内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的大鼠平滑肌细胞增殖迁移

目的:观察血管内皮Jagged1下调对血小板衍生的生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导平滑肌细胞增殖迁移的影响。方法:分离培养大鼠主动脉内皮和平滑肌细胞,将内皮接种于下室、平滑肌接种于上室建立细胞共培养体系,根据内皮是否行Jagged1小RNA干扰分为对照组、空载体组和Jagged1小RNA干扰组。用Western blot检测内皮     

VEGF165对过氧化氢诱导的内皮祖细胞增殖损伤的保护作用

目的 观察血管内皮生长因子-165(vascular endothelial growth factor-165,VEGF165)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的人外周血来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖损伤及细胞周期相关蛋白表达的影响.方法 采用密度梯度离心法和贴壁培养法从人外周血中分离培养内皮祖细胞.在经MTT实验筛选出过氧化氢处理浓度后,对EPCs进行实验分组:正常对照组,不给予任何处理因素;VEGF165处理组,以终浓度为25ng/mL的VEGF165孵育24 h;过氧化氢处理,以终浓度200 μmol/L过氧化氢处理内皮祖细胞24 h;VEGF 165预处理组,经浓度为25 ng/mL的VEGF165预孵育30 min后,再与终浓度为200μmol/L的H2O2共孵育24 h.CCK-8法检测各组内皮祖细胞增殖活性的差异;Western blot分析各组内皮祖细胞中细胞周期相关蛋白cyclin D1和PCNA的蛋白表达情况.结果 与对照组相比,VEGF165处理组内皮祖细胞增殖活性增高(P＜0.05);过氧化氢处理组内皮祖细胞增殖活性较对照组降低(P＜0.05),且细胞周期相关蛋白cyclin Dl和PCNA下调(P＜0.05); VEGF165预处理组中,EPCs增殖活性较过氧化氢处理组增高(P＜0.05),且cyclin D1和PCNA蛋白表达上调(P＜0.05).结论 VEGF165可促进人外周血来源的内皮祖细胞的增殖,对过氧化氢诱导的内皮祖细胞增殖损伤有一定的保护作用,其机制可能与细胞周期相关蛋白cyclin D1和PCNA表达升高有关.     

美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨抗氧化剂美乐托宁对冠心病患者循环血中内皮祖细胞增殖与凋亡的影响及其机制.方法 选择冠状动脉造影确定冠心病患者36例,密度梯度离心法获取冠心病患者外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度美乐托宁(0.5、1.0和2.0 mmol/L)干预6、12、24和48 h.MTT法检测美乐托宁对内皮祖细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测美乐托宁对细胞凋亡率的影响,逆转录.聚台酶链式反应技术检测Bcl-2mRNA表达,Western blot检测Bcl-2的蛋白表达.结果 美乐托宁呈浓度和时间依赖性改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力(P<0.01);美乐托宁抑制体外培养的冠心病患者外周血中内皮祖细胞的凋亡,作用呈浓度和时间依赖性(P<0.01);美乐托宁上调内皮祖细胞内Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01).结论 美乐托宁能改善体外培养的冠心病患者外周血内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖能力,并通过上调凋亡抑制基因Bcl-2而发挥抑制内皮祖细胞凋亡的作用.     

人外周血、脐血、脂肪组织来源的内皮祖细胞部分生物学特性比较

目的研究人外周血、脐血和脂肪组织三种不同来源内皮祖细胞部分生物学特性异同,探讨其可能不同的适应范围和方式及方法,进而为提高内皮祖细胞的应用效率提供依据。方法采用密度梯度离心法分离人外周血、脐血单个核细胞,胰蛋白酶消化提取脂肪组织干细胞。所采集细胞诱导分化,观察细胞形态,对培养第7天的细胞进行鉴定。采用MTT法检测细胞增殖,Boyden小室检测细胞迁移能力,贴壁法检测细胞黏附功能以及血管生成试剂盒检测细胞体外成血管能力。结果诱导分化细胞均证实为内皮祖细胞。脐血源性内皮祖细胞增殖、迁移、黏附、成血管能力最强(P<0.05)。脂肪组织来源内皮祖细胞增殖与成血管能力方面较外周血来源内皮祖细胞强(P<0.05)。结论人脐血内皮祖细胞可能更适用于同种异体干细胞移植,脂肪组织来源内皮祖细胞可能在自体干细胞移植治疗缺血性疾病方面有潜在应用前景。     

白藜芦醇对外周血内皮祖细胞功能的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇对于内皮祖细胞体外功能的影响。方法密度梯度离心法获得人外周血单个核细胞,培养7 d后,采用免疫荧光和流式细胞仪进行细胞鉴定;随后加入不同浓度的白藜芦醇[0（对照）、1、5、15、60μmol/L]干预72 h,观察其对内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力的影响;同时采用RT-PCR和ELISA方法测定药物干预后,内皮祖细胞中内皮型一氧化氮合成酶（endothelial n itric oxide synthase,eNOS）的表达。结果与对照组相比,1μmol/L白藜芦醇促进内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,同时上调eNOS的mRNA和蛋白水平的表达;而60μmol/L白藜芦醇抑制内皮祖细胞增殖、迁移和黏附,并且下调eNOS的mRNA和蛋白水平的表达。结论低浓度白藜芦醇可改善内皮祖细胞增殖、迁移和黏附功能,并上调eNOS表达,而高浓度白藜芦醇则抑制上述细胞功能和eNOS表达。     

基质细胞衍生因子1α对大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移的影响

目的观察基质细胞衍生因子1α对体外培养的大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移的影响。方法微孔法从大鼠骨髓提取内皮祖细胞。免疫荧光鉴定血管内皮生长因子受体2和CD133,不同浓度基质细胞衍生因子1α处理内皮祖细胞后,采用Transwell迁移系统检测内皮祖细胞迁移能力。结果分离出的大鼠骨髓内皮祖细胞免疫荧光下血管内皮生长因子受体2 和CD133 双阳性,基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性促进内皮祖细胞迁移,对照组与基质细胞衍生因子1α各处理组比较差异均具显著性(P<0.05或P<0.01)。结论基质细胞衍生因子1α呈浓度依赖性促大鼠骨髓源内皮祖细胞迁移。     

主动脉夹层患者循环内皮祖细胞或许经由氧化应激机制加速细胞衰老

目的探讨主动脉夹层患者循环内皮祖细胞是否经由氧化应激机制加速衰老。方法临床选取疑似主动脉夹层患者并经主动脉CTA检查后分为对照组和主动脉夹层组,抽取外周血分离单个核细胞群,流式细胞分选术分离和计数内皮祖细胞,应用层粘连蛋白粘附法、改良的Boyden小室及MTT法测定内皮祖细胞的粘附、迁移和增殖功能,应用Western blot检测内皮祖细胞衰老相关的p16INK4a和SIRT1蛋白水平,并测定细胞内反应氧类物质水平。结果与对照组相比,主动脉夹层组循环CD34+CD133+KDR+内皮祖细胞数量明显减少(P0.01),且细胞粘附、迁移和增殖功能明显降低(P0.05);Western blot结果显示细胞衰老相关的p16INK4a蛋白水平明显升高,而抗衰老蛋白SIRT1表达水平明显降低,细胞内反应氧类物质水平明显增加(P0.05)。结论不断增加的细胞内反应氧类物质致主动脉夹层患者循环内皮祖细胞的粘附、增殖和迁移功能受损,最终加速循环内皮祖细胞衰老。     

低频脉冲磁场对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和体外血管化的影响

目的 观察不同强度低频脉冲磁场对体外培养大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、细胞周期、迁移和成血管能力的影响.方法 密度梯度离心法获得大鼠骨髓源内皮祖细胞,随机分为4组:对照组,1.0mT组,1.4mT组和1.8 mT组.除时照组外.其余各组用频率为15 Hz不同强度的方波脉冲磁场刺激大鼠骨髓源内皮祖细胞,2 h/d,持续刺激5 d.曝磁5 d后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,划痕试验检测细胞迁移能力,管状结构形成试验和3维培养检测细胞成血管能力.结果 1.0mT组和1.4mT组磁场促进内皮祖细胞增殖,使其细胞周期分布发生改变,DNA合成期(S期)和合成后期(G2期)细胞比例增加,1.8 mT组磁场也能促进内皮祖细胞增殖,但对细胞周期分布影响不明显.体外培养内皮祖细胞迁移能力差,各强度磁场对其迁移能力也无明显影响.不同强度磁场均能够提高内皮祖细胞成血管能力,与对照组相比差异均有统计学意义[(14.0±1.6)比(11.0±1.6); (19.2±1.9)比(11.0±1.6); (15.4±1.1)比(11.0±1.6),P均<0.05].1.0mT和1.4 mT磁场作用强于1.8mT磁场.结论 磁场的生物学作用和磁场强度相关,1.0 mT和1.4 mT低频脉冲磁场促进大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和DNA合成并提高其成血管能力.     

下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨下调Jagged1表达对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将培养的RPMI8226细胞随机分为对照组(不做转染)、siRNA control组(转染negative control)和siRNA Jagged1组(转染Jagged1-siRNA),以RT-PCR检测各组细胞中Jagged1 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率;Western印迹检测细胞中Jagged1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和酶切半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,siRNA Jagged1组细胞中Jagged1 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、S期细胞比例、Cyclin D1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著降低,G0/G1期细胞比例、凋亡率和酶切caspase-3蛋白表达显著升高(P0.05);而siRNA control组细胞中各指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论下调Jagged1表达可抑制骨髓瘤RPMI8226细胞增殖,阻滞细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达及上调酶切caspase-3蛋白表达有关。     

低频脉冲磁场对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和体外血管化的影响

目的观察不同强度低频脉冲磁场对体外培养大鼠骨髓源肉皮祖细胞增殖、细胞周期、迁移和成血管能力的影响方法密度梯度离心法获得大鼠骨髓源内皮祖细胞,随机分为4组：对照组,1．0mT组,1．4mT组和1．8mT组除对照组外．其余各组用顿率为15Hz不同强度的厅波脉冲磁场刺激大鼠骨髓源内皮租细胞,2h／d,持续刺激5d,曝磁5d后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法俭测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,划痕试验检测细胞迁移能力,管状结构形成试验和3维培养检测细胞成血管能力。结果1．0mT组和1．4mT组磁场促进内皮祖细胞增殖,使其细胞周期分布发牛改变,DNA合成期（S期）和合成后期（G2期）细胞比例增加,1．8mT组磁场也能促进内皮祖细胞增殖．但对细胞周期分布影响不明显。体外培养内皮租细胞迁移能力差,各强度磁场对其迁移能力也无明显影响。不同强度磁场均能够提高内皮祖细胞成血管能力,与对照组相比差异均有统计学意义[（14．0±1．6）比（11．0±1．6）;（19．2±1．9）比（11．0±1．6）：（15．4±1．1）比（11．0±1．6）,P均〈0．05]1．0mT和1．4mT磁场作用强于1．8mT磁场：结论磁场的生物学作用和磁场强度相关,1．0mT和1．4mT低频脉冲磁场促进大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和DNA合成并提高其成血管能力。     

酸性成纤维细胞因子对下肢动脉硬化闭塞症患者内皮祖细胞的影响

目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对下肢动脉硬化闭塞症(LEASD)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖与凋亡的影响.方法 选择LEASD患者36例,取外周血20 ml,获取单个核细胞,培养7d,细胞传至第3代,分为对照组,加aFGF 1、2和5 μg/L,依次为低、中、高浓度组,每组9例,各组干预6、12、...     

血管内皮生长因子调节内皮祖细胞生物学功能

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对体外培养骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及机制初探。方法密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集素I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定。单个核细胞培养7d后分为对照组和VEGF干预组。VEGF干预组加入不同浓度VEGF（25,50,75,100μg／L）培养48h,分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。RT—PCR法半定量检测VEGF对EPCs内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响。硝酸还原酶法比色测定VEGF对EPCs分泌一氧化氮的影响。结果VEGF可浓度依赖性地增加EPCs数量并明显促进EPCs的黏附、迁移和增殖能力,与对照组比较差异显著。VEGF可上调EPCseNOSmRNA的表达,促进EPCs分泌一氧化氮。结论VEGF可能通过上调EPCseNOSmRNA的表达影响EPCs部分生物学功能。     

Estrogen induces endothelial progenitor cells proliferation and migration by estrogen receptors and PI3K-dependent pathways

Estrogen induces endothelial progenitor cells (EPCs) migration and proliferation, which may serve as a potential target for coronary artery disease, but the mechanisms are unclear. We hypothesized that estrogen receptors (ERs) and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) signaling pathway, which represent particularly important roles of action for estrogen, may contribute to estrogen-induced EPCs migration and proliferation. Bone marrow mononuclear cells (MNCs) were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) supplemented with growth factors as previously described. A total of 87.32+/-5.13% of adherent cells showed uptake of acetylated low-density lipoprotein and lectin binding. Immunostaining and fluorescence activated cell sorting confirmed the endothelial progenitor phenotype. RT-PCR, immunocytochemistry staining and Western blot demonstrated expression of ERs. Exposure to 17beta-estradiol significantly improved EPCs migration and proliferation. Those effects were blocked by pretreatment with the pharmacological PI3K blockers LY294002 (1 h, 10 micromol/L) and ICI-182780 (1 h, 10 micromol/L), a specific estrogen receptor antagonist, which show involvement of estrogen receptors and PI3K pathway. These results suggest that estrogen induces EPCs migration and proliferation via ERs and PI3K pathway which provided a novel insight and treatment strategy of vascular biology.     

骨髓源性内皮祖细胞与内皮细胞共培养促进其向成熟内皮细胞分化的研究

目的：探讨共培养的内皮细胞对内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化的影响。方法：分离1～2个月龄,SD大鼠股骨髓,个核细胞（MNCs）,MNCs,Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染鉴定内皮细胞的特性。应用贴块法培养大鼠腹主动脉的内皮细胞,vWF免疫组化染色进行鉴定。采用Transwell培养板,上、下室分别加入内皮祖细胞和内皮细胞,15%胎牛血清的NO.2 DMEM/F12培养液培养14 d,倒置相差显微镜观察培养内皮祖细胞的形态。RT-PCR检测eNOS、vWF mRNA,流式细胞术检测CD31及KDR的表达。结果：荧光双染显示培养的单个核细胞具有内皮祖细胞特性;共培养的内皮祖细胞呈短梭型、铺路石状,培养至4 w时有复杂的网状结构形成。RT-PCR检测显示,eNOS及vWF mRNA表达均较对照组显著增加（P〈0.05）。流式细胞术分析表明,共培养组的内皮祖细胞CD31及KDR的表达,也显著高于对照组（分别为P〈0.05及P〈0.01）。结论：与内皮细胞共培养可促进内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化。     

不同年龄段大鼠血清影响内皮祖细胞向成熟内皮诱导分化

目的观察不同年龄段大鼠血清对骨髓内皮祖细胞向成熟内皮细胞诱导分化的影响。方法无菌取1~2月龄、19~26月龄Sprague-Dawley大鼠股骨和胫骨,获取骨髓单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,经差速贴壁法对二次贴壁细胞在纤维连接蛋白包被的培养板或培养瓶进行体外培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色和FITC-CD31染色进行鉴定;收集制备相应年龄段(1~2月龄、19~26月龄)大鼠血清,将内皮祖细胞分为老年大鼠内皮祖细胞 老年大鼠血清组、老年大鼠内皮祖细胞 年轻大鼠血清组、年轻大鼠内皮祖细胞 老年大鼠血清组、年轻大鼠内皮祖细胞 年轻大鼠血清组。体外培养的内皮祖细胞经含20%不同年龄段大鼠血清的内皮条件培养基诱导培养后,激光共聚焦显微镜检测DiI-acLDLF、ITC-UEA-1双染色阳性率,免疫组织化学检测假血友病因子表达、逆转录聚合酶链反应分别检测内皮一氧化氮合酶、血管内皮生长因子受体2表达,体外血管生成实验观察内皮祖细胞参与管形生成能力。结果年轻大鼠血清显著提高老年大鼠内皮祖细胞在内皮条件培养基诱导培养后的DiI-acLDLF、ITC-UEA-1双染色阳性率(P<0.05),而老年大鼠血清显著降低年轻大鼠内皮祖细胞双染阳性率(P<0.05);年轻大鼠血清明显促进老年大鼠内皮祖细胞在内皮条件培养基诱导培养后的血管性血友病因子、内皮型一氧化氮合酶(P<0.01)及血管内皮生长因子受体2表达(P<0.05);年轻大鼠血清显著减少内皮条件培养基诱导培养后未参与血管生成的老年大鼠内皮祖细胞数(P<0.05)。结论年轻大鼠血清可显著增强老年大鼠内皮祖细胞向内皮细胞诱导分化的能力,而老年大鼠血清可部分抑制年轻大鼠内皮祖细胞向成熟内皮细胞诱导分化;年轻大鼠血清中可能存在激发衰老个体内皮祖细胞活力的系统性血清因子,这些因子可增强衰老个体来源的内皮祖细胞内在分化潜能。     

钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号传导通路对内皮祖细胞增殖作用的研究

目的研究钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子（CaN—NFAT）信号传导通路对内皮祖细胞（EPCs）增殖的作用。方法采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁培养获得EPCs。比色法测定EPCs增殖能力;免疫印迹法检测EPCs内钙调神经磷酸酶Ap（cnAp）蛋白质水平的表达;逆转录聚合酶链反应法检测EPCs内cnAB和NFAT4的表达。观察不同干预因素24h和48h后对EPCs增殖能力的作用,干预因素48h后对EPCs内CnAβ蛋白质水平表达的影响及对EPCs内CnAB和NFAT4表达的影响。结果苯肾上腺素（PE）使EPCs增殖能力增高;环孢素A（CsA）不仅直接使EPCs增殖能力下降,而且可抑制PE引起的EPCs增殖能力增高。结论EPCs内存在CaN—NFAT信号传导通路,该通路受促进因素及抑制因素的调节;CaN—NFAT信号传导通路对EPCs的增殖有明显作用。     

Effects of MicroRNA-10b on lung cancer cell proliferation and invasive metastasis and the underlying mechanism

Objective:To study the influence of MicroRNA-lOb on proliferation and invasion of human low metastatic lung cancer cell 95-C and its mechanism.Methods:Lipofectamine MicroRNA-lOb eukaryotic expression plasmid was transfected into 9S-C.The experiment group was divided into blank control group,empty vector transfected group and MicroRNA-lOb transfected group.Real time quantitative RT-PCR was used to detect the expression of MicroRNA-lOb and KLF4mRNA expression.Proliferations of cells were detected by cell proliferation assay,invasion of the delected the cell Transwell experiments,the expression of KLF4 protein was detected in Western blotting cells.Results:The proliferation rate of MicroRNA-lOb piasmid transfection group increased significantly after transfection,invasion and migration ability enhancement,by comparison,there are statistically significant differences in the blank control group and negative control group(P0.05);the expression of MicroRNA-lOb piasmid transfection group KLF4protein decreased,the difference was statistically significant(P0.05);reduce the expression of MicroRNA-l0b piasmid transfection group KLF4mRNA,but no significant differences(P0.05).Conclusions:MicroRNA-l0b may promote proliferation and invasion of 95-C cells by down regulating the expression of KLF4 protein.     

C/EBPα基因在大鼠肝星状细胞内的表达及意义

目的 初步探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C／EBPα)在肝星状细胞(HSC)激活过程中的作用。方法 采用免疫细胞化学、western blot及RT-PCR检测原代培养不同时间段HSC内C／EBPd蛋白和mRNA的表达，以及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、结蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP2)mRNA、Ⅰ型前胶原(α1)mRNA的表达；Lipofect AMINE2000介导的瞬时转染方法将pcDNA3．1(-)-C／EBPα真核表达质粒转染入激活的HSC内，采用免疫细胞化学方法鉴定转染成功及转染后HSC内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；在相差显做镜下观察HSC在原代培养过程中形态的改变。结果 原代正常HSC中可以检测到C／FBPα mRNA和蛋白的表达，蛋白位于细胞质和细胞核内，但主要位于细胞质内，且除新鲜分离(0d)组以外，随着HSC培养至2、4、7、10d，C／EBPα蛋白和mRNA的表达呈逐步下降的趋势，而α-SMA、MMP2和Ⅰ型前胶原(α1)的表达则逐步增强；转染后24h，目的基因转染组HSC内C／EBPα的表达明显强于空载体对照组，而PCNA的阳性细胞数较空载体对照组明显减少；转染后36h，目的基因转染组细胞几乎全部死亡，残存的细胞形态变细，体积缩小，而空载体对照组细胞仍存括。结论 C／EBPα基因可能参与HSC的激活调控机制，且C／EBPα过表达对HSC的增殖存在抑制作用。     

C反应蛋白对内皮祖细胞部分生物学功能的影响及其机制的实验研究

目的 观察C反应蛋白(CRP)对体外培养骨髓源性内皮祖细胞(EPC)数量及增殖、迁移、黏附功能的影响及其机制探讨. 方法 密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,FITC-荆豆凝集紊I、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定.单个核细胞培养7 d后进行实验分组,分为对照组和CRP干预组.CRP干预组加入不同浓度CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)培养48 h,然后分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPC的增殖、迁移和黏附能力.RT-PCR检测不同浓度下CRP对EPC内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的影响,并检测EPC的NOS活性. 结果 CRP(分别为5、10、15、20 μg/ml)各组EPC数量分别为(58±3)、(54±3)、(47±3)和(39±5)个,对照组EPC数量为(60±3)个.MTT法检测CRP各亚组EPC在490 nm吸光度值分别为0.332±0.003、0.297±0.036、0.273±0.013和0.259±0.035,对照组为0.345±0.014.CRP浓度为10、15、20μ/ml 3个亚组EPC的数量及增殖能力显著低(P＜0.01).CRP各组(10、15、20 μg/ml)与对照组相比EPC黏附数量明显低[(28±2)、(22±3)、(19±3)和(16±2)个比(30±2)个,P＜0.05].不同浓度CRP各组与对照组相比EPC迁移数量明显低[(11±2)、(9±2)、(6±2)和(5±1)个比(12±2)个,P＜0.05].CRP各亚组(5、10、15、20μg/ml)EPC eNOS mRNA相对光密度显著低于对照组.CRP呈剂量依赖性降低EPC NOS活性,CRP各组EPC的NOS活性分别为(66.29±1.81)、(57.44±3.25)、(48.37±3.86)和(36.82±4.89)nmol/mg蛋白,对照组EPC NOS活性为(68.56±2.82)nmol/mg蛋白,其中浓度为10、15、20μg/ml CRP组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 CRP可能通过影响EPC eNOS表达活性降低EPC数量并影响其部分生物学功能.     

DMBT1过表达对食管癌细胞系EC9706生物学行为的影响

目的: 建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1的食管癌细胞系EC9706,并分析转染前后其增殖特点、转移侵袭能力的变化.方法: 脂质体介导法将DMBT1的全长表达质粒转染食管癌细胞系EC9706,G418筛选阳性克隆细胞,Western blot及RT-PCR检测DMBT1蛋白及mRNA水平变化,MTT法绘制细胞生存曲线及无血清条件下测细胞生存抑制率,Transwell实验检测细胞趋化迁移能力变化.结果: 通过稳定转染后,DMBT1蛋白水平及mRNA水平均比对照组提高3.2倍以上,与对照组比较,差异有显著意义( P<0.01);实验组细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比对照组细胞更为缓慢,在无血清培基中增殖抑制率随时间延长不断增高,实验组迁移细胞数为206±25,对照组为367±42,2组比较差异有显著意义( P<0.01).结论: 在体外成功建立稳定表达DMBT1的细胞系,DMBT1过表达在体外显著抑制食管癌细胞系EC9706的生长增殖及趋化迁移.