深圳地区婚检人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变检测分析

目的了解深圳地区育龄人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症发生率及常见基因突变类型,为优生优育遗传性疾病筛查、诊断及预防提供实验依据。方法应用定量G6PD酶活性检测方法对深圳婚检人群进行筛查,采用PCR导流杂交法对酶活性筛查阳性人群及随机选择的酶活性筛查阴性女性进行基因突变检测。统计分析G6PD缺乏症发生率及各种基因突变频率,比较两种检测方法在女性中的检测效果。结果共筛查24 190例婚检人群,571例酶活性检测阳性,G6PD缺乏症总体检出率为2.36%,其中男347例,有332例(95.68%)检出基因突变,女224例,有215例(95.98%)检出基因突变。酶活性筛查阳性人群共检出11种基因突变类型,55种基因型。最常见3种基因突变类型为c.1388GA、c.1376GT和c.95AG,合计占比约70.40%,其次为c.392GT(5.95%),c.871GA(5.95%)和c.1024CT(4.73%);c.1311CT多态性位点突变比例为11.38%。随机选择的428例酶活性正常女性,96例(22.43%)检出基因突变,其中78例为c.1311CT多态性位点突变,18例为致病性位点突变,致病性突变基因检出率为4.20%。与基因突变检测相比,酶活性检测对女性人群漏检率达68.63%。结论深圳地区育龄人群常见G6PD基因突变类型为c.1388GA、c.1376GT、c.95AG。表型检测和分子检测相结合的筛查、确诊方式有助于女性婚检人群G6PD缺乏症婚前遗传咨询。     

东莞地区 G6PD 缺乏症的分子流行病学研究

目的：了解东莞地区人群 G6PD 缺乏的流行特征,为本地区提供 G6PD 缺乏症基因突变、基因型及表型资料,完善本地区基因突变谱,并为制订本地区 G6PD 缺乏症的预防计划提供有价值的参考。方法收集2010年1月至2012年12月在我院进行体检的男性外周血样本,采用 G6PD/6PGD 比值法进行筛查,记录其 G6PD/6PGD 比值法检测结果,G6PD/6PGD＜l．5确诊为 G6PD 缺乏,阳性样本采用 PCR-RDB 进行基因诊断,同时随机抽取50例阴性样本作为对照组进行基因诊断。计算疾病检出率、基因突变、基因型频率和基因构成比。结果3885例样本中共检出302例表型阳性的 G6PD 缺乏症患者,检出10种基因突变和1种多态性位点,鉴定出12种基因型,另有3例样品未发现 PCR-RDB 检测的17种突变类型。50例阴性样本进行基因诊断均为阴性。东莞市男性人群 G6PD 缺乏表型阳性的群体检出率是7．77％,17种常见突变基因携带率是7．70％,各种突变类型的构成比依次为 G1376T（32．8％）、G1388A（34．1％）、A95G（12．4％）、G871A （3．7％）、G392T（3．7％）、C1024T（3．3％）。结论本研究阐述了东莞地区G6PD 缺乏的人群发生率和详细的基因突变谱和突变频率,研究资料为在该地区制订有效可行的 G6PD 缺乏预防计划提供有价值的参考。     

G6PD缺乏症基因型检测新方法的建立及分子流行特征分析

目的建立葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因型检测的新方法及深入了解梅县地区大学生G6PD缺乏症的流行特征。方法经G6PD酶活性定量测定法确诊为G6PD缺乏症患者,用高分辨率熔解曲线法检测基因突变类型,对所有样本进行DNA测序验证。结果G6PD缺乏症的发病率为7．5％。共发现17种不同的基因型,其中最常见的2种基因型是G6PD Canton（1376G〉T）和G6PDKaiping（1388G〉A）,占70％以上;接下来的是G6PDGaohe（95A〉G）、G6PD Union（1360C〉T）、G6PD Chinese．4（392G〉T）、G6PD Chinese-5（1024C〉T）。此外,5．33％（4／75）的G6PD缺乏症患者没有发现任何突变。结论高分率熔解曲线（high—resolution melting,HRM）是一种陕速、廉价、有效的G6PD基因型筛查方法。     

东莞地区469例 G6PD 缺乏症基因突变类型分析

目的：了解东莞地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的基因突变类型,为 G6PD 缺乏症的临床诊断及预防提供依据。方法收集进行 G6PD 酶活性筛查的患者资料,记录其 G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）比值结果,随机抽取469例表型阳性样本,通过反向斑点杂交（RDB）技术检测其基因突变类型。结果采用 G6PD/6PGD 比值法共检测16464例标本,检出阳性标本672例（G6PD/6PGD＜1．0）,检出率为4．08％。随机抽取样本中,检出基因突变460例,检出率为98．1％,其中G1376T 突变173例、G1388A 突变141例、A95G 突变82例、G871A 突变60例、G392T 突变23例、C1024T 突变14例;还检出中国地区 G6PD 少见突变基因型 C1004T 突变6例、T517C 突变2例、C1360T 突变1例;同时检出 C1311T 多态性65例和双重杂合突变96例。结论东莞地区 G6PD 缺乏症发生率较高,G6PD 基因突变类型具有中国人群普遍代表性,又有该地区的异质性。     

泸州儿童G6PD缺乏症的基因突变类型及临床特点分析

目的:研究泸州地区儿童G6PD缺乏症基因突变类型及其临床特点。方法:选取2017年3月至2019年7月泸州市各县区怀疑为G6PD缺乏症行G6PD酶活性+基因突变检查患儿共732例,采用紫外速率定量法进行G6PD酶活性检测,采用多色探针荧光PCR溶解曲线法检测基因突变,分析不同基因类型在发生急性溶血时的临床特点。结果:732例标本中检测出阳性标本共387例,有基因突变且有酶活性下降326例,有基因突变但无酶活性下降共49例,无基因突变但有酶活性降低共12例。有基因突变的375例阳性样本中,c.1376GT、c.1388GA、c.1024CT及c.95AG最常见。c.1376GT、c.1388GA分别与c.1024CT酶活性比较差异有统计学意义(P0.05)。蚕豆是发生急性溶血最常见诱因,c.95AG分别与c.1388GA、c.1376GT网织红细胞率比较差异有统计学意义(P0.05),c.1376GT与c.95AG血红蛋白比较差异有统计学意义(P0.05)。c.1376GT、c.1388GA比c.1024CT酶活性低。发生急性溶血时,不同基因突变类型在网织红细胞率及血红蛋白变化有差异,而在年龄、住院时间、输血量、总胆红素、尿色恢复时间等方面无差异。结论:泸州地区G6PD缺乏症患儿的常见基因突变类型为c.1376GT、c.1388GA、c.1024CT。G6PD缺乏症最常见的临床表现形式是蚕豆病。     

东莞地区469例G6PD缺乏症基因突变类型分析

目的 了解东莞地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的基因突变类型,为G6PD缺乏症的临床诊断及预防提供依据。方法 收集进行G6PD酶活性筛查的患者资料,记录其G6PD/6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)比值结果,随机抽取469例表型阳性样本,通过反向斑点杂交(RDB)技术检测其基因突变类型。结果 采用G6PD/6PGD比值法共检测16 464例标本,检出阳性标本672例(G6PD/6PGD<1.0),检出率为4.08%。随机抽取样本中,检出基因突变460例,检出率为98.1%,其中G1376T突变173例、G1388A突变141例、A95G突变82例、G871A突变60例、G392T突变23例、C1024T突变14例;还检出中国地区G6PD少见突变基因型C1004T突变6例、T517C突变2例、C1360T突变1例;同时检出C1311T多态性65例和双重杂合突变96例。结论 东莞地区G6PD缺乏症发生率较高,G6PD基因突变类型具有中国人群普遍代表性,又有该地区的异质性。     

龙岗区孕前人群G6PD缺乏症的分子流行病学研究

目的通过研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因在龙岗区孕前人群中的主要突变类型、分布特点及表型,为该病在本地区的诊断及预防提供实验依据。方法收集龙岗区孕前优生健康检查10075例血标本,利用G6PD/6PGD比值法进行葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性常规检测。对437例G6PD/6PGD比值法阳性及535例阴性样本,采用PCR+导流杂交法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变类型。结果采用G6PD/6PGD比值法筛查,酶活性异常检出率为4.34%。酶学筛查阳性样本基因突变检出率为97.25%,酶学阴性样本基因突变检出率为44.67%。基因检测共检出21种突变类型,包含多种复合突变,常见突变型为1376GT、1388GA、1311CT及95AG。结论分子水平的检测可以显著提高女性杂合子G6PD缺陷症的检出率。     

武汉地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者基因突变分析

目的:探讨武汉地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症患者的基因突变特征。方法:对湖北省妇幼保健院1 321例筛查阳性的新生儿及门诊患者进行G6PD基因检测,首选多色探针熔解曲线法(MMCA)检测中国人群常见的12种G6PD基因突变,对于MMCA法未检出者,分析其酶活性和临床信息,必要时进行测序检测。结果:在1 321例受检者中共检出768例突变,检出率58.1%。共检出18种G6PD基因变异类型,包括c.1388G>A、c.1376G>T、c.95G>A、c.1024C>T、c.871G>A、c.392G>T、c.487 G>A、c.1360C>T、c.1004C>A、c.517T>C、c.592C>T、c.94C>G、c.152C>T、c.320A>G、c.1028A>G、c.1316G>A、c.1327G>C和c.1376G>C,其中男性半合子683例,女性纯合子3例,女性杂合子80例,女性复杂杂合2例。结论:本研究共检出18种G6PD基因变异类型,并首次在中国人群中报道了c.94C>G、c.1028A>G和c.1327G>C突变类型。武汉地区人群常见G6PD基因突变类型为c.1388G>A、c.1376G>T和c.95G>A。     

广西地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分子流行病学分析

目的对新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)筛查阳性患儿采用G6PD/6PGD比值法进行酶活性检测和采用Sanger法进行G6PD基因突变检测,了解广西地区G6PD缺乏症患儿的患病情况。方法收集2016-2017年于广西壮族自治区妇幼保健院进行新生儿疾病筛查G6PD活性阳性的新生儿及儿科门诊就诊的疑似G6PD缺乏患儿共457例作为研究对象,行G6PD/6PGD比值法酶活性检测和基因突变检测,对相关数据进行回顾性分析。结果在457例疑似患儿中,G6PD/6PGD酶活性异常391例,酶活性正常66例;同时行G6PD基因检测分析,391例酶活性异常的疑似患儿均为G6PD基因致病性突变携带者;酶活性正常的66例疑似患儿中,致病性杂合突变携带者40例,均为女性。另外,基因检测显示G6PD基因突变:95AG 74例(17.17%),871GA 32例(7.42%),1 024CT 28例(6.50%),1 376GT 123例(28.54%),1 388GA156例(36.19%),为广西地区的热点突变;其余位点突变18例(4.18%)。结论广西地区G6PD基因突变类型既有中国人群常见的基因突变类型,又有该地区特有的基因突变类型。     

佛山地区孕产妇G6PD基因缺陷调查及干预模式研究

目的调查佛山地区孕产妇葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷状况,探讨干预指导模式的效果。方法选择2013年4~12月到该院产检的孕产妇及其丈夫各1 646例,以反向膜杂交法检查夫妇双方的G6PD基因、以生化仪法检测G6PD活性,分析两性基因突变率、酶活性缺陷率,给予遗传咨询指导并跟踪随访新生儿G6PD基因突变与酶活性低下情况。结果 G6PD基因突变率男性4.7%,女性2.3%;G6PD酶活性缺陷率男性3.5%,女性1.6%;G6PD基因突变发生较高的位点是G1376T(36.2%)、G1388A(21.6%)、A95G(13.7%)和G1024T(11.2%)。结论佛山地区是G6PD缺陷高发地区,G1376T、G1388A、A95G和G1024T是主要的点突变类型。     

Rapid detection of glucose-6-phosphate dehydrogenase gene mutations by denaturing high-performance liquid chromatography

OBJECTIVES: Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency is a common inherited disorder worldwide. Different kinds of G6PD mutations may result in variable severity of clinical onset in G6PD-deficient individuals. In this study, a reliable molecular diagnostic method was developed for rapid detection of G6PD gene mutation. DESIGN AND METHODS: Primers were designed to amplify G6PD gene fragments that were subjected to mutation screening using denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) analysis. Mutations were identified by their distinct elution peak patterns and were confirmed by DNA sequencing. The assay was further validated against 29 samples from individuals with G6PD deficiency. RESULTS: A DHPLC-based assay for G6PD mutation detection was established. The 9 common G6PD mutations in the Taiwanese and Chinese population could be distinguished through the analysis of DNA elution patterns. During the validation test with the 29 G6PD deficiency specimens, two additional rare mutations, T517C and C519G, were unveiled. Overall, the DHPLC-based mutation detection was 100% concordant with the DNA sequencing results. CONCLUSION: Compared to other genotyping techniques, this method requires significantly less technical time to perform and has a greatly increased throughput capacity. Hence, the DHPLC method represents a major technical advance for G6PD genotyping and should benefit G6PD-deficient individuals for proper clinical care.     

云南玉溪葡萄糖-6-磷酸脱氧酶缺乏症基因突变研究

目的：调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率．分析鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及特征，探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有效方法。方法：NBT纸片法定性筛查玉溪当地居民450人，NBT定量酶活性，PCR-ARMS法检测中国人中最常见的三种突变，作PCR-SSCP分析，最后用DNA测序分析和证实。结果：（1）450例当地居民筛查发现G6PD缺乏症患者48例（男31例，女17例）。（2）PCR-ARMS发现G1388A 21例（43．75％）、G1376T4例（8．33％），未见A93G。（3）PCR-SSCP发现27例异常，PCR—DNA测序结果与PCR—ARMS结果吻合。2份未知突变样本测序分析证实为C1311T。（4）测序发现复合型突变：1例G1376T／IVS-11T93C，1例G1376T／C1311T和1例G1388A／IVS-11＇I＇93C。结论：（1）云南玉溪G6PD缺乏症发病率为10．67％，男性13．78％．女性7．56％；男、女性别比例1．82。（2）云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以G1388A突变最常见，其次是G1376T突变，两种突变共占52．08％，未发现A95G突变。（3）研究云南玉溪G6PD缺乏症基因突变型对指导优生、优育，预防该病的遗传传播．提高我省各地州人口素质具有一定的社会意义。对开展G6PD缺乏症的基因诊断具有一定的应用价值和指导意义     

Molecular genotyping of G6PD mutations for neonates in Ningbo area

The aim of this study is to determine the cut‐off value of glucose‐6‐phosphate dehydrogenase (G6PD) activity and the mutation spectrum of G6PD gene in neonates with G6PD deficiency at Ningbo. Around 82233 neonatal blood samples were measured to determine G6PD activity. The positive samples were further detected with gene analysis. A total of 445 neonates were confirmed as G6PD deficiency, and the incidence in Ningbo was 1/185. 17 types of G6PD gene mutations were found, including 11 single‐site mutations and 6 double‐site mutations. Considering the significant differences in G6PD activity, the cut‐off value was detected to be 2.35 and 3.65 U/gHb for males and females, respectively. Significant differences in G6PD activities were noted and found to be varied from 4.61 to 6.02 U/gHb in different seasons (p < 0.0001). G6PD deficiency screening is a significant detection test for neonatal G6PD deficiency prevention. Our study highlights that the screening should be done using different cut‐off values according to the sexes in different seasons.     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA C1311T的多态性

目的 将突变特异性扩增系统法引入葡萄糖－６－磷酸脱氢酶Ｃ１３１１Ｔ突变型的检测,并利用它调查Ｃ１３１１Ｔ在正常人群中的发生频率,探讨此突变伴发的ＩＶＳ－１１ Ｃ９３５是否与酶活性降低有关。方法 测序检测Ｇ６ＰＤ缺乏症患者中的Ｃ１３１１Ｔ突变,利用已证实为Ｃ１３１１Ｔ标本探索Ｃ１３１１Ｔ的ＡＲＭＳ检测法最佳条件,用此法来确定中国人中Ｃ１３１１Ｔ的发生频率。     

云南省葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型的初步研究

目的 分析云南人群中葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｃ６ＰＤ）缺乏症患的基因突变类型及分布特点。应用自然或错配引物介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析方法。检测６０例云南籍Ｇ６ＰＤ缺乏症患中Ｇ１３８８Ａ、Ｇ１３７６Ｔ、Ｃ１０２４Ｔ、Ｇ３９２Ｔ、Ｃ５９２Ｔ、Ａ９５Ｇ６种Ｇ６ＰＤ基因突变类型。结果 ６０例Ｇ６ＰＤ缺乏症患中,共检出６种Ｇ６ＰＤ基因突变类型,其中Ｇ１３８８Ａ突变７例（２８．３％）、Ｇ１３７６     

贵州三都水族居民葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变研究

为了了解贵州省少数民族居民葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)缺乏症的发病率、基因突变类型特点及分布特征，进一步从分子水平揭示G6PD基因突变的异质性，对贵州省三都水族自治县1090名当地水族居民采用噻唑蓝定性法、G6PD／6PGD活性比值法进行G6PD缺乏症的筛查，再经错配引物介导的聚合酶链反应/限制性酶切分析法检测中国人中最常见的3种G6PD基因突变型：1376G→T、1388G→A、95A→G。结果表明：在受检的1090人中，共检出G6PD缺乏症98例，检出率8．99％，在G6PD缺乏症中检出最常见的3种G6PD基因突变型：1376G→T24例；1388G→A12例；95A→G9例；并在国内首次检出1376G→T、95A→G复合型突变1例。1376G→T突变频率为0．245；1388G→A突变频率为0．122；95A→G突变频率为0．092。结论：1376G→T、1388G→A、95A→G为贵州省三都水族居民的常见G6PD突变型，这个结果提示贵州三都水族与中国其它少数民族在起源上可能有共同的渊源。     

中国人常见G6PD基因突变的快速检测

目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD）缺乏症是世界上最常见的遗传性红细胞酶缺陷病。本文探讨建立一种简便快速、准确可靠、经济实用的G6PD缺乏症分子诊断技术。方法采用DNA测序技术通过双盲法对所建立的单管多重PCR结合分子杂交技术进行方法学评价。结果所建立的新技术可成功地检出上述中国人常见的G6PD基因突变并能清楚区分男性杂合子、女性杂合子或纯合子或双重杂合子。盲法分析结果显示,该技术对经DNA直接测序确诊的G6PD标本的诊断准确度和重复性均达到100%。结论单管多重PCR结合分子杂交技术可准确、快速地检测中国人常见的G6PD基因突变且具有经济和实用的优点,非常适合于G6PD缺乏症的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断。