促肝细胞生长素对肺纤维化大鼠的干预作用及其途径

目的:观察早期和晚期给予促肝细胞生长素对大鼠肺纤维化模型的干预作用,并分析其可能作用途径。方法:实验于2005-05/09在哈尔滨医科大学附属第二医学院实验中心完成。选择雄性Wistar大鼠85只,按随机数字表法分为5组,正常对照组、博来霉素模型组、地塞米松治疗组及促肝细胞生长素早期治疗组每组各20只,促肝细胞生长素晚期治疗组5只。除正常对照组外,其他大鼠均经气管内灌注博来霉素A5(5mg/kg)生理盐水溶液0.2～0.3mL,诱导肺纤维化。地塞米松治疗组和促肝细胞生长素早期治疗组于造模后第2天开始腹腔注射地塞米松3mg/kg和促肝细胞生长素1mg/kg,1次/d。正常对照组和博来霉素模型组注射等体积生理盐水。各组分别于气管内灌注后的第3,7,14,28天经麻醉腹主动脉放血法处死5只大鼠。促肝细胞生长素晚期治疗组于造模后第14天开始腹腔注射促肝细胞生长素1mg/kg,1次/d,于造模后第28天经麻醉腹主动脉放血法处死5只大鼠。分离肺组织,用免疫组化方法检测转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶抑制剂1蛋白在大鼠肺组织的表达水平。通过苏木精-伊红染色、Masson胶原染色及测定肺组织羟脯氨酸浓度来评价治疗效果,肺泡炎及肺纤维化程度分为4级(1分:无肺泡炎或无纤维化;4分:重度肺泡炎或纤维化,受累面积>50%)。结果:85只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①促肝细胞生长素早期治疗组造模后第7,28天肺组织羟脯氨酸含量均显著低于博来霉素模型组(P<0.05～0.01)。②促肝细胞生长素早期治疗组造模后第28天肺纤维化评分显著低于博来霉素模型组(P<0.05)。③促肝细胞生长素早期治疗组造模后第7,28天肺组织转化生长因子β1蛋白表达水平显著低于博来霉素模型组(P<0.05)。④促肝细胞生长素早期治疗组造模后第3,7,14天基质金属蛋白酶抑制剂1蛋白表达水平均显著低于博来霉素模型组(P<0.05);造模后第14,28天基质金属蛋白酶9蛋白表达水平均显著高于博来霉素模型组(P<0.05)。⑤促肝细胞生长素早期治疗组和晚期治疗组各项指标比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:早期和晚期应用促肝细胞生长素能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化,这种作用可能通过抑制转化生长因子β1和调节基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶抑制剂1蛋白的表达而实现。     

肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶表达与地塞米松的干预效应

目的：探讨炎症细胞与地塞米松对基质金属蛋白酶活性的影响及基质金属蛋白酶在肺纤维化中的作用。方法：①实验于2004-04／07在解放军兰州军区总医院动物实验中心和呼吸内科实验室、血液科实验室完成。选用32只普通Wistar大鼠。随机将动物分为3组：对照组（n=8），肺纤维化组（n=12），治疗组（n=12）。②肺纤维化组和治疗组按5mg／kg经气管内灌注博莱霉素溶液0．3mL制备大鼠肺纤维化模型，对照组则给予0．3mL生理盐水，治疗组每日腹腔注射地塞米松0．4mL（5mg／kg），对照组及肺纤维化组则每日腹腔注射0.4mL生理盐水。（3）在实验第3，7，14、27天分别处死后，收集肺泡灌洗液，行细胞计数和分类；聚丙烯酰胺明胶酶谱法鉴定肺泡灌洗液中基质金属蛋白的活性变化；羟脯氨酸法测定肺组织胶原含量的变化。结果：大鼠32只均进入结果分析。①病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显，出现典型肺纤维化改变；治疗组肺损伤和纤维化程度明显减轻。②治疗组肺泡灌洗液粒细胞学分类在第7，14天分别比肺纤维化组降低了51．6％和62．4％（P〈0．05）；第14天治疗组肺胶原总量比肺纤维化组降低了17．8％（P〈0．05）。（3）聚丙烯酰胺明胶酶谱示基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在两组中活性带均增强，但治疗组活性带的强度比肺纤维化组明显减弱。结论：炎症细胞能增强基质金属蛋白酶的活性，基质金属蛋白酶活性增强进一步促进了纤维化的发展，而地塞米松则抑制了基质金属蛋白酶活性增强，减轻了肺纤维化程度。     

肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶表达与地塞米松的干预效应

目的探讨炎症细胞与地塞米松对基质金属蛋白酶活性的影响及基质金属蛋白酶在肺纤维化中的作用。方法①实验于2004-04/07在解放军兰州军区总医院动物实验中心和呼吸内科实验室、血液科实验室完成。选用32只普通W istar大鼠。随机将动物分为3组对照组(n=8),肺纤维化组(n=12),治疗组(n=12)。②肺纤维化组和治疗组按5m g/kg经气管内灌注博莱霉素溶液0.3m L制备大鼠肺纤维化模型,对照组则给予0.3m L生理盐水,治疗组每日腹腔注射地塞米松0.4m L(5m g/kg),对照组及肺纤维化组则每日腹腔注射0.4mL生理盐水。③在实验第3,7,14,27天分别处死后,收集肺泡灌洗液,行细胞计数和分类;聚丙烯酰胺明胶酶谱法鉴定肺泡灌洗液中基质金属蛋白的活性变化;羟脯氨酸法测定肺组织胶原含量的变化。结果大鼠32只均进入结果分析。①病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显,出现典型肺纤维化改变;治疗组肺损伤和纤维化程度明显减轻。②治疗组肺泡灌洗液粒细胞学分类在第7,14天分别比肺纤维化组降低了51.6%和62.4%(P<0.05);第14天治疗组肺胶原总量比肺纤维化组降低了17.8%(P<0.05)。③聚丙烯酰胺明胶酶谱示基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在两组中活性带均增强,但治疗组活性带的强度比肺纤维化组明显减弱。结论炎症细胞能增强基质金属蛋白酶的活性,基质金属蛋白酶活性增强进一步促进了纤维化的发展,而地塞米松则抑制了基质金属蛋白酶活性增强,减轻了肺纤维化程度。     

雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及其抑制剂1表达的影响

目的：探讨雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织中细胞外基质相关因子基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制因子1的表达的影响。 方法：①实验于2004—01／09在南京医科大学实验动物中心、南京医科大学生化教研室实验室和病理教研室实验室完成。选用健康雄性Wistar大鼠18只。按随机数字表将大鼠分为3组：对照组、哮喘组、药物组，每组6只。②哮喘组和药物组于第1，8天每只腹腔内注射抗原混悬液1mL致敏；第15天开始雾化吸入10g／L鸡卵清蛋白激发哮喘，1次／d，20min／次，连续4周制作哮喘模型。每天激发前30min，药物组预先灌胃雷公藤多甙悬浮液（1．5mL）50mg／（kg&#183;d）。对照组以等量生理盐水行致敏和激发，1次／d，20min／次，连续吸入4周。③采用免疫组化法观察大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1的蛋白表达，采用反转录聚合酶联反应技术测定3组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。④多组间均数的比较采用方差分析，组间两两比较采用q检验。 结果：大鼠18只均进入结果分析。①大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9和组织金属蛋白酶抑制剂1蛋白含量：哮喘组明显高于对照组（q=9．75，7．87，P〈0．01）；经药物干预后，明显低于哮喘组（q=5．99，3．27，P〈0．05），但仍明显高于对照组（q=3．76，4．59，P〈0．05）。②大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值：哮喘组〉1，明显高于对照组（q=3．87，P〈0．05）；经药物干预后〈1，明显低于对照组（q=3．47，P〈0．05），更低于哮喘组（q=7．34，P〈0．01）。③大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达水平：哮喘组明显高于对照组（q=16．71，15．37，P〈0．01）；经药物干预后显著下降，明显低于哮喘组（q=11．14，7．21，P〈0．01），但未完全降至正常，仍明显高于对照组（q=5．57，8．17，P〈0．01）。④大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA比值：哮喘组〉1，明显高于对照组（q=3．45，P〈0．05）；经药物干预后〈1，明显低于对照组（q=3．45，P〈．05），更低于哮喘组（q=6．89，P〈0．01）。 结论：雷公藤多甙可能下调基质金属蛋白酶9的表达，调节基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值的平衡，干预细胞外基质重塑。     

洛沙坦对大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的干预作用

目的：观察大鼠心肌梗死后心肌间质基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2的表达和心室重塑、心功能变化的关系及洛沙坦干预的影响。 方法：实验于2004-09／2005-08在华中科技大学协和医院心血管研究所实验室进行。①取180只SD大鼠，随机取8只为假手术组（不结扎冠状动脉），其余172只大鼠结扎冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型。②将造模成功的67只大鼠随机分成洛沙坦组[灌胃洛沙坦30mg／（kg&;#183;d），1次／d]和模型组（灌胃等量生理盐水），两组分为术后1，7，14，28d4个亚组。③应用反转录-聚合酶链反应法及免疫组化方法检测基质金属蛋白酶2，金属蛋白酶组织抑制因子2及Ⅰ/Ⅲ胶原的表达，超声心动图评价大鼠心功能变化和心室重塑的过程。 结果：75只大鼠进入结果分析。①基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2蛋白表达：模型组除术后1d基质金属蛋白酶2表达与假手术组无差异外，其他各时间点表达均高于假手术组（P〈0．05）；洛沙坦组术后7，14，28d金属蛋白酶2表达均低于模型组（P〈0．05）。②基质金属蛋白酶2及金属蛋白酶组织抑制因子2mRNA表达：模型组各时间点均高于假手术组（P〈0.05），洛沙坦组术后1，14，28d基质金属蛋白酶2mRNA表达均低于模型组（P〈0．05）。③心肌Ⅰ/Ⅲ胶原比例：术后14，28d，模型组显著高于假手术组（P〈0．05），洛沙坦组低于模型组（P〈0．05）。④超声心动图显示模型组大鼠在术后7，14，28d时心功能明显低于假手术组（P〈0．01），洛沙坦组14，28d时心功能指标均较模型组明显改善（P〈0．05）。 结论：大鼠心肌梗死后心肌间质金属蛋白酶2、金属蛋白酶组织抑制因子2表达增高，非梗死区Ⅰ／Ⅲ胶原比例升高可能是心室重塑和心力衰竭发生发展的原因之一。洛沙坦可通过抑制金属蛋白酶2表达，逆转Ⅰ／Ⅲ胶原比例改善心肌梗死后心室重塑及心力衰竭。     

低分子肝素对大鼠急性百草枯中毒治疗作用实验研究

目的：探讨低分子肝素减轻急性百草枯中毒大鼠肺纤维化的可能作用机制。方法：55只雄性SD大鼠随机分成正常对照组5只,模型组25只,低分子肝素组25只。模型组与低分子肝素组禁食1 h后经口一次性给予百草枯75 mg/kg灌胃制成百草枯大鼠肺纤维化模型;低分子肝素组造模后皮下注射低分子肝素1000 u/d,对照组与模型组给予0.2 mL/d生理盐水皮下注射。正常对照组于第1天,模型组、低分子肝素组于造模后1,3,7,14,28 d分别取5只大鼠肺组织行病理HE染色,取血清检测转化生长因子-β1、基质金属蛋白酶-9水平。结果：模型组血清转化生长因子-β1水平第3天明显升高;基质金属蛋白酶-9水平于第7天逐渐上升,第28天明显升高,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。低分子肝素组第3天起转化生长因子-β1、基质金属蛋白酶-9水平较模型组降低(P＜0.05或P＜0.01)。病理结果示低分子肝素组肺泡壁出血减轻,肺纤维化程度较模型组减少。结论：低分子肝素可能通过影响转化生长因子-β1水平,减少基质金属蛋白酶-9的合成,减轻大鼠纤维化程度。     

内皮素受体拮抗剂对博莱霉素所致肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶表达的影响

目的 探讨内皮素受体拮抗剂BQ-123对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1表达的影响.方法 实验分为模型组、治疗组及对照组三组.模型组用博莱霉素5 mg/kg气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,治疗组予以内皮素受体拮抗剂BQ-123 50 μg/kg每周2次腹腔注射,对照组以等量生理盐水替代.造模后第28天处死大鼠,用半定量逆转录聚分酶链反应(RT-PCR)测定基质金属蛋白酶-1 mRNA的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定基质金属蛋白酶-1蛋白的表达.结果 模型组基质金属蛋白酶-1 mRNA表达显著低于对照组(P＜0.01),治疗组较之模型组明显增加(P＜0.01).ELISA检测提示模型组基质金属蛋白酶-1蛋白含量低于对照组(P＜0.05),治疗组蛋白含量较之模型组明显增加(P＜0.01).结论 肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶-1水平降低,应用内皮素受体拮抗剂治疗可提高基质金属蛋白酶-1的表达.     

骨髓间质干细胞移植对实验性肺纤维化的治疗作用

目的:研究骨髓间质干细胞(BMSCs)对博来霉素A5(BLMA5)所致大鼠肺纤维化的治疗作用,并探讨其治疗机制.方法:雌性SD大鼠70只随机分为A组21只为生理盐水对照组;B组21只为BLMA5模型组;C组21只为气管内注入BLMA5后立即移植BMSCs;D组7只为气管内注入BLMA514 d后移植BMSCs.C、D组分别于BLMA5造模后立即、14 d后通过尾静脉注入4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记的BMSCs.A、B、C组大鼠分别于第7、14、28天、D组第28天时各处死大鼠7只行HE及Masson染色;荧光显微镜下检测标记细胞、肺组织内羟脯氨酸(HYP)含量,分析肺内胶原沉积情况;免疫组化观察MMP-2、TGF-β1表达.结果:①C组第7、14、28天及D组第28天肺组织均见到标记的BMSCs.②HE及Masson染色切片,与A组比较B组第7天肺泡炎最明显,第28天肺纤维化最重(P<0.01);C、D组均轻于B组,C组轻于D组(均P<0.05).③B组注BLMA5第7天,HYP含量及TGF-β1表达均开始升高,第28天最高,各组间比较均有变化(P<0.05).④B组MMP-2的表达在第7天时最多,与A、C组比较有明显差异(P<0.01),第28天时下降到较低水平,各组比较无差异.结论:骨髓间质干细胞可定植于受损的肺组织,并能有效阻止BLMA5诱导的早期大鼠肺纤维化形成,其机制可能与降低TGF-β1、MMP-2的表达有关,早期治疗效果优于晚期.     

雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及其抑制剂1表达的影响

目的:探讨雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织中细胞外基质相关因子基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制因子1的表达的影响。方法:①实验于2004-01/09在南京医科大学实验动物中心、南京医科大学生化教研室实验室和病理教研室实验室完成。选用健康雄性Wis-tar大鼠18只。按随机数字表将大鼠分为3组:对照组、哮喘组、药物组,每组6只。②哮喘组和药物组于第1,8天每只腹腔内注射抗原混悬液1mL致敏;第15天开始雾化吸入10g/L鸡卵清蛋白激发哮喘,1次/d,20min/次,连续4周制作哮喘模型。每天激发前30min,药物组预先灌胃雷公藤多甙悬浮液(1.5mL)50mg/(kg·d)。对照组以等量生理盐水行致敏和激发,1次/d,20min/次,连续吸入4周。③采用免疫组化法观察大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1的蛋白表达,采用反转录聚合酶联反应技术测定3组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。④多组间均数的比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验。结果:大鼠18只均进入结果分析。①大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9和组织金属蛋白酶抑制剂1蛋白含量:哮喘组明显高于对照组(q=9.75,7.87,P<0.01);经药物干预后,明显低于哮喘组(q=5.99,3.27,P<0.05),但仍明显高于对照组(q=3.76,4.59,P<0.05)。②大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.87,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.47,P<0.05),更低于哮喘组(q=7.34,P<0.01)。③大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达水平:哮喘组明显高于对照组(q=16.71,15.37,P<0.01);经药物干预后显著下降,明显低于哮喘组(q=11.14,7.21,P<0.01),但未完全降至正常,仍明显高于对照组(q=5.57,8.17,P<0.01)。④大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.45,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.45,P<.05),更低于哮喘组(q=6.89,P<0.01)。结论:雷公藤多甙可能下调基质金属蛋白酶9的表达,调节基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值的平衡,干预细胞外基质重塑。     

基质金属蛋白酶9与肺组织重构

目的：总结归纳基质金属蛋白酶9在哮喘、慢性阻塞性肺疾病及肺间质纤维化等疾病过程中参与肺组织重构的表达和作用。 资料来源：应用计算机检索Pubmed数据库1979-01／2005-11基质金属蛋白酶9的文章，检索词“Gelatinase B；asthma；Pulmonary Disease，Chronic Obstructive；pulmonary fibrosis”，限定文章语言种类为English；同时检索中国期刊全文数据库1979-01／2005-11期间的相关文章，检索词“基质金属蛋白酶9；哮喘；肺疾病，阻塞性；肺纤维化”，限定文章语言种类为中文。 资料选择：纳入标准：有关基质金属蛋白酶9在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化中的表达。排除标准：①较陈旧的文献；②重复研究。资料提炼：共收集到有关基质金属蛋白酶9在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化中的肺组织重构的表达及作用文章233篇，排除重复或类似的同一研究，15篇符合要求。 资料综合：①基质金属蛋白酶9在哮喘中肺组织的表达：在未经治疗的稳定期的哮喘患者或轻度哮喘患者中均未发现基质金属蛋白酶9的增加。在严重哮喘患者中，哮喘加重期患者，哮喘持续状态患者均有基质金属蛋白酶9的增加。②基质金属蛋白酶9在慢性阻塞性肺疾病中的表达：慢性阻塞性肺疾病患者肺实质、血清和痰中基质金属蛋白酶9水平是增加的，基质金属蛋白酶9在慢性阻塞性肺疾病的发病机制中发挥作用，但其与慢性阻塞性肺疾病分期的关系还有待进一步研究。③基质金属蛋白酶9在肺纤维化中的表达：基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1参与了肺纤维化中肺组织的重构，尤其在特发性肺纤维化发病过程中。特发性肺纤维化患者肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶9水平是升高的，但在肺间质纤维化不同类型及相同类型的不同阶段，基质金属蛋白酶9有不同的变化，需要进一步的研究。 结论：由于基质金属蛋白酶9参与了哮喘、慢性阻塞性肺疾病及肺间质纤维化中肺组织的改变和重构，尤其是在疾病的不同时期基质金属蛋白酶9的表达也是不同的，因此对基质金属蛋白酶9的研究有重要的临床意义。