贮藏期苹果轮纹病拮抗菌的筛选研究

以苹果、姜、蒜为试材,采用对峙培养法研究了健康苹果果实、姜、蒜内的可培养内生细菌和健康苹果植株根际土壤微生物对苹果轮纹病的拮抗作用。结果表明:根际土壤中分离到可培养细菌9种,姜、蒜、苹果内分别分离到可培养菌株5种、3种和1种;对分离到的微生物进行拮抗性测定,除土2对苹果轮纹病菌菌丝生长无抑制效果外,其余菌株都对苹果轮纹病菌有抑菌效果,且从根际土壤中分离到的微生物对苹果轮纹病菌具有拮抗性的所占比例较大,为44.4%;其次为姜和蒜,所占比例分别为27.8%和16.7%。所有菌株中除蒜12,土1和土5与对照比较抑菌效果差异不显著外,其余菌株抑菌效果差异都显著。所有菌株中抑制效果最好的为姜4,其真菌菌落直径只有(30.78±0.49)mm,其次为土4,真菌菌落直径为(35.12±0.13)mm。     

拮抗细菌BMY-1菌株对几种水果储藏病原真菌的抑制作用

采用平板对峙培养法测定从土壤中分离获得的拮抗细菌BMY-1菌株对柑桔绿霉病菌（Penicillium digatatum）、柑桔青霉病菌（Penicillium italicum）、苹果炭疽病菌（Glomerella cingulata）、苹果轮纹病菌（Physalospora piricola）、梨扩展青霉病菌（Penicillium expansum）、葡萄白腐病菌（Coniothyrium dlodiella）等6种水果产后病原真菌的抑制作用。结果表明，BMY-1菌株对苹果炭疽病菌（G.cingulata）和梨扩展青霉菌（P．expansum）的生长有较好的作用，抑菌率分别达48．43％和50．37％。采用液体共培养法观察到BMY-1菌株对病原真菌的菌丝有破坏作用，使苹果炭疽病菌菌丝扭曲和断裂，葡萄白腐病菌菌丝膨大畸形。对几种水果同时接种拮抗细菌BMY-1和病原真菌，BMY-1菌株对苹果炭疽病病斑和梨扩青病病斑扩展有较强的抑制作用，并能有效延迟葡萄白腐病发病时间。     

哈密瓜枯萎病细菌拮抗试验

从哈密瓜根际土壤中分离出多种细菌,通过试验室拮抗试验和日光温室大田试验来筛选具有较好拮抗效果的品种,为哈密瓜枯萎病生物防治提供初步的参考。从根际土壤中分离得到的125个菌株中,对哈密瓜枯萎病菌具有拮抗效果的有18种,将这18种进行复筛,得到6个菌株进行大田防治试验,其中S-1、H-10和K-16的发酵液对哈密瓜枯萎病防治效果良好,防效分别为82.3%、81.5%和79.6%;而这3株菌株发酵液防治后的病情指数分别为16.8、21.2和24.5,均具有较好防治效果和抗病能力。     

哈密瓜枯萎病细菌拮抗试验简

从哈密瓜根际土壤中分离出多种细菌,通过试验室拮抗试验和日光温室大田试验来筛选具有较好拮抗效果的品种,为哈密瓜枯萎病生物防治提供初步的参考。从根际土壤中分离得到的125个菌株中,对哈密瓜枯萎病菌具有拮抗效果的有18种,将这18种进行复筛,得到6个菌株进行大田防治试验,其中S-1、H-10和K-16的发酵液对哈密瓜枯萎病防治效果良好,防效分别为82.3%、81.5%和79.6%;而这3株菌株发酵液防治后的病情指数分别为16.8、21.2和24.5,均具有较好防治效果和抗病能力。     

梨轮纹病拮抗细菌的筛选与评价

采集南京、连云港、高邮3地梨园病叶、病果、健叶、健果、病枝、健枝和土壤样本90份,分离纯化后得到871个细菌分离物,对其进行梨轮纹病菌菌丝生长的皿内抑制试验,共获得21株拮抗能力较强的细菌,其中拮抗性能最好的细菌sf 628抑菌圈直径达45 mm,抑制率达59.21%。梨果接种试验结果表明,21株拮抗能力较强的细菌中有5株拮抗细菌对梨轮纹病菌引起的病斑扩展抑制率大于50%,其中菌株sf 628抑制率达60.61%。进一步的理化特性和分子鉴定结果表明,菌株sf 628为枯草芽孢杆菌枯草亚种。     

辣椒疫病拮抗菌的分离、筛选与评价

从67份不同土样中分离得到382株细菌、264株放线分离物,通过平板时峙培养,筛选出拮抗辣椒疫霉的株,其中放线的比例较高,为44.1%;而细菌所占比例则较低,仅为8.5%.测定了抑活性较强的26株株对6种植物病原真的拮抗作用及盆栽控病效果.试验结果表明,拮抗B-YD4-6,A-NP6-7和A-GD5-2对6种植物病原真菌均有抑作用.且抑能力较强,抑圈直径为22.0～26.0 mm,抑制率达45.18%～55.56%;且该3株拮抗株对辣椒疫病的防治效果较好,21 d后的防治效果分别为65.5%,67.4%,64.5%.     

果树真菌病害拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗机制初探

【目的】分离获得对果树真菌病害[苹果轮纹病(Botryospuaeria dothidea)、苹果斑点落叶病(Alternaria alternaria)、葡萄炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、葡萄白腐病(Coniella diplodiella)和葡萄霜霉病(Plasmopara viticola)]具有明显拮抗作用的菌株,初步研究其作用机制,为果树真菌病害的生物防治提供潜在的材料菌株。【方法】从不同植物上分离内生菌,采用平板对峙法、菌落生长速率法及叶盘法等试验筛选拮抗菌;根据菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析、gyrA基因序列分析等对其进行鉴定;通过测定拮抗菌发酵液对温度、pH值的敏感度分析拮抗物质的稳定性;通过测定拮抗菌发酵液对菌丝的影响,初步分析其拮抗机制。【结果】从不同植物根、茎、叶中共分离得到58株细菌,其中编号为YTB1407的细菌菌株对上述5种植物病原真菌有较好的拮抗作用,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,且该菌株发酵液的拮抗活性在温度为20~100℃、pH为2.0~10.0,比较稳定。经该菌株发酵液处理后的病原菌菌丝畸形。【结论】该拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens;温度和pH值对该菌株拮抗物质活性影响不大;该拮抗菌株可以通过影响病原菌菌丝正常生长发挥其拮抗作用。     

梨树腐烂病拮抗真菌JK2的分离和鉴定

【目的】分离鉴定对梨树腐烂病具有拮抗活性的内生真菌,为梨树腐烂病生物防治提供新的资源菌。【方法】利用组织分离法从梨树腐烂病发病枝条中分离内生菌,通过平板对峙实验筛选对梨树腐烂病菌具有拮抗作用的菌株。结合形态学和分子生物学手段,分析和确定拮抗菌株的种属。利用离体梨树枝条鉴定拮抗内生真菌对腐烂病的防治效果。【结果】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株对梨树腐烂病菌具有强烈拮抗活性的菌株JK2,抑制率超过95%。JK2上清液对梨树腐烂病菌同样具有抑制活性。经鉴定,菌株JK2为青霉属产紫青霉。离体梨树枝条鉴定结果显示,JK2对梨树腐烂病具有良好的防治效果。【结论】从梨树腐烂病发病枝条中分离获得一株具有拮抗活性的内生真菌JK2,该菌株是一株新的梨树腐烂病生防菌资源,具有潜在的应用价值。     

化学药剂敌力脱与拮抗细菌协同作用防治梨轮纹病研究

从南京、连云港、高邮三地的梨园采样,分离得到梨轮纹病病原菌25株及871个细菌分离物,25株病原菌致病性分化测定结果表明菌株N-BG-L5的致病力最强;871细菌分离物拮抗能力试验结果表明,拮抗细菌sf628对梨轮纹病菌菌丝生长具有很强的抑制性,抑菌圈直径达45mm。常见26种化学药剂对梨轮纹病菌的室内毒力测定结果表明,25%敌力脱能有效抑制梨轮纹病菌菌丝生长,EC50值为0.1522mg·L-1。将拮抗细菌sf628与25%敌力脱进行复配,结果表明配比为1∶3、1∶2、1∶1、2∶1时增效比均大于1.5,2种单剂复配后有增效作用。其中配比为1∶3时对梨轮纹病菌的毒力最强,增效比为2.942。拮抗细菌sf628与25%敌力脱配比为3∶1时,增效比为1.071,2种单剂复配后有相加作用。     

柑桔溃疡病拮抗芽孢菌株的筛选及其控病作用

从贛州脐橙园脐橙根际土壤中获得192个细菌分离物,通过平板拮抗测试,筛选出对柑桔溃疡病菌Xanthomonas axonopodis pv.citri有较强拮抗作用的6个芽孢菌株,抑菌圈直径达12.0～25.0mm,其中菌株G32对柑桔溃疡病菌抑制效果最好,稳定性高;温室控病试验表明,菌株G32的控病效果最佳,接种溃疡病菌前喷施拮抗菌G32的预防效果达60.7%,接种溃疡病菌后喷施拮抗菌G32的治疗效果为53.2%;根据其形态特征、培养性状、生理生化特性及16SrDNA序列比对分析,将G32鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。     

‘长富2号’苹果果实类黄酮组成和含量研究

采用反相高效液相色谱法对‘长富2号’苹果果皮和果肉中的类黄酮进行了测定,并对6个产地‘长富2号’苹果的类黄酮组成与含量进行了比较研究。结果表明:果皮含4类16种类黄酮,总含量810.12～1304.59mg·kg-(1黄酮醇占58.3%～73.1%);果肉含3类11种类黄酮,总含量79.87～124.88mg·kg-1(黄烷醇占67.5%～85.5%);果肉中各种类黄酮含量均很低,特别是黄酮醇,含量仅为果皮的0.1%～3.1%;6个产地‘长富2号’苹果所含类黄酮种类完全相同,产地间果皮黄酮醇液相色谱指纹图谱相似度高达0.922～0.990;不同产地间类黄酮含量多有明显差异(P0.05),陕西白水样品果皮中类黄酮含量最高而果肉中最低,河北昌黎样品果皮类黄酮含量最低,山东牟平样品果肉类黄酮含量最高;平均单果含类黄酮35.14mg,其中,果皮类黄酮占41.3%,果肉类黄酮占58.7%。     

晚熟苹果新品种‘岳苹’

‘岳苹’是以‘寒富’ב岳帅’杂交选育而成的晚熟苹果新品种。果实圆锥形,平均单果质量295g,大果545g。果实鲜红色,果面光洁。果肉黄白色,松脆、中粗,汁液多,风味酸甜、微香,硬度11.2kg·cm-2,可溶性固形物15.3%,可溶性糖12.49%,可滴定酸0.22%,维生素C0.052mg·g-1。S基因型为S1S2。果实发育期165d左右,营养生长期220d。丰产,稳产,耐贮藏,抗寒,抗苹果轮纹病。     

MdMYB10对苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响

MdMYB10对苹果果皮花青苷合成起重要作用,但对苯丙氨酸代谢途径中其他酚类物质合成是否起作用尚不清楚。从‘粉红女士’苹果（Malus ? domestica‘Pink Lady’）果皮中克隆了MdMYB10,分别构建其过表达载体pCAMBIA2301-MdMYB10和沉默载体pTRV2-MdMYB10,在套袋苹果果皮下注射农杆菌诱导MdMYB10过表达和沉默,分析MdMYB10对解袋后苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响。结果表明,在过表达MdMYB10的果皮组织中,MdMYB10表达量上调了19.62倍,MdPAL、MdCHS、MdF3H、MdDFR、MdANS、MdUFGT、MdFLS、MdANR均有不同程度的上调,只有MdLAR无显著变化;沉默MdMYB10的果皮组织中,MdMYB10表达量降低了87%;MdCHS、MdF3H、MdDFR、MdANS和MdUFGT均有不同程度的下调,其中MdANS和MdUFGT下调最多,分别下调83%和82%。在过表达MdMYB10的果皮中,花青苷含量升高了3.05倍,槲皮素–3–O–半乳糖苷、表儿茶素、原花青素B2、绿原酸、对香豆酸含量均有不同程度升高,根皮苷含量无明显变化;在沉默MdMYB10的果皮中,花青苷含量降低了83%,槲皮素–3–O–半乳糖苷和表儿茶素含量分别降低58%和52%,原花青素B2、根皮苷含量无明显变化,而绿原酸含量升高了24%,对香豆酸含量升高了21%。可见,MdMYB10不仅调控苹果果皮中花青苷合成,同时还调控苯丙氨酸代谢中绿原酸、对香豆酸、槲皮素–3–O–半乳糖苷、表儿茶素和原花青素B2等物质的合成,但对根皮苷的形成作用不明显。     

苹果抗轮纹病机制研究进展

在中国引起苹果轮纹病的病原菌为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea），其主要通过自然孔口直接侵染苹果，并分泌细胞降解酶等使苹果组织降解以促进病菌的进一步侵染，而苹果可通过增强细胞壁的木质化、释放抗菌化合物以及产生免疫蛋白等抑制病菌。通过对苹果轮纹病的危害及病原菌种类、病菌侵染机制、苹果的抗性机制等方面的详细综述，为有效防治苹果轮纹病提供理论依据。     

苹果种质资源果实轮纹病抗性的评价

利用5个不同来源的苹果轮纹病菌株,对279份苹果种质资源的果实抗病性进行室内接种鉴定。结果表明：不同种质资源在果实的发病率、潜伏期和病斑大小上均存在极显著差异;同一种质资源分别接种5种轮纹病菌,在发病率、潜伏期和病斑大小上也存在显著差异。对抗病性指标进行相关性分析,多数菌株的各个抗病指标间都存在显著相关性。通过综合抗性筛选,发现‘珍宝’、‘金沙依拉姆’和‘红玉’为高抗材料;‘詹姆斯格里斯’、‘红夏’‘耍红’、‘伊朗桃苹’‘超等蔷薇’和‘极早红’为高感材料。     

黄色苹果新品种‘华月’

‘华月’苹果是以‘金冠’为母本,‘华富’为父本杂交育成的新品种。果实圆柱形,平均单果质量230g;果皮黄色,阳面带红晕;果肉肉质,似‘富士’风味。晚熟,抗寒,高抗苹果早期落叶病、果实轮纹病。     

苹果霉心病病原研究

１９８９－１９９３年，在甘肃苹果产区采集红星或元帅品种病果和无症状果实，逐果取果心组织分离，获得３０余个真菌分离物，以链格抱（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）出现率最高，占５１．３％；其次为粉红单端孢（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｓｅｕｍ）、棒盘孢（Ｃｏｒｙｍｅｕｍｓｐ．）、节孢状镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍａｒｔｈｒｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）、狭截盘多毛孢（Ｔｒｕｎｃａｔｅｌｌａａｎｇｕｓｔａｔａ）等，依次占１１．８％、１２．０％、８．９％、７．９％。每个单果大多是只能分离出一种菌，少数出现２一３种菌。不同症状的果实，出现的真菌种类不同，霉心果以链格孢出现率最高，占６０％－８０％；心腐果中链格孢出现率显著较少，占１０％－３０％；而粉红单端孢、节孢状镰刀菌、棒盘孢、狭截盘多毛孢等５种菌的出现率较高，占７．８％－２５．５％。用果心不带菌的果实人工接种，对１２种分离物进行致病性测定看出，不同菌株之间致病力有明显差异，致心腐的病菌主要有５种，分别是粉红单端孢、棒盘孢、节孢状镰刀菌、狭截盘多毛孢和一种不产孢的浅色丝状菌。链格孢主要致霉心症状。混合接种试验表明，如有几种真菌进入果心，则致病性强的一种首先占据优势，?     

超表达MdFLS2的拟南芥fls2突变体识别细菌鞭毛蛋白,提高对轮纹病菌的抗性

以红肉苹果‘紫红3号’愈伤组织为试材,克隆了细菌鞭毛蛋白受体基因MdFSL2,研究了其与拟南芥AtFLS2对细菌鞭毛蛋白敏感性差异以及对苹果轮纹病抗性的影响。进化树分析表明,MdFLS2与拟南芥AtFLS2亲缘关系较远,处于不同的进化树分支,与梨PbFLS2的亲缘关系最近。时空表达特异性研究表明,在苹果叶片中MdFLS2表达不随组织衰老而产生差异,能够被外源SA处理诱导,不受IAA、ACC处理影响;在根系中表达量最高,而在花与果实中表达量较低。在拟南芥中异源过表达MdFLS2,显著抑制植株生长,并出现叶片边缘枯死或细胞死亡的表型。在转基因拟南芥中受SA诱导的病程相关基因AtPR1、AtPR2和AtPR5,及衰老相关基因AtORE1和AtNAP的表达水平均显著高于野生型。为研究MdFLS2是否具有感知细菌鞭毛蛋白的能力,进行拟南芥根系生长抑制试验,MdFLS2超表达恢复了细菌鞭毛蛋白N端22个保守氨基酸肽段(flg22)对拟南芥fls2突变体根系生长的抑制作用,但flg22分别处理30和60 min,或20和40 min,flg22诱导的标志性基因表达水平及MAPK激酶活化水平在过表达MdFLS2的fls2突变体中显著低于同样处理的野生型。超表达MdFLS2提高了拟南芥叶片对轮纹病菌的抗性,并增强了拟南芥突变体fls2对假单胞菌DC3000的抗性。研究结果说明苹果MdFLS2是一个有功能的免疫相关基因,MdFLS2与AtFLS2在具体执行功能与作用机制上可能存在差异。     

覆玉米秸对苹果枝干轮纹病的影响

通过对苹果园pH值,可溶性盐含量,腐殖质的含量,P、N含量等的分析,研究覆玉米秸对苹果枝干轮纹病的影响。结果表明:覆玉米秸可以降低土壤pH值、可溶性盐的含量,提高土壤腐殖质的含量,这些均有利提高苹果树对枝干轮纹病的抗性;而覆玉米秸降低P、N含量,还引起一些火灾、鼠害、病害,这些均加重了苹果枝干轮纹病的发生。     

微波提取苹果皮中多酚物质的工艺研究

多酚是一类重要的活性物质,具有抗氧化、清除自由基等生理活性功能,在食品、医药领域具有广阔的应用前景。苹果皮中含有丰富的多酚类物质,从苹果皮中提取多酚类物质,为苹果皮的后续处理提供了新的途径。本文研究了微波法提取苹果皮中多酚物质的工艺,通过单因素试验探讨了不同的乙醇浓度、料液比、提取时间、微波功率对苹果皮多酚物质提取效果的影响。通过正交试验得到最佳提取工艺为乙醇浓度60%,料液比为1：10,微波功率600W,提取时间为50s,此时多酚得率为0.28%。