ｍｇ￣２＋浓度、引物浓度、复性温度等进行优化选择，并对酚／氯仿提取法和裂解粗提法两种标本处理方法进行了比较。用建立的Ｎ－ＰＣＲ检测３０例有上消化道症状患者的唾液及８例胃组织标本中ＨＰＤＮＡ，结果阳性率分别为５６．６７％和６２．５０％，５例胃组织标本阳性患者中４例唾液标本亦阳性。实验表明Ｎ－ＰＣＲ是一种敏感特异的检测方法，可用于唾液等标本中ＨＰ的检测。