小鼠卵巢免疫反应产物内GATA-4的表达定位

背景:特异性转录因子GATA-4家族对动物生殖细胞分化和生殖过程中多种激素的调节有非常重要的作用。目的:观察小鼠卵巢内GATA-4免疫反应产物的特征与分布。方法:选取健康昆明种6周龄ICR小鼠6只,取卵巢进行石蜡切片,应用免疫组织化学ABC法,DAB显色观察GATA-4在此时期卵巢中的表达情况。结果与结论:GATA-4免疫反应细胞在6周龄小鼠的卵巢中均有分布,主要在初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞,在卵泡膜细胞上有少量分布,黄体上未见分布。说明小鼠卵巢内存在GATA-4。     

Peroxiredoxin Ⅳ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中的表达

目的:探讨Peroxiredoxin(PRDX) Ⅳ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达。方法:选用C57BL/6j小鼠不同周龄、动情周期以及促性腺激素预处理卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDX Ⅳ mRNA表达。结果:PRDX Ⅳ mRNA在3周龄、6周龄、8月龄卵巢中表达分别为新生3d小鼠的0.76、0.42、0.12(P<0.05);在性成熟小鼠各动情周期卵巢中表达无差异;在未成熟小鼠促性腺激素预处理卵巢中,PMSG注射48h表达为生理盐水注射组(CON组)的1.63倍(P<0.05),于HCG注射后4、8、12、48h分别为CON组的0.81、0.56、0.78、0.66(P<0.05)。结论:PRDX Ⅳ可能通过调节卵泡发育与卵巢氧化应激压力而调控卵巢衰老过程。     

氧化损伤产物8-OHdG、4-HNE、NTY在成年小鼠卵巢组织中的增龄变化

目的:探讨DNA、脂质和蛋白质氧化损伤产物在成年小鼠卵巢组织中的增龄变化.方法:选用12、24、48、75周龄自然衰老C57BL/6小鼠为模型.采用免疫组织化学方法和蛋白印迹技术检测各年龄组小鼠卵巢中8羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHdG)、4羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NTY)的表达变化情况.结果:8-OHdG、4-HNE、NTY在卵巢间质细胞随增龄表达增加(P＜0.05).12周龄组3种物质的表达均明显低于其他各组,差异有显著统计学意义(P＜ 0.01);24周龄含量低于48、75周龄组,差异有显著统计学意义(P＜ 0.05);48周龄组与75周龄组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).而各年龄组卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞中未见明显变化.结论:氧化损伤在卵巢间质细胞中随增龄表现明显,间质细胞氧化损伤可能是导致卵巢衰老的原因之一.     

卵巢细胞微囊移植对去卵巢小鼠的骨胶原代谢的影响

背景：性激素对维持骨骼的完整性是必要的,体外培养的卵巢细胞可以分泌雌激素和孕激素,海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠微球可以在移植物和受体间提供一个屏障,有利于异体移植物的存活。目的：探讨异体移植的微囊化卵巢细胞在去卵巢小鼠体内的生存和分泌功能,以及对骨胶原代谢的作用。方法：用6周龄雌性昆明小鼠分离培养卵巢细胞,并用海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠盐微囊化分离培养的卵巢细胞。将24只8周龄雌性昆明小鼠随机分为3组（n=8）,正常组：未进行卵巢切割;去卵巢组：切除卵巢;移植组：卵巢切除后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。射免疫分析法检测微囊化卵巢细胞培养液和小鼠血清雌二醇和/或孕激素水平,VanGieson染色法显示骨基质中的Ⅰ型胶原纤维,测小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量。结果与结论：卵巢细胞和微囊化卵巢细胞培养液中分泌雌二醇和孕激素水平没有显著差异,移植90d后小鼠血清雌二醇浓度与正常组无显著差异,而去卵巢组血清雌二醇浓度明显低于正常组。VanGieson染色显示,移植组的胶原纤维分布与正常组相似,而去卵巢组的骨小梁减少、游离末端增多,脱钙骨基质变薄,胶原纤维减少。与正常组比较,去卵巢组小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量降低。提示,微囊化卵巢细胞异体移植后能继续生存并分泌雌激素,并能在某种程度上减缓由去卵巢引起的骨胶原的分解代谢。     

青春期母鼠抗缪勒管激素暴露对其卵泡发育与生育功能的影响

目的:探讨青春期抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)暴露对小鼠成年后生育能力的影响。方法:将4周龄雌性CD-1小鼠分为对照组与AMH暴露组。AMH暴露组小鼠每周腹腔注射2次外源性AMH(0.125 mg/kg),连续4周。对照组小鼠腹腔注射同体积的生理盐水,给药频率同AMH组。通过组织学观察评价青春期AMH暴露对小鼠卵泡发育的影响。通过免疫荧光实验检测AMH对小鼠卵巢细胞增殖的影响。随后将雌性小鼠与雄性小鼠交配,记录交配后50 d内产仔率、产仔数以及产仔时间。结果:与对照组比较,AMH暴露组小鼠在动情前期中卵巢内窦前卵泡增多,早期窦卵泡和窦卵泡数量明显减少;在动情期中卵巢内卵母细胞和黄体数量明显减少。免疫荧光结果显示:与对照组比较,AMH暴露组小鼠卵泡中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阳性细胞数比例明显下降。与雄性小鼠交配后,与对照组比较,AMH暴露组小鼠产仔率、产仔数以及产仔时间均明显下降。结论:青春期AMH暴露可显著降低小鼠成年后生殖能力。     

卵巢细胞微囊移植对去卵巢小鼠的骨胶原代谢的影响

背景:性激素对维持骨骼的完整性是必要的,体外培养的卵巢细胞可以分泌雌激素和孕激素,海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠微球可以在移植物和受体间提供一个屏障,有利于异体移植物的存活。目的:探讨异体移植的微囊化卵巢细胞在去卵巢小鼠体内的生存和分泌功能,以及对骨胶原代谢的作用。方法:用6周龄雌性昆明小鼠分离培养卵巢细胞,并用海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠盐微囊化分离培养的卵巢细胞。将24只8周龄雌性昆明小鼠随机分为3组(n=8),正常组:未进行卵巢切割;去卵巢组:切除卵巢;移植组:卵巢切除后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。射免疫分析法检测微囊化卵巢细胞培养液和小鼠血清雌二醇和/或孕激素水平,VanGieson染色法显示骨基质中的Ⅰ型胶原纤维,测小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量。结果与结论:卵巢细胞和微囊化卵巢细胞培养液中分泌雌二醇和孕激素水平没有显著差异,移植90d后小鼠血清雌二醇浓度与正常组无显著差异,而去卵巢组血清雌二醇浓度明显低于正常组。VanGieson染色显示,移植组的胶原纤维分布与正常组相似,而去卵巢组的骨小梁减少、游离末端增多,脱钙骨基质变薄,胶原纤维减少。与正常组比较,去卵巢组小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量降低。提示,微囊化卵巢细胞异体移植后能继续生存并分泌雌激素,并能在某种程度上减缓由去卵巢引起的骨胶原的分解代谢。     

抑制GATA-3基因表达的RNAi载体构建和筛选

GATA-3在Th2免疫网络中起至关重要的作用。本研究的目的是构建和筛选出能够高效、特异性抑制GATA-3基因表达的siRNA质粒载体。在小鼠P815细胞中转染以GATA-3作为靶基因的PSi338、PSi717和PSil232的干涉质粒载体，通过RT—PCR和Westernblot方法分别从转录和蛋白质水平观察它们对GATA-3基因表达的影响。结果表明：PSi338、PSi717均能明显抑制P815细胞中GATA-3mRNA的表达和GATA-3蛋白的合成。结论：成功地构建和筛选出两条高效、特异性抑制GATA-3基因表达的siRNA质粒载体。     

长期力竭运动动情周期抑制模型大鼠卵巢组织形态和超微结构的变化

背景：研究运动性月经失调女性性腺和卵巢的功能,以及形态学的改变对于探讨运动性月经失调的发生机制具有重要意义。目的：通过建立长期力竭运动致动情周期抑制大鼠模型,观察卵巢的组织形态和细胞超微结构的变化。方法：正常3月龄SD雌性大鼠随机分成对照组和模型组,其中模型组大鼠每日进行一次力竭游泳运动直至其动情周期紊乱,取卵巢组织,苏木精-伊红染色,光镜下观察卵巢组织形态变化,电镜下观察卵巢细胞超微结构的变化。结果与结论：与对照组相比,模型组大鼠卵巢典型生长卵泡和新鲜黄体明显减少,原始卵泡、闭锁卵泡则相对增加,其颗粒细胞、黄体细胞内细胞器明显减少而含有大量的脂滴。提示长期力竭运动可抑制大鼠卵巢卵泡的发育、成熟、排卵与黄体形成,并使卵巢细胞的超微结构发生抑制性改变。     

促性腺激素释放激素激动剂对环磷酰胺引起大鼠卵巢损伤的预防作用

目的：探讨促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）曲普瑞林对化疗中大鼠卵巢的保护作用。方法：选用2-3月龄、体重（250±10）g的SD雌性大鼠40只，随机分为正常对照组、环磷酰胺（CTX）组、曲普瑞林组、曲普瑞林＋CTX组。用药后比较4组大鼠卵巢湿重和形态学变化，利用原位细胞凋亡Tunel法检测4组大鼠卵巢中细胞凋亡情况。结果：肉眼观环磷酰胺组大鼠卵巢明显萎缩变小，而其他3组无明显差别；光镜下可见化疗药物组各期卵泡总数显著减少，曲普瑞林组生长卵泡数、成熟卵泡数减少，初级卵泡数及总卵泡数增加。而曲普瑞林能明显改善化疗药物对卵巢的损害，GnRHa＋CTX组保存了大部分初级卵泡且总卵泡数增加；环磷酰胺组细胞凋亡指数高于曲普瑞林＋CTX组，差别有统计学意义（P＜0.05）结论：曲普瑞林的应用对环磷酰胺所致的大鼠卵巢损伤有一定的保护作用。     

不同周龄组的C57BL小鼠多巴胺神经元对MPTP敏感性的对比及其机制探讨

目的：观察不同周龄的C57BL小鼠多巴胺神经元对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）的药物敏感性差异，探讨其差异的机制是否与热休克蛋白70（HSP70）不同表达相关。方法：将4。6周龄及15。17周龄的C57BL小鼠给予MPTP造成帕金森病模型，同时设立对照组。采用高效液相法检测纹状体内多巴胺（DA）、3，4-二羟苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。免疫组化法观察黑质中酪胺酸羟化酶（TH）阳性细胞及HSP70的表达。结果：15-17周龄小鼠在MPTP造模后纹状体中DA、DOPAC、HVA的含量，黑质中的TH阳性细胞数和HSP70的表达含量均明显低于4—6周龄模型组（P〈0．05），而两个周龄的对照组的各项指标均无明显差异。结论：15-17周龄的C57BL小鼠对于MPTP的敏感性明显高于4—6周龄小鼠。HSP70的表达量不同可能是造成敏感性差异的原因之一。     

新生CD-1小鼠雌性生殖干细胞的建系及生物学特征

背景：传统观点认为雌性哺乳动物出生后不再产生新的卵母细胞,近年来多项研究表明出生后哺乳动物卵巢中存在能再生卵子的雌性生殖干细胞。 目的：从新生CD-1小鼠卵巢中分离、纯化雌性生殖干细胞并建系及进行生物学特征研究。 方法：通过两步酶消化法和免疫磁珠分选从新生 CD-1小鼠卵巢中分离与纯化雌性生殖干细胞并体外长期培养,然后通过RT-PCR、细胞免疫荧光化学和核型分析鉴定其生物学特征。 结果与结论：从3-5 d龄CD-1小鼠卵巢中分离出雌性生殖干细胞并建立细胞系,目前已在体外长期培养15个月,共传代70多次。该细胞系表达Mvh,Dazl,Oct-4,Stel a,Blimp1,Fragilis等生殖细胞标志物,同时通过Fragilis和BrdU的双免疫荧光实验证实了其增殖活性和生殖细胞特性;核型分析发现该细胞系也具有正常的二倍体核型。因此CD-1小鼠卵巢中存在具有有丝分裂活性和正常的核型的雌性生殖干细胞。     

Independent roles for IL-2 and GATA-3 in stimulating naive CD4+ T cells to generate a Th2-inducing cytokine environment

T cell receptor (TCR) signaling plays an important role in early interleukin (IL)-4 production by naive CD4+ T cells. This "antigen-stimulated" early IL-4 is sufficient for in vitro Th2 differentiation. Here, we provide evidence that early IL-4 production by naive CD4+ T cells stimulated with cognate peptide requires TCR-induced early GATA-3 expression and IL-2 receptor signaling, both of which are controlled by the degree of activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK). Stimulation of naive CD4+ T cells from TCR transgenic mice with low concentrations of peptide-induced IL-2-dependent STAT5 phosphorylation, IL-4-independent early GATA-3 expression, and IL-4 production. Neutralization of IL-2 abolished early IL-4 production without affecting early GATA-3 expression. In addition, naive CD4+ T cells from GATA-3 conditional KO mice failed to produce early IL-4 in response to TCR/CD28 stimulation. Stimulation with high concentrations of peptide abrogated early GATA-3 expression and IL-2-dependent STAT5 phosphorylation, and resulted in the failure to produce early IL-4. This high concentration-mediated suppression of early IL-4 production was reversed by blockade of the ERK pathway. A MEK inhibition rescued early GATA-3 expression and responsiveness to IL-2; these cells were now capable of producing early IL-4 and undergoing subsequent Th2 differentiation.     

荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人骨髓间充质干细胞中的表达

背景：GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在骨髓造血及成脂调控机制中起重要作用。目的：观察GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达。方法：收集6例再生障碍性贫血患者及6位正常人骨髓液各10mL,Ficoll贴壁法分离培养骨髓单个核细胞,达70%~80%融合后扩增传代。取传至第3代的间充质干细胞,应用流式细胞仪进行鉴定。提取总RNA,比较各组基因与内参基因之间的差别。荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达量。结果与结论：与正常人间充质干细胞相比,再生障碍性贫血患者间充质干细胞的GATA-2和干细胞因子基因表达量降低（P=0.012,0.039）,过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达量升高（P=0.035）;两组GATA-1基因表达量差异无显著性意义。提示GATA-2、干细胞因子基因的异常表达可能影响AA患者骨髓微环境的造血调控作用;过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的异常表达可能解释再生障碍性贫血患者骨髓易成脂的原因。     

长春瑞滨上调小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4的表达

背景：Toll样受体4除与抗感染免疫有关外,在心肌梗死、脑梗死等组织损伤和自身免疫病等非感染性炎症反应中也发挥着重要作用。目的：观察长春瑞滨对小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响。方法：取20只BALB/c小鼠,随机分为实验组和对照组,实验组尾静脉注射长春瑞滨,对照组注射生理盐水。结果与结论：注射后48h,实验组小鼠尾静脉血管出现内皮细胞脱落、血栓形成和炎细胞浸润,损伤部位内皮细胞高表达Toll样受体4;对照组小鼠尾静脉血管无明显损伤表现,血管内皮细胞Toll样受体4阴性或弱表达。表明长春瑞滨上调了小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4表达,提示Toll样受体4可能参与了长春瑞滨致静脉血管内皮损伤的发生过程。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨

背景：前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。目的：进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。方法：分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Westernblot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达结果与结论：神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5mRNA的表达上调作用。Westernblot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

Elevated luteinizing hormone induces expression of its receptor and promotes steroidogenesis in the adrenal cortex

Transgenic (TG) female mice expressing bLHbeta-CTP (a chimeric protein derived from the beta-subunit of bovine luteinizing hormone [LH] and a fragment of the beta-subunit of human chorionic gonadotropin [hCG]) exhibit elevated serum LH, infertility, polycystic ovaries, and ovarian tumors. In humans, increased LH secretion also occurs in infertility and polycystic ovarian syndrome, often concomitant with adrenocortical dysfunction. We therefore investigated adrenal function in LH overexpressing bLHbeta-CTP female mice. The size of their adrenals was increased by 80% with histological signs of cortical stimulation. Furthermore, adrenal steroid production was increased, with up to 14-fold elevated serum corticosterone. Primary adrenal cells from TG and control females responded similarly to ACTH stimulation, but, surprisingly, the TG adrenals responded to hCG with significantly increased cAMP, progesterone, and corticosterone production. LH receptor (LHR) expression and activity were also elevated in adrenals from female TG mice, but gonadectomized TG females showed no increase in corticosterone, suggesting that the dysfunctional ovaries of the intact TG females promote adrenocortical hyperfunction. We suggest that, in intact TG females, enhanced ovarian estrogen synthesis causes increased secretion of prolactin (PRL), which elevates LHR expression. Chronically elevated serum LH, augmented by enhanced PRL production, induces functional LHR expression in mouse adrenal cortex, leading to elevated, LH-dependent, corticosterone production. Thus, besides polycystic ovaries, the bLHbeta-CTP mice provide a useful model for studying human disorders related to elevated LH secretion and adrenocortical hyperfunction.     

Rheb1在小鼠巨核-红系多能性干细胞发育中的作用

目的:研究Rheb1基因在小鼠巨核-红系多能性干细胞发育成熟中的作用及相关的机制.方法:利用Vav-Cre在造血系统中特异性敲除小鼠Rheb1(Vav1-Cre;Rheb1fl/fl,Rheb1△/△小鼠),采用流式细胞术检测Rheb1敲除组和对照组小鼠骨髓和外周血中红系细胞的比例;CFC克隆形成实验检测敲除组和对照组...     

α7烟碱型乙酰胆碱受体对小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞中转录因子STAT5表达的影响

目的:检测α7烟碱型乙酰胆碱受体的不同活性状态对CD4+CD25+调节性T细胞中STAT5表达的影响。方法:免疫磁珠法分离C57BL/6J小鼠脾脏中的CD4+CD25+调节性T细胞,以烟碱/α银环蛇毒刺激后采用western blot法分析α7受体的不同活性状态对细胞中STAT5表达的影响。结果:western blot分析显示,α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂--烟碱可以提高调节性T细胞中磷酸化STAT5的表达水平,该效应在给药30min后达峰;而使用α7烟碱型乙酰胆碱受体特异性抑制剂--α银环蛇毒预处理细胞后,烟碱使其中磷酸化STAT5表达增高的效应消失。结论:烟碱可以增强CD4+CD25+调节性T细胞中磷酸化STAT5的表达,且该效应是依赖α7烟碱型乙酰胆碱受体途径的。