牦牛分子育种的理论与实践

21世纪初,动物育种已迈入分子水平,朝着快速改变动物基因型的方向发展.本文在总结作者近年来对牦牛各种分子遗传标记研究成果的基础上,分析了RFLP、RAPD、AFLP、微卫星DNA、m tDNA等分子遗传标记在牦牛遗传育种研究中的应用以及牦牛功能基因的研究现状,进而探讨了牦牛分子育种的理论和实践,以便为今后在牦牛生产中进一步地开展分子育种提供理论依据.     

AFLP技术在昆虫分子系统学研究中的应用

概述了AFLP分子标记技术在昆虫分类鉴定、遗传图谱构建、遗传多样性分析、群体遗传结构和分化、生态型分析等分子系统学应用研究方面取得的较大进展．总结了AFLP的改进技术,并提出对相关问题的思考．     

DNA分子标记在水稻遗传育种中的应用

综述了近年来DNA分子标记在水稻分子遗传图谱的构建、遗传资源保存和遗传多样性分析、基因的标记及克隆、比较基因组学研究、分子标记辅助育种等方面研究的应用及存在的问题，展望了其应用前景。     

黄瓜亲本间分子遗传距离与杂种优势的相关性

选用10个黄瓜亲本,通过RAPD分析计算其分子遗传距离,然后配制遗传距离大,中,小的杂交组合15个,田间测定它们的16个园艺性状,对所得园艺性状数据进行统计分析,并计算园艺性状与分子遗传距离间各种相关曲线的相关系数,结果发现,黄瓜园艺性状与分子遗传距离间的各种相关曲线中,以抛物线的相关系数最优,其中座瓜率,收获始期与分子遗传距离的抛物线相关系数存在着显著相关性。     

DNA分子标记技术在菊花种质资源中的应用研究

菊花具有重要的观赏价值和药用价值,是我国著名的传统花卉之一.本文综述了DNA分子标记技术在菊花种质资源遗传多样性评价、系统发育分析、种质鉴定、遗传连锁图谱构建及QTL定位和表型性状关联分析等方面的应用现状,并对DNA分子标记技术的发展和应用前景进行了展望.     

分子标记在杨树育种上的应用

本文概述了分子标记在杨树指纹图谱构建、遗传图谱构建、QTLs定位、分子标记辅助选择、遗传多样性分析、杂种鉴定等方面的研究进展,同时指明了分子标记在林木研究上的发展趋势。     

DNA分子标记在不结球白菜遗传育种中的应用进展

概述了分子标记的分类和特点,以及在不结球白菜遗传多样性分析、遗传图谱构建、数量性状座位(quantitative trait locus,QTLs)定位和分子标记辅助育种等领域中的最新研究进展.总结了目前分子标记在不结球白菜遗传改良和辅助育种中存在的若干问题,并对该研究领域提出了一些展望和建议.     

分子标记在杨树育种上的应用

本文概述了分子标记在杨树指纹图谱构建、遗传图谱构建、QTLs定位、分子标记辅助选择、遗传多样性分析、杂种鉴定等方面的研究进展,同时指明了分子标记在林木研究上的发展趋势.     

SSR分子标记的研究进展

介绍SSR分子标记的开发方法,综述了SSR标记在通用性、遗传多样性与种质鉴定、遗传连锁图谱构建、基因定位与克隆、数量性状基因位点(QTLs)分析、DNA指纹图谱构建等研究中的应用及最新进展,对提高SSR分子标记电泳检测效率提出一些建议.同时展望了SSR分子标记的应用前景.     

分子标记技术及其在果树种质资源研究中的应用

分子标记是一种新型的遗传标记,它具有独特的优越性,被广泛地应用于生物学研究的各个领域.本文就当前分子标记的主要类型、特点及在果树品种鉴定、遗传多样性、系谱分析、连锁图谱的构建和基因标记等种质资源研究中的应用及其研究进展进行了简要阐述.     

深黄被孢霉Δ12-脂肪酸脱氢酶基因RNAi表达载体的构建

 深黄被孢霉是国内研究生产γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,GLA)和花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)等多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)的主要产油丝状真菌.前期的实验结果表明,深黄被孢霉M6-22具有潮霉素抗性,而且目前也没有关于深黄被孢霉营养缺陷型菌株的报道,限制了一些基于深黄被孢霉菌株进行遗传操作的研究.研究以红色荧光蛋白DsRED基因作为报告基因,构建能同时用于丝状真菌外源基因和RNAi表达载体pS-DsRED.通过PEG/CaCl₂原生质体转化法将pS-DsRED导入深黄被孢霉M6-22中进行表达,成功获得产粉红色的阳性菌落,并在此基础上构建了深黄被孢霉Δ¹²-脂肪酸脱氢酶基因RNAi表达质粒pSREDMID12RNAi,为下一步目的基因的敲除和基因功能分析奠定了基础.     

Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of the phytopathogenic fungus Penicillium digitatum

Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation （ATMT） system was assessed for conducting insertional mutagenesis in Penicillium digitatum, a major fungal pathogen infecting post-harvest citrus fruits. A transformation efficiency of up to 60 transformants per 106 conidia was achieved by this system. The integration of the hph gene into the fungal genome was verified by polymerase chain reaction （PCR） amplification and sequencing. These transformants tested were also shown to be mitotically stable. Southern blot analysis of 14 randomly selected transformants showed that the hph gene was randomly integrated as single copy into the fungal genome of P. digitatum. Thus, we conclude that ATMT of P. digitatum could be used as an alternatively practical genetic tool for conducting insertional mutagenesis in P. digitatum to study functional genomics.     

脂肪酶基因结构和氨基酸序列的比较

采用PCGENE6 8软件系统对真菌脂肪酶基因和氨基酸序列进行了分析。真核生物中多数结构基因中含有内含子 ,但真菌脂肪酶基因几乎有一大半的是连续的 ;对于有内含子的基因 ,不同脂肪酶基因所含内含子数目各异。所有脂肪酶一级结构中都包含Gly X1 Ser X2 Gly保守序列 ,在真菌脂肪酶中该序列更保守 ;Ser、Asp/Glu和His3个氨基酸残基组成了真菌脂肪酶的活性中心 ;大多数真菌脂肪酶是糖蛋白 ,但也有一些不含糖基的脂肪酶 ,主要取决于脂肪酶一级结构中是否存在糖基化识别序列。     

Construction of Streptomyces lydicus A01 transformant with the chit33 gene from Trichoderma harzianum CECT2413 and its biocontrol effect on Fusaria

Streptomyces lydicus A01 resists many plant pathogens (including Fusarium spp.) by producing the antifungal agent natamycin, which binds to the ergosterol of fungal cell membranes and inhibits the growth of pathogens. Trichoderma harzianum CECT2413 is a widely-distributed soil fungus that antagonizes several plant fungal pathogens (including Fusarium spp.) by producing chi-tinase and degrading chitin, a major component of the fungal cell wall. This study attempted to enhance the biocontrol effect of S. lydicus A01 on Fusarium spp. by transforming the chitinase gene of Trichoderma. Chitinase and natamycin could act synergisti-cally on both the cell walls and cell membranes of pathogens. The 33-kD chitinase-encoding gene (chit33) was cloned and conju-gal-transformed from T. harzianum CECT2413 to S. lydicus A01, and then confirmed via polymerase chain reaction (PCR) assays. Subsequent analyses using the 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method and ultraviolet spectrophotometry showed that compared with its wild type strain (WT), the S. lydicus A01 conjugal transformant (CT) with chit33 gene exhibited substantially higher chi-tinase activity and natamycin production. The resistance of S. lydicus A01-chit33 CT and WT to four Fusaria in crops and vegetables was tested via the cup-plate method. Compared with the WT, the conjugal transformant of S. lydicus A01 with chit33 gene from T. harzianum CECT2413 showed greatly increased biocontrol effect on fusarium disease. This study would be beneficial to the development of high-quality antifungal bio-agents for agricultural applications via the synergy between the previously non-existent and pre-existing functions achieved through heterogeneous gene transformation.     

硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA

在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化.     

捕食线虫真菌Drechslerella dactyloides Gα基因克隆及系统发育分析

 运用简并PCR和DNA Walking技术首次从捕食线虫真菌(Drechslerella dactyloides)中克隆了Gα的编码全长基因Dga1.该基因全长1 420 bp,编码356个氨基酸,推测其编码蛋白的分子质量和pI值分别为40.84 ku和6.68.通过同源比对和系统发育分析,表明Dgal属于真菌Gα的第3类群,推测Dgal具有激活腺苷酸环化酶的作用.     

青霉菌组蛋白去乙酰化酶基因的敲除及其次级代谢产物变化

丝状真菌尤其是青霉菌Penicillium代谢的各类次级产物日趋成为研制新药的重要来源，很多药物如抗癌药物、抗生素、免疫抑制剂等均来源于真菌。然而真菌次级代谢受多因素的影响，其中表观遗传修饰起到重要的调控作用。组蛋白乙酰化表观遗传修饰常与转录激活相关，从而促进次级代谢产物的合成。以青霉属真菌Penicillium christenseniae SD-193.84为研究对象，利用生物信息学手段确定其组蛋白去乙酰化酶（HDAC）基因，建立该菌中同源重组基因敲除技术，对该基因进行敲除，并比较了基因敲除前后次级代谢产物的变化，发现HDAC影响了多种次级代谢产物的合成。本研究为青霉菌分子遗传操作及次级代谢调控提供了参考。     

慢性中耳乳突炎真菌感染的研究

对慢性中耳炎患者71例74耳在乳突根治术中取鼓窦脓性分泌物进行真菌培养，取材阳性率为45．9％（34／74）。慢性中耳乳突炎治疗中需作包括霉菌在内的致病菌培养以便更合理而科学地治疗，不可盲目用药。     

真菌聚酮合酶分类进展及其应用

概述了真菌聚酮合酶几种有代表性的新分类,这些分类对于进一步认识、改造和利用真菌聚酮合酶以及开发真菌聚酮化合物资源等方面具有重要意义。