SGK1调节Th17细胞分化在高血压中的作用

目的探讨SGK1在高血压外周血CD4~+T淋巴细胞中的表达,揭示SGK1通过调节Th17细胞的功能在高血压中的作用。方法收集高血压患者病例,依据临床诊断分成I级、II级和III级。FCM检测Th17细胞在高血压患者外周血中的比例,ELISA检测IL-17A在血清中的表达水平。从高血压患者外周血单个核细胞中分选CD4~+T淋巴细胞,real-time PCR检测SGK1的表达,同时检测RORC的表达水平。构建高血压大鼠模型,HE染色观察肾组织炎症变化,免疫组织化学检测肾组织中SGK1的水平。结果与健康对照相比,高血压患者外周血Th17细胞的比例和血清中IL-17A的水平明显升高,且随高血压分级越高,Th17细胞比例和IL-17A血清水平越高。SGK1的表达在高血压患者CD4~+T淋巴细胞中显著升高。更为重要的是,SGK1的表达与RORC和IL-17A具有正相关性。在高盐诱导的高血压大鼠模型中,血清IL-17A的水平明显高于正常对照组。与对照组比较,高血压组的肾组织出现了明显的炎症变化和浸润的淋巴细胞,SGK1在肾组织中的表达明显升高。结论高血压中Th17细胞的比例明显升高,SGK1通过调节Th17细胞的功能促进了高血压的进展。     

负性协同刺激分子PD-1和Tim-3及细胞因子在布鲁氏菌病中的变化

目的检测布鲁氏菌病患者程序性死亡蛋白1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)及细胞因子IL-17A和IL-6的变化。方法 72例布鲁氏菌患者组与50例正常对照组采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中PD-1和Tim-3的表达,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中PD-1 mRNA和Tim-3 mRNA的表达,流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测血清中IL-17A和IL-6的水平,Pearson法分析布鲁氏菌病患者外周血中PD-1~+Tim-3~+CD4~+T的表达与IL-17A和IL-6的相关性,分析布鲁氏菌病患者外周血中PD-1~+Tim-3~+CD4~+T的表达及临床特点。结果与正常对照组相比,布鲁氏菌病患者组PD-1~+Tim-3~+CD4~+T细胞、PD-1 mRNA和Tim-3 mRNA的表达、IL-17A和IL-6的水平均明显增加(P0.01),布鲁氏菌病患者外周血中PD-1~+Tim-3~+CD4~+T的表达与IL-17A(r=0.71,P0.01)和IL-6(r=0.83,P0.01)的水平均呈明显的正相关,并且布鲁氏菌病患者出现发热、骨关节痛、多器官受累时外周血中PD-1~+Tim-3~+CD4~+T的表达明显增高(P0.01)。结论 PD-1与Tim-3在布鲁氏菌病患者中表达增加,可能共同参与了布鲁氏菌对免疫应答的负性调控,不利于机体对布鲁氏菌的有效清除。     

急性期川崎病Th17细胞变化初探

目的 探讨Th17细胞在川崎病(Kawasaki disease,KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿60例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3及PBMC IL-6、TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3、IFN-γ等mRNA表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、TGF-β、IL-23、IL-27、IFN-γ的蛋白浓度;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)的比例.结果 急性期KD患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01),IVIG治疗后明显降低(P<0.01);急性期KD患儿IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数目(WBC)呈正相关(IL-17A:0.70,0.85,0.80,P<0.01;IL-17F:0.63,0.65,0.69,P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6转录水平明显高于对照组(P<0.01),IVIG治疗后显著降低(P<0.01);TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3 mRNA水平及血浆蛋白浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血浆IFN-γ浓度显著升高,mRNA水平无变化;急性期KD患儿CD4+ CD25+ Tr细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 急性期KD患儿Th17细胞过度活化可能参与了KD免疫发病机制.     

miR-126敲减增强小鼠CD4~+T细胞体内活性并促进其向Th1细胞分化

目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+T细胞表面活化标志CD69、CD62L和CD44分子以及Ki-67的表达变化;膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双染色法结合流式细胞术检测CD4+T细胞的凋亡情况;实时定量PCR检测CD4+T细胞功能相关细胞因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-12、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化。结果与野生型(WT)小鼠组相比,miR-126KD小鼠组CD4+T细胞内miR-126成熟体的表达显著下调;FACS结果显示miR-126KD小鼠CD4+T细胞表达CD62L的比例明显减少,而表达CD69、CD44以及Ki-67细胞的比例显著增加,CD4+T细胞的体内凋亡比例显著减少;CD4+T细胞中IL-4、IL-10的mRNA水平明显降低,而IL-12、TGF-β、TNF-α以及IFN-γ的mRNA水平显著增加。结论 miR-126KD小鼠体内CD4+T细胞的活性显著增强并促进其向Th1细胞分化。     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

Treg/Th17在变应性鼻炎患者血液中的意义

观察Treg/Th17转录因子及其细胞因子在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者外周血单个核细胞和血清中的表达并探讨其临床意义。选择42例AR患者根据视觉模拟量表(visual analog scale,VAS)分为轻度组(n=23例)和中重度组(n=19例),同期选择20例门诊健康体检者作为对照组。采用RT-PCR检测各组Foxp3、RAR相关孤儿受体mRNA(RARrelated orphan receptor C mRNA,RORC mRNA),采用ELISA检测各组血清TGF-β和IL-17表达水平。结果显示,中重度组和轻度组变应性鼻炎患者Foxp3mRNA及血清TGF-β表达水平明显低于对照组(P<0.05),RORC mRNA和血清IL-17表达水平明显高于对照组(P<0.05),且随病情严重程度加重,Foxp3 mRNA及血清TGF-β表达水平明显降低(P<0.05),而RORC mRNA及血清TGF-β表达水平明显升高(P<0.05)。本研究证明,Treg/Th17细胞失衡可能在AR发病中占有重要的地位。     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的水平

目的:观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血Th17细胞和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及其相关因子的水平和功能,初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法:PNS患儿分为单纯型肾病(SNS)20例、肾炎性肾病(NNS)15例;同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比例;Real-time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达;ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果:SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19 mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组(P0.05),且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组(P0.05);SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组(P0.05),其中两组疾病患儿血清TGF-β1的水平无统计学意义(P0.05),其余指标NNS患儿均明显低于SNS组(P0.05)。结论:Th17/Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用,其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。     

替比夫定治疗的慢乙肝患者中Th17细胞释放IL-26的变化研究

目的通过检测替比夫定治疗的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者中IL-26的动态变化及与其它炎症因子的相关性,揭示其在CHB疾病中可能的促炎作用。方法将51个CHB患者和28个健康人纳入本研究。收集患者在替比夫定(tebivudine,LdT)治疗期间(0、12、24、36和52周)外周血,分析HBsAg、HBeAg、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和HBV病毒载量等临床数据。流式细胞仪分离CD4~+T、CD4~-T细胞,酶联免疫吸附检测血浆中IL-26、IL-17蛋白水平,荧光定量PCR检测IL-26、RORγt的mRNA水平。结果与健康对照组相比CHB患者血浆IL-26水平显著升高,LdT治疗期间IL-26水平呈时间依赖性下降。治疗期间血浆IL-26浓度与T辅助17(Th17)细胞分泌IL-17水平呈相似的下降趋势。CHB患者外周血单个核细胞中IL-26~+CD4~+细胞百分率明显高于IL-26~+CD4~-细胞百分率,CD4~+T细胞表达的IL-26和RORγt的mRNA水平呈正相关,且随治疗进程其表达水平逐渐降低,提示Th17细胞可能是IL-26主要源细胞。结论在CHB患者的外周血中,IL-26主要由Th17细胞产生,是一种潜在的CHB预后和治疗的生物标志物。     

川崎病急性期患者Th17细胞检测及意义

目的:探讨川崎病患者急性期Th17细胞的水平及意义。方法:急性期川崎病(KD)患儿43例,正常同年龄对照41例,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞占CD4+细胞的比例。荧光定量PCR(Real-time-PCR)检测RORγt和IL-23p19mRNA的表达。双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6水平。结果:急性期KD患儿外周血Th17细胞比例及其特异性转录因子RORγt的mRNA表达分别为:(1.285±0.625)%、(M:5.62,Q:7.16),显著高于同龄对照组(0.584±0.407)%、(M:1.79,Q:2.55),(P0.01)。KD患儿血清IL-6水平显著增高[病人:(M:36.42,Q:129.77)、对照:(M:2.39,Q:1.15)](P0.01),且与Th17细胞比例成正相关(r=0.88,P0.01)。IL-23p19的mRNA表达与正常对照比较无显著差异[病人:(M:2.12,Q:3.05)、对照:(M:1.73,Q:2.79)](P0.05)。结论:急性期川崎病患者Th17细胞数量、血清IL-6水平升高;Th17可能作为急性炎症的启动因素,参与川崎病免疫发病过程。     

急性期川崎病Foxp3基因甲基化改变及意义初探

目的 探讨急性期川崎病(KD)Foxp3基因甲基化状态及其在KD免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿30例,正常同年龄对照组18例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.甲基化特异性定量PCR(MSQP)检测CD4+T细胞Foxp3基因启动子、调节性T细胞(Tr)特异性甲基化区(TSDR)CpG岛甲基化状态;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Tr的比例;荧光定量PCR检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA4、GITR、LAG3、CCR8、UBD、LGALS3等基因mRNA表达.结果 (1)急性期KD患儿CD4+T细胞Foxp3基因启动子CpG岛非甲基化水平明显低于同年龄对照组(P＜0.01),经IVIG治疗后明显升高(P＜0.01);TSDR区CpG岛非甲基化水平各组间差异无统计学意义(P＞0.05);(2)急性期KD患儿CD4+CD25+Foxp3+Tr细胞比例及CD4+T细胞Foxp3 mRNA表达水平明显低于正常对照组(P＜0.01),且与Foxp3基因启动子CpG岛非甲基化水平呈正相关(CD4+CD25+Foxp3+Tr:r=0.76,P＜0.01;Foxp3:r=0.89,P＜0.01),IVIG治疗后显著上升(P＜0.01);(3)急性期KD患儿CD4+CD25+Foxp3+Tr细胞相关因子CTLA4、GITR、LAG3和CCR8等基因mRNA水平显著降低(P＜0.01),IVIG治疗后均有不同程度的恢复(P＜0.01);Foxp3依赖性分子UBD和LGALS3表达水平亦低于正常对照组(P＜0.01),IVIG治疗后基本恢复至正常水平(P＜0.01).结论 急性期KD患儿Foxp3基因启动子非甲基化水平低下可能与KD免疫调节功能紊乱有关.     

微小RNA-126基因敲减对CD4~+T细胞体外功能的影响

目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4~+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4~+CD62L~+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4~+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4~+T细胞的凋亡情况。结果与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4~+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P0.001);miR-126 KD小鼠CD4~+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P0.05);同时Ki-67~+的比例也明显增加(P0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4~+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P0.001),IL-4的比例显著下调(P0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P0.05);最后,CD4~+T细胞的凋亡比例显著减少(P0.05)。结论 miR-126基因敲减后CD4~+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础。     

KD 患儿Th17 / Treg 细胞失衡和单核细胞趋化蛋白1 的关系研究

目的:探讨川崎病(KD)患儿外周血CD4+ CD25+调节T 细胞(Treg) / 辅助性T 细胞17(Th17)与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的关系及其在KD 发病中的作用机制。方法:2014 年6 月至2015 年6 月选取本院收治的48 例KD 患儿(恢复期28 例,急性期20 例)为研究对象,另选取40 例健康体检儿童为对照组,采用ELISA 法测定两组血清中白细胞介素-15,17,23(IL-15,17,23)及MCP-1 水平,采用流式细胞术测定两组外周血Treg/ Th17 细胞比例。结果:KD 组患儿血清IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 水平显著高于对照组(P<0.05),且急性期KD 患儿血清IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 水平高于稳定期组。KD 组患儿Treg 细胞、Treg/ Th17、Th17 显著高于对照组(P<0.05),急性期KD 患儿Treg 细胞、Treg/ Th17 水平、Th17 高于稳定期(P<0.05)。经Pearson 单因素分析,IL-15、IL-17、IL-23 及MCP-1 与Treg/ Th17 呈负相关(P<0.05)。结论:Treg 与Th17 细胞间的失衡及MCP-1 水平在KD 患儿体内持续升高可能与KD 病情发病及进展有密切的关系,通过测定KD 患儿Treg/ Th17 细胞比例及MCP-1 对评估患儿病情及预后具有一定的指导意义。     

利金方降低大鼠Th17细胞/CD4~+ T细胞比值减轻香烟烟雾提取物引起的炎症反应

目的探讨利金方对香烟提取物诱导的CD4~+ T细胞向Th17细胞分化及对炎症的影响及作用机制。方法分离和培养CD4~+ T细胞,分为空白对照组、香烟烟雾提取物(CSE)组、(0.25、0.5、1.0)mg/mL利金方处理组、Janus激酶2(JAK2)抑制剂AG-490组、信号转导子和转录激活子3(STAT3)抑制剂TG-101348组。利金方处理组和抑制剂组都是先给予相应处理后再进行CSE刺激。流式细胞术检测各组CD4~+ T细胞、Th17细胞比例,ELISA检测CD4~+ T细胞培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素17A(IL-17A)水平;实时定量PCR检测CD4~+ T细胞JAK2、STAT3、维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)的mRNA水平,Western blot法检测CD4~+ T细胞JAK2、磷酸化的JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、ROR-γt的蛋白水平。结果 CSE处理增加Th17细胞/CD4~+ T细胞比值,培养基中TNF-α、IL-17A含量;ROR-γt的mRNA和蛋白表达增加,JAK2、STAT3磷酸化增加。利金方处理后降低Th17细胞/CD4~+ T细胞比值,减少TNF-α、IL-17A分泌,抑制ROR-γt的mRNA和蛋白表达以及JAK2、STAT3的磷酸化。结论利金方通过抑制JAK2-STAT3-ROR-γt通路降低Th17细胞/CD4~+ T细胞比值减轻CSE诱导的炎症反应。     

基质金属蛋白酶2/9促进T细胞CD100脱落在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的作用

目的观察CD100、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP2)、MMP9在冠心病患者中的变化,评估MMP2/9对T细胞中CD100的调控在冠心病发病中的作用。方法 24例稳定性心绞痛(stable angina, SA)、22例不稳定性心绞痛(unstable angina, UA)、31例急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)和18例对照者入组本研究。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆可溶型CD100(sCD100)、MMP2、MMP9水平,流式细胞术检测T细胞中膜型CD100(mCD100)平均荧光强度(MFI)。分选CD4~+和CD8~+T细胞,使用CD100、MMP2/9和抗CD100抗体刺激,ELISA法检测上清中细胞因子水平,实时定量PCR法检测CD4~+T细胞中转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3、RORγt和CD8~+T细胞中穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量。结果 AMI组血浆sCD100、MMP2、MMP9水平高于对照组、SA组和UA组,AMI组CD4~+和CD8~+T细胞中mCD100 MFI低于对照组、SA组和UA组(P0.05)。CD100刺激后CD4~+T细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-17、IL-22水平及T-bet、RORγt mRNA相对表达量升高(P0.05)。CD100刺激后CD8~+T细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、IFN-γ水平及穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量升高(P0.05)。MMP2或MMP9单独刺激AMI患者CD4~+T细胞,上清sCD100、mCD100 MFI无明显变化,MMP2+MMP9联合刺激后,上清sCD100升高,mCD100 MFI降低,分泌IFN-γ、IL-17、IL-22水平及T-bet、RORγt mRNA相对表达量升高(P0.05),加入抗CD100抗体后CD4~+T细胞中上述指标较联合刺激组降低(P0.05)。MMP2、MMP9或MMP2+MMP9联合刺激AMI患者CD8~+T细胞,上清sCD100升高,mCD100 MFI降低,TNF-α、IFN-γ水平及穿孔素、颗粒酶B mRNA相对表达量升高(P0.05),加入抗CD100抗体后CD8~+T细胞中上述指标较联合刺激组降低(P0.05)。结论 AMI患者中,高表达的MMP2/9促进T细胞mCD100脱落,上调sCD100水平,诱导T细胞活化。     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

成人哮喘患者Treg/Th17细胞失衡与呼出气一氧化氮的相关性研究

目的:探讨成人哮喘患者Treg/Th17细胞失衡与呼出气一氧化氮(FeNO)的相关关系。方法:募集成人哮喘患者17例,慢性咳嗽非哮喘患者16例。所有患者均检测FeNO值,并用ELISA法检测血浆IL-17的表达水平,流式细胞术检测外周血中Treg、Th17细胞占CD4~+T淋巴细胞比例。比较两组患者FeNO水平的差异及其与Treg/Th17的相关关系。结果:与慢性咳嗽组相比,哮喘组血浆IL-17浓度升高(P<0.05)、外周血Th17/CD4~+T细胞比值升高(P<0.001)、FeNO水平升高(P<0.001)、Treg/Th17细胞的比值降低(P<0.001),而Treg/CD4~+细胞比值无明显变化(P>0.05)。哮喘组FeNO值与外周血Treg/CD4~+T细胞比值无明显相关性,而与Th17细胞占CD4~+T淋巴细胞比例呈正相关(r=0.663,P=0.01),与Treg/Th17细胞比值呈负相关(r=-0.757,P=0.002)。结论:哮喘患者FeNO水平升高与Treg/Th17失衡有关,主要与Th17细胞表达升高有关。     

Th17细胞在子痫前期患者外周血表达增加

观察正常妊娠妇女和子痫前期疾病患者外周血CD4+T细胞中Th17细胞和特异性转录因子维A酸相关孤独受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)的表达和意义。实验组为子痫前期疾病患者25例,正常妊娠妇女20例,未孕妇女20例。采集研究对象外周血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th17细胞相关细胞因子IL-17A,IL-6,TNF-α的表达,Ficoll法分离外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4+T淋巴细胞,逆转录-聚合酶联反应(RT-RCR)半定量检测CD4+T细胞中Th17细胞特异性转录因子RORγt的表达,流式细胞术检测CD4+IL-17+T细胞比例。子痫前期患者外周血清中IL-6、IL-17A的含量分别为(31.72±13.34)ng/L、(2.61±1.64)ng/L,高于正常妊娠组水平,差异有显著统计学意义(P<0.01),TNF-α在子二组间的表达分别为(18.00±8.64)ng/L和(11.69±3.68)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05);RORγt mRNA在子痫前期组的表达高于正常妊娠组,净光密度值差异有显著统计学差异(P<0.01),CD4+IL-17+T细胞在子痫前期组的表达为(1.83±0.42)%,高于正常妊娠组(0.87±0.26)%,差异有显著统计学意义(P<0.01)。子痫前期患者外周血CD4+T细胞中RORγt mRNA、Th17细胞以及Th17细胞相关细胞因子表达异常,可能在疾病的发病机理中起到重要作用。     

肝素诱导的DC对慢性乙肝患者Th1/Th2分化的影响

探讨肝素体外对慢性乙肝患者CD4~+T细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)、rhTNF-α(100 u/ml)和肝素(50 u/ml)诱导培养DC。免疫磁珠分离外周血CD4~+T细胞亚群,ELISA法检测DC或CD4~+T细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。以流式细胞仪检测肝素处理前后DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。结果:纯化的慢性乙肝患者CD4~+T细胞培养上清中IFN-γ显著低于同期培养的正常人CD4~+T细胞(P0.05);肝素处理的慢性乙型肝炎患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平及分泌的IL-12水平明显升高(分别P0.05、P0.01);而分泌的IL-6水平降低(P0.05)。肝素处理后的DC与慢性乙肝患者外周血中CD4~+T细胞共培养后,其上清中Th1型细胞因子IFN-γ的水平明显升高(P0.01)。体外肝素处理后的慢性乙肝患者的DC能部分改善外周血Th1细胞分化的不足。