耐药性癫癎患者脑组织线粒体mMDH NDUFC2基因表达异常

目的研究耐药性癫癎患者脑细胞线粒体mMDH、NDUFC2表达,探讨其在耐药性癫癎形成中的作用.方法分别提取48例耐药性癫癎患者、8例非耐药性癫癎患者及8例对照组脑组织标本的总RNA后,用基因芯片对其进行扫描,随后用荧光定量PCR技术进行验证.结果发现与线粒体功能有关的基因mMDH、NDUFC2在耐药性癫癎中显著下调,荧光定量RT-PCR验证结果与基因芯片一致.结论脑细胞线粒体基因mMDH、NDUFC2表达异常可能通过能量代谢及神经元坏死参与了耐药性癫癎的形成.     

耐药性癫(癎)患者伴有(癎)样放电的脑组织中SCN8A基因产物的异常表达

目的观察电压门控钠通道SCN8A(sodium channel voltage-gated type VIII alpha,SCN8A)基因在耐药性癫患者脑组织中的表达,探讨其与耐药性癫的关系。方法在基因芯片研究的基础上,采用免疫组织化学、免疫荧光组织化学技术,分析比较40例耐药性癫患者手术切除脑组织标本中SCN8A基因编码的产物钠通道蛋白Nav1.6的表达水平,并与20名对照组进行比较。结果发现SCN8A在耐药性癫患者脑组织中表达上调,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论SCN8A基因在耐药性癫脑组织中表达上调,可能与耐药性癫中样放电的产生和(或)传播有关。     

耐药性癫(癎)患者颞叶中细胞周期依赖性蛋白激酶5的表达

目的 研究细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinases 5,CDK5)在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,探索其在耐药性癫(癎)发病机制中的作用.方法 收集耐药性癫(癎)患者术后脑组织,用荧光定量PCR、免疫组化和Western blot 3种检测方法从基因和蛋白水平分别测定CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中的表达,并与对照组进行比较.结果 荧光定量PCR发现CDK5 mRAN比对照组明显增加,免疫组化检测显示这种基因的蛋白表达产物主要分布在神经元轴突和胶质细胞中,Western blot检测在相对分子质量35 000处有一蛋白条带,并且可见实验组(颞叶和海马中分别为1.4293±0.1839和2.0733±0.4738)高于对照组(颞叶和海马中分别为0.9680±0.4147和1.403±0.6163,P＜0.05).结论 CDK5在耐药性癫(癎)患者颞叶中表达增强,提示他们可能参与了耐药性癫(癎)的形成.     

基因芯片检测难治性癫脑组织中sh3gl2的表达

目的：运用基因芯片和RT-PCR技术检测难治性癫脑组织中sh3gl2 mRNA表达,从分子水平探讨难治性癫可能的发病机制。方法：在应用基因芯片对难治性癫患者手术切除的颞叶组织与对照组行基因表达谱分析研究的基础上,筛选出目的基因后用RT-PCR对芯片扫描结果进行验证。结果：候选基因sh3gl2在难治性癫患者脑部颞叶组织中出现高表达,与对照组相比差异有显著统计学意义（P〈0.01）;RT-PCR结果与芯片结果一致。结论：sh3gl2在难治性癫颞叶皮质中的表达增加,提示了其可能是难治性癫发生发展中的一个重要因素。     

耐药性癫癎患者的载脂蛋白E（ApoE）基因多态性分析

目的 研究耐药性癫痫患者的载脂蛋白E基因多态性，并探究影响耐药性癫癎形成机制的遗传因素。方法 取耐药性癫癎患者肘静脉血，用PCR-RFLP技术检测ApoE基因多态性，并与非耐药性癫癎和正常对照组进行比较分析。结果 耐药性癫癎组中ε4等位基因的频率为（16．9），明显高于非耐药性癫癎组（8．2）和正常对照组，其差异有统计学意义（P〈0．05），而ε2，ε3等位基因的频率三组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；病例组与正常对照组ApoE基因多态性有显著性差异（P〈0．01）。结论 ApoEε4等位基因可增加耐药性癫癎发生的危险性。     

难治性颞叶癫(癎)的相关基因表达谱

目的 筛选难治性颞叶癫(癎)相关基因表达谱,并通过对表达谱筛选所发现的差异基因进行验证,从分子水平探讨颞叶癫(癎)可能的发病机制.方法 在利用基因芯片对难治性颞叶癫(癎)患者手术切除颞叶组织与对照间行基因表达谱分析研究的基础上,扩大样本量,应用RT.PCR方法,验证SH3GL2、BTN2A2、KCNJ4基因的mRNA在颞叶癫(癎)患者脑内的表达差异.结果 芯片研究结果显示,颞叶癫(癎)脑组织标本与对照组相比,表达趋势一致的已知基因包括:免疫相关因子、离子通道相关因子、信号转导相关基因、细胞增殖周期因子、细胞凋亡相关基因等;经RT.PCR证实,颞叶癫(癎)组突触重建调控因子SH3GL2的mRNA表达水平(1.022±0.547)明显高于对照组(0.446±0.171,t=-3.181),免疫调控基因BTN2A2的mRNA表达在颞叶癫(癎)组(0.481±0.196)同样高于对照组(0.243±0.111,t=3.351),而编码内向整流钾通道亚单位基因KCNJ4 mRNA的表达水平在颞叶癫疴组(0.438±0.178)则明显低于对照组(0.795±0.112),差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在颞叶癫(癎)发生发展各个阶段均有基因的参与,是一个复杂的调控过程;芯片试验结果对进一步探讨疾病可能的发病机制以及为探求疾病治疗的新靶点提供了依据.     

MCP-1在难治性癫痫患者脑组织中的表达

目的了解难治性癫癎患者脑组织中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)的表达,探索其在难治性癫癎发病机制中的作用。方法在基因芯片扫描获阳性结果基础上,用免疫组织化学方法研究40例难治性癫癎患者脑组织中MCP-1的表达,并与对照组进行比较。结果基因芯片扫描显示MCP-1 mRNA表达上调,免疫组化结果进一步证实MCP-1在难治性癫癎患者脑组织中的表达较对照组明显增多(P<0．05)。结论MCP-1在难治性癫癎的发病机制中可能起着重要作用,阻断MCP-1有可能改变难治性癫癎的预后。     

难治性癫痫患者脑组织中Eml 5mRNA表达及其意义

目的 运用基因芯片和荧光定量PCR技术检测难治性癫痫患者脑组织中Eml5（EMAP like protein5，Eml5）mRNA表达，探讨其表达异常在难治性癫痫患者中的意义。方法 收集36例难治性癫痫患者和8例非难治性癫痫患者术后脑组织，用含有14109条人类基因的芯片对其扫描，筛选出目的基因后，用荧光定量PCR对芯片扫描结果进行验证，并与8例正常脑组织进行比较。结果 发现候选基因End5mRNA在难治性癫痫患者脑部海马和颞叶中出现高表达，荧光定量PCR结果与芯片结果一致。结论 End5mRNA表达上调可能是难治性癫痫发生发展中的一个重要因素，其可能通过加强神经微管组装，促进神经元轴突延伸，触发海马齿状回颗粒细胞苔藓纤维异常发芽，参与了病理性神经网络重组和兴奋性突触重构。     

MCP-1在难治性癫(癎)患者脑组织中的表达

目的 了解难治性癫(癎)患者脑组织中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达,探索其在难治性癫(癎)发病机制中的作用.方法在基因芯片扫描获阳性结果基础上,用免疫组织化学方法 研究40例难治性癫(癎)患者脑组织中MCP-1的表达,并与对照组进行比较.结果 基因芯片扫描显示MCP-1 mRNA表达上调,免疫组化结果进一步证实MCP-1在难治性癫(癎)患者脑组织中的表达较对照组明显增多(P＜0.05).结论 MCP-1在难治性癫(癎)的发病机制中可能起着重要作用,阻断MCP-1有可能改变难治性癫(癎)的预后.     

耐药性癫癎患者术后脑组织中Tau蛋白的表达

目的研究Tau蛋白在耐药性癫癎患者脑组织中的表达,探讨其在耐药性癫癎发病机制中的作用。方法采用免疫组化法检测48例耐药性癫癎患者海马及颞叶皮层中Tau蛋白的表达,同步观察海马苔藓纤维芽生,并与对照组进行比较。结果耐药性癫癎组和对照组脑组织中总Tau蛋白表达无明显差异,而磷酸化Tau蛋白在耐药性癫癎患者海马CA3区(0·0450±0·0115)及齿状回内分子层(0·0463±0·0120)表达增多,同步伴有海马苔藓纤维芽生(耐药性癫癎组:3·18±0·35,对照组:0·61±0·19)。结论磷酸化Tau蛋白表达增强可能是耐药性癫癎患者海马突触重建的重要机制,改变磷酸化Tau蛋白的表达有可能改善耐药性癫癎患者的预后。