谷胱甘肽对人离体嗜中性白细胞超氧阴离子产生和清除的影响

目的：研究谷胱甘肽（GSH）对人离体嗜中性白细胞超氧阴离子产生和清除的影响及机制。方法：用细胞色素C还原法测定3种刺激剂：N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）、佛波豆蔻醚乙酸盐（PMA）和花生四烯酸（AA）介导的嗜中性白细胞超氧阴离子释放量。用Western blot法检测嗜中性白细胞蛋白质因子p47^phox磷酸化。结果：GSH呈浓度依赖性促进fMLP介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子，不影响PMA和AA介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子。酪氨酸激酶抑制剂5，7，45-三羟基异黄酮明显抑制fMLP介导的氧自由基产生，而蛋白激酶C抑制剂十字孢碱仅有轻度抑制作用。在非初始化的嗜中性白细胞GSH可清除fMLP、PMA和AA诱导产生的超氧阴离子。GSH刺激fMLP介导的嗜中性白细胞质因子p47如磷酸化，与其对超氧阴离子释放的影响一致。结论：GSH对刺激剂介导的超氧阴离子的产生依赖于膜受体的激活和还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶p47^phox磷酸化。     

β-肾上腺素能药物对人离体嗜中性白细胞释放超氧阴离子的影响和机制

目的：用人离体嗜中性白细胞研究新型β1-受体阻滞药（艾司洛尔和兰地洛尔）和β2-受体激动药（舒喘宁）对嗜中性白细胞释放超氧阴离子的影响及机制。方法：细胞色素C还原法测定3种肾上腺素能药物对3种刺激荆介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子量。抗原抗体法检测丝氨酸或苏氨酸磷酸化。结果：艾司洛尔呈浓度依赖性抑制花生四烯酸（AA）介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子；兰地洛尔增加N-甲酰甲硫氨酰．亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子.舒喘宁呈浓度依赖性抑制fMLP和佛波豆蔻醚乙酸盐（PMA）介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子。艾司洛尔抑制从介导的嗜中性白细胞释放超氧阴离子与其抑制嗜中性白细胞蛋白质的丝氨酸或苏氨酸磷酸化是一致的。结论：β-受体药对嗜中挫白细胞释放超氧阴离子的影响与β-受体和被阻滞的强度无关。     

麝香糖蛋白成分对趋化三肽激活的大鼠中性白细胞功能的影响

采用大鼠中性白细胞体外温孵系统，观察麝香糖蛋白成分麝香-1对体外趋化三肽激活的大鼠中性白细胞某些功能，包括超氧阴离子产生和溶酶体酶释放的影响。结果表明：麝香-1在1～100μg／ml终浓度下，可使中性白细胞超氧阴离子生成量增加23．0％～83．6％，使β-葡糖苷酸酶释放量降低7％～47％，使溶菌酶释放量降低9％～22％。抑制溶酶体酶释放可能是麝香抗炎作用机制之一。     

麝香糖蛋白成分对血小板活化因子激活的大鼠中性白细胞功能的影响

采用体外温孵系统，观察麝香糖蛋白成分麝香-1对体外血小板活化因子激活的大鼠中性白细胞某些功能，包括超氧阴离子产生和溶酶体酶释放的影响。结果表明：麝香-1在1μg／mL～100μg／mL终浓度下，可使中性白细胞超氧阴离子生成量增加109％～291％，在10μg／mL～100μg／mL终浓度下，可使β-葡糖苷酸酶释放量降低6％～51％，使溶菌酶释放量降低7％～21％。抑制溶酶体酶释放可能是麝香抗炎作用机制之一。     

植物中的苯乙酮化合物对体外中性白细胞呼吸爆发活力的抑制效应

从喜马拉雅地区的一种带有块茎的植物胡黄连Picrorrhizakurrooa中曾分离得到苯乙酮葡萄糖甙androsin，该化合物及其相应的糖甙配体磁麻脂（apocynin）对过敏源和由PAF诱导的支气管收缩显示了强烈的抑制作用；对androsin和磁麻脂进行化学修饰所得的一系列苯乙酮衍生物对防止豚鼠的支气管阻塞更有效。本文作者研究了19种不同取代的苯乙酮的衍生物在体外对由N-甲酰甲硫氨酰亮氨酰苯基丙氨酸（FMLP）刺激人体多型核中性白细胞释放超氧阴离子（O）的抑制作用。研究表明：1）磁麻脂（RZ—RS一H，R3—OCH3，R‘一OH）和4一羟基已氧基一3一…     

麝香糖蛋白成分对趋化三肽激活的大鼠中性白细胞功能的…

采用大鼠中性白细胞体外温孵系统，观察麝香糖蛋白成分麝香－１对体外趋化三肽激活的大鼠中性白细胞某些功能，包括超氧阴离子产生和溶酶体酶释放的影响。结果表明，麝香－１在１￣１００μｇ／ｍｌ终浓度下，可使中性白细胞超氧阴离子生成量增加２３．０％￣８３．６％，使β－葡糖苷酸酶释放量降低７％￣４７％，使溶菌酶释放量降低９％￣２２％，抑制溶酶体酶释放可能是麝香抗炎作用机制之一。     

激活的补体对清醒山羊肺内液体交换的影响——超氧阴离子的作用

作者采用山羊慢性肺淋巴瘘模型,在输入酵母多糖活化的血浆后,观察清醒山羊肺内液体和蛋白质交换以及中性粒细胞释放超氧阴离子能力的改变。结果表明输入酵母多糖活化的血浆可激活中性粒细胞,使之释放超氧阴离子的能力增强;肺淋巴流量增加及肺淋巴与血浆蛋白比值增大。提示中性粒细胞释放超氧阴离子能力增强,可能是激活的补体致肺微血管壁受损的原因之一。     

厚朴酚对趋化三肽激活的大鼠中性粒细胞功能的影响

目的：探讨厚朴酚对趋化三肽激活的大鼠中性粒细胞功能的影响，以阐明其抗炎机理。方法：分别用酶标仪和荧光比色法测定超氧阴离子的生成、溶菌酶的释放以及β葡糖苷酸酶的释放。结果：厚朴酚在1～100μmol/L可以使中性粒细胞的超氧阴离子的产生增加，在大于10μmol/L时可以明显地抑制激活的中性粒细胞β-葡糖苷酸酶和溶菌酶的释放。结论：抑制溶酶体酶的释放可能是厚朴酚抗炎作用机理之一。     

性别对大鼠创伤失血性休克后循环血多形核白细胞反应的影响

目的观察性别对大鼠创伤失血性休克后循环血多形核白细胞（PMN）活化和凋亡的影响。方法实验动物为发情前期的雌性和成年雄性SD大鼠，共30只，分为雄性，雌性和对照3组。麻醉后先在腹部正中做5cm切口造成软组织损伤，分层缝合后通过放血的方法将平均动脉压降至（35±5）mmHg，并维持60min，然后在60min内用4倍于最大失血量的乳酸林格液进行复苏。对照纽不进行休克及液体复苏。复苏或假手术后2h和24h分别测定循环血PMN释放过氧化物阴离子和弹性蛋白酶的水平，并用流式细胞仪测定PMN的Fas表达率。结果（1）使用十四烷酰佛波醇乙酰（PMA）刺激后，雄性组和雌性组大鼠复苏后2h、24h时循环血PMN所产生的过氧化物阴离子量与雄性和雌性对照组大鼠相比差异均无显著性意义（P〉0．05）。（2）复苏后2h、24h时，雄性组大鼠与雌性组大鼠用N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸（fMLP）刺激所产生的过氧化物阴离子和用脂多糖（LPS）刺激所产生的弹性蛋白酶水平间差异均有显著性意义（P〈0．05）。（3）复苏后2h、24h时，雄性组大鼠PMN的Fas表达率与对照组相比差异均有显著性意义（P〈0．01）；虽然雌性组Fas表达率也较对照组降低（P〈0．05），却明显高于雄性组（P〈0．05）．绪论创伤受血性侏弃．后雄性大鼠PMN的活化明显高干雌性：雄性大鼠PMN的凋亡较雌性出现延迟。     

P47phox基因C923T多态性与脑梗死的相关性研究及其对血脂的影响

目的探讨P47^phox基因第10外显子C923T（Ala308Val）多态性与脑梗死的关系及其对血脂的影响。方法采用PCR-单链构象多态技术和DNA直接测序法检测110例脑梗死患者、10个脑梗死家系成员和100名健康对照者的P47^phox基因第10外显子C923T多态性;酶法测定总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,免疫比浊法测定apoA-I及apoB100,酶联免疫吸附法测定脂蛋白a血清水平。结果P47^phox基因第10外显子C923T多态存在CC、CT、TF三种基因型,脑梗死组及其各亚组C923T多态基因频率分布与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;脑梗死组和对照组CT基因型血清11G水平均明显高于CC基因型（P〈0．05）。结论P47^phox基因C923T多态性可能与脑梗死的易患性无关,但与血脂代谢有一定相关。     

血管活性肽对同型半胱氨酸刺激平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 观察对兔主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖起负调节作用的Ｃ－型利钠利尿肽（ＣＮＰ）、肾上腺髓质素（Ａｄｍ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、生长抑素（ＳＳＴ）和甲状旁腺素相关蛋白（ＰＴＨｒＰ）等活性肽对同型半胱氨酸（Ｈｃｙ）刺激的ＶＳＭＣ增殖的影响。方法 ６只大耳白兔胸主动脉贴块法离体培养平滑肌细胞;分对照及Ｈｃｙ加不同处理因素组;＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入测定ＶＳＭＣ增殖;差速离心分离细胞膜、胞浆及胞     

白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制

目的 探讨细胞因子白介素-1β（IL-1β）对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2（COX-2）表达的影响及调节机制。方法 A549细胞培养达80％融合后，用不同浓度的IL-1β（0、0.1、1、5和10ng／mL）干预或用5ng/mL IL-1β干预不同时间（0、3、6、9、12和24h）观察白介素-1β（IL-1β）对A549细胞COX-2表达的影响；用5ng／mL IL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶（ERK）抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580、蛋白激酶C（PKC）抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径；用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预，以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响；westem blot检测COX-2蛋白表达，RT—PCR检测COX-2 mRNA表达。COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定。结果 A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加，干预9h表达达高峰；SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达，PD098059对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达无影响；IL-1β对COX-2报告基因无影响。结论 PKC途径和P38 MAPK途径参与IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达。     

黄芪对同型半胱氨酸诱导的大鼠胸主动脉张力损伤的保护作用

目的 探讨黄芪对同型半胱氨酸诱导的大鼠胸主动脉张力损伤的保护作用及其机制。方法 采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型。观察不同作用浓度（0．1-3．0mmol/L）同型半胱氨酸干预60min后，对主动脉环内皮依赖性舒张作用的影响，以及超氧化物歧化酶（200U／ml）和不同浓度（10-300mg／L）黄芪对同型半胱氨酸诱导的血管环张力变化的影响。结果 预孵60min后，同型半胱氨酸呈浓度依赖性抑制主动脉环内皮依赖性血管舒张作用；以超氧化物歧化酶（200U／ml）干预30min后，可以完全逆转同型半胱氨酸对血管环的抑制作用，而30-300mg/L制作用。结论 黄芪能改善同型半胱氨酸对实验大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能的抑制作用。     

JNK信号通路在同型半胱氧酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究JNK信号通路在同型半胱氨酸（Hcy）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡中的作用。方法在人脐静脉内皮细胞培养基中加入不同浓度Hcy培养24h，以及加入SP600125预处理再加入10．0mmol／L的Hcy作用2h。用TUNEL法检测HUVECs凋亡情况。用Western-Blot法检测不同组HUVECs表达P-JNK的蛋白含量。结果用0．3mmol／L的Hcy干预后，HUVECs凋亡和JNK表达开始高于对照组（均P〈0．01）。100mmol／L最显著（均P〈0．01），呈浓度依赖关系；而SP600125两种浓度对HUVECs凋亡和JNK表达均有抑制作用，其中10．0umol／L更显著（P〈0．01）。结论Hey能够诱导HUVECs凋亡和上调JNK的表达，而SP600125具有明显的抑制作用，这可能是其促进动脉粥样硬化形成的重要机制之一。     

The role of protein kinase C and [Ca2+]i in superoxide anion synthesis and myeloperoxidase degranulation of human neutrophils

A chemiluminescence procedure has been developed to determine superoxide anion (O2-) generation and myeloperoxidase (MPO) release from human activated neutrophils. By using this procedure, the role of protein kinase C (PKC) and cytosolic calcium ion (Ca2+[i) for O2- generation and MPO release was examined. Activation of Fc gamma R on neutrophils with IgG-coated zymosan (IgGZ) caused a transient rise of Ca2+[i, followed by O2- generation and MPO release. A PKC inhibitor suppressed completely the O2- generation and slightly the MPO release. Direct activation of PKC by a specific PKC activator, phorbol myristate acetate (PMA), induced a remarkable O2- generation and a small MPO release, indicating that PKC may regulate entirely O2- synthesis and partially MPO degranulation. Influx of extracellular Ca2+ induced by the calcium ionophore A23187 provoked MPO release only. Complete inhibition of this MPO release with a Ca2+/calmodulin (CaM)-coupling inhibitor and a CaM inhibitor provides evidence that Ca2+[i may regulate MPO degranulation through direct activation of CaM, but not PKC. The Ca2+/CaM inhibitors significantly prevented IgGZ-induced O2- generation and MPO release, while they did not affect PMA-induced O2- generation and MPO release. These results suggest that in Fc gamma R-stimulated neutrophils, Ca2+[i activates CaM, which in turn mediates not only activation of PKC-induced O2- synthesis and MPO degranulation, but also MPO degranulation without PKC intermediate.     

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子（KCl25mmol*L-1）的培养基中转移至低钾培养基（KCl5mmol*L-1）中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段,SAPK/JNK分析盒测定c-JunN-末端蛋白激酶(JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB203580通过抑制细胞凋亡,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元,c-Jun表达和磷酸化水平升高了,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB20358025μmol*L-1的低钾培养基中,c-Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB203580抑制JNK活性,降低c-Jun的磷酸化而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

磷酸化JNK介导大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的研究大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡的机制以及特异性c-jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125的保护作用。方法分别用台盼蓝染色和P1标记流式细胞仪检测E.coli感染不同时间后U937细胞的死亡率及凋亡率；Western blot方法分析JNK信号转导通路的激活情况。结果E.coli可诱导U937细胞凋亡，并且具有时间依赖性，此凋亡过程可被JNK的阻断剂SP600125阻断；在此过程中，JNK在E.coli感染10min和20min时被激活并磷酸化。结论E.coli诱导的U937细胞凋亡依赖JNK信号转导通路；SP600125通过特异性地抑制JNK活性降低E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响

目的观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是27.95μmol/L和2.38μmol/L,作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。结构效应分析表明:C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。     

蛋白激酶Cγ在低氧预适应脑保护中的作用及其缺血性卒中鼠脑半影区内相互作用蛋白鉴定

目的 验证经典型蛋白激酶C（conventional protein kinase C,cPKC）γ在低氧预适应（hypoxic preconditioning,HPC）诱导缺血脑保护中作用,同时利用HPC和cPKCγ阻断剂,鉴定脑缺血半影区内参与cPKCγ脑保护的信号蛋白.方法 将健康成年雄性BALB/c小鼠,按数字表法随机分为常氧假手术（Sham）、常氧缺血（Ischemia,I）、二甲基亚砜溶剂处理后缺血（DMSO＋I）、HPC预处理后缺血（HPC＋I）,以及cPKCγ抑制剂和HPC预处理后缺血（HPC＋Go6983＋I）等5组.应用小鼠整体HPC和脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）致缺血性脑卒中模型,借助蛋白印迹检测cPKCγ膜转位（激活）水平,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triph-enyltetrazolium chloride,TTC）染色观察脑梗死体积.采用cPKCγ免疫共沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术鉴定脑缺血半影区内cPKCγ相互作用蛋白结果.结果 与常氧缺血I组相比,HPC＋I组缺血核心区和半影区内cPKCγ膜转位水平明显增高,而cPKCγ抑制剂Go6983预处理则明显降低HPC＋Go6983＋I组缺血核心、半影区和对侧脑皮层内cPKCγ的膜转位水平（P〈0.05,每组n=6）.cPKCγ抑制剂Go6983明显减弱HPC降低缺血性卒中小鼠脑梗死体积的保护作用（P〈0.05,每组n=6）同时.Go6983明显抑制HPC＋I组小鼠脑缺血半影区内cPKCγ与部分蛋白的相互作用,包括铜/锌超氧化物歧化酶（Cu/Zn superoxide dismutase,SOD）、DJ-1、UMP-CMP激酶、腺苷酸激酶、泛素末端水解酶（ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1,UCHL1）、白介素-16 （interleukin-16,IL-16）和热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）.结论 cPKCγ通过对缺血半影区内部分相互作用蛋白的调节,参与HPC对缺血性卒中小鼠脑的神经保护作用.