同种异体骨髓基质细胞肝内移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)移植到D-氨基半乳糖(D-Gal)诱导的兔急性肝损伤模型的治疗效果.材料与方法 BMSCs由雄性白兔的股骨和胫骨的骨髓中提取,分离、培养及传代3周并观察其形态学特征,然后直接肝脏注射移植到D-Gal诱导的同种雄性兔的急性肝损伤模型内.实验组(n=24):为直接肝脏内注射5 ml BMSCs(约2×107个);对照组(n=34):为直接肝脏内注射5ml D-Hanks液.每天观察各组实验兔的行为变化、存活率、肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT),谷草转氨酶(AST),白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)]的改变;BMSCs移植后1、2、4周分别处死两组实验兔,观察肝脏组织病理学变化及肝脏坏死程度,参照评分标准.两位组织病理学医师双盲予以各实验动物的肝脏组织标本评分.结果 实验组1周后的存活率高于对照组(95.8%vs 70.6%,P＜0.05),而1～2周后的存活率较对照组未见显著性改善(100%vs82.4%,P＞0.05).肝功能的检测显示:与对照组比较,实验组在细胞移植后血清ALB明显升高(P＜0.05),ALT和AST均有显著性降低(P＜0.05),但两组的TBIL水平的变化并无统计学意义(P＞0.05).组织病理学评分的结果显示:与对照组比较,BMSCs移植到受损肝脏后可显著减轻肝脏坏死程度及刺激肝细胞再生进而发挥强大的抗坏死作用(P＜0.001).结论 同种异体BMSCs移植可加速修复D-Gal诱导的兔严重急性肝损伤.BMSCs直接肝内注射移植为实验动物模型简单实用的移植方式.     

自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔急性肝损伤模型的治疗效果,了解促肝细胞生长素(pHGF)在干细胞移植治疗中的协同作用.方法 新西兰雄性大白兔15只,皮下注射50%CCl4橄榄油溶液0.8 ml/kg连续4 d制作急性肝损伤模型.模型动物随机分为实验组A(干细胞移植组),实验组B(干细胞移植+pHGF组)和对照组(各5只).实验组经兔双侧胫骨抽取骨髓约5 ml,采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞,制成5 ml细胞悬液,透视下经股动脉插管将骨髓干细胞经肝动脉注入肝脏,对照组注人生理盐水.实验组B在干细胞移植后隔日静脉注射pHGF 2.0 mg/kg共20 d.干细胞移植后2、4、8周抽血进行肝功能检测,8周后取兔肝脏组织标本进行病理学观察.结果 骨髓干细胞肝动脉移植后肝功能逐渐改善,至移植后8周,各组血清AST、ALT活性和TBIL、ALB含量均显著低于术前指标,而球蛋白含量高于术前(P均<0.05),而且各组之间仍有明显差异.病理组织学观察显示实验组肝纤维组织增生程度和肝细胞变性较对照组明显减轻.免疫组化染色可见肝组织内散在分布有CD34阳性肝样细胞,实验组A较对照组多,实验组B最多.结论 自体骨髓干细胞经肝动脉移植对肝损伤有明显治疗作用,可改善肝功能,促进肝组织结构重建,抑制纤维组织增生;pHGF能加速肝组织的修复和肝功能的改善.     

骨髓干细胞移植对急性肝功能损伤大鼠治疗的实验研究

目的：研究不同的骨髓干细胞移植途径对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。方法：采用四氯化碳注射方法,建立大鼠急性肝损伤模型,观察门静脉移植和肝实质内移植干细胞两种方式对急性肝功能损伤大鼠的治疗作用。结果：对于药物致急性肝损伤大鼠,干细胞移植后3周,两种方式的移植组血清白蛋白水平均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且肝实质内移植组明显高于门静脉移植组（P〈0.05）;肝实质内移植组血清谷丙转氨酶明显高于门静脉移植组（P〈0.01）。结论：骨髓干细胞移植可以促进急性肝损伤大鼠血清白蛋白恢复;肝实质内移植骨髓干细胞易引起肝脏损害。     

炎症在对乙酰氨基酚肝毒性中的双重作用

对乙酰氨基酚（acetaminophen,APAP）毒性是发达国家药物引起的急性肝衰竭的主要原因。大量肝细胞坏死是APAP肝毒性的主要特征,损伤肝细胞的再生是至关重要的,许多因素会影响肝脏修复。炎症在APAP过量导致肝损伤后再生中起着重要作用,但其机制仍不清楚。目前,通常认为炎症是引起肝组织损伤的主要原因,然而证据表明炎症在早期阶段导致肝损伤,但在后期阶段可以促进肝脏再生。核因子-κB（nuclear factor kappa B ,NF-κB）是APAP肝损害的一个重要炎性调节因子,然而NF-κB活性增加与肝损伤后期阶段的肝脏再生有密切关系。肿瘤坏死因子 α作为一种早期炎性细胞因子,也同APAP肝损伤后肝脏再生相关。炎症在APAP肝损伤中起着双重作用,即参与了早期肝损伤过程又参与了后期的肝脏再生过程。     

大鼠间充质干细胞超顺磁性氧化铁标记和经脾移植后的MR示踪研究

目的磁粒子标记骨髓间充质干细胞,同种异体移植入急性肝损伤大鼠脾脏,应用1·5TMR仪进行活体成像,为干细胞移植并无创示踪提供实验依据。方法制备Fe2O3-多聚左旋赖氨酸(PLL),标记分离纯化后的大鼠骨髓间充质干细胞(bonemesenchymalstemcells,BMSCs),普鲁士蓝染色显示细胞内铁。12只急性肝损伤大鼠分成实验和对照两组,将标记细胞(实验组,n=6)和未标记细胞(对照组,n=6)同种异体移植入大鼠脾脏,在移植前、移植后3h及3、7、14d应用MR的T2W对肝脏进行活体成像,测量肝脏信噪比(signal-to-noiseratio,SNR),并与肝脏组织切片普鲁士蓝染色对照。结果BMSCs的Fe2O3-PLL标记率近100%,普鲁士蓝染色显示蓝色铁颗粒位于BMSCs胞质内。实验组和对照组注射前、注射后3h及3、7、14d肝脏的SNR分别为19·53±2·30,3·28±1·06,7·34±2·10,10·25±3·96,15·50±3·73;20·20±4·35,21·20±4·43,19·13±2·80,21·43±5·45,19·07±4·80。与注射前比较,实验组3h及3、7d肝脏的SNR下降,差异具有统计学意义(Dunnett检验,t值分别为16·25,12·19,9·29,P值均<0·05),14d时SNR虽仍较低,但差异无统计学意义(Dunnett检验,t=4·03,P>0·05)。对照组移植后各时间点与移植前比较,SNR改变差异无统计学意义(方差分析,F=0·187,P>0·05)。组织学示普鲁士蓝阳性细胞主要分布于肝小叶中央静脉周围病变区。结论Fe2O3-PLL可以有效标记大鼠BMSCs,临床应用型1·5TMR仪可对磁粒子标记的BMSCs经脾植入后进行活体示踪。     

磁标记干细胞肝移植的MR活体示踪研究进展

肝脏干细胞移植不但可以替代坏死的组织,还可刺激受体组织再生以达自身修复;此外,通过体外基因修饰肝脏干细胞,再移植给相应基因缺陷的受体肝脏以分化为具有正常功能的肝细胞,可以治疗肝脏代谢疾病.目前人骨髓干细胞自体移植技术已应用于临床终末期肝病的治疗,而且取得了较好的疗效.     

输注自体骨髓问充质干细胞对小型猪异基因移植肝的保护作用研究

目的 观察经门静脉输注的自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植肝脏中的分布情况和对移植肝脏的保护作用. 方法 版纳小型猪(供体)和西藏小型猪(受体)各16只配对行肝移植.受体随机分成对照组和处理组,每组8只.对照组只做原位肝移植,处理组在原位肝移植的基础上于术中经门静脉注射1×10 9个预先经BrdU标记的受体自身BMSCs,术后第3、7、10天静脉采血榆测肝功能,术后检测标记的间充质干细胞在肝脏局部的分布状况,同时检测其在脾、肺组织中的分布状况.结果 BrdU标记的间充质干细胞主要聚集在移植的肝脏中,脾、肺组织中几乎没有分布.术前两组血清谷氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)比较无明显差异(P＞0.05),术后处理组受体血清中AST和ALT总体水平明显低于对照组(P＜0.01).术后第7天,处理组肝组织轻度淤血,血管周围有少量炎性细胞浸润,肝细胞点状坏死,中性粒细胞浸润.而对照组术后第3天,移植的肝脏中可见汇管区大量炎症细胞聚集、肝细胞浑浊、气球样变性,并出现不同程度的点状、灶状坏死. 结论 肝移植术导致移植肝脏的微环境变化,BrdU标记受体自身BMSCs在肝组织中聚集分布,对移植肝脏有保护作用.     

胎肝细胞输注移植联合运动对阻塞性黄疸大鼠肝损伤修复与再生的影响

目的:观察胎肝细胞输注移植联合中等强度有氧运动干预对大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤的修复与再生的影响。方法:40只SD大鼠随机分为假手术、阻塞性黄疸致肝损伤、胎肝细胞及胎肝细胞联合运动干预4组,后3组均采用改良的胆总管结扎法构建大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤模型。自孕龄12～16天的SD孕鼠胚胎中提取肝脏组织,加工制备胎肝细胞。两胎肝细胞组于模型构建过程中的胆总管结扎后进行胎肝细胞肝门静脉输注移植。运动组进行坡度5%、速度16.8 m/min、每天45 min、每周5天、共12周的中等强度跑台训练。12周后大鼠禁食过夜,随后分离出肝组织并取材,应用HE染色法观察大鼠肝细胞形态;生物化学法测定血清总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量;免疫组化技术检测肝组织表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、多药耐药蛋白(MPR2)的蛋白表达;RT-PCR技术检测EGF、FXR、MRP2 mRNA表达。结果:假手术组肝细胞形态结构正常,阻塞性黄疸致肝损伤组可见肝细胞广泛空泡样变性、片状坏死,胎肝细胞组肝细胞少量点状坏死,胎肝细胞联合运动组肝细胞未见明显坏死。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠血清TBIL、AST、ALT含量显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠HGF、EGF阳性表达显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.01),而MRP2阳性表达显著高于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠EGF mRNA表达显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.01),而MRP2、FXR mRNA含量表达显著高于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。结论:胎肝细胞肝门静脉输注移植以及胎肝细胞肝门静脉输注移植联合中等强度有氧运动对阻塞性黄疸导致的重症肝损伤有明显的修复与再生作用,其机制可能是通过促进肝细胞再生相关因子的表达和肝细胞的增殖,从而发挥修复与再生作用。     

骨髓间充质干细胞对大鼠急性放射性肝损伤修复的研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠急性放射性肝损伤的修复作用。方法 雌性SD大鼠12只,肝右叶接受单次6MVX射线20Gy照射,建立急性放射性肝损伤模型;随机分成2组,干预组注射雄性大鼠BMSCs悬液,对照组注射等量生理盐水。4周后观察大鼠肝组织的病理形态学改变,采用原位杂交技术检测肝脏中性别决定基因Y(SRY)及免疫组织化学技术检测ɑ-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)的阳性表达。结果 两组大鼠肝右叶组织中均可见汇管区炎性反应及肝实质细胞的损伤,但干预组的损伤程度比对照组轻。干预组大鼠肝右叶中检测到的SRY阳性细胞多于肝左叶(t=3.77,P＜0.05),ɑ-SMA的阳性表达率低于对照组(t=2.25,P＜0.05)。结论 单次20Gy照射可以造成大鼠肝右叶急性放射性损伤;SRY阳性细胞可以被征募到大鼠的放射性肝损伤部位,在一定程度上可能减轻放射性肝纤维化的发生。     

兔超早期激素性股骨头坏死模型制作及综合评价

目的制作兔超早期激素性股骨头坏死模型,同时进行影像学和病理学综合评价。方法30只新西兰大耳白兔随机分成2组：实验组20只,于臀肌注射甲泼尼龙20mg,／kg,共3次,每次间隔24h。对照组10只,与实验组相同时间点用同样方法注射等量生理盐水。在造模后第7、14、21、28、35天分别对模型实验组随机4只兔、对照组随机2只兔进行数字X线摄影（DR）、CT、磁共振成像（MRI）检查及病理学观察。结果所有动物股骨头DR、CT、常规MRI检查及大体病理均无异常改变;造模后14d开始模型实验组股骨头出现异常病理改变,主要表现为空骨陷窝增多,骨髓脂肪细胞肥大;21～35d,上述病理改变更为明显。实验组21d后股骨头MRI的短时间反转恢复序列（srnR）开始出现点片状高信号。结论通过肌肉注射激素制作兔超早期股骨头坏死模型成功率高,操作简单,可用于超早期股骨头坏死的影像学研究;MRI的STIR序列是超早期诊断股骨头坏死的敏感检查方法。     

经颈静脉肝穿刺活检术在弥漫性肝病中的临床应用价值

目的:探讨经颈静脉肝穿刺活检术(TJLB)在弥漫性肝病中的临床应用价值.方法:回顾性分析2019年6月-2020年11月在我院接受TJLB的35例弥漫性肝病患者的病例资料,对一般资料、技术成功率、组织学标本充分性、手术操作时间、穿刺次数、并发症发生率等情况进行分析.结果:10例凝血酶原时间延长>6 s,25例国际标准化...     

Functional liver imaging with 99Tcm-galactosyl-neoglycoalbumin (NGA) in alcoholic liver cirrhosis and liver fibrosis

Synthesis of 99Tcm-galactosyl-neoglycoalbumin (99Tcm-NGA), a recently described new radioligand with high specificity for hepatic binding protein (HBP), a galactose-residue specific receptor on hepatocytes, was carried out by covalent coupling of 2-imino-2-methoxyethyl-1-thio-beta-D-galactopyranoside to the primary amino groups of human serum albumin. NGA was purified by ultrafiltration and size exclusion high-pressure liquid chromatography (HPLC). Using a computer-based simulation program, time-activity data for the liver and precordium, blood radioactivity 2 min after i.v. injection of the radioligand, the association constant of 99Tcm-NGA-binding to HBP measured on human liver biopsies in vitro, and other patient-related parameters were put into a five-state non-linear model describing the pharmacokinetics of 99Tcm-NGA. By fitting the parameters of the model iteratively to the experimental data, an estimate of HBP concentration in the liver and of total liver blood flow was obtained. Using this model we studied 32 patients (53 +/- 11 years) with different clinical stages of alcoholic liver cirrhosis. Child B and Child C stage cirrhotic patients had a lower HBP concentration in the liver compared to control individuals (0.96 +/- 0.21 mumol l-1). The group with the most advanced cirrhosis (Child C stage) had a significantly lower HBP concentration (0.27 +/- 0.15 mumol l-1) than Child A patients (0.66 +/- 0.21 mumol l-1; P less than 0.01) and Child B patients (0.53 +/- 0.18 mumol l-1; P less than 0.05). In four patients with biopsy-proven liver fibrosis (0.84 +/- 0.20 mumol l-1) no difference in receptor concentration from normal individuals was estimated. Changes in liver blood flow were not significant between the groups. A direct comparison of HBP concentration estimated in vivo by 99Tcm-NGA functional imaging and HBP concentration measured in vitro on a surgically removed liver biopsy specimen from the same patient with a normal liver and liver cirrhosis showed good matching of these two values. The results suggest that in vivo estimation of HBP concentration in the liver by 99Tcm-NGA functional imaging might be a suitable method for determining liver cell mass.     

肝组织活检诊断为药物性肝损伤的肝功能异常患者临床特征分析

 目的 分析179例肝组织活检诊断药物性肝损伤的肝功能异常患者临床特征。方法 回顾性分析2010-01至2015-01解放军总医院第五医学中心收治的符合条件的诊断为肝功能异常且可排除甲乙丙戊型病毒性肝炎、EB病毒及CMV病毒性感染、自身免疫性肝病、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病,以及遗传代谢性肝病导致的肝损伤病例179例。依据肝组织活检病理结果将病例分为急性/亚急性组和慢性组,分析两组间临床特征及病理表现差异。结果 在发病类型方面,急性/亚急性肝损伤以青年为主(64.3%),而对于慢性肝损伤以老年为主(53.7%),差异具有统计学意义(P＜0.05)。临床症状表现中,乏力、肝区不适、发热、皮肤瘙痒方面,两组之间相比差异无统计学意义;而急性/亚急性组中纳差(50.0% vs 30.9%)和尿黄(58.9% vs 35.0%)症状较慢性组更明显(P＜0.05)。肝功能生化检测指标方面,急性/亚急性组在ALT、AST、TBIL、DBIL方面明显高于慢性组,有统计学差异(P＜0.01),但两组在ALP、GGT、ANA的分布比例无统计学差异。急性/亚急性组与慢性组药物性肝损伤的病理表现不同,两组在胆汁淤积病理表现方面没有差异,而急性/亚急性组多见于混合型病理表现,慢性组多见肝细胞损伤病理表现。结论 老年人易发生慢性药物性肝损伤,并且多以肝细胞损伤病理表现为主,对于病因不明的反复肝功能异常老年患者,应警惕慢性药物性肝损伤的可能。     

Pitfalls in liver imaging

Localized, abnormal attenuation/intensity areas on unenhanced and/or enhanced study of CT/MR imaging do not necessarily correspond to tumors themselves or real tumor size. Pitfalls in the diagnosis of liver tumor are described dividing into enhanced study (vascular variants, vascular abnormalities, hyperplastic nodules, around the tumor, and miscellaneous) and unenhanced study (fatty change, focal spared area of diffuse fatty liver, and miscellaneous).     

Detection of focal liver lesions in cirrhotic liver using contrast-enhanced ultrasound

Patients with liver cirrhosis are at increased risk of hepatocellular carcinoma (HCC). Conventional or baseline ultrasound (BUS) is often used as the first-line tool for HCC surveillance or detection, but the accuracy of BUS in HCC detection or differentiation from other focal liver lesions (FLLs) is limited. Contrast-enhanced ultrasound (CEUS) represents a recent revolution in the field of ultrasonography and it has become increasingly important in the detection and evaluation of FLLs. In CEUS, HCC typically exhibits arterial hyper-enhancement and portal-venous washout represented by hypo-enhanced lesions in the portal venous and late phases. The detection rate of HCC was significantly higher with CEUS compared with BUS. Even regenerative or some dysplastic nodules may exhibit arterial hyper-enhancement as they are differentiated from HCC by its iso-enhancing pattern in portal and late phases. The contrast-enhancement patterns of other different types of benign and malignant FLLs, as well as their detection rates with CEUS, were also discussed.     

肝脏肿瘤和正常肝组织CT灌注参数的可重复性研究

目的评估肝脏肿瘤和正常肝组织CT灌注的可重复性,以及呼吸运动和数据采集时间对参数可重复性的影响。材料与方法本前瞻性研究获得伦理委员会批准和受试者知情同意。本研究符合HIPAA要求。7例有肝脏肿瘤的病人间隔2～7d分别进行两次CT灌注扫描,每次检查有2个     

Real-time contrast-enhanced ultrasound imaging of focal liver lesions in fatty liver

PurposeThe objective of this study was to investigate the contrast-enhanced ultrasound (CEUS) imaging features of focal liver lesions (FLLs) in fatty liver.MethodOne hundred FLLs in 98 patients with fatty liver were evaluated with real-time CEUS.ResultsAll malignant FLLs showed hyperenhancement in arterial phase and contrast washout in portal and late phases. Among the FLLs, 3.3% of hemangiomas, 12.5% of focal nodular hyperplasias (FNHs), and 2.5% of focal fatty sparing lesions showed contrast washout in the late phase. The sensitivity and specificity for the characterization of hepatocellular carcinoma, metastasis, hemangioma, FNH, and focal fatty sparing lesions were 100% and 95.6%, 60% and 100%, 93.3% and 98.6%, 87.5% and 97.8%, and 92.6% and 100%, respectively.ConclusionsCorrect characterization of FLLs in fatty liver by CEUS is possible based on their typical enhancement patterns.