当归注射液治疗再生障碍性贫血的实验研究

目的 :探讨当归注射液对再生障碍性贫血 (AA)小鼠骨髓造血功能的保护作用。方法 :雌性Balb/c小鼠 ,随机分为 5组。①正常对照组 ,未经特殊处理。②模型对照组 ,经60 Co 6 .0Gyγ 射线亚致死量全身照射 ,4d内由尾静脉输入取自DBA/ 2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞 ,制成AA模型 ,于制模当天给予腹腔注射无菌生理盐水 ,10ml·kg-1·d-1,连续 12d。③当归注射液小剂量组 ,于制模当天即给予当归注射液腹腔注射 2ml·kg-1·d-1,连续 12d。④当归注射液大剂量组 ,予当归注射液 10ml·kg-1·d-1,腹腔注射。⑤丙酸睾丸酮组 ,给予腹腔注射丙酸睾丸酮 10ml·kg-1·d-1。于第 12d每只小鼠称重后 ,采集尾静脉血测外周血白细胞计数 ,后断颈处死小鼠 ,取出双侧尺骨及股骨 ,冲出骨髓单个核细胞 ,计数。并行CD34+ 细胞检测及骨髓超微结构观察。结果 :与正常对照组比较 ,模型对照组造血细胞明显减少 ,骨髓微环境受损。当归注射液大剂量组能明显改善骨髓增生程度 ,修复骨髓微环境。结论 :当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生 ,改善骨髓微环境对AA小鼠进行保护作用。     

当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞周期蛋白D2表达的影响

目的:探讨当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血(AA)小鼠骨髓有核细胞增殖周期及其细胞周期蛋白D2表达的影响。方法:雌性Balb/c小鼠,随机分为3组:①正常对照组:未经特殊处理。②模型对照组:经60Co6Gyγ-射线亚致死量全身照射,4 h内由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺、淋巴结混合细胞,制成AA模型,于制模当天即给予腹腔注射无菌生理盐水,每天10 ml.kg-1,连续12 d。③当归注射液组:每天予当归注射液10 ml.kg-1,腹腔注射,连续12 d。于第12 d每只小鼠称重后,采集尾静脉血测外周血白细胞计数,后断颈处死小鼠,取出双侧尺骨及股骨,冲出骨髓单个核细胞,计数。并行组织学切片,粒单系祖细胞培养及骨髓有核细胞G0/G1期细胞百分率及细胞周期蛋白D2的检测。结果:与正常对照组比较,模型对照组造血细胞明显减少,粒单系祖细胞计数明显减低,骨髓有核细胞G0/G1期细胞百分率明显增加,而细胞周期蛋白D2表达水平明显降低,当归注射液组能增加骨髓单个核细胞计数及粒单系祖细胞计数,明显降低G0/G1期细胞百分率,提高细胞周期蛋白D2的表达水平。结论:当归注射液可能通过刺激细胞周期蛋白D2的表达促进造血细胞的增殖。     

当归多糖干预再生障碍性贫血模型小鼠线粒体功能异常机制研究

目的:研究当归多糖(ASP)对再生障碍性贫血(AA)模型小鼠线粒体功能异常的作用机制。方法:AA小鼠随机分为对照组、再障组和治疗组,再障组与治疗组通过~(60)Coγ、腹腔注射环磷酰胺和氯霉素造模后,分别用生理盐水或ASP喂养2周。透射电子显微镜观察骨髓的线粒体超微结构。从骨髓细胞中分离出Lin~-Sca-1~+c-Kit~+(LSK)细胞,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),并进行活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、细胞色素氧化酶(COX)和单胺氧化酶(MAO)的相关检测。结果:与对照组比较,再障组和治疗组骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es、LSK细胞中的线粒体数量减少,MMP降低。应用ASP干预后,骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es等数值相比再障组显著增加。ASP可以纠正LSK线粒体数量下降的趋势,ASP纠正AA模型小鼠异常的MAO和COX水平,并通过降低ROS和MDA,纠正异常的膜电位而改善线粒体的功能(P0.05或P0.01)。结论:ASP可能通过上调线粒体膜电位、改善线粒体膜稳定性,纠正AA干细胞的过度凋亡。     

抑肽酶对实验性急性肝损伤模型小鼠肝组织的保护作用

目的：观察抑肽酶对实验性急性肝损伤小鼠肝组织超微结构改变的影响,探讨其对肝组织的保护作用。方法：建立小鼠急性四氯化碳（CCl₄）肝损伤模型,分为正常对照组、模型组、甘利欣注射液组及抑肽酶小、中、大剂量组。各组小鼠取肝组织做超薄切片,醋酸双氧铀-柠檬酸铅双重染色,透射电镜下观察其肝组织超微结构的改变。结果： 模型组肝细胞呈肿胀状,肝细胞核呈固缩状,胞质内粗面内质网减少、线粒体固缩、基质空化。抑肽酶小剂量组个别细胞呈固缩状,肝细胞胞质内可见少量粗面内质网和溶酶体,胆小管腔内微绒毛消失。抑肽酶中剂量组肝细胞体积稍大,肝细胞核仁明显,胞质内粗面内质网和线粒体,可见大量糖原聚集,胆小管腔内微绒毛较多。抑肽酶大剂量组肝细胞结构接近正常对照组,细胞体积较大,细胞界限清楚,肝细胞核呈圆形,胞质内粗面内质网和线粒体丰富,可见糖原颗粒。甘利欣注射液组肝组织超微结构改变与抑肽酶中剂量组相似。结论： 腹腔注射抑肽酶对实验性小鼠急性肝损伤的肝组织超微结构具有明显的保护作用,随着抑肽酶剂量的增大肝组织超微结构改变明显减轻。     

左归补髓生血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓有核细胞凋亡的影响

目的 观察左归补髓生血方治疗小鼠再生障碍性贫血的疗效及其对骨髓中有核细胞凋亡的影响。方法 将40只SPF级ICR小鼠随机分正常组、模型组、西药组、中药组。采用二甲磺酸丁酯和环磷酰胺交替给药12 d的方法复制再生障碍性小鼠模型。观察外周血细胞计数以及骨髓组织形态学变化,采用TUNEL法检测各组小鼠骨髓中有核细胞凋亡。结果 与正常组比较,模型组小鼠外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显减低（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）;光镜下可见小鼠骨髓增生极度减少,红系、粒系、巨核细胞系均明显减少。与模型组比较,中药组以及西药组外周血红细胞、白细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显升高（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）;光镜下可见骨髓中造血组织比例增多。结论 左归补髓生血方可以有效升高再生障碍性贫血小鼠外周血细胞计数,抑制骨髓中有核细胞的凋亡。     

重组人骨形成蛋白成熟肽4对急性放射损伤小鼠造血系统的修复作用

目的探讨重组人骨形成蛋白成熟肽-4(rhBMP-4m)对~(60)Coγ射线照射引起的小鼠造血系统损伤的修复作用。方法 90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组和rhBMP-4m治疗组,每组30只。模型组和rhBMP-4m治疗组小鼠接受~(60)Coγ射线照射,照射剂量7 Gy,全身照射200 s;正常对照组小鼠不接受照射。模型组小鼠每日腹腔注射生理盐水1.0 mL,rhBMP-4m治疗组小鼠每日腹腔注射rhBMP-4m 0.5 mg,连续治疗6 d。分别于照射后第1、3、5、7、9天检测小鼠外周血白细胞数、骨髓单个核细胞数、骨髓单个核细胞中CD34~+细胞比例;照射后第9天进行脾结节计数,并计算脾脏质量与体质量的比值(脾体比)。结果照射后第1天3组小鼠外周血白细胞计数比较差异均无统计学意义(P>0.05);照射后第3、5、7、9天模型组小鼠外周血白细胞计数低于正常对照组(P<0.01);照射后第3、5天rhBMP-4m治疗组小鼠外周血白细胞计数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),照射后第7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠外周血白细胞计数高于模型组(P<0.05)。模型组小鼠照射后各时间点骨髓单个核细胞计数均低于正常对照组(P<0.01)。照射后第1、3天rhBMP-4m治疗组小鼠骨髓单个核细胞计数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),照射后第5、7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠骨髓单个核细胞计数高于模型组(P<0.05)。模型组小鼠照射后各时间点的单个核细胞中CD34~+细胞百分率均低于正常对照组(P<0.01)。rhBMP-4m治疗组小鼠照射后第1、3天单个核细胞中CD34~+细胞百分率与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05),照射后第5、7、9天rhBMP-4m治疗组小鼠单个核细胞中CD34~+细胞的百分率高于模型组(P<0.05)。照射后第9天,模型组小鼠脾结节计数高于正常对照组,脾体比低于正常对照组(P<0.05);rhBMP-4m治疗组小鼠脾结节计数和脾体比高于模型组(P<0.01)。结论辐射可引起小鼠骨髓造血系统损伤,rhBMP-4m能够促进骨髓造血系统的重建。     

伊木萨克片对异常黏液质型阳痿病证大鼠模型性腺轴调节作用的形态学研究

目的：研究伊木萨克片对异常黏液质阳痿病证大鼠性腺轴形态学的影响,探寻其对生殖激素调节作用的形态学基础。方法取90只性功能正常雄性 SD 大鼠,其中10只为正常对照组,余80只为造模组,采用芫荽实＋菠菜实＋湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型,20 w 后从证候模型中筛出阳痿病证模型,并将其分为病证模型组、药物干预组,干预2 w 后,观察下丘脑、垂体和睾丸形态学变化。结果（1）下丘脑：正常组组织结构与细胞形态完好。病证模型组基质疏松,呈网状结构,轻度水肿;超微结构可见,神经胶质细胞基质密度下降,核周隙增宽,线粒体水肿呈空泡样病变,内质网扩张,神经元核膜界线不清,线粒体基质密度下降,粗面内质网扩张。药物干预组得到一定程度修复。（2）垂体：正常组结构完好。病证模型组基质疏松,轻度水肿;超微结构可见,内质网明显扩张,线粒体普遍空泡样变。药物干预组细胞排列紧密,粗面内质网扩张减少,有一定修复。（3）睾丸：正常组结构完好。病证模型组可见生精小管明显变形,各级生精细胞数量明显减少,间质减少;超微结构显示,生精细胞数量减少且排列紊乱,可见有精原细胞、精母细胞核固缩,精子细胞界限模糊不清。药物干预组生精细胞数量明显增多,支持细胞增加,管腔内可见一定数量的精子。结论异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴形态学可发生明显改变,维药伊木萨克片有促进其修复的作用。     

甘草酸对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能的影响

目的:探讨甘草酸对免疫诱导再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血功能的影响,寻求治疗免疫诱导再障的方法。方法:BALB/c小鼠72只,适应性喂养1周后,随机分为实验组(64只)及正常对照组(8只)。实验组小鼠首先制造再障模型。将制模后小鼠再分为模型对照组(40只)及甘草酸组(24只)。将甘草酸组再分为低、中、高剂量组,每组8只,低、中、高剂量组小鼠每天经灌胃分别给予10、20、30mg/(kg.d)甘草酸,连续14 d,于第15天脱臼处死小鼠,分别检测血象、骨髓单个核细胞(BMNC)、CFU-GM、BFU-E,用原位末端标记法(TUNEL)测定胸腺淋巴结混合细胞、骨髓单个核细胞、外周血单个核细胞凋亡率。其余40只模型对照组小鼠每天经灌胃给予等体积生理盐水,并分别于第3、5、7、10、15天各处死一批次小鼠。8只正常对照组小鼠只给予等体积生理盐水。检测指标同上。结果:甘草酸组WBC、Hb、BMNC、CFU-GM、BFU-E明显高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),且具有剂量-效应关系。模型对照组骨髓单个核细胞凋亡率、胸腺淋巴结混合细胞凋亡率、外周血单个核细胞凋亡率均高于正常对照组(P<0.01)。甘草酸组骨髓单个核细胞凋亡率高于正常对照组(P<0.01)而低于模型对照组(P<0.01),外周血单个核细胞凋亡率高于正常对照组及模型对照组(P<0.05,P<0.01),胸腺淋巴结混合细胞凋亡率高于正常对照组(P<0.01)。结论:甘草酸通过促进成熟淋巴细胞凋亡而有助于免疫诱导再障小鼠骨髓造血功能的恢复。     

愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓细胞超微结构的影响

目的 探讨愈障汤对再生障碍性贫血大鼠骨髓细胞超微结构的影响及保护、修复作用。方法 将80只Wistar大鼠按随机区组法分为正常对照组、模型对照组、中药组和西药组。采用全身照射加腹腔注射药物法建立大鼠再降模型。分组处理后于实验第10,16天测定外周血及骨髓有核细胞数;透射电镜观察骨髓细胞线粒体超微结构。结果 电镜下,对照组造血细胞发育障碍,出现线粒体嵴模糊、嵴间腔消失、髓样变、空泡化等现象,血窦内皮细胞断裂。治疗组外周血象及骨髓细胞病理变化明显好于模型对照组。结论 愈障汤具有升高再障大鼠外周血各项指标,保护、修复骨髓造血细胞损伤,并促进细胞增殖、分化的作用。     

银耳孢糖对白细胞减少小鼠的升白细胞作用

目的：观察银耳孢糖(TSP)对环磷酰胺(CTX)和X射线所致白细胞减少小鼠的升高白细胞作用。方法：60只昆明种小鼠随机分为6组,每组10只：正常对照组、模型对照组、阳性对照组和TSP小、中和大剂量组。正常对照组未施加任何处理,其他5组腹腔注射CTX 100 mg•kg^-1或X射线照射,造成白细胞减少模型。正常对照组及模型对照组尾静脉注射氯化钠注射液,阳性药物组尾静脉注射苦参素注射液200 mg•kg^-1,药物组分别尾静脉注射 TSP 25、50和100 mg•kg^-1,共15 d;各组小鼠分别于第 1 次给予 CTX或X射线照射前和给予 CTX或X射线照射后3、6、9、12和15 d计数外周血白细胞数,取右侧完整股骨检查骨髓有核细胞数。结果：给予CTX或X射线照射后,各组白细胞数和骨髓有核细胞与正常对照组比较均明显下降（P<0.05）,与模型组比较,TSP 50、100 mg•kg^-1组白细胞和骨髓有核细胞数升高（P<0.05或P<0.01）。结论：TSP对CTX或X射线照射小鼠外周血白细胞减少具有明显的升白细胞作用。     

Effects of Ligustrazine on Hematopoiesis in the Early Phase of Bone Marrow Transplantation Mice

the National NaturalScience Foundation(Serial No.3 9870 92 6)sacrificed on the1 st,3rd,5 th,7th,1 0 th,1 5 th,and 2 1 st day after BMT.The marrow from fe-murs was flushed into RPMI- 1 640 medium. BM-NCs from each femur were counted.1 .2 .7Carbon- Mold Preparation of Blood Vessels　　 A colloidal carbon solution( prepared Chineseink,0 .2 ml,2 0 mg/ml in saline) was injected1 -2 min before sacrifice on the1 st,3rd,5 th,7th,1 0 th,1 5 th,2 1 st day after BMT.One femur ofeach mouse was r…     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

Enhancing Effects of Ligustrazine on Expression of CD31 and Hematopoietic Reconstitution in Syngenic Bone Marrow Transplantation of Mice

Summary： The effect of ligustrazine on the expression of CD31 in syngenic bone marrow transplantation （BMT） mice was studied. Fifty-six Balb/c mice were divided into 3 groups： normal control group. BMT control group, and ligustrazine treated group. Syngenic BMT mouse models were established according to the literatures. In BMT control group and the ligustrazine treated group, the mice were given respecxively orally 0.2 mL saline and 2 mg ligustrazine twice a day. On the 7th, 14th, and 21st day after BMT, the mice were killed. The expression of CD31 on the surface of bone marrow nuclear cells （BMNC） was detected by flow cytometry. Peripheral blood leukocytes, platelets and BMNC were counted. Histological observation of bone marrow was made. The results showed thai in ligustrazine treated group the peripheral blood leukocylcs, platelets and BMNC counts, and the expression of CD31 on the day 7, 14, 21 after BMT were higher than in BMTcontrol group （P〈0.01 or P〈0.05）. In conclusion, ligustrazine could obviously enhance the CD31 expression on the surface of BMNC after syngcnic BMT in mice, which may be one of the mecha- nisms underlying the ligustrazine accelerating hematopoietic reconstitution in syngenic BMT.     

Effect of ligustrazine on hematopoiesis in bone marrow transplantation mice

Hematopoietic reconstitution after bone marrowtransplantation is a complicated process,whichconcerns with the quality and quantity ofhematopoietic stem cell (HSC) ,and also with therecovery of hematopoietic inducing microenvironment(HIM) .The contact of HSC and HIM is critical forhematopoietic reconstitution.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　Materials1 .1 .1　 Animals　　 BALB/c mice of both sexes(clean class,close copulatory series (H- 2 d,MLSb) )were 8— 1 0 weeks old,and 1 7— 2 …     

升白胶囊对辐射所致小鼠白细胞减少症影响的研究

目的探讨升白胶囊对辐射所致小鼠外周血白细胞减少症的影响以及升高白细胞的作用机制。方法将60只小鼠随机分为5组,正常对照组、模型对照组、贞芪扶正胶囊组、升白胶囊大剂量组、升白胶囊小剂量组,每组12只。经低能X射线照射制备小鼠白细胞减少症模型,造模成功后各组分别给予相应药物灌胃。造模后第8d、第14d取血及股骨进行检测。观测小鼠外周血象、骨髓有核细胞数(BMNC)和骨髓DNA的含量。结果与正常对照组比较,模型对照组白细胞(WBC)数、BMNC数及骨髓DNA含量显著降低(P﹤0.01);与模型对照组比较,贞芪扶正胶囊组与升白胶囊大剂量组第8d、第14dWBC数及升白胶囊小剂量组第14dWBC数显著升高(P﹤0.01);与模型对照组比较,贞芪扶正胶囊组、升白胶囊大剂量组BMNC数及骨髓DNA含量显著升高(P﹤0.01或P﹤0.05),升白胶囊小剂量组骨髓DNA含量显著升高(P﹤0.05)。结论升白胶囊对低能X射线照射所致小鼠白细胞减少有显著升高作用,其机制与促进骨髓造血功能有关。     

Effects of Platelet Factor 4 on Expression of Bone Marrow Heparan Sulfate in Syngenic Bone Marrow Transplantation Mice

Platelet factor 4 ( PF4) is a negativehematopoietic factor.It can inhibit the prolifera-tion of endothelial cells and hematopoietic stem/progenitor cells,particularly megakaryoryocyticcells,reversibly[1] ,inhibit DNA synthesis,blockcell cycle progression during S phase and reducethe sensibility of normal hematopoietic stem/pro-genitor cells,but not some cancer or leukemia celllines,to cytotoxic drugs and ionizing radia-tion[2 - 3] ,and it also can cause a population in-crease of the stem cel…     

扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响

目的:观察扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响.方法:BALB/c小鼠40只随机分为正常组、模型对照组、环孢霉素A对照组、扶正养营颗粒实验组,记数外周血象、骨髓有核细胞,测定骨髓造血组织容量及bcl-2表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,环孢霉素A组、扶正养营颗粒组外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:扶正养营颗粒可能是通过上调拮抗凋亡因子bcl-2的表达,改善骨髓增殖,发挥其治疗再生障碍性贫血的作用.     

Study on the effect of ligustrazine on hematopoietic reconstitution in bone marrow transplantation mice

Hematopoietic reconstitution after bone marrowtransplantation is a complicated process CXCchemokines and their receptors play important rolesin this process. One of these receptors, CXCR4 expresses on hematopoietic stem cells, and is now takenas a "homing factor" in hematopoietic reconstitu--'tionll' 2]. Ligustrazine can protect the bone marrowmicroenvironment after irradiation or immune damage[', 4]. We established allogenic bone marrow transplantation mice models and explored the effects …