柚皮素对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的]探讨柚皮素(NAR)对高糖(HG)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的影响。 [方法]将培养的H9c2细胞分为对照组(正常糖量)、HG组(35.5 mmol/L葡萄糖)、HG＋NAR低、中、高浓度组(35.5 mmol/L葡萄糖＋6.25、12.5、25.0 μmol/L NAR)。用噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平。 [结果]经HG处理的H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)。经HG与NAR共同处理H9c2细胞后,NAR低、中、高浓度组H9c2细胞增殖活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、ROS水平、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P＜0.05)。 [结论]NAR可抑制HG诱导的H9c2细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2/ARE信号通路密切相关。     

哈巴苷对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用

目的探究哈巴苷(HG)对大鼠心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法将H9c2细胞随机分为对照组(H9c2组)、哈巴苷组、H2O2组和H2O2+哈巴苷组,用H2O2处理细胞,复制氧化损伤模型。用哈巴苷(4μmoL)处理细胞,CCK8检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,二氯荧光乙酰乙酸盐(DCF)法检测细胞内活性氧(ROS),根据试剂盒说明书检测上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)浓度,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果与H9c2组比较,H2O2组心肌细胞增殖倍数明显降低,哈巴苷作用细胞4d后,H2O2+哈巴苷组心肌细胞增殖倍数明显高于H2O2组;同时,与H9c2组比较,H2O2组细胞凋亡率明显升高;与H2O2组比较,H2O2+哈巴苷组细胞凋亡率显著降低;H2O2还能显著诱导H9c2细胞Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,抑制Bcl-2表达;HG能显著减弱H2O2诱导Caspase-3和Caspase-9表达和抑制Bcl-2表达的作用;此外,H2O2组细胞内ROS活性及上清液中SOD和GSH浓度明显低于H9c2组,MDA浓度明显高于H9c2组,H2O2+哈巴苷组细胞内ROS活性及SOD和GSH浓度明显高于H2O2组,MDA浓度明显低于H2O2组。结论哈巴苷能通过抑制氧化应激抑制心肌细胞H9c2凋亡。     

新型硫化氢供体8L通过上调NF-E2相关因子2的表达拮抗H2O2损伤H9c2心肌细胞

目的探讨新型硫化氢供体8L对氧化应激诱导心肌细胞损伤的保护作用及NF-E2相关因子2(Nrf2)有关的分子机制。方法用活性氧供体过氧化氢(H2O2)处理培养的大鼠H9c2心肌细胞,建立心肌细胞损伤的体外模型以模拟急性缺血再灌注诱导的心肌损伤;在H2O2处理前给予8L预处理观察其对心肌细胞的保护作用。为了明确Nrf2的作用,在H2O2处理或8L预处理前给予其选择性抑制剂鸦胆苦醇预处理。细胞计数试剂盒8比色法检测细胞存活率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放,罗丹明123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP),Western Blot法检测核内Nrf2的表达。结果 H9c2心肌细胞经0~600μmol/L H2O2处理6 h可浓度依赖性地降低细胞存活率,且半数有效浓度约为400μmol/L。400μmol/L H2O2处理H9c2心肌细胞6 h可使LDH释放增加,MMP降低,并增加细胞核内Nrf2的表达(P均0.01)。在用400μmol/L H2O2处理前,先用50、100和200μmol/L 8L预处理1 h,可将细胞存活率从(52.6±4.3)%分别提高至(72.5±6.3)%、(83.1±5.2)%和(85.7±4.9)%。200μmol/L 8L预处理1 h还可明显抑制H2O2诱导的LDH释放(P0.01)及MMP受损(P0.05),但可易化H2O2诱导的Nrf2表达上调(P0.01)。另外,10μmol/L鸦胆苦醇预处理1 h不但可加重H2O2诱导的心肌细胞损伤(P0.01),还可拮抗8L的心肌细胞保护作用(P0.01)。结论硫化氢供体8L可减轻氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与上调Nrf2有关。     

当归多糖对缺氧-复氧损害H9c2心肌细胞的保护作用

目的探讨当归多糖(angelica sinensis polysaccharide,ASP)对缺氧-复氧损害H9c2心肌细胞的保护作用。方法噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]检测ASP对H9c2细胞增殖的影响;在体外ASP培养后,再缺氧-复氧培养H9c2心肌细胞为实验组,以正常培养细胞为对照组,以仅缺氧-复氧培养细胞为缺氧-复氧组。观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞活性氧水平;生化检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(humanγ-glutamyl systeine synthetase,γ-GCS)、红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1[NAD(P)H dehydrogenase 1,NQO1]mRNA表达;Western bloting实验检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bcl-2-Associated X,Bax)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白浓度。结果在常氧环境中ASP可浓度-时间依赖地抑制H9c2细胞增殖;缺氧-复氧诱导H9c2细胞显著凋亡(P0.05)、活性氧水平显著升高(P0.05),同时造成活性氧清除相关酶γ-GCS、HO-1、NQO1 m RNA表达及Nrf2蛋白表达显著下调(P0.05);而ASP可浓度依赖地显著抑制缺氧-复氧诱导的H9c2细胞凋亡(P0.05),降低缺氧-复氧诱导的H9c2细胞活性氧水平(P0.05),显著提高缺氧-复氧诱导的H9c2细胞中γ-GCS、HO-1、NQO1mRNA表达及Nrf2蛋白表达(P0.05)。结论 ASP可上调Nrf2表达,提高心肌细胞内抗氧自由基酶的表达,降低由缺氧-复氧所导致心肌细胞的氧化应激水平,抑制心肌细胞凋亡。     

人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用

目的观察人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷Rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷Rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷Rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。     

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blo...     

海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用

目的 研究海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用。方法 采用H2O2诱导法建立心肌细胞损伤模型,设置正常对照组、氧化损伤组、海藻多糖低、中、高剂量组及阳性对照组,海藻多糖各剂量组分别加入0.3、0.6、1.2 mg/ml的海藻多糖,阳性对照组加入50μmol/L的叔丁基对苯二酚(tBHQ),继续培养72 h,使用噻唑蓝比色(MTT)法测定H9C2细胞存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定H9C2细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,H9C2细胞Fe2+、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及H9C2细胞上清液LDH、肌酸激酶(CK)水平,流式细胞法测定H9C2细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1蛋白水平。结果 与氧化损伤组比较,海藻多糖各剂量组及阳性对照组H9C2细胞存活率、GSH水平,H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1...     

上调lncRNA MEG3对大鼠心肌细胞系缺氧/复氧损伤的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)对大鼠心肌H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)的保护作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路的关系。方法:将H9c2细胞分为Control组、H/R组、H/R+Ad-绿色荧光蛋白(GFP)组、H/R+Ad-MEG3组、H/R+Ad-MEG3+si-NC组及H/R+Ad-MEG3+si-Nrf2组。实时荧光定量逆转录酶聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测MEG3表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;蛋白质印迹(Western Blot)检测Nrf2/ARE通路相关蛋白表达。结果:与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、细胞中ROS水平及Nrf2、血红素氧化酶1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白水平均增高,而细胞活力、细胞中MEG3表达水平、SOD和CAT活性均降低(P<0.05)。M...     

胰高血糖素样肽1对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

目的研究胰高血糖素样肽1(GLP-1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为常规处理的对照组、H/R组及1、5、10μmol/L GLP-1组以验证GLP-1的保护作用,随机分为si-NC组、si-NC+H/R组、si-NC+H/R+10μmol/L GLP-1组、si-Nrf2+H/R+10μmol/L GLP-1组以验证核因子E2相关因子2(Nrf2)在GLP-1减轻细胞损伤中的作用。处理24 h后检测乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)、总抗氧化力(T-AOC)含量及Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)表达水平。结果 H/R组LDH、CK-MB、MDA的含量高于对照组,T-AOC的含量及Nrf2、HO-1的表达水平低于对照组;不同剂量GLP-1组LDH、CK-MB、MDA的含量低于H/R组,T-AOC的含量及Nrf2、HO-1的表达水平高于H/R组;敲低Nrf2表达后,si-Nrf2+H/R+10μmol/L GLP-1组LDH、CK-MB、MDA的含量高于si-NC+H/R+10μmol/L GLP-1组,T-AOC的含量及Nrf2、HO-1的表达水平低于si-NC+H/R+10μmol/L GLP-1组。结论 GLP-1对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,激活Nrf2/HO-1通路是可能的分子机制。     

circPRKCI靶向miR-217对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨circPRKCI对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡的影响及其对miR-217的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,pcDNA、pcDNA-circPRKCI、anti-miR-NC、anti-miR-217、pcDNA-circPRKCI与miR-NC、pcDNA-circPRKCI与miR-217 mimics分别转染至心肌细胞后进行H/R处理;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测circPRKCI、miR-217表达量;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circPRKCI与miR-217的靶向关系;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果H/R诱导的H9c2细胞中circPRKCI表达水平降低(P<0.05),miR-217、MDA、凋亡率及Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。H/R诱导的H9c2细胞中转染pcDNA-circPRKCI或转染anti-miR-217后可降低MDA含量、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P<0.05)。双荧光素酶实验显示circPRKCI可靶向结合miR-217;miR-217过表达可逆转circPRKCI过表达对H/R诱导的H9c2细胞氧化应激及凋亡的作用。结论circPRKCI过表达通过下调miR-217表达抑制氧化应激及其诱导的细胞凋亡,从而减轻心肌细胞氧化损伤。     

白藜芦醇对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨白藜芦醇抑制高糖诱导人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)的凋亡及可能机制。方法 MTT检测HK-2细胞活力;Hoechst染色法、caspase-3活性检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞内活性氧水平;Real-time PCR检测Nrf2 mRNA表达;Western印迹法检测Nrf2蛋白表达。结果30 mmol/L葡萄糖能显著降低HK-2细胞活力,诱导细胞凋亡,上调细胞内活性氧的水平,并下调Nrf2 mRNA和蛋白表达。10μmol/L白藜芦醇预处理能部分逆转高糖的作用。结论白藜芦醇对高糖诱导的HK-2凋亡的保护机制可能与抑制活性氧的生成和上调Nrf-2的表达有关。     

人参皂苷Rg1对过氧化氢诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1对过氧化氢(H2O2)诱导SK-N-SH细胞凋亡的影响。方法建立H2O2致SK-N-SH细胞凋亡模型,MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测细胞bcl-2、bax的表达水平。结果100μmol/LH2O2诱导SK-N-SH细胞12h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞凋亡率为16.6%,DNA断裂呈片段状,细胞培养液及细胞内MDA含量增加,SOD活性下降,细胞中bax表达明显升高。而人参皂苷Rg1可明显减少细胞损伤,使细胞中bax表达明显减少、细胞培养液及细胞内MDA含量减少、SOD活性增加、细胞凋亡的各项指标均明显改善。结论人参皂苷Rg1对H2O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡具有保护作用,其作用机制可能与提高SK-N-SH细胞的抗氧化能力以及减少bax表达有关。     

虎杖苷通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻大鼠急性心肌梗死后心肌细胞损伤

目的研究虎杖苷对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌细胞损伤的保护作用及分子机制。方法 SD雄性大鼠随机分为Sham组、AMI组、虎杖苷组、虎杖苷+ZnPP组。后3组通过左冠状动脉前降支结扎的方式建立AMI模型。虎杖苷为每天40 mg/kg灌胃,血红素加氧酶1(HO-1)抑制剂Zn PP为每天20 mg/kg腹腔注射。造模后第8天,检测各组心功能超声指标左心室射血分数(LVEF)、左室内压力变化最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、血清心肌损伤指标、心肌梗死面积、心肌氧化应激指标及核因子E2相关因子2(Nrf2)/HO-1表达情况。结果与Sham组比较,AMI组LVEF、+dp/dtmax、-dp/dtmax及心肌超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量均明显降低,心肌梗死面积及血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量及心肌丙二醛(MDA)的含量及Nrf-2、HO-1的表达水平均明显增加(P0. 05)。与AMI组比较,虎杖苷组LVEF、+dp/dtmax、-dp/dtmax及心肌SOD、GSH-Px的含量及Nrf-2、HO-1的表达水平均明显升高,心肌梗死面积及血清LDH、CK、CK-MB含量及心肌MDA的含量均明显降低(P0. 05)。与虎杖苷组比较,虎杖苷+ZnPP组LVEF、+dp/dtmax、-dp/dtmax及心肌SOD、GSH-Px的含量均明显降低,心肌梗死面积及血清LDH、CK、CK-MB含量及心肌MDA的含量均明显增加(P0. 05)。结论虎杖苷能够减轻大鼠急性心肌梗死后心肌细胞损伤,该效应可能由Nrf2/HO-1通路的激活介导。     

iNOS与COX-2对H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的影响

目的 探讨iNOS与COX-2在H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡的作用.方法 在PC12细胞建立H2O2预处理对抗H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测iNOS与COX-2蛋白表达水平.结果 用10 μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可显著地抑制50 μmol/L H2O2作用24 h后引起的细胞凋亡,并可明显地促进PC12细胞iNOS与COX-2蛋白表达;选择性iNOS抑制剂AG和COX-2抑制剂NS-398分别阻断H2O2预处理诱导的抗细胞凋亡作用.结论 iNOS和COX-2均介导了H2O2预处理诱导的抗凋亡作用.     

肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1

目的 探讨肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane protein,LAMPs)对人单核细胞表达血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的影响,并探讨可能的调控机制。方法 体外培养THP-1细胞,用不同浓度的LAMPs作用后,分别采用realtime-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达。同时采用不同浓度的放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理细胞,观察其对HO-1表达的影响,以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Western blot检测Akt的磷酸化情况;同时采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察其对LAMPs诱导Nrf2核转位及HO-1表达的影响;最后采用 siRNA干扰Nrf2表达,以证实Nrf2是否参与调控HO-1表达。结果 (1)0~5 μg/mL LAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白;(2)5 μg/mL LAMPs能诱导THP-1细胞Akt磷酸化,并能增强其DNA结合活性;PI3K抑制剂LY294002处理后,可明显抑制LAMPs诱导的HO-1表达和Nrf2核转位;(3)干扰Nrf2表达后,可明显下调LAMPs诱导THP-1细胞表达HO-1。结论 LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能与PI3K/Nrf2通路有关。     

无机砷对角质细胞红系相关因子及其下游抗氧化酶蛋白表达的影响

目的探讨无机砷暴露对皮肤角质细胞红系相关因子2(Nrf2)及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)蛋白表达的影响。方法 25μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作用于人类皮肤角质细胞系HaCaT细胞株0.5、3、6、12、24 h,采用western blot法检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况。结果25μmol/L NaAsO2暴露0.5、3、6、12、24 h均能够显著诱导HaCaT细胞的Nrf2蛋白表达(P<0.01),Nrf2蛋白在NaAsO2暴露3、6、12 h表达量呈现高峰,24 h则呈下降趋势,但仍显著高于对照组;NQO1的蛋白表达仅在暴露后3 h显著高于对照组(P<0.01),暴露时间延长后则显著下降,6、12、24 h的NQO1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);HO-1蛋白则从暴露3 h开始呈现明显的诱导表达,且随染毒时间的延长(6、12、24 h)表达持续增强,具有明显的时间-效应关系(P<0.01)。结论无机砷暴露能够诱导人类皮肤角质细胞系HaCaT细胞的Nrf2及其调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的蛋白表达。     

黄芪总黄酮和黄芪甲苷对H_2O_2诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨黄芪总黄酮(AF)和黄芪甲苷(Astr)对硫氧还蛋白(Trx)和无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)的表达影响及作用机制。方法将培养的细胞随机分为对照组、H2O2组、AF+H2O2组和Astr+H2O2组。H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型;MTT法观察细胞活力,免疫荧光检测8-OHdG的表达,确定MRC-5细胞氧化损伤情况;流式细胞仪测定细胞凋亡;RT-PCR和Western印迹法检测APE/Ref-1、Trx mRNA和蛋白的表达。结果 800μmol/L H2O2孵育细胞24 h可显著诱导MRC-5细胞损伤,使细胞存活力下降至47.25%,细胞经AF和Astr与H2O2共孵育后,明显抑制由H2O2引起的APE/Ref-1蛋白表达下调,上调Trx的表达,降低了8-OHdG含量,抑制了氧化环境下的MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 Astr和AF通过上调APE/Ref-1和Trx的基因表达水平、拮抗H2O2而对MRC-5的氧化损伤具有保护作用。两者相比Astr优于AF。     

L-茶氨酸抑制P53/P16改善D-半乳糖诱导的人脐静脉内皮细胞和心肌细胞损伤

目的:探讨L-茶氨酸对D-半乳糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和心肌细胞(H9c2)损伤的保护作用。方法:通过D-半乳糖诱导HUVECs和H9c2细胞损伤。采用CCK8法检测细胞存活率,分光光度法检测细胞SOD酶活力和MDA含量,western blot测定细胞P53、P16、Rb和磷酸化Rb蛋白表达,评价L-茶氨酸的保护作用和可能机制。结果:L-茶氨酸(5和10 mmol/L)显著性抑制D-半乳糖诱导的HUVECs和H9c2凋亡,升高细胞SOD酶活力,降低MDA含量,抑制P53和P16表达并提高Rb的磷酸化水平。结论:L-茶氨酸能够保护D-半乳糖诱导HUVECs和H9c2损伤,其机制与调控P53和P16通路有关。     

肿瘤坏死因子受体相关因子5对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及作用机制研究

目的:分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养H9c2细胞,以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl₂)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型,采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水...     

砷酸钠对Chang肝细胞Nrf2信号通路的影响

目的探讨五价砷酸钠暴露对Chang肝细胞核转录因子-E2类相关因子2(Nrf2)及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)的mRNA及其蛋白表达的影响。方法 0.5、1.0、2.0mmol/L的砷酸钠(Na2HAsO4)染毒Chang肝细胞6 h后,采用western blot法检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况;采用抗氧化反应元件(ARE)-荧光素酶活性检测Nrf2的转录活性情况;采用Real-time PCR检测细胞NQO1和HO-1的mRNA表达情况。结果 0.5、1.0、2.0 mmol/L的Na2HAsO4染毒6 h均能够显著诱导Chang细胞的Nrf2蛋白表达(P<0.05),ARE荧光素酶活性水平也随染毒剂量的增加而诱导,并且具有剂量-效应关系;随着染毒剂量的升高,HO-1和NQO1的mRNA及蛋白水平逐渐升高,与对照组相比具有统计学差异,并且具有剂量-效应关系(P<0.01)。结论砷酸钠暴露能够诱导人类Chang肝细胞的Nrf2及其调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA及其蛋白的表达。