γ射线照射后小鼠XRCC修复基因的mRNA表达

目的分析XRCC修复基因在IRM2近交系小鼠辐射抗性产生中的作用。方法用Northern杂交方法,比较IRM2小鼠及其亲本ICRJCL及615小鼠不同剂量γ射线照射后不同时间XRCC1及XRCC5修复基因mRNA表达水平。结果对照组IRM2小鼠XRCC1及XRCC5基因mRNA水平明显高于其亲本对照组小鼠(P<0.01及P<0.05)。当接受1,2及4Gy照射后,亲本小鼠XRCC1及XRCC5基因mRNA水平均有不同程度升高,但显著变化出现在照射后2h(P<0.05)。IRM2小鼠在较低剂量1,2Gy时变化不明显,只在相对较高的4Gy剂量组照射后1h,XRCC1及XRCC5基因mRNA水平显著升高(P<0.05及P<0.01)。结论IRM2小鼠的这两种修复基因基础表达处于高水平,当受到较大剂量照射后,XRCC5基因高表达参与DNA双链断裂修复,这可能是其辐射抗性的主要原因之一。     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸NO含量、NOS活性及AIF基因的变化

目的 研究低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)基因的变化。方法 酶法检测不同剂量(0、0.025、0.05、0.075、0.1及0.2Gy)及0.075Gy照射后不同时间(0、3、6、12、18和24h)小鼠睾丸组织中NO含量及NOS活性的变化;Real-time PCR和Western blot法检测不同剂量(0、0.05、0.075、0.1及0.2Gy)及0.075Gy照射后不同时间(0、6、12和24h)小鼠睾丸组织中AIF mRNA表达及蛋白的表达。结果 不同剂量X射线照射后12h,小鼠睾丸组织中NO含量及NOS活性随照射剂量增加而增加,0.075Gy增至最大(P<0.05),0.1~0.2Gy一直维持较高水平(P<0.05);AIF mRNA随剂量增加而增加,0.1Gy时达到最大(P<0.05);而AIF蛋白在0.075Gy时达到最大。0.075Gy X射线照射后,NO含量与NOS活性随时间延长而增加,NO含量在24h时增到峰值(P<0.05),而NOS活性在12h时达到峰值(P<0.05);AIFmRNA随时间延长而增加,在24h时达到峰值(P<0.05);其蛋白表达在12h时达到峰值。结论 低剂量电离辐射照射后,小鼠睾丸生精细胞中NO含量、NOS活性及AIF基因表达增加,具有时程和剂量效应规律性。     

γ-射线对人支气管上皮细胞let-7α表达影响的研究

目的 探讨γ-射线对人支气管上皮细胞(16HBE)let-7α表达影响.方法 用60Coγ-放射源0.2～8.0 Gy照射16HBE后8 h,用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术测定let-7α的相对表达;同时测定了2.0 Gy照射16HBE后4、8和24 h细胞let-7α的相对表达.结果 16HBE let-7α表达因照射剂量和照射后时间的不同而异,1.0～8.0 Gy照射后能明显下调16HBE Let-7α的表达(P<0.05),0.2和0.4 Gy照射组与未照射对照组相比,16HBE let-7α的表达出现上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);2.0 Gy照射后4、8和24 h 16HBE let-7α的表达与未照射组相比出现上调趋势(P<0.05).结论 γ-射线可以影响16HBE let-7α表达.     

60Co γ-射线体外诱导人外周血淋巴细胞XPC基因表达的实验研究

目的研究核苷酸切除修复(NER)XPC基因在60Coγ-射线照射致人外周血淋巴细胞损伤中的表达变化规律,探讨XPC作为新的电离辐射生物剂量计的可行性。方法不同剂量(0~8 Gy)60Coγ-射线照射后,采用实时定量荧光PCR法,检测不同剂量及5 Gy60Coγ-射线照射后不同时间外周血淋巴细胞XPC基因表达水平。结果随着照射剂量的增加,外周血淋巴细胞中XPC表达明显增高;照射后4 h XPC表达即开始增高,24 h达峰值,以后逐渐下降,照射后72 h仍高于0 h组。结论60Coγ-射线可诱导人外周血淋巴细胞XPC的表达增强,并具有剂量-效应关系及时间规律,有望成为新的辐射生物剂量计。 更多还原     

γ-射线对人支气管上皮细胞let-7a表达影响的研究

目的探讨γ-射线对人支气管上皮细胞(16HBE)let-7a表达影响。方法用60Coγ-放射源0.2~8.0 Gy照射16HBE后8 h,用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术测定let-7a的相对表达;同时测定了2.0 Gy照射16HBE后4、8和24 h细胞let-7a的相对表达。结果16HBElet-7a表达因照射剂量和照射后时间的不同而异,1.0~8.0 Gy照射后能明显下调16HBElet-7a的表达(P<0.05),0.2和0.4 Gy照射组与未照射对照组相比,16HBElet-7a的表达出现上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);2.0 Gy照射后4、8和24 h 16HBElet-7a的表达与未照射组相比出现上调趋势(P<0.05)。结论γ-射线可以影响16HBElet-7a表达。     

60Coγ射线诱导L02人正常肝细胞COXⅡ基因表达、ATP水平和细胞活力改变

目的 探讨照射剂量和照射时间对电离辐射诱导L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”)的线粒体编码基因细胞色素c氧化酶(COX)Ⅱ基因表达、三磷酸腺苷(ATP)水平和细胞活力变化的影响.方法 采用2×7析因设计方法.0、1、3、5、8、10、15 Gy剂量60Coγ射线分别照射L02细胞24、48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量PCR法检测COXⅡmRNA表达水平,蛋白质印迹法检测COXⅡ蛋白表达水平,ATP发光检测试剂盒和CCK-8试剂盒检测细胞内ATP水平和细胞活力.结果 照射时间与照射剂量对L02细胞的COXⅡmRNA及蛋白表达水平上调、ATP水平升高和细胞活力下降的影响存在交互作用(F值分别为92.43、267.40、6.99、116.11,P＜0.05或P＜0.001).在一定照射剂量范围内,照射后24 h COXⅡ蛋白表达水平、照射后24、48 h ATP水平和细胞活力分别与照射剂量存在剂量-效应关系(P＜0.05或P＜0.01).结论 照射剂量和照射时间的交互作用影响60Coγ照射诱导的L02细胞COXⅡ基因表达和细胞内ATP水平与细胞活力.     

桑牛强生胶囊对4.0 Gy照射小鼠免疫功能的影响

目的 观察桑牛强生胶囊对60Coγ射线4.0 Gy照射小鼠免疫功能的影响.方法 小鼠离体抗体形成细胞(溶血分光光度法)和脾淋巴增殖细胞转化功能检测4.0 Gy照射小鼠和细胞免疫功能.结果 桑牛强生胶囊1.6、0.4g/kg剂量组可明显提高4.0 Gy照射小鼠血清抗体水平(P<0.01、P<0.05),桑牛强生胶囊1.6、0.4 g/kg剂量组刺激指数均明显高于模型对照组(P<0.01或P<0.05),提高对60Co γ射线所致免疫低下小鼠淋巴细胞产生抗体及促进细胞免疫功能,可不同程度的恢复受照射小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能.2个剂量治疗组与模型对照组比较差异有显著性(分别为P<0.05,P<0.01).结论 桑牛强生胶囊可以明显提高对60Co γ射线所致免疫低下小鼠淋巴细胞产生抗体及促进细胞免疫的功能.     

不同剂量γ射线对肾小管上皮细胞增殖与功能的影响

目的研究受不同剂量γ射线照射后,原代培养肾小管上皮细胞增殖和功能的改变情况。方法机械过滤加酶消化法分离培养肾小管上皮细胞,以01、、51、0 Gyγ射线照射细胞,MTT法测定细胞的增殖,RT-PCR法分析基因mRNA表达,Western Blot法检测相关蛋白的表达。结果肾小管上皮细胞受1 Gyγ射线照射后对数生长期延迟,受5 Gy1、0 Gyγ射线照射后不出现对数生长期。受1 Gy、5 Gy1、0 Gyγ射线照射的肾小管上皮细胞Na ,K -ATP酶、1α羟化酶、24羟化酶mRNA表达明显降低,TGF-βmRNA和蛋白质表达明显升高。受1Gy射线照射后OPN蛋白量提高,而受5 Gy、10 Gy照射后OPN蛋白量降低。结论不同剂量γ射线可明显抑制肾小管上皮细胞的增殖,促使肾小管上皮细胞向成纤维细胞转化,并通过增加TGF-β的分泌促进纤维蛋白等基质蛋白在细胞外的堆积,这种作用存在明显的剂量依赖关系。     

γ射线模拟职业照射对大鼠血细胞影响

目的 探讨γ射线模拟核设施检修职业照射对大鼠血细胞的影响.方法 无特定病原体级健康成年雄性SD大鼠随机分为5个照射剂量组和1个对照组,照射剂量组接受137Cs γ射线小剂量率照射,累积剂量分别为0.05、0.20、0.50、1.00和2.00 Gy;对照组不接受照射.照射结束后第2天和第11天,进行大鼠血液白细胞计数(WBC)及其分类、红细胞计数、血小板计数、血红蛋白(Hb)水平检测.结果 ①γ射线照射累积剂量0.50 Gy以上可以造成WBC在照射结束后第2天暂时降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),照射结束后第11天恢复正常.②0.05～0.50 Gy剂量可导致单核细胞(Mo)比例在照射结束后第11天升高.③1.00 Gy以上剂量可导致Hb水平在照射结束后第11天降低,照射结束后第2天和第11天淋巴细胞比例均降低,Mo比例均升高,此3项指标分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜O.05和P＜0.01).结论 γ射线模拟职业照射对大鼠WBC及其分类有明显影响,1.00 Gy以上剂量可能造成受照大鼠在照射结束一段时间后发生贫血.     

不同剂量γ射线诱发MDM2基因表达初步研究

目的 观察电离辐射对离体人周围血白细胞中MDM2基因表达的影响.方法 采集了3名健康人周围血进行60Co γ射线照射,提取白细胞总RNA,以β-actin作为内对照基因,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative pol-ymerase chain reaction,qPCR)方法探索辐照后MDM2表达的剂量一效应关系.结果 0～2 Gy剂量范围内,MDM2的mRNA相对表达水平随照射剂量增加而上调,通过拟合建立了0～2 Gy剂量范围内MDM2/β-actin相对表达量与照射荆量间的剂量-效应直线方程(γ=1.366 4+1.112 0x,P<0.001,相关指数=0.90).结论 电离辐射可以诱发MDM2基因表达发生改变,在0～2 Gy范国内MDM2的mRNA相对表达水平随照射剂量增加而明显上调.     

琼枝麒麟菜多糖对辐射损伤小鼠细胞周期的影响

目的 探讨γ射线对小鼠细胞周期的影响,从细胞水平探讨琼枝麒麟菜多糖(EGP)的抗辐射作用.方法 将小鼠随机分为正常对照组、模型组和3个不同剂量EGP实验组,灌胃10d后行一次性γ射线辐射,每只2 Gy,20h后流式细胞仪检测细胞周期百分率.结果 小鼠经2Gyγ射线照射后,与正常对照组比较,G0/G1期胸腺、脾细胞和骨髓细胞百分数明显增加(P<0.01),而S期和(M G2)期细胞百分数明显减少(P<0.01);与模型组比较,EGP实验组能使受照小鼠细胞S、G2 M期的比例升高(P<0.05和P<0.01).结论 EGP对辐射损伤细胞具有一定的保护作用.     

超强静磁场对幼鼠CAT和GSH-Px基因表达影响

目的 探讨超强静磁场(USMF)对幼龄小鼠过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)基因表达的影响.方法 1周龄小鼠分为3个照射组和对照组,分别经12 T的USMF照射8,12,16 h和假照射处理;照射结束6、12、24 h后提取小鼠肝脏中总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CAT和GSH-Px mRNA的表达水平.结果 经USMF12 T照射12 h后,小鼠CAT mRNA及GSH-Px mRNA的平均表达水平分别为1.154、0.881,高于对照组0.895、0.683;照射16 h组在照射后6 h,小鼠CAT 和GSH-Px mRNA表达水平分别为(1.112±0.217)、(0.887±0.217),高于对照组(0.923±0.089)、(0.642±0.073)(P<0.05).结论 USMF照射可使小鼠CAT和GSH-Px基因的表达发生变化.     

电离辐射对脾细胞p16、CyclinD、CDK4基因表达的影响

目的 研究X射线全身照射对小鼠脾细胞p16、CyclinD、CDK4基因转录及蛋白表达的影响。方法 采用Northern blot方法检测了2Gy X射线照射后p16、CDK4基因转录变化,半定量RT-PCR方法检测CyclinD mRNA水平,采用流式细胞术(FCM)检测三者蛋白表达变化。结果 研究证实,2Gy X射线全身照射后2~8 h脾细胞p16 mRNA水平明显增高,12 h恢复正常水平。p16蛋白表达于照射后24 h明显增高(P <0.05)。周期蛋白CyclinD mRNA水平轻度降低,其蛋白表达未见明显改变。照射后2 h,脾细胞CDK4 mRNA水平开始降低,持续到72 h,降至最低值,为假照射组的55.9%。照射后8~72 h,CDK4蛋白表达明显减少(P <0.05~P <0.01)。结论 电离辐射照射后脾细胞内p16基因表达增高;CDK4基因表达降低。     

实时定量聚合酶链反应法检测人周围血淋巴细胞受照后GADD45基因表达的改变

目的建立辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因表达定量检测技术,探讨GADD45基因表达变化作为辐射生物剂量计的可行性。方法健康人周围血经X射线照射后分离淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GADD45基因经不同剂量照射(0～8 Gy)、2 Gy照后不同时间(0～72 h)的mRNA表达水平,以管家基因GAPDH为内参进行定量分析。结果照射后GADD45基因在转录水平表达呈剂量依赖性增加,4 Gy照射时达到峰值,8 Gy仍然保持在较高水平,GADD45基因表达改变存在线性剂量-效应关系,其线性回归方程为y^=3.408 1.528x,R2=0.787。2 Gy照射后GADD45基因mRNA表达在照射后1 h呈现上升趋势,在4 h时达峰值,照射后72 h基因表达仍未恢复到初始水平。结论实时荧光定量PCR检测GADD45基因表达方法具有良好的敏感性、重复性和剂量-效应关系,有可能成为新的辐射生物剂量计。     

电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446 nm23-H1基因表达的影响

目的:探讨电离辐射对人肺非小细胞癌细胞株H446 nm23-H1基因表达的影响.方法:取对数生长期的H446细胞置60Co放射治疗机上单次照射,照射剂量分别为0、1、2、3、4和5Gy,继续培养至0、6、24和48 h后收集细胞,提取细胞总RNA和总蛋白.分别用RT-PCR和Western blot检测nm23-H1基因mRNA和蛋白的表达水平.结果:照射后各剂量组mn23-H1 mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.01),与剂量之间呈负相关(P<0.05),相关系数r分别≥0.785和≥0.66;mRNA的表达水平在0～24 h内随培养时间延长逐渐增加,48 h时有所降低.蛋白表达在0～6 h内没有明显变化,24 h达到高点,48 h有所降低.结论:电离辐射对H446细胞nm23-H1基因表达有一定的影响,随着辐射剂量的增大该基因mRNA和蛋白表达水平逐渐降低,并且在所有观察时间点均显示出一定的剂量效应关系.     

~(60)Coγ辐射致小鼠血液中microRNA表达改变及意义

目的探讨~(60)Coγ射线辐射损伤对小鼠血液microRNA的影响及意义。方法 SPF级C57BL/6J小鼠接受0.5 Gy、2 Gy、6 Gy、10 Gy全身照射后,应用Agilent microRNA生物芯片筛选小鼠血液中差异表达microRNA。结果microRNA芯片筛选出0.5 Gy、2 Gy、6 Gy、10 Gy照射后6 h有11、16、12、28个miRNA表达异常。24 h后分别有32、36、30、27个miRNA表达异常。且与未照射组比较表达差异有统计学意义(P0.05)。筛选27个microRNA组成的表达谱,对辐射损伤剂量和时间的判断有很好的效果,准确率、敏感性和特异性均90%以上。结论 microRNA在血液中差异表达与辐射损伤有关,其有望成为辐射损伤新的血液标志物。     

大剂量辐射小鼠血液中microRNA的表达

目的探讨60Coγ射线大剂量辐射损伤对小鼠血液microRNA的影响及意义。方法 SPF级C57BL/6J小鼠接受10 Gy全身照射后,分别于照射后6、24 h进行外周血白细胞计数。同时应用Agilent microRNA生物芯片筛选小鼠血液中差异表达microRNA。结果 microRNA芯片筛选出辐射后6 h有27个差异表达的microRNA,其中12个上调,15个下调。辐射后24 h有26个差异表达的microRNA,其中4个上调,22个下调。与未照射组比较,表达差异有统计学意义(P0.05)。10 Gy照射后,6和24 h外周血白细胞总数与对照组相比,差异有统计学意义。结论 microRNA在血浆中差异表达与辐射损伤有关,其有望成为辐射损伤新的血液标志物。     

MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系的研究

目的:研究MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系及其表达规律。方法:①对乳腺癌细胞MDA-MB-231分别转染miR-21 mimics、miR-21 mimics Scramble(阴性对照)、miR-21 inhibitor、miR-21 inhibitorScramble(阴性对照),转染后进行集落形成实验,通过存活分数(Surviving Fraction SF)的变化检测其辐射敏感性是否发生变化;②时程实验:3Gy X-Ray照射后,分别于0、4、8、12、24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达;③量效实验:0、1、2、4、6Gy X-Ray分别照射细胞24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。结果:MDA-MB-231细胞转染miR-21mimics后,SF明显升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);MDA-MB-231细胞转染miR-21 inhibitor后,SF明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);3GyX射线照射乳腺癌细胞株MDA-MB-231后,miR-21表达量上调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),并在12 h时达到峰值,24 h时恢复到照前水平;miR-21的表达量随着照射剂量的增加而发生变化,2Gy时达到峰值,照射剂量进一步加大,miR-21表达量开始下调,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05),6Gy时miR-21表达量明显低于未照射组。结论:miR-21对于增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231的辐射抗性具有一定作用。     

X射线对人外周血白细胞miR-575表达的影响

目的探讨电离辐射对外周血白细胞microRNA-575(miR-575)表达水平的影响。方法用EDTA-K2血常规管收集2例(男、女各1例)健康成年人肘正中静脉血各48 ml,分成4份,每份6个样品,在室温下分别接受剂量为0 Gy、0.5 Gy、1 Gy、3 Gy、5 Gy和8 Gy的6MV X射线照射,照射剂量率为2 Gy/min,照射面积大小为10 cm×10 cm。随后将接受照射的血样接种于RPMI-1640完全培养基中,37℃培养12 h、24 h、48 h和72 h,收获培养物后分离其中白细胞的总RNA,采用实时荧光定量PCR实验检测外周血白细胞中miR-575的相对表达量。结果照射剂量对辐照培养后白细胞miR-575相对表达量差异有统计学意义(P 0.05),但培养时间差异无统计学意义(P 0.05)。与0 Gy组相比,照射0.5 Gy、1 Gy、3 Gy和5 Gy后的白细胞miR-575相对表达量明显增加(P 0.05),在辐射剂量为5 Gy处达到峰值,到8 Gy下降,剂量-效应曲线符合二次函数方程,拟合曲线方程:y=-0.005 4x~2+0.043 2x+0.343 (r~2=0.929)。结论白细胞miR-575的表达水平可能与电离辐射损伤有关,可能有作为电离辐射相关生物标志的潜力。