东亚飞蝗抗菌活性物质的萃取及抗菌效应研究

试验研究东亚飞蝗成虫抗菌活性物质的萃取参数与抑菌效应。采用针刺蘸大肠杆菌菌悬液方法,以抗菌活性为指标,用杯碟法测定临床多重耐药菌的抑菌活性,确定最佳诱导时间,初步研究抗菌谱。结果表明,东亚飞蝗抗菌活性物质粗提液对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)或革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、水稻白叶枯病原菌)均有一定的抑制作用。其抗菌谱为:金黄色葡萄球>水稻白叶枯病原菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌,其中以对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最明显。抗菌活性物质浓度为11.782mg/mL,蝗虫抗菌活性物质收率为8.623%。经纯化后的抗菌活性物质增强对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌的抑制作用。采用针刺蘸大肠杆菌方式可成功诱导东亚飞蝗抗菌物质的表达,尤其以针刺蘸大肠杆菌诱导后饲养24h得到的抗菌活性物质抑菌活性最强。结果表明东亚飞蝗虫体内含有抗菌活性物质可被诱导表达,其抗菌作用机理有进一步研究。     

弧菌颉颃菌的筛选及其在对虾养殖中的初步应用

试验从养殖环境中分离到22株细菌,以副溶血弧菌为病原指示菌,点种法筛选到1株弧菌颉颃菌A4;通过生理生化试验和16S rRNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。抑菌性能试验结果显示,分离菌株对副溶血弧菌、溶藻弧菌及灿烂弧菌均具有较好的颉颃作用。在对虾养殖试验中发现,使用枯草芽孢杆菌制剂2 d后可显著减少水体中的弧菌数量（P＜0.05）,改善对虾生长状态。该菌株可作为益生菌开发成微生态制剂,用于对虾养殖中弧菌病的预防。     

枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物的抑菌活性研究

为了检测枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌对鲫鱼免疫机能的影响及其代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,试验将鲫鱼分成3组,分别为沼泽红假单胞菌组、等比例沼泽红假单胞菌和枯草芽孢杆菌的复合菌组和未加菌处理的对照组,在养殖水体中分别加入不同的微生物,在第30天静脉采血,测定血浆中碱性磷酸酶(ALP)、总超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)的活性以及丙二醛(MDA)的浓度;利用超声波破碎细胞,旋蒸浓缩得到枯草芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌胞内外代谢产物,采用牛津杯法以小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌株,测定代谢产物的抑菌圈直径。结果表明:沼泽红假单胞菌组与复合菌组的鲫鱼血浆中ALP的活性显著高于对照组(P0.05),LZM活性高于对照组,MDA的浓度低于对照组,SOD的活性与对照组的差异不显著(P0.05);两种菌的胞外代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,沼泽红假单胞菌胞内代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强,枯草芽孢杆菌胞内代谢产物对小肠耶尔森氏菌抑菌活性较强。说明沼泽红假单胞菌和复合菌对鲫鱼的免疫机能有一定的增强作用,两种益生菌胞内外代谢产物对小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。     

文蛤抗菌物质的粗提及活性检测

为了分离纯化得到文蛤体内的抗菌活性蛋白，以灭活的副溶血弧菌诱导的方法，通过紫外分光光度计法测定其粗提品的蛋白质含量，并进行抗菌活性检测，同时利用硫酸铵沉淀法对粗提物进一步纯化、SDS-PAGE泳检测纯度。结果显示，文蛤经副溶血弧菌诱导后，产生的抗菌物质在短时间内达到高峰，随后逐渐下降，大约在4h时对大肠杆菌抑制率最高；诱导4h时抑制率与对照相比无显著差异（P〉0．05）。在经过硫酸铵沉淀后，SDS-PAGE电泳显示条带较多；进行SephadexG-50凝胶过滤层析的最佳条件为洗脱流速0．2ml／min、样品浓度3．0mg/ml。     

甘草内生真菌分离及其抑菌活性初探

为了解药用植物甘草(Glycyrrhiza uralensis)内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis var.tritici）、枸杞黑果病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium f.sp.cucumeris）、黄瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani）5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）4种细菌作为供试指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。试验结果显示,从甘草根、茎、叶中分离出20株内生真菌,其中根部最多,占分离菌株总数的65.0%,其次为茎部,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2目2科5属,梭孢霉属为优势菌属,占分离菌株总数的70.0%;在分离的内生真菌中有15株菌对1种或1种以上供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的75.0%,19株菌对1种或1种以上供试细菌有不同程度的抑制作用,为分离内生真菌总数的95.0%;有7株内生真菌对枯草芽孢杆菌拮抗活性差异显著（P＜0.05）,有 8株内生真菌对金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,有3株内生真菌对大肠杆菌拮抗活性差异显著,有1株内生真菌对革兰氏阴性铜绿假单胞菌拮抗活性差异显著,其中菌株RLEFR015对番茄灰霉病菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR010对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌拮抗活性差异显著,菌株RLEFR002对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌供试细菌拮抗活性差异显著;菌株RLEFR015、RLEFR002、RLEFR010均为梭孢霉属,为高活性菌株。甘草内生真菌具有多样性和抑菌活性,多数菌株对供试病原真菌和病原细菌具有拮抗活性,对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阳性枯草芽孢杆菌拮抗活性较强,预示着甘草内生真菌具有重要的资源价值。     

家蝇抗菌肽的分离纯化及生物学活性

将诱导家蝇提取的家蝇抗菌肽提取物，经凝胶过滤层析和离子交换层析，得到具有抗菌活性的单一峰，质谱结果显示抗菌肽分离物含有4种小肽，相对分子质量678．3～1017．2。家蝇抗菌肽对革兰氏阴性菌（大肠杆菌、巴氏杆菌）的抗菌活性优于革兰氏阳性菌（金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌），对耐药性巴氏杆菌有较强的抗菌活性，对大肠杆菌的MIC为4．2～8．4mg／L，对耐药性巴氏杆菌的MIC为3．8～7．8mg／L。扫描电镜观察发现，家蝇抗菌肽通过损伤细胞壁使细胞质外流而达到杀菌的目的。家蝇抗菌肽对家兔、鸡、猪、小鼠、番鸭、鹅和家鸭红细胞无溶血反应和凝集反应。‘     

降解黄曲霉毒素枯草芽孢杆菌的解毒性、抗菌性及抗逆性研究

试验对筛选得到的高效降解黄曲霉毒素B1、G1和M1的枯草芽孢杆菌(霉立解060菌)进行解毒活性、抗菌活性及抗逆性研究。将枯草芽孢杆菌发酵液分成上清液、菌悬液和胞内液组分,验证各组分对黄曲霉毒素的解毒效率。试验结果表明,枯草芽孢杆菌发酵后的上清液对AFB1、AFG1和AFM1的降解活性最高,确定发酵后的上清液中存在解毒活性组分;对解毒活性物质进行加热和蛋白酶K变性处理后,解毒活性显著降低,表明起解毒作用的活性物质是其分泌的一种胞外酶;试验进一步证明枯草芽孢杆菌具有显著抑制大肠杆菌、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌,抵抗胃酸、胆盐、高温等不利环境的特性,具有很强的抗菌性和抗逆性。     

重组鹅β-防御素7蛋白的原核表达及其生物学特性分析

为探讨鹅β-防御素7(Av BD7)的生物学特性,将鹅Av BD7基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体p Pro EX HTa的EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD7,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对其菌液进行诱导表达。经N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)分析,该重组蛋白大小为10~15 ku,与预期大小结果一致。重组鹅Av BD7蛋白纯化后,通过菌落计数的方法测定其体外抗大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌等抑菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其对鸡红细胞的溶血活性。结果显示,重组鹅Av BD7蛋白对所测定的5种细菌均有显著抗菌活性(P0.05),且其抑菌活性随蛋白浓度的增加而增强。高浓度盐离子(150 mmol/L)显著抑制重组鹅Av BD7蛋白的抗菌活性(P0.05)。重组鹅Av BD7蛋白对鸡红细胞没有溶血活性(P0.05)。由此可见,重组鹅Av BD7蛋白具有广谱抗菌活性,高浓度盐离子显著降低其抗菌活性,且该重组蛋白不具有溶血活性。     

茶多酚有改善肠道菌丛和除臭作用

绿茶中含有多种成分,如咖啡因、多酚(丹宁)、氨基酸、维生素和皂素等。用氯仿和乙酸乙酯可以从绿茶中提取出10～18％的茶多酚。最近的一些研究证实,茶多酚具有抗氧化剂、除臭剂和杀菌剂活性及药理学作用。 据体外研究报告,茶多酚对金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、产气荚膜梭菌和蜡状芽胞杆菌具有抗菌活性。茶酚对伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和金黄色     

核桃(Juglans regia L.)青皮提取物抗氧化及抑菌活性的研究

核桃青皮是核桃(Juglans regia L.)加工的副产物,因含有多种活性成分,可能是一种潜在的天然抗氧化剂和抑菌剂来源。本研究旨在研究核桃青皮提取物的抗氧化能力和抑菌活性,为开发新的饲用抗生素替代品提供参考。以蒸馏水及25%、50%、75%和100%的甲醇、乙醇,丙酮为溶剂分别提取8和12h获得核桃青皮提取物。通过测定提取物中的总酚和总黄酮含量,根据还原能力和2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基清除率评价其抗氧化能力;以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,分别测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)及抑菌率评价其抑菌活性。结果表明,有机溶剂浓度显著影响提取物中的总酚和黄酮含量(P0.01);除丙酮外,提取时间对提取物中总酚和黄酮含量均有显著的影响(P0.05);在所有提取溶剂中,以25%乙醇提取8h获得的总酚和黄酮最高,分别达到25.35和12.63mg·g-1。有机溶剂浓度对提取物的还原能力具有显著的影响(P0.01),而提取时间仅对丙酮提取物的还原能力具有显著影响(P0.05),其中25%乙醇提取物的还原能力在各处理中最高,为0.366。有机溶剂浓度对提取物的DPPH自由基清除率具有显著的影响(P0.01),而提取时间仅对甲醇提取物的自由基清除率有显著影响(P0.01),其中75%丙酮提取物可清除88.81%的自由基,在各处理中最高。有机溶剂浓度对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)均有显著的影响(P0.01);从提取时间来看,除甲醇提取物对大肠杆菌以及丙酮提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径无显著影响外(P0.05),其他均有显著的差异(P0.01);此外,提取时间显著影响对大肠杆菌的MIC(P0.05),乙醇和丙酮提取物的金黄色葡萄球菌MIC以及丙酮提取物的枯草芽孢杆菌MIC有显著差异(P0.05),其他提取物的MIC均不受提取时间的影响(P0.05)。抑菌率测试结果表明核桃青皮25%乙醇提取物对枯草芽孢杆菌的抑菌活性强于对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制。由此可见,所有核桃青皮提取物均具有一定的抗氧化及抑菌活性,尤其以25%乙醇8h提取物的作用最好。     

一种银离子抗菌液抑菌性能及其抑菌性能稳定性的试验观察

目的观察银离子抗菌液的抑菌性能及其抑菌性能的稳定性。方法分别参考GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C4抑菌性能试验方法和C6稳定性测试方法,对该银离子抗菌液的抑菌性能及抑菌性能的稳定性进行评价。结果该银离子抗菌液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率均>99.9%,该银离子抗菌液在室温下放置一年后,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率均>99.9%,结论该银离子抗菌液大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均具有较强的抑菌作用,且该产品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及白色念珠菌的抑菌作用可以至少保持一年。     

杂合抗菌肽Mel-MytB在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性测定

为了获得抗菌活性较强的抗菌肽，将蜂毒肽（Melittin）与贻贝素B （Mytilin-B）的核心功能序列杂合，以Melittin （3-14）和Mytilin-B （13-27）的成熟肽段作为模板序列，根据巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）偏好密码子，采用SOE方法合成杂合抗菌肽Mel-MytB（MEM）基因。改造后的基因克隆到pPICZα-A质粒，构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-MEM，而后经Sac Ⅰ酶切线性化后电转入毕赤酵母受体菌X-33。结果表明，在醇氧化酶（AOX）启动子调控下，分子质量约3.0 ku的Mel-MytB杂合抗菌肽获得表达，具有热稳定性和酸稳定性，煮沸40 min、pH 2.0~10.0范围内抑菌活性基本不变。抗菌特性研究结果表明，该表达产物具有广谱抗菌活性，其对大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923/ATCC6538、肠道沙门氏菌ATCC13076、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、副溶血弧菌ATCC17802、创伤弧菌ATCC27562、枯草芽孢杆菌ATCC6633的MIC值分别为5.1、2.2、2.0、4.6、7.6、9.4、13.2和59.4 μg/mL。因此，重组抗菌肽Mel-MytB在疾病防治和动物饲料添加剂等方面具备较好的应用前景。     

枯草芽孢杆菌对育肥羊生长性能、抗氧化及免疫机能的影响

文章旨在研究基础日粮添加枯草芽孢杆菌对育肥羊生长性能、抗氧化及免疫机能的影响,试验将80只体重相近的育肥羊随机分为4组,每组4个重复,每个重复5只。各组育肥羊分别饲喂基础日粮+0、25、50、75?mg/kg的枯草芽孢杆菌的日粮,试验为期60?d。结果 ：（1）50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组育肥羊末重、平均日采食量显著高于0、25?mg/kg枯草芽孢杆菌组（P <0.05）,50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组育肥羊平均日增重显著高于0?mg/kg枯草芽孢杆菌组（P <0.05）,0?mg/kg枯草芽孢杆菌组育肥羊料重比显著高于50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组（P <0.05）。（2）50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组血样中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性显著高于0?mg/kg枯草芽孢杆菌组（P <0.05）,0?mg/kg枯草芽孢杆菌组血样中丙二醛含量显著高于25、50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组（P <0.05）。（3）25、50、75?mg/kg枯草芽孢杆菌组血样中免疫球蛋白A、肿瘤坏死因子-α含量显著高于0?mg/kg枯草芽孢杆菌组...     

噬菌体在动物细菌病防治中的应用研究进展

综述了毒性噬菌体在防治大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、弯曲杆菌所致畜禽或实验动物传染病及副溶血弧菌、鳗弧菌、铜绿假单胞菌等所致水产动物传染病中的应用进展,以期为相关领域研究提供参考。     

牡丹内生真菌高抑菌活性菌株的筛选及培养基优化

为了从牡丹内生真菌中筛选具有高抑菌活性的菌株,并对其发酵培养基进行优化,试验采用测量抑菌圈的方法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌株,筛选一株抑菌活性最强的菌株并通过正交试验对培养基各营养组分进行优化。结果表明:抗菌活性菌株筛选发现,JYH4的抑菌圈直径最大;优化后的培养基组分为葡萄糖6%、蛋白胨6%、磷酸氢二钾0.5%。说明JYH4具有较高的抑菌活性,在优化后的培养基中对枯草芽孢杆菌的抑菌效果更为显著,其抑菌圈直径达到18.77 mm。     

八角属植物的抗菌活性研究

为了研究八角属植物粗提物及从披针叶茴香中分离得到的5个单萜类化合物的抗菌活性,试验采用纸片法对八角属几种植物果实与叶子的35种粗提物进行抗菌活性研究,采用倍比稀释法对从披针叶茴香中分离得到的5个单萜类化合物进行抗菌活性筛选。结果表明:八角属几种植物粗提物对枯草芽孢杆菌都有不同程度的抑制作用,八角茴香果实和披针叶茴香果实的总提取物、乙酸乙酯部位和正丁醇部位、野八角果实和叶子及披针叶茴香叶子的乙酸乙酯部位对枯草芽孢杆菌显示了显著的抑制生长作用,其抑菌圈直径都在11.40 mm以上;所有的粗提物样品对大肠杆菌均无抑制作用。5个单萜类化合物对大肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌都有不同程度的抑制生长作用,MIC值均在2.00 mg/m L以下。说明八角属植物粗提物和5个单萜类化合物都具有一定的抗菌活性。     

复合益生菌对断奶仔猪生长性能及肠道菌群的影响

本文旨在研究益生菌凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌组合运用对断奶仔猪生长性能及肠道菌群的影响。选取54头25 日龄健康的断奶仔猪分成2个处理组,每个处理组27头。对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮添加复合益生菌（凝结芽孢杆菌800 g/t垣枯草芽孢杆菌400 g/t）。通过体外牛津杯试验评估凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌组合对断奶仔猪肠道致病大肠杆菌K88的抑菌性能,确定凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌在饲粮中最佳的添加比例。试验第8d,仔猪盲肠食糜 取样,测定盲肠肠道菌群。试验结果显示,饲粮中添加凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌能够显著（P＜0.05）降低断奶仔猪料肉比和腹泻率;同时,显著增加（P＜0.05）断奶仔猪盲肠中乳酸杆菌的数量,显著降低（P＜0.05）断奶仔猪盲肠中大肠杆 菌的数量。以上结果表明,饲粮中添加凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌能够抑制肠道中有害菌大肠杆菌的数量,增加肠道菌群有益菌乳酸杆菌数量,改善断奶仔猪生长性能。     

一株颉颃黄曲霉菌枯草芽孢杆菌的生物学特性研究

对筛选出的一株枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究。将枯草芽孢杆菌全菌液、上清液及超声波菌体分别进行抑制黄曲霉菌生长试验和降解黄曲霉毒素解毒效率,并进行抑制大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌抑菌试验,以及耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和温度敏感试验。结果表明该株枯草芽孢杆菌超声波菌体对黄曲霉生长具有明显抑制作用,对黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素M1的降解活性分别为75%、70%和62%,而全菌液和上清液效果较差。对大肠杆菌和沙门菌抑菌效果较好,对金黄色葡萄球菌较差,能够耐酸、耐胆盐、胃肠耐受能力和耐高温。试验对该株枯草芽孢杆菌应用临床提供理论依据。     

芽孢杆菌不同菌种抑菌性强度试验比较分析

研究从不同环境中分离鉴定12种共21株芽孢杆菌,应用滤纸片法进行芽孢杆菌抑菌性的比较试验。结果表明:枯草芽孢杆菌07菌株、枯草芽孢杆菌16菌株、贝莱斯芽孢杆菌02菌株和韦氏芽孢杆菌A菌株对经黄色葡萄球菌抑菌强度达到"++++",对大肠杆菌的抑菌强度达到"++"以上。芽孢杆菌sp.菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌强度达到"+++"。研究表明,芽孢杆菌同一菌种的不同菌株抑菌强度不同;不同菌种之间的抑菌强度差别明显,且对大肠杆菌的抑菌强度尤为突出。     

杆菌七肽抗菌谱和溶血性的研究

本试验旨在研究杆菌七肽抗菌谱和体外对人工肠液和胃液的稳定性、溶血性,为其在饲料中替代抗生素提供理论依据。试验采用管碟法测定抑菌圈来研究杆菌七肽对18株微生物的抑制作用,并研究高温水浴、人工肠液、人工胃液处理后的抑菌活性以及不同浓度杆菌七肽对红细胞的溶血率。结果表明:杆菌七肽对大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、布氏杆菌(Brucella melitensis)、嗜水气假单胞菌(Pseudomonas hydrophila)等具有明显的抑制作用,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)没有抑制作用,且抑菌活性不受热处理、人工胃液和肠液的影响;不同浓度的(12.5～100μg/mL)杆菌七肽处理红细胞的溶血率都低于5%。结果显示,杆菌七肽抗菌谱主要为革兰氏阴性菌;杆菌七肽对热处理、人工胃液和人工肠液具有很好的耐受性,而且对受试红细胞溶血性低。